35

35 Tumorgewebe
Petro E. Petrides

35.1 Fehlregulation des Wachstums und der Differenzierung

bei Tumoren – 1142

35.2 Tumorentstehung (Cancerogenese) – 1143

35.3 Onkogene – 1143

35.3.1 Mechanismus der Onkogenwirkung – 1143
35.3.2 Protoonkogenaktivierung durch Mutationen – 1144

35.4 Antionkogene – 1145

35.4.1 Identifizierung von Antionkogenen – 1145
35.4.2 Funktionen von Antionkogenen – 1147
35.4.3 Inaktivierung von Antionkogenen durch Mutationen – 1149

35.5 Kumulative Aktivierung von Onkogenen

und Inaktivierung von Antionkogenen beim Mehrschrittprozess
der Tumorigenese – 1150
35.5.1 Familiäre adenomatöse Polyposis (FAP) – 1150
35.5.2 Hereditäre nicht-polypöse colorektale Tumoren – 1152
35.5.3 Sporadische colorektale Tumoren – 1152

35.6 Entstehung von Fusionsgenen durch Translokationen – 1154

35.7 Mechanismen der Invasion und Metastasierung – 1155

35.7.1 Invasion und Metastasierung – 1155
35.7.2 Wechselwirkungen von Tumorzellen mit der extrazellulären Matrix – 1156
35.7.3 Bedeutung von Proteinasen für Invasion und Metastasierung – 1156

35.8 Tumorentstehung durch Cancerogene – 1157

35.8.1 Chemische Cancerogenese – 1157
35.8.2 Physikalische Cancerogenese – 1158

35.9 Stoffwechsel von Tumorgeweben – 1159

35.10 Früherkennung von Tumoren – 1159

35.11 Krebstherapie – 1160

35.12 Gentherapeutische Ansätze bei Krebserkrankungen – 1161

Literatur – 1162
 1142 Kapitel 35 · Tumorgewebe

> > Einleitung

Biochemische Untersuchungsmethoden wurden von Otto Warburg in den 30er Jahren des vergangenen Jahrhunderts in die
Krebsforschung eingeführt. Dieser machte vor allem Störungen der Atmungskette und des Glucosestoffwechsels für die Mali-
gnität verantwortlich. Im Gefolge dieser Pionierforschungen suchte man seit Ende der 40er Jahre nach allen möglichen bioche-
mischen Unterschieden zwischen Krebs- und normalen Zellen. Diese Bemühungen haben erst seit Beginn der 80er Jahre des
vergangenen Jahrhunderts durch die Entdeckung von Krebsgenen zu ersten sichtbaren Erfolgen geführt.
Das Auffinden der molekularen Unterschiede zwischen Normal- und Krebszellen stellt nicht nur die Grundlage zum Ver-
ständnis der malignen Transformation dar, sondern eröffnet auch neue Wege zur Entwicklung von Krebstherapeutika. Denn das
Problem der dem Onkologen zur Verfügung stehenden Krebsmittel war bisher ihre mangelnde Spezifität, d.h. die Tatsache,
dass sie auch auf gesunde Gewebe wirken. Der Ansatz der zielgerichteten Tumortherapie (»targeted therapy«) auf der Basis
tumorbiochemischer Erkenntnisse hat zur Entwicklung neuer Krebsmittel wie monoklonaler Antikörper oder Tyrosinkinase-
Inhibitoren geführt, die bereits Eingang in die Tumorbehandlung gefunden haben. Die molekulare Dimension des Krebspro-
blems ist extrem vielschichtig, da es den Krebs par excellence nicht gibt: Tumoren der einzelnen Gewebe unterscheiden sich,
wie auch die normalen Gewebe, voneinander; in einem Gewebe entstehen unterschiedliche Tumoren, und viele Tumoren wei-
sen zudem Subpopulationen von Zellen auf (Tumorheterogenität). Darüber hinaus nehmen die Krankheiten bei einzelnen
Patienten einen sehr unterschiedlichen, individuellen Verlauf.

35.1 Fehlregulation des Wachstums
und der Differenzierung bei
Tumoren
! Störungen des Fließgleichgewichts zwischen Zellauf-
und -abbau führen zu Tumoren.
Der menschliche Organismus besteht aus etwa 1013 Zellen,
die in Organen und Geweben jeweils Funktionseinheiten
bilden. Diese bestehen aus verschiedenen Zelltypen in ge-
nau festgesetzten Proportionen und mit definierter, räum-
licher Anordnung. Die Entwicklung, die zu den einzelnen
Arten spezialisierter Zellen führt, wird als Differenzierung
bezeichnet. Darüber gibt es praktisch in allen Geweben wei-
tere Spezialisierungen: So besteht die Population der Epi-
dermiszellen der Haut zu einen aus Basalzellen zum anderen
aus Zellen verschiedener Keratinisierungs-Stadien (7 Kap.
24.8.2). Die mitotische Aktivität ist auf die basalen Zellen
beschränkt, bei deren Teilung jeweils wieder eine Basalzelle
und eine Zelle entstehen, die sich weiter differenziert, d.h.
die Fähigkeit zur Teilung verliert, dafür aber die Fähigkeit
gewinnt, Keratin zu produzieren. Während Zellen der Epi-
35 dermis ständig abgebaut und durch neue ersetzt werden,
bleiben andere Zellen, wie z.B. der Großteil der Nervenzel-
len, als individuelle Einheit bis zum Tode des Menschen
bestehen. Der Austausch der Epidermiszellen ist wohl orga-
nisiert: Die Stammzellen produzieren durch Replikation
ständig Nachkommen, die nach mehreren Differenzie-
rungsschritten den Platz der verlorenen Zellen einnehmen.
Zwischen Wachstum und Differenzierung einerseits und
dem programmierten Zelltod durch Apoptose (7 Kap. 7.1.5;
7 Kap. 25.8.2) andererseits besteht ein Fließgleichgewicht,
d.h. die Anzahl der neu produzierten Zellen entspricht ge-
nau der der abgebauten Zellen. Eindrucksvolles Beispiel ist
das Darmepithel, das beim Menschen wie die Epidermis
innerhalb von einigen Tagen regeneriert wird.
! Störungen des Gleichgewichts von Zellneubildung und
programmiertem Zelltod können zu Tumoren führen.
Neben den Basalzellen der Haut und den Mukosazellen ha-
ben auch die Zellen des Knochenmarks eine dauerhaft hohe
Proliferationsrate. Daneben existieren Zellen mit nur zeit-
weilig erhöhter Mitoserate wie Fibroblasten oder Endothel-
zellen, die bei Verletzungen aktiv werden, und Zellen endo-
kriner Gewebe wie das Endometrium, die in Zyklen proli-
ferieren. Insgesamt sollen während eines Menschenlebens
1016 Zellen unbrauchbar und durch neue Zellen ersetzt
werden. Wie der Ausgleich des Zellverlusts durch entspre-
chende Zellproliferation reguliert wird, ist noch unbekannt.
Die molekularen Grundlagen sind jedoch von großem
praktischem Interesse, wenn bei Störungen des Fließgleich-
gewichts die Zahl der neu gebildeten Zellen die der verloren
gegangenen übersteigt. Die überzähligen Zellen können
sich teilweise oder vollständig, zeitweilig oder auch immer
der Regulation entziehen: die Folge sind harmlose Wuche-
rungen (benigne Tumoren) oder bösartige Krebsge-
schwulste (maligne Tumoren). Häufig ist mit der erhöhten
Proliferation auch eine Unfähigkeit zur Differenzierung
verbunden. Deshalb zielen Therapieansätze nicht nur auf
eine Hemmung der Proliferation, sondern auch auf eine
Induktion der Differenzierung.
Je nachdem, ob die Tumoren von Mesenchym- oder
Epithelzellen ausgehen, wird zwischen Sarkomen und Kar-
zinomen unterschieden. Tumoren der Blut bildenden Zel-
len werden als Leukämien bezeichnet. Ein Tumor entsteht
aus einer neoplastisch veränderten Zelle und stellt damit
einen Klon dar.
35.3 · Onkogene
1143 35
35.2 Tumorentstehung . Tabelle 35.1. Protoonkogene und verwandte Onkogene
(Cancerogenese) (Auswahl)
1. Wachstumsfaktoren
! Onkogene und Antionkogene sind die verantwortlichen PDGF (platelet derived growth factor) sis-Onkogen
Krebsgene. FGF (fibroblast growth factor) int 2-Onkogen
2. Transmembranäre Wachstums-
faktorrezeptoren
Krebs stellt eine genetische Erkrankung in dem Sinne dar,
EGF-Rezeptor erbB-Onkogen
dass das Genom der Krebszelle durch eine Akkumulation M-CSF-Rezeptor fms-Onkogen
von genetischen Veränderungen gekennzeichnet ist und 3. Membranassoziierte Tyrosinkinasen
dass diese Veränderungen von einer Krebszellgeneration Abl-Tyrosinkinase abl-Onkogen
auf die nächste übertragen werden. 4. Membranassoziierte Guanin-
Wesentliches Ziel der Krebsforschung ist die Identifi- nucleotid-bindende Proteine
zierung der für die Entstehung und Progression der einzel- Ras-Protein ras-Onkogen
nen Tumorerkrankungen beim Menschen verantwortlichen 5. Cytosolische Serin-Threoninkinasen raf-mil-Onkogen
Gene (nach den Sequenzdaten des menschlichen Genoms mos-Onkogen
etwa 900), der »Krebsgene«. Zu den »Krebsgenen« gehören 6. Cytosolische Hormonrezeptoren
die Onkogene und die Antionkogene, die die Tumorent- Schilddrüsenhormonrezeptor erbA-Onkogen
stehung fördern bzw. supprimieren. Diese Gene sind im 7. Transkriptionsfaktoren fos-, jun-, myc-, myb-,
normalen, d.h. genetisch nicht veränderten Zustand häufig rel-Onkogene

als Schlüsselgene für die Vorgänge der Signaltransduk- 8. Apoptosefaktoren bcl2-Onkogen

tion (7 Kap. 25) verantwortlich. Zwischen den Produkten
beider Gengruppen, den Onkoproteinen und Antionko-
proteinen, besteht ein fein reguliertes Gleichgewicht: Stö-
rungen dieses Gleichgewichts durch die konstitutive Akti-
vierung von Onkogenen und/oder die Inaktivierung von
Antionkogenen begünstigen die Tumorentstehung. Wahr-
scheinlich sind verschiedene Mutationen in unterschied-
lichen Genen für die Entstehung und Progression der
einzelnen Tumorerkrankungen verantwortlich und unter-
schiedliche Gene mit unterschiedlichen Mutationen beim
einzelnen Patienten verändert, was den individuellen Ver-
lauf der Erkrankung und das individuelle Ansprechen auf
eine Behandlung erklärt.
nimmt deswegen an, dass diese viralen Onkogene durch
Übernahme aus dem Genom der jeweiligen Wirtszelle des
Virus – eventuell in veränderter Form (z.B. ohne Introns)
– entstanden sein müssen.
! Protoonkogene sind an der Transduktion von Wachs-
tumssignalen beteiligt.
Das Zellwachstum wird durch eine große Zahl von Wachs-
tumsfaktoren reguliert. Diese sind Polypeptide, die von
verschiedenen Zellen gebildet werden und u.a. den Über-
gang von Zellen aus der G0- bzw. G1-Phase in den Zell-
zyklus bewirken. Dieser Übergang erfolgt in zwei Schritten
(. Abb. 35.1): Zuerst muss die Zelle durch sog. Kompe-

35.3 Onkogene
35.3.1 Mechanismus der Onkogenwirkung

! Viele Onkogene leiten sich von den an der Wachstums-

regulation beteiligten Genen ab.

Viele Onkogen-Proteine weisen Strukturähnlichkeiten mit

an der Wachstumsregulation beteiligten Proteinen auf. On-
kogene sind durch Mutationen aus diesen normalen, für
den Fortbestand einer Zelle notwendigen Genen ent-
standen. Die letzteren werden dementsprechend auch als
Protoonkogene, d.h. Vorläufer von zellulären Onkogenen
(c-Onkogene) bezeichnet. . Tabelle 35.1 gibt eine Zusam-
menstellung der wichtigsten Protoonkogene und der da-
raus abgeleiteten zellulären Onkogene. Die Analyse Tumor
bildender Gene aus Retroviren zeigt darüber hinaus, dass
. Abb. 35.1. Beeinflussung des Zellzyklus durch Kompetenz- und
auch diese als virale Onkogene (v-Onkogene) bezeich-
Progressionsfaktoren. Kompetenzfaktoren wie EGF, PDGF oder FGF
neten Gene in vielen Fällen Sequenzhomologie zu den an können durch bestimmte Onkogene substituiert werden; die Wirkung
der Wachstumsregulation beteiligten Genen zeigen. Man von Progressionsfaktoren ist z.B. durch TGF-β antagonisierbar
 1144 Kapitel 35 · Tumorgewebe
. Abb. 35.2. Ras-Inaktivierung durch
Bindung des GAP-Proteins. Das mutier-
te Ras-Protein kann das GAP-Protein nicht
mehr binden, sodass das Ras-Protein
daueraktiviert bleibt
tenzfaktoren von der G0- in die G1-Phase überführt wer-
den und anschließend unter dem Einfluss von Progres-
sionsfaktoren mit der DNA-Synthese beginnen. Zur
Gruppe der Kompetenzfaktoren zählen der epidermale
Wachstumsfaktor (EGF), der transformierende Wachs-
tumsfaktor-D (TGF-D), der Fibroblastenwachstumsfak-
tor (FGF) und der Plättchenwachstumsfaktor (PDGF)
(7 Kap. 7.1.4, 25.1.3). Der insulinähnliche Wachstums-
faktor-1 (IGF-1) oder Insulin in hohen Konzentrationen
sind wichtige Vertreter der Progressionsfaktoren (. Abb.
35.1). Der Durchtritt durch die G1-Phase erfordert die kon-
tinuierliche Wachstumsfaktor-Stimulation über mehrere
Stunden, da die Zellen sonst wieder in den G0-Zustand
zurückkehren. Während eines bestimmten Abschnitts der
G1-Phase müssen sowohl Kompetenz- als auch Progres-
sionsfaktoren anwesend sein, anschließend nur noch Pro-
gressionsfaktoren. Einige Cytokine wie der transformieren-
de Wachstumsfaktor-E (TGF-E), Interferone oder Tumor-
nekrosefaktor D (TNF-D) antagonisieren die Wirkung von
Wachstumsfaktoren.
Der erste Schritt in der Wechselwirkung von Wachs-
tumsfaktoren mit der Zielzelle ist die Bindung an einen
spezifischen Membranrezeptor, meist aus der Familie
35 der Rezeptoren mit Tyrosinkinaseaktivität (7 Kap. 25.5.1).
Eine wichtige Funktion bei dieser Signaltransduktion
kommt dem G-Protein Ras zu, das, das nach Aktivierung
durch Rezeptoren mit Tyrosinkinaseaktivität GTP bindet
und damit die Signaltransduktionskaskade weiterleitet.
Zur Signallöschung dient das GAP-Protein (GAP, GTPase
activating protein). Dies fördert die GTPase-Aktivität von
Ras und leitet damit dessen Inaktivierung ein (. Abb. 35.2).
Es gibt Mutationen, die einen Aminosäureaustausch im
Ras-Protein auslösen, der die Bindung des GAP-Protein
und damit die Ras-Inaktivierung unmöglich macht. Dies
führt zu einer Arretierung des durch den Wachstums-
faktor aktivierten Zustands der Zelle und wirkt damit
mitogen.
35.3.2 Protoonkogenaktivierung
durch Mutationen
! Onkogenmutationen wirken dominant.
Onkogene werden bei menschlichen Tumoren durch Mu-
tationen aktiviert. Die Wirkung aktivierter Onkogene ist
dominant, d.h. sie wird bereits manifest, wenn das zweite
Allel noch nicht aktiviert ist. Onkogen-Mutationen kön-
nen ständig in somatischen Zellen auftreten. Da sie nicht
in Keimbahnzellen beobachtet worden sind, wirken On-
kogenmutationen während der Embryonalentwicklung
offenbar letal. Punktmutationen verursachen den Aus-
tausch einer Aminosäure, so z.B. in den Positionen 12, 13
oder 61 des Ras-Onkoproteins bei Patienten mit Colontu-
moren. Chromosomale Translokationen wie bei der
chronischen Leukämie (9/22) führen zum Bruch von On-
kogenen und zur anschließenden Fusion der Bruchstücke
mit Ausbildung von Fusionsgenen, die in ihrer Funktion
verändert sind. Durch andere Translokationen (t8/14) ge-
rät ein Onkogen unter den Einfluss eines neuen regulato-
rischen Systems (wie z.B. das c-myc-Onkogen beim Bur-
kitt-Lymphom unter den Einfluss des Immunglobulin-
locus). Folge der Onkogenmutation ist die konstitutive
Anschaltung eines Signaltransduktionswegs, auch wenn
kein exogenes Wachstumssignal vorliegt. Sie macht die
Zelle also vom Liganden unabhängig. Alternativ kann
eine Daueraktivierung auch durch die konstitutive Pro-
duktion eines Wachstumsfaktors hervorgerufen werden,
für den die Zelle einen Rezeptor besitzt. Diese auto-
krine Stimulation der Proliferation (7 Kap. 25.1.1) ist
demnach ligandenabhängig. Darüber hinaus können
auch Gene, die am programmierten Zelltod (Apoptose)
beteiligt sind, durch eine veränderte Expression zu einer
Verlängerung der Überlebenszeit der Zelle (ohne Pro-
liferationssteigerung) führen. Dies kann z.B. durch eine
Erhöhung der bcl 2-Konzentration oder den Verlust von
35.4 · Antionkogene
Caspase-Inhibitoren hervorgerufen werden (7 Kap. 7.1.5,
7 Kap. 9.3.1, 9.3.5).
35.4 Antionkogene
35.4.1 Identifizierung von Antionkogenen
! Bei familiären Tumoren liegt bereits eine Keimbahnmu-
tation vor.
Wesentliche Anstöße erhielt die Antionkogenforschung
durch das Postulat von Alfred Knudson von der University
of Texas in Houston zu Anfang der 70er Jahre des ver-
gangenen Jahrhunderts, nach dem das Retinoblastom
(RB), ein Augentumor bei Kindern, durch zwei konseku-
tive Mutationen im Genom entsteht.
4 Danach treten bei der sporadischen Form des Retino-
blastoms beide Mutationen in der Retinazelle als soma-
tische Mutationen nach der Konzeption auf
4 wohingegen bei der familiären Form eine Mutation
als Keimbahnmutation von einem Elternteil ererbt
und die zweite als somatische Mutation erworben wird
(. Abb. 35.3)
Diese Hypothese geriet in Zusammenhang mit den Anti-
onkogenen, als die Natur dieser Keimbahn- und soma-
tischen Mutationen erkannt wurde: Sie führen nämlich
zur Inaktivierung eines Gens auf Chromosom 13, das als
Rb-Gen (7 Kap. 7.1.3; 35.4.2) bezeichnet wird. Grundlage
für diese Identifizierung waren cytogenetische Analysen,
die ein gelegentliches Fehlen der Bande q14 des Chromo-
soms 13 bei Retinoblastomtumorzellen ergeben hatten. An-
schließende genetische Analysen erbrachten den Beweis,
. Abb. 35.3. Vergleich der zeitlichen Mutationsabfolge bei fami-
liären und sporadischen Tumoren. Gezeigt sind die beiden Allele,
die nacheinander durch Mutationen geschädigt werden müssen
1145 35
dass es sich bei den beiden postulierten Mutationen um die
Inaktivierung der beiden Allele dieses Gens handelte. Es
wurde auch klar, dass das Rb-Gen rezessiv wirkte, da Kin-
der mit nur einem defekten Allel eine normale Entwicklung
erfahren. Nur die Zelle, die auch das normale Wildtyp-Allel
zusätzlich verliert, ist wachstumsgestört.
! Eine somatische Mutation ist an dem Verlust der Hete-
rozygotie erkennbar.
Zur Identifikation chromosomaler Regionen, die Anti-
onkogene enthalten, dient die DNA-Sequenzverlust-Ana-
lyse, die am Beispiel des Retinoblastoms veranschaulicht
werden soll (. Abb. 35.4), das – wie besprochen – als here-
ditäre und sporadische Form vorkommt. Geht man von der
Annahme aus, dass der hereditären Form eine Keimbahn-
mutation des Retinoblastomlocus zugrunde liegt, dann
wird das mutierte Allel bei einem Nachfahren des Patienten
in allen seinen Keimzellen und somatischen Zellen vor-
kommen. Der Nachkomme ist also heterozygot für den
Locus, da er auf einem Chromosom das normale und auf
dem anderen das mutierte Allel aufweist. Tritt nun in einer
Retinazelle eine somatische Mutation auf, die zum Verlust
des normalen Allels führt, so verliert die entstehende Tu-
morzelle ihren heterozygoten Zustand (loss of heterozygosi-
ty, LOH). Die Mutation, die zum Verlust des zweiten Allels
führt, kann mit einer Frequenz von 10–6 pro Zellgeneration
auftreten, sodass zwei nicht-funktionierende Allele entste-
hen, die jedoch Mutationen in unterschiedlichen Regionen
aufweisen können (gemischte Heterozygotie). Wesentlich
häufiger (mit 10–3 bis 10–4 pro Zellgeneration) erfolgt der
Verlust des Wildtyp-Allels jedoch durch andere Mechanis-
men wie chromosomale non-disjunction, meiotische Re-
kombination oder Genkonversion, sodass die meisten Tu-
moren, die beide Allele des Antionkogens verloren haben,
identisch mutierte Allele aufweisen. Ist eine solche Mutati-
on mit dem Verlust einer chromosomalen Bande (7 oben)
oder gar des gesamten Chromosoms verbunden, so ist sie
entsprechend einfach unter dem Mikroskop mit Hilfe der
Cytogenetik zu erkennen (ohne dass dadurch der genaue
Locus definiert wäre). Die meisten Mutationen liegen je-
doch auf submikroskopischer Ebene. Da aufgrund des oben
geschilderten Mechanismus der Entstehung der Heterozy-
gotie die chromosomalen Regionen, die das mutierte Allel
flankieren, oft ebenfalls betroffen sind, können polymor-
phe Marker, die in der Nähe der mutierten Region liegen
und ebenfalls vor der Tumorentstehung heterozygot waren,
einen parallelen Verlust der Heterozygotie aufweisen.
Zur Identifizierung bisher noch nicht bekannter Anti-
onkogene werden auch sog. anonyme Sonden (da zwar ihr
Bindungsort an einen Chromosomenabschnitt, nicht aber
ihre Struktur bekannt ist) als Marker für Polymorphismen
verwendet: Mehrere Hundert solcher anonymen DNA-
Sonden für alle Chromosomen mit einem mittleren Ab-
stand von etwa 10 Millionen Basen stehen für diese Unter-
suchungen zur Verfügung. Um den Verlust von Allelen zu
 1146 Kapitel 35 · Tumorgewebe

. Abb. 35.4. Verlust der Heterozygotie

(LOH) am Beispiel des Retinoblastoms. Oben
links: Vererbung eines Chromosom 13 mit
einem rezessiven Defekt am RB 1-Locus (als rb
bezeichnet) führt dazu, dass das Kind in allen
Zellen rb/+ ist. Das Retinoblastom kann durch
Verlust des dominanten Wildtyp-Allels durch
im unteren Abbildungsteil beschriebene
Mechanismen entstehen. Oben rechts: Eine
rezessive Mutation, die in einer einzelnen Zelle
auftritt, könnte ebenfalls durch einen der
angegebenen Mechanismen erkannt werden.
Unten: Der an der Tumorentstehung beteiligte
chromosomale Mechanismus kann durch den
Vergleich der Genotypen der Loci A und B auf
Chromosom 13 in Normal (N)– und Tumorge-
webe (T) analysiert werden: (α) Verlust des
Wildtypchromosoms, sodass ein Verlust dieser
Allele im Tumorgewebe auftritt, (β) Verlust des
Wildtypchromosoms und Duplikation des
mutierten Chromosoms, sodass die Intensität
der verbliebenen Allele doppelt so stark im
Tumor- wie im Normalgewebe ist, (γ) Rekombi-
nation unter Beteiligung eines Bruchpunkts
zwischen Locus A und rb1, sodass ein Locus im
Tumor heterozygot bleibt, während der andere
ein Allel verliert und das zweite verdoppelt,
und (δ) ist die Mutation spezifisch für den
rb1-Locus, dann zeigt die RFLP-Analyse keinen
Allelverlust im Tumor. (Nach Hansen u. Cava-
nee 1988)

entdecken, muss DNA von normalen und Tumorzellen
desselben Patienten verglichen werden. Die wiederholte
Beobachtung des Verlusts der Heterozygotie eines spezi-
fischen chromosomalen Markers in Zellen eines be-
35 stimmten Tumortyps spricht dann für die Existenz eines in
der Nähe gelegenen Antionkogens, dessen Verlust an der
Tumorentstehung beteiligt ist. So findet sich z.B. ein Mar-
ker für Chromosom 18q, der hochpolymorph (und des-
halb in den meisten Genomen heterozygot) ist, in 70%
fortgeschrittener Colonkarzinome in einem homozygoten
Zustand. Dies spricht für die Gegenwart eines Antionko-
gens in der Nähe dieses Markers. Mit diesem Ansatz kann
man das gesamte Tumorgenom systematisch auf die Ge-
genwart von LOHs untersuchen. Erschwert werden Inter-
pretation und Analyse von LOHs gelegentlich durch die
Gegenwart stromaler und inflammatorischer Zellen in
Tumorgewebeproben, d.h. von Zellpopulationen, die den
normalen Genotyp aufweisen.
! Unterschiede in den genetischen Fingerabdrücken von
Tumor- und Normalgewebe weisen auf somatische
Mutationen hin.
Ein ähnlicher Ansatz ist mit Hilfe der Sonden für Mikro-
satelliten möglich. Dazu werden kurze Nucleotidabschnitte
wie (CAC)5 oder (CTGT)4, die mehrfach an bekannten
Stellen des Genoms vorkommen, als Sonden verwendet.
Bei diesem Ansatz werden bei einem Patienten der trans-
formierte und der noch verbliebene gesunde Anteil eines
Organs parallel untersucht. Dies ist z.B. beim Nierenkrebs
möglich, zu dessen Behandlung die erkrankte Niere durch
Operation entfernt wird. Solche als genetischer Finger-
abdruck bezeichneten Analysen zeigen, dass bei Verwen-
dung der mit dem DNA-Abschnitt (CTGC)4 hybridisie-
renden Sonde (GACA)4 nach Restriktionsenzymverdau
bei einem Großteil der Patienten Bandenabschwächungen
erkennbar sind (. Abb. 35.5). Da die repetitiven Elemente,
35.4 · Antionkogene
1147 35

dung zusätzlicher Sonden kann die Zahl der Kandidaten-

gene von mehreren auf eines eingeengt werden, welches
dann sequenziert wird. Durch den Nachweis von Muta-
tionen bei Patienten mit der untersuchten Tumorerkran-
kung wird das Kandidatengen in den Stand eines Tumor-
gens erhoben.

35.4.2 Funktionen von Antionkogenen

! Tumorsuppressor-Gene regulieren den Zellzyklus.

Antionkogene bzw. Antionkoproteine wirken als Hemm-

. Abb. 35.5. Nachweis des Verlusts chromosomaler Abschnitte
bei 8 Patienten mit Nierenkrebs durch genetischen Fingerab-
druck. Die Hybridisierung erfolgte mit der synthetischen Oligonu-
cleotidsonde (GACA). N Normalgewebe; C Tumorgewebe; Hi Hinf I; H
Hae III. Die Pfeile zeigen die im Tumoranteil fehlenden Banden. (Nach
Bock et al. 1994)
mit denen diese Sonde hybridisiert, auf den kurzen Armen
der Chromosomen 13, 14, 15, 21 und 22 liegen, befinden
sich dort wahrscheinlich für die renale Tumorgenese kri-
tische Gene. Durch diese Techniken wird i.A. eine chro-
mosomale Region festgelegt, auf der sich eine Vielzahl
von Kandidaten-Antionkogenen befindet. Durch Verwen-
stoffe des Zellwachstums (. Tab. 35.2): Die Antionkoprote-
ine Rb105 und p53 (7 Kap. 7.1.3, 10.3.2, 35.4.2) werden als
kernständige Proteine beim kritischen Übergang von der
G1- in die S-Phase benötigt, also zu dem Zeitpunkt, zu dem
auch TGF-E die Progression durch den Zellzyklus hemmen
kann. Die Hemmung durch TGF-E korreliert mit einer
Phosphorylierung des Rb-Genprodukts, welches dadurch
inaktiviert wird (7 unten). Für andere Antionkoproteine
werden eine Reihe von Funktionen (. Tabelle 35.3) disku-
tiert, zu denen auch DNA-Reparaturfunktionen zählen
(Mutator-Gene, 7 Kap. 35.5.2). Für ein weiteres Antionko-
gen, das BCRA1-Gen, dessen Ausfall mit einem deutlichen
Risiko verbunden ist, ein familiäres Mammakarzinom zu
entwickeln, sind Funktionen bei der Regulation der Trans-
kription, der DNA-Reparatur sowie der Ubiquitierung von
Proteinen nachgewiesen worden.
! Das Rb-Genprodukt hemmt über die Inaktivierung der
Transkriptionsfaktoren E2F und DP1 den Eintritt in die
S-Phase.
Der zeitliche Ablauf des Zellzyklus wird durch Synthese
und Abbau der Cycline bestimmt, deren Konzentration in
einer Phase des Zellzyklus ansteigt und in einer anderen
wieder abfällt (Einzelheiten 7 Kap. 7.1.2). Cycline regulieren

. Tabelle 35.2. Antionkogene (Auswahl)

Gen Protein Krankheit Lokalisation Funktion
rb Rb Retinoblastom, Osteosarkom 13q14 Reguliert Transkriptionsfaktoren
wt-1 WT-1 Wilms-Tumor 11p13 Transkriptionsfaktor
apc APC Familiäre Polyposis 5q21 β-Cateninbindung
dcc DCC Colorektale Tumoren 18q21 Adhäsionsprotein
p53 p53 Osteosarkom, Mamma, Gehirn 17p12–13 Transkriptionsfaktor
nf1 Neurofibromin Neurofibromatose 17q11.2 GTPase-aktivierendes Protein
nf2 Merlin Akustikusneurinom 22q Cytoskelett-Integration
mts1 p16 Melanom 9q21 Blockiert cdk4
mts2 p15 ? 9q21 Blockiert cdk
msh2 MSH2 Colorektale Tumoren 2p DNA-Reparatur
mlh1 MLH1 Colorektale Tumoren 3p DNA-Reparatur
brca1 BRCA1 Mamma-, Ovarialcarcinom 17q21 Transkriptionsfaktor
 1148 Kapitel 35 · Tumorgewebe
. Tabelle 35.3. Mögliche Funktionen von Antionkogenen
Induktion terminaler Differenzierung
Aufrechterhaltung genomischer Stabilität (Mutator-Gene)
Triggerung des Alterungsprozesses
Regulation des Zellwachstums
Hemmung von Proteinasen
Modulation von Histokompatibilitätsantigenen
Regulation der Angiogenese
Vermittlung der Zell-Zell-Kommunikation
Proteinkinasen, die deshalb als Cyclin-abhängige Protein-
kinasen (cyclin dependent kinases, CDK 1, 2, 3 etc.) bezeich-
net werden. Die Aktivierung von CDK 2 durch Cyclin E und
von CDK 4 durch Cyclin D führt zur Phosphorylierung des
Retinoblastom-Proteins (Rb105), wodurch die Zelle in die
S-Phase eintreten kann. Rb105 bindet im dephosphory-
lierten Zustand zwei Transkriptionsfaktoren, E2F und DP1,
die dadurch inaktiviert werden. Die Phosphorylierung von
Rb105 führt zu Freisetzung von E2F und DP1, die dann die
Transkription von Genen in Gang setzen (. Abb. 35.6). Dazu
gehören Proteine, die für die die DNA-Synthese verantwort-
. Abb. 35.6. Wirkung von Cyclin
E/CDK2 und Cyclin D/CDK4 auf
den Rb-E2F-DP1-Komplex. Nach p 53
Phosphorylierung des Rb 105
dissoziiert der Komplex, sodass die
Transkriptionsfaktoren freigesetzt G2
werden und ihre Wirkung entfalten
können
S
35 . Abb. 35.7. Über p21 vermittel-
te Effekte von p53 auf die Cyclin
E/CDK2- und Cyclin D/CDK4-
Komplexe. (Einzelheiten 7 Text)
lich sind (sog. S-Phase-Proteine). Damit besteht die normale
Funktion von Rb105 – nicht nur in Retinazellen – darin,
den Eintritt in die S-Phase zu verhindern.
! p53 hemmt den Übergang in die S-Phase bei DNA-
Schädigungen.
Wenn die DNA einer Zelle durch Carcinogene, UV-Licht
oder γ-Strahlung beschädigt ist (7 Kap. 7.7.3), bedeutet dies
bei einer Zellteilung das Risiko einer erhöhten Mutations-
frequenz. Es existieren deshalb Mechanismen, mit denen
der Übergang in die S-Phase bei Schädigung des Genoms
verhindert wird. So steigt die p53-Konzentration als Ant-
wort auf eine DNA-Schädigung an. Dadurch werden ver-
schiedene Transkriptionsfaktoren wie z.B. das p21-Protein
vermehrt synthetisiert. p21 bindet die CDK 2 und 4 und
hemmt dadurch die Phosphorylierung ihrer Substrate, so
z.B. des Rb105 (. Abb. 35.7). Dadurch bleibt der Rb105-
E2F-DP1-Komplex intakt und die Zelle kann nicht von der
G1- in die S-Phase übertreten. Dies verschafft der Zelle eine
Gelegenheit, den DNA-Schaden zu reparieren. Anschlie-
ßend fällt der p53-Spiegel wieder ab, sodass p21 nicht län-
ger synthetisiert wird. Ist p53 mutiert (bei fast der Hälfte
aller menschlichen Tumoren! siehe unten), so kann der
G0 Cyclin E CDK 2 E2F
Rb DP 1
M
ATP
CDK 4
ADP
G1 P P
Cyclin D Rb + +
P P
Transkription von
S -Phase-Genen
35.4 · Antionkogene
Übergang in die S-Phase nicht verhindert werden. Darüber
hinaus supprimiert das p53-Protein die Entstehung von
Tumoren noch über die Initiation der Apoptose (7 Kap.
7.1.5). Somit überwacht p53 die Integrität des Genoms
durch Verhinderung der Zellteilung durch G1-Arretierung
oder Aktivierung eines Suizidprogramms, wenn die DNA
eine Schädigung aufweist.
! Papillomvirus-Genprodukte können p53 und das
Rb105 inaktivieren.
Papillomviren (7 Kap. 10.3.2) benötigen für ihre Replikation
Nucleotidvorstufen. Aus diesem Grunde ist es für sie günstig,
wenn die Wirtszelle in die S-Phase eintritt, in der die Bedin-
gungen für die Virusreplikation optimal sind. Die Virus-
proteine E6 und E7 binden und inaktivieren p53 und Rb105.
Wenn E7 an Rb105 bindet, setzt das Rb105-Protein die
E2F-DP1-Transkriptionsfaktoren frei, die den Eintritt in
. Abb. 35.8. Verteilung somatischer Mutationen im p53-Gen. In
der Mitte: Die Gesamtverteilung bei 1312 Patienten. Oben: Die unter-
schiedliche Verteilung bei Leberkrebspatienten in Hoch- und Niedrig-
1149 35
die S-Phase ermöglichen. Die Bindung von E7 an Rb105 ent-
spricht der Phosphorylierung von Rb105 durch die CDKs
(. Abb. 35.6), sodass die Notwendigkeit für das normale
Signal umgangen wird. Unter diesen Umständen erkennt
das p53-Kontrollsystem möglicherweise, dass etwas nicht
stimmt, sodass die Zelle der Apoptose anheim fallen würde.
Da jedoch das E6-Protein mit p53 assoziiert, wird sein Abbau
gefördert und seine Wirkung entsprechend geschwächt.
35.4.3 Inaktivierung von Antionkogenen
durch Mutationen
! Antionkogenmutationen wirken rezessiv.
Antionkogene wirken – im Gegensatz zu den Onkogenen
– rezessiv, d.h. sowohl die vom Vater als auch die von
risikoregionen. Unten Patienten mit Lungen- oder Darmkrebs. (Nach
Harris u. Hollstein 1993)
 1150 Kapitel 35 · Tumorgewebe

der Mutter ererbte Kopie des Gens muss inaktiviert sein,
damit die wachstumssupprimierende Funktion des Gens
aufgehoben wird. Prädispositionssyndrome resultieren
aus der Keimbahninaktivierung einer Kopie eines Anti-
onkogens, der eine somatische Mutation auf dem anderen
Allel folgen muss, damit die Krankheit klinisch manifest
wird. Auch Antionkogene können über die bekannten
Mechanismen inaktiviert werden: Punktmutationen (mit
Aminosäuresubstitutionen oder vorzeitigem Transla-
tionsabbruch), Deletionen, Insertionen oder Spleißmuta-
tionen.
eine immer wieder beobachtete zeitliche Abfolge morpho-
logischer Veränderungen vom Adenom bis zum Karzi-
nom auf, die auf molekulare Veränderungen untersucht
werden kann.
35.5.1 Familiäre adenomatöse Polyposis
(FAP)
! Werden Patienten mit der FAP nicht operiert, so entwi-
ckelt sich ein Dickdarmtumor.

! Somatische Mutationen des p53-Antionkogens sind

Die FAP manifestiert sich im 2.Lebensjahrzehnt und ist
häufig und bei den einzelnen Tumorerkrankungen
durch die Entstehung von Hunderten bis Tausenden von
unterschiedlich verteilt.
adenomatösen Polypen im Colon und Rektum gekenn-
Etwa 80% der Mutationen im p53-Gen bedingen Ami- zeichnet (. Abb. 35.9). Wird der Patient nicht behandelt,
nosäuresubstitutionen (Missense-Mutationen), die die so entsteht aus den Polypen im 4. und 5. Lebensjahrzehnt
Wechselwirkung mit anderen Proteinen in der Zelle oder immer ein colorektales Karzinom (obligate Präcancerose).
die Halbwertszeit verändern (. Abb. 35.8). Die Analyse Die Therapie besteht in der vorbeugenden, fast vollstän-
von über 30 Tumorerkrankungen des Menschen hat digen Entfernung des Dickdarms. Einzelne Patienten kön-
gezeigt, dass die meisten p53-Mutationen aufweisen nen auch andere Tumormanifestationen oder Verände-
und dass sich die Verteilung verschiedener Mutationen rungen am Retinaepithel entwickeln. Das bei der FAP
im p53-Gen von Erkrankung zu Erkrankung unter- veränderte Gen wird als APC-Gen (. Tab. 35.3) bezeich-
scheidet. Abbildung 35.8 zeigt die Verteilung von Muta- net. Es liegt auf Chromosom 5q21, hat eine Länge von
tionen bei verschiedenen Gruppen von Patienten. Hoch- 6,6 kb mit 15 Exons und codiert für ein Tumorsuppressor-
risikogruppen chinesischer Patienten mit Leberkrebs, Protein mit 2843 Aminosäuren. Eine Fülle unterschied-
die aus Gegenden stammen, in denen chronische Hepa- licher Keimbahnmutationen ist bei FAP-Patienten be-
titis B-Infektionen oder Belastung mit Aflatoxin B1 häu- schrieben worden, von denen die meisten Rasterschub-
fig sind, haben ein deutlich anderes Mutationsspek- mutationen sind, die einen vorzeitigen Abbruch der
trum als Patienten aus Gegenden mit geringem Erkran-
kungsrisiko. Deutliche Unterschiede finden sich auch
beim Vergleich von Lungen- und Darmkrebs. Im All-
gemeinen sind p53-Genmutationen mit einem schlech-
teren Ansprechen auf die Chemo- und Radiotherapie
verbunden. Die Zellen weisen ein labileres Genom auf,
sodass Mutationen akkumulieren können. Dagegen rea-
gieren Tumoren mit normalen p53-Genen gut auf die
therapeutisch induzierte DNA-Schädigung durch Cyto-
statika.

35 35.5 Kumulative Aktivierung von

Onkogenen und Inaktivierung
von Antionkogenen beim Mehr-
schrittprozess der Tumorigenese

Seit Ende der 80er Jahre des vergangenen Jahrhunderts sind

die Kenntnisse über die genetischen Grundlagen von
Krebserkrankungen, die den Dickdarm und das Rektum
betreffen (colorektale Tumoren) wesentlich weiterentwi-
ckelt worden. Dazu haben angeborene Erkrankungen (Prä-
dispositionssyndrome), die zu diesem Tumor führen, wie
. Abb. 35.9. Zahlreiche gutartige Polypen, aus denen sich bei
die familiäre adenomatöse Polyposis (FAP) oder die nicht- der familiären adenomatösen Polyposis obligat Karzinome ent-
polypösen colorektalen Tumorerkrankungen, beigetragen. wickeln. (Aufnahme von S.R.Hamilton, John Hopkins University
Außerdem tritt bei sporadischen colorektalen Tumoren School of Medicine)
35.5 · Kumulative Aktivierung von Onkogenen und Inaktivierung von Antionkogenen
. Abb. 35.10. Die APC-mRNA: Darstellung der 15 Exons. In der
unteren Hälfte sind die Keimbahnmutationen mit ihren klinischen
Manifestationen, in der oberen Hälfte die somatischen Mutationen
Translation mit Bildung eines verkürzten Proteins zur
Folge haben. Über den Nachweis solch unterschiedlich
verkürzter Proteine können etwa 80% der Mutationen
nachgewiesen werden. Dem APC-Protein wird eine Funk-
tion als Zelladhäsionsmolekül durch Wechselwirkungen
mit α- und ß-Catenin (7 Kap. 6.2.6) zugeschrieben. Zwi-
schen Art der Mutationen (und damit der Länge des Pro-
teinprodukts) und dem Auftreten klinischer Symptome
besteht eine direkte Beziehung (. Abb. 35.10). Die Ade-
nome bei FAP-Patienten erwerben mit zunehmender Zahl
1151 35
dargestellt, die sowohl bei der FAP als auch bei sporadischen colorek-
talen Tumoren vorkommen
und Größe eine weitere (in diesem Fall somatische) Mu-
tation in dem noch normalen Allel (Knudson-Hypothese,
7 Kap. 35.4.1). Diese könnte durch Mutagene in der ver-
dauten Nahrung verursacht werden oder dadurch, dass
die Zellen eine Störung des DNA-Reparaturmechanismus
aufweisen, sodass sie die Rasterschubmutationen nicht
reparieren können. Die Folge ist ein Wachstumsvorteil
durch die Mutation, sodass der betroffene Zellklon stark
expandiert.
 1152 Kapitel 35 · Tumorgewebe
35.5.2 Hereditäre nicht-polypöse
colorektale Tumoren
! Mutationen in Genen für Reparaturenzyme können
Tumorerkrankungen verursachen.
Diese vererbbaren Darmtumoren (Lynch-Syndrom) zeich-
nen sich durch eine Disposition, einen colorektalen Tumor
zu entwickeln, aus. Sie machen etwa 5 bis 15% der Dick-
darmkrebserkrankungen aus. Die Tumoren treten im mitt-
leren Lebensalter (mit etwa 45 Jahren) auf und liegen bevor-
zugt proximal der linken Colonflexur. Durch die Analyse
von Familien (. Abb. 35.11), in denen die Krankheit ver-
mehrt auftritt, gelang mit verschiedenen Methoden die
Identifizierung der zugrunde liegenden genetischen De-
fekte: Interessanterweise fand sich nicht der übliche Verlust
von Genen, sondern es wurden Allele mit unterschiedlicher
Länge beobachtet. Dies ist auf veränderte (CA-) Dinucleo-
tidrepeats zurückzuführen. Veränderungen dieser Mikro-
satelliten (7 Kap. 5.4.3) wurden im gesamten Genom ge-
funden, was dafür spricht, dass die an der angeborenen
Disposition für colorektale Tumoren beteiligten Gene
etwas mit der fehlerfreien DNA-Replikation zu tun hat-
ten. So wurden mehrere Gene auf den Chromosomen 2,
3 und 7 (hmsh2, hmlh1, hpms1 und 2) identifiziert, die
Homologe des bakteriellen muthls-Komplexes darstellen,
der am genetischen Korrekturlesen, d.h. der Reparatur
von Basenfehlpaarungen, beteiligt ist (7 Kap. 7.3.1). Keim-
bahnmutationen dieser Mutatorgene führen zu einem
Funktionsverlust mit Akkumulation von Fehlpaarungen
mit DNA-Replikationsfehlern, der bei einem hohen Pro-
zentsatz von Patienten mit angeborenen, aber auch bei
35
. Abb. 35.11. Familienstammbaum mit hereditärem, nicht-
polypösem, colorektalem Karzinom (CRC). Die Zahl gibt das Mani-
festationsalter an. Die meisten Betroffenen haben colorektale Karzino-
etwa 15% der Patienten mit sporadischen colorektalen
Tumoren gesehen wird. Diese Mikrosatelliten-Instabilität
könnte für Mutationen anderer Gene verantwortlich sein,
die an dem Mehrschrittprozess der Tumorentstehung be-
teiligt sind.
35.5.3 Sporadische colorektale Tumoren
Colorektale Tumoren stellen ein ausgezeichnetes Modell für
die molekulare Analyse des Mehrschrittprozesses der Tu-
morentstehung dar, da die meisten bösartigen Tumoren
(Karzinome) aus gutartigen (Adenomen) entstehen. Damit
lassen sich die einzelnen Schritte der Tumorigenese, d.h. die
Progression vom normalen Mukosaepithel über die Hyper-
plasie, die unterschiedlichen Adenomformen bis zum Kar-
zinom (mit und ohne Metastasierung) auf molekularer Ebe-
ne verfolgen. Dazu werden Gewebeproben in den einzelnen
Krankheitsstadien mit Hilfe cytogenetischer und moleku-
larbiologischer Methoden mit gesundem Colongewebe ver-
glichen und auf Änderungen (loss of heterozygosity (LOH)
und Mutationsanalyse) untersucht. Nach den Ergebnissen
dieser Analysen entstehen colorektale Tumoren als Folge
der kumulativen Aktivierung von Onkogenen bzw. Inakti-
vierung von Antionkogenen durch Mutationen.
! Mutationen in den mcc- und ras-Onkogenen bestim-
men die frühe Phase des Adenom-Karzinom-Über-
gangs.
Im Gegensatz zum normalen Epithelwachstum besteht in
der frühen colorektalen Tumorigenese ein hyperprolifera-
tiver Regenerationszustand von Colonepithelien. An die-
me (rote Symbole), einzelne aber auch andere Tumoren z.B. des Nieren-
beckens oder Dünndarms (grüne Symbole). ○ Frau; □ Mann; ø □/ ver-
storben; CRC colorektales Karzinom
35.5 · Kumulative Aktivierung von Onkogenen und Inaktivierung von Antionkogenen
1153 35

. Abb. 35.12. Genetische Veränderungen bei der Progression vom Colonadenom zum Colonkarzinom. (Einzelheiten 7 Text)

sem Zustand ist das mcc-Gen (mutated in colon carcinoma)
auf Chromosom 5q21 beteiligt. Das Auftreten des Adenom-
phänotyps wird von einer Hypomethylierung (verringerte
DNA-Methylierung, 7 Kap. 8.5.1) mit genomischer Insta-
bilität begleitet (. Abb. 35.12). Diese hemmt die Chromo-
somenkondensation. Bei einem Drittel der untersuchten
DNA-Abschnitte konnten bereits bei Grad I/II-Adenomen
Hypomethylierungen festgestellt werden. Im weiteren Ver-
lauf der Tumorigenese treten ras-Mutationen auf. Bis zu
10% der Colonadenome (Polypen) mit einer Größe von
weniger als 1 cm, aber bereits etwa die Hälfte der Adenome
mit einer Größe von mehr als 1 cm und die Hälfte aller
Karzinome weisen ras-Mutationen auf (. Abb. 35.13). Da-
neben können andere Onkogene wie z.B. das neu-, c-myc-
oder c-myb-Onkogen aktiviert sein.
! Mutationen in den dcc- und p53-Antionkogenen be-
stimmen die späte Phase des Adenom-Karzinom-Über-
gangs.
dukt übrig bleibt, so erwirbt die Tumorzelle einen weiteren
Wachstumsvorteil.
Der zweite wichtige Allelverlust betrifft Chromosom
18q21–22, das bei etwa 70% der Tumoren und etwa 50%
der späten Adenome verloren ist. Das dort gelegene dcc-
Gen (deleted in colorectal carcinomas) codiert für ein Pro-
tein, das eine signifikante Homologie zur Familie der Zell-
adhäsionsproteine aufweist. Das dcc-Gen wird in normaler
Colonschleimhaut exprimiert, jedoch nicht oder nur in
reduzierter Menge in der Mehrzahl (etwa 75%) der colorek-
talen Tumoren. Das Gen könnte durch Veränderungen von
Zell-Zell-Wechselwirkungen oder Zell/extrazelluläre Ma-
trix-Wechselwirkungen eine Rolle bei der Tumorigenese
spielen. Im Gegensatz zu Allelverlusten auf Chromosom
17p bestehen 18q-Verluste bereits in etwa 15% sog. Grad

Im weiteren Verlauf kommt es zum Verlust verschiedener

Regionen (LOH, 7 Kap. 35.4.1) im Bereich des kurzen
Arms von Chromosom 17: Sie sind zwar selten bei Pa-
tienten mit Adenomen und nehmen mit zunehmender
Größe, villösen Anteilen bzw. Dysplasie (Grad I bis III, also
zunehmend undifferenzierter) auf etwa 25% zu, treten aber
bei etwa 75% aller Patienten mit Karzinomen auf (. Abb.
35.13). Allen Verlusten gemeinsam ist die Region p12–13,
die das p53-Antionkogen enthält. Außerdem wurden
Punktmutationen in dem zweiten p53-Allel in Zusammen-
hang mit dem Verlust des anderen Allels häufig bei colorek-
talen Tumoren gefunden. Bereits die Mutation eines Allels
bewirkt einen selektiven Wachstumsvorteil der betroffenen
Zelle, da offenbar das mutierte Genprodukt mit der Funk-
tion des noch gesunden durch Komplexbildung interferiert . Abb. 35.13. Prozentsatz von ras-Mutationen und -Allelverlus-
(dominanter Effekt). Geht in einem weiteren Schritt das ten auf Chromosom 17p in Abhängigkeit vom Tumorstadium.
normale Allel verloren, sodass nur das mutierte Genpro- (Einzelheiten 7 Text)
 1154 Kapitel 35 · Tumorgewebe
. Abb. 35.14. Entstehung verschie-
dener Formen des BCR-ABL-Fusions-
gens durch Chromosomen-Trans-
lokation bei der chronisch mye-
loischen Leukämie. (Einzelheiten
7 Text)
I–II-Adenome und nehmen mit weiterer Dysplasie (Grad
III) auf 47% zu. Bei diesen molekularen Veränderungen
handelt es sich um häufige, in der Adenom-Karzinom-Se-
quenz anzutreffende Veränderungen, deren dargelegter
Zeitablauf bevorzugt auftritt, aber nicht auftreten muss. So
sind 17p-Allelverluste in frühen Adenomen selten und ver-
gleichende Untersuchungen zwischen Adenomen und Kar-
zinomen zeigen, dass der Unterschied nicht durch die Qua-
lität der Veränderungen, sondern ihre Quantität bedingt ist.
Daraus kann man schließen, dass die Akkumulation gene-
tischer Veränderungen und nicht ihr zeitlicher Ablauf für
die Progression vom Adenom zum Karzinom verantwort-
lich ist. Mit Sicherheit sind noch Allelverluste in anderen
chromosomalen Regionen (so z.B. auf 1q, 4p, 6p, 8p, 9q,
22q) für die colorektale Tumorigenese von Bedeutung, so-
dass man davon ausgehen kann, dass mindestens 6 bis 10
genetische Veränderungen die colorektale Tumorigenese
bedingen.
35.6 Entstehung von Fusionsgenen
durch Translokationen
35 Jede Änderung des Tumorzellgenoms kann (muss aber
nicht) eine makroskopisch sichtbare Veränderung der
Chromosomen bedingen und damit mit Hilfe der Cytoge-
netik erkennbar werden. Daraus folgt, dass die molekulare
Charakterisierung der chromosomalen Veränderung zur
Identifikation der an der Erkrankung ursächlich beteiligten
Krebsgene führen kann. In der Tat zeigte die Identifizierung
von Genen, die an Rearrangements beteiligt sind, dass es
sich in einzelnen Fällen um Onkogene handelt. Dadurch,
dass Onkogene an der Translokation beteiligt waren, war
belegt, dass sowohl Translokationen als auch Onkogene
entscheidend an der Tumorentstehung beteiligt sein müs-
sen. Die chromosomale Analyse, d.h. z.B. der Nachweis der
9/22 Translokation bei der chronischen myeloischen Leu-
kämie (CML), war die Voraussetzung für die Klonierung
der beteiligten Gene.
! Patienten mit chronisch myeloischer Leukämie weisen
eine reziproke Translokation zwischen den Chromo-
somen 9 und 22 auf.
Die chronische myeloische Leukämie (CML) ist eine Leu-
kämie, bei der Granulozyten und ihre unreifen Vorstufen
unreguliert produziert und ins Blut freigesetzt werden. Bei
Patienten mit CML waren im Jahre 1960 ein verkürzter lan-
ger Arm des Chromosoms 22 (22q- oder Philadelphia-
Chromosom) und als dessen Ursache im Jahre 1973 eine
Translokation beschrieben worden, die durch eine Aus-
tausch von Bruchstücken zwischen den Chromosomen 9
und 22 charakterisiert ist. Dabei ist jeweils eines der beiden
Chromosomen der Zelle betroffen. An der reziproken
Translokation sind das Abl-Onkogen auf Chromosom 9
und das Breakpoint Cluster Gen (BCR) auf Chromosom 22
beteiligt. Das Abl-Onkogen kodiert für eine Nichtrezeptor-
Tyrosinkinase mit einem Molekulargewicht von 145 kd
(p145ABL) (. Abb. 35.14).
Der Bruchpunkt im ABL-Gen tritt in Richtung 5c (zum
Zentromer hin) des Exon 2 (von insgesamt 11 Exons) auf . Die
Exons 2–11 des ABL-Onkogens werden in die sog. Major
Breakpoint-Cluster Region (M-bcr) des BCR-Gens trans-
poniert: die dabei entstehende Fusions-mRNA wird in ein
chimäres Protein transkribiert, das als p210BCR-ABL bezeich-
net wird. In seltenen Fällen liegt der Bruchpunkt auf Chromo-
som 22 an anderen Stellen, den Minor- bzw. Mikron-Break-
point Cluster Regionen. Dabei entstehen das p190BCR-ABL-
(m-bcr) bzw. p230BCR-ABL-(μ-bcr) Fusionsprotein.
Die mit der Bildung der Fusionsproteine verbundenen
strukturellen Änderungen rufen die Charakteristika der
CML (Transformation, vermehrte Proliferation, gestörte
Adhäsion) hervor: vermittelt wird diese durch konstitutive
Aktivierungen der RAS- , JAK-STAT-, FAK und Pl-3-Kina-
se-Signalwege (7 Kap. 25).
35.7 · Mechanismen der Invasion und Metastasierung
Durch die auf diesen biochemischen Kenntnissen beru-
hende Entwicklung eines spezifischen BCR-ABL-Tyrosin-
kinase-Inhibitors (STI 571) können Patienten mit CML
heute sehr gut behandelt werden (7 Kap. 35.11).
35.7 Mechanismen der Invasion
und Metastasierung
Solange ein Tumor auf seinen Ausgangspunkt beschränkt
ist (Primärtumor), kann die Erkrankung durch einen ope-
rativen Eingriff geheilt werden. Viele Tumoren weisen je-
doch die Tendenz auf, lokal invasiv zu wachsen und nach
Einbruch in die Gefäßbahn sekundäre Tumoren (Metasta-
sen) zu bilden.
35.7.1 Invasion und Metastasierung
! Invasion und Metastasierung erfordern zusätzliche
genetische Veränderungen in Tumorzellen.
Verschiedene koordiniert ablaufende Prozesse stellen die
Voraussetzung für Invasion und Metastasierung dar. Dabei
sind – wie im Falle der Onko- und Antionkoproteine – ne-
gative und positive regulatorische Elemente von Bedeutung.
Die bisher beschriebenen genetischen Veränderungen füh-
ren zu einer Störung der Proliferation. Das fehlregulierte
Wachstum ruft jedoch nicht per se Invasion und Metasta-
sierung hervor, d.h. diese Prozesse bedürfen zusätzlicher
genetischer Veränderungen. Mutationen können entweder
nacheinander und völlig unabhängig voneinander auftre-
ten oder – was wahrscheinlicher ist – durch zeitlich über-
lappende Prozesse. Invasion und Metastasierung kommen
durch Proteine zustande, die die Anhaftung von Tumorzel-
len an zelluläre oder extrazelluläre Matrixbestandteile des
umgebenden Gewebes fördern, die die Proteolyse von
Wirtsbarrieren wie z.B. Basalmembranen durch Tumorzel-
len stimulieren, die die Tumorzellfortbewegung unterstüt-
. Abb. 35.15. Mehrschrittprozess der Metastasierung. (Einzelheiten 7 Text)
1155 35
zen und die die Proliferation im Zielorgan der Metastasie-
rung ermöglichen. Diese Proteine werden auch von nicht-
transformierten Zellen gebildet, werden aber durch Proteine
antagonisiert, die ihre Produktion, Regulation oder Wir-
kung blockieren können. Störungen dieses Gleichgewichts
führen zur Aktivierung der Bewegung (Motilität) und Pro-
teolyse als Voraussetzung für Invasion und Metastasie-
rung.
! Die Neubildung von Gefäßen ist ein kritischer Schritt
bei der Tumorbildung.
Invasives Verhalten und Metastasierung beruhen auf einer
Kaskade von miteinander verbundenen und nacheinander
ablaufenden Schritten, die viele Wirt-Tumor-Wechselwir-
kungen beinhalten. Für die erfolgreiche Metastasierung
muss eine Zelle oder eine Gruppe von Zellen imstande sein,
den Primärtumor durch Überwindung der Basalmembran
zu verlassen, in das örtliche Stroma einzudringen, An-
schluss an die Zirkulation zu gewinnen, im entfernten Ge-
fäßbett stecken zu bleiben, in das Zielorgan zu auszuwan-
dern (Interstitium und Parenchym) und als sekundäre
Kolonie zu proliferieren (. Abb. 35.15). Dabei stellt die
Neubildung von Gefäßen, die Angiogenese, die Vorausset-
zung für die Größenzunahme des Primärtumors über einen
Durchmesser von 2 mm dar; diese Größenzunahme ver-
ursacht eine Hypoxie, die zur Bildung des Hypoxie-indu-
zierbaren Transkriptionsfaktors I (HIF) führen (7 Kap.
28.1.10). Diese führt zur Expression des vaskulären endo-
thelialen Wachstumsfaktors (VEGF). Auf parakrinem
Weg stimuliert VEGF die Proliferation von Gefäßendothel-
zellen. Diese Wirkung wird über spezifische VEGF-Rezep-
toren (VEGF-R1 und VEGF-2 oder KDR) vermittelt, die
Tyrosinkinaseaktivität aufweisen. An der Gefäßneubildung
sind auch andere Cytokine wie TGF-E, FGF und Angio-
genin beteiligt. Über die neu gebildeten Blutgefäße, die den
Tumor durchdringen, treten die Tumorzellen häufig in die
Zirkulation ein. Eine Neubildung von Gefäßen ist ebenso
für die Vergrößerung der metastatischen Kolonie erforder-
lich. Nur ein sehr kleiner Prozentsatz, d.h. weniger als 0,01%
 1156 Kapitel 35 · Tumorgewebe
der zirkulierenden Tumorzellen, ist schließlich imstande,
metastatische Kolonien zu verursachen. Demzufolge wird
die Metastasierung auch als ein hochselektiver Wettbewerb
angesehen, der das Überleben einer Subpopulation von me-
tastatischen Tumorzellen favorisiert, die im heterogenen
Primärtumor präexistieren.
35.7.2 Wechselwirkungen
von Tumorzellen mit der
extrazellulären Matrix
! Tumorzellen haben die Tendenz, Kompartimentgrenzen
zu überwinden.
Im Zuge der Entwicklung zu invasiven Tumoren missach-
ten Tumorzellen die soziale Ordnung von Grenzen inner-
halb von Geweben und dringen in fremde Organe ein. Der
Säugetierorganismus ist durch die extrazelluläre Matrix, die
aus der Basalmembran und dem darunter liegenden inter-
stitiellen Stroma (7 Kap. 24.1) besteht, in eine Reihe von
Gewebekompartimenten aufgeteilt. Die basale Epithelzell-
schicht liegt auf dieser Basalmembran, auf der anderen
Seite befindet sich das interstitielle Stroma mit stromalen
Zellen wie z.B. Fibroblasten oder Myofibroblasten. Norma-
lerweise mischen sich die Zellpopulationen auf den beiden
Seiten diesseits und jenseits der Basalmembran nicht. Beim
invasiven Tumor überwinden Tumorzellen jedoch die
Basalmembran, dringen in das darunter liegende inter-
stitielle Stroma ein und treten mit den stromalen Zellen in
Wechselwirkung. Demzufolge ist das metastatische Ver-
halten der Tumorzelle durch ihre Tendenz gekennzeichnet,
Gewebekompartimentgrenzen zu überwinden und sich mit
verschiedenen Zelltypen zu mischen. Die Basalmembran
ist eine Matrix aus Kollagen, Glycoproteinen und Proteo-
glykanen, die normalerweise keine zum passiven Zelltrans-
port ausreichend großen Poren enthält. Aus diesem Grunde
muss die Invasion der Basalmembran durch Tumorzellen
ein aktiver Vorgang sein. Sobald die Tumorzellen das
Stroma erreichen, können sie Anschluss an Lymph- und
Blutgefäße zur weiteren Disseminierung gewinnen. Die
35 Wechselwirkungen der Tumorzelle mit der Basalmembran
können in mehrere Schritte unterteilt werden:
4 die Herabsetzung der Wechselwirkungen zwischen den
einzelnen Tumorzellen
4 ihr Kontakt mit der Basalmembran
4 die Auflösung der Matrix und
4 die Wanderung (Motilität)
Die Bindung der Tumorzelle an die Basalmembranoberflä-
che wird durch Tumorzelloberflächenrezeptoren der Inte-
grin- und Nichtintegrin-Familien vermittelt. Diese Rezep-
toren erkennen Glycoproteine wie Laminin, Typ IV-Kolla-
gen und Fibronektin in der Basalmembran (7 Kap. 24.5.3).
Einige Stunden nach dem Kontakt der Tumorzelle mit der
Basalmembran findet sich an dieser Stelle eine umschrie-
bene lokalisierte Zone der Auflösung. Dies kommt dadurch
zustande, dass Tumorzellen proteolytische Enzyme sezernie-
ren oder dass die Wirtszelle Proteinasen freisetzt, die die
Matrix und ihre Adhäsionsmoleküle abbauen. Die Auflö-
sung der Matrix findet in einer umschriebenen Region in
der Nähe der Tumorzelloberfläche statt, in der die Mengen
aktiven Enzyms die natürlich vorkommenden Proteinase-
inhibitoren im Interstitium und in der Matrix, die von nor-
malen Zellen in der Nachbarschaft sezerniert werden, über-
schreitet.
! Tumorzellen müssen beweglich sein.
Die Motilität ist ein weiterer wichtiger Schritt der Invasion,
der dazu führt, dass die Tumorzelle gerichtet die Basal-
membran überwindet und sich durch das Stroma nach re-
gionaler Proteolyse der Matrix bewegt. Die Bewegung be-
ginnt mit der Ausstreckung von Pseudopodien an der Front
der wandernden Zelle. Die Tumorzellmotilität wird durch
Tumorzellcytokine (autokrine Motilitätsfaktoren) reguliert.
Die ebenfalls erhöhte ungerichtete Motilität von Tumorzel-
len führt zu einer Ausbreitung im Bereich des Primärtu-
mors. Zusätzlich können Ort und Richtung der Tumorzell-
bewegung durch von anderen Zellen gebildete Stoffe mit
chemotaktischer Wirkung beeinflusst werden.
35.7.3 Bedeutung von Proteinasen
für Invasion und Metastasierung
! Matrix-Metalloproteinasen besitzen eine Schlüsselfunk-
tion beim Abbau der extrazellulären Matrix.
Verschiedene Familien proteolytischer Enzyme (Metallo-,
Cystein- und Serinproteinasen) sind am Abbau der Basal-
membran bzw. der extrazellulären Matrix beteiligt. Serin-
proteinasen wie t-Plasminogenaktivator aktivieren das
Proenzym Plasminogen zu Plasmin, welches Matrixkom-
ponenten abbaut. Cysteinproteinasen wie Kathepsin B
können bei transformierten Zellen in aktivierter Form mit
der Plasmamembran assoziiert sein, von wo aus sie bei Kon-
takt mit einer Basalmembran darin enthaltenes Laminin
degradieren. Die wichtigste Gruppe Matrix-abbauender
Enzyme stellen die Matrix-Metalloproteinasen (MMP) dar
(7 Kap. 9.3.3, 7 Kap. 24.6).
Die Aktivität vieler Metalloproteinasen wird nach ihrer
Sekretion in den Extrazellulärraum auf verschiedenen Ebe-
nen reguliert (7 Kap. 9.3.3), entweder durch Aktivierung
mittels limitierter Proteolyse, durch Bindung an Zellmem-
branen, durch Substratbindung und durch Wechselwir-
kungen mit von Wirt- und/oder auch Tumorzellen gebil-
deten Metalloproteinase-Inhibitoren (tissue inhibitors of
metalloproteinases, TIMPs). TIMP1, ein Glycoprotein mit
einer Molekülmasse von 28,5 kDa, wird von vielen vom
Mesoderm abstammenden Zellen und von Fibroblasten
35.8 · Tumorentstehung durch Cancerogene
produziert. Es hemmt interstitielle und Typ IV-Kollagenase
und damit auch die Invasion von Tumorzellen durch Am-
nionmembranen (ein experimentelles System zum Studi-
um der Invasion und Metastasierung), ohne dass dabei die
Wachstumstendenz oder Adhäsion der Zellen beeinflusst
wird. TIMP2 besitzt ein Molekulargewicht von 21 kD und
ist nicht glycosyliert. Es wird ebenfalls von mesodermalen
Zellen produziert und bildet inaktivierende Komplexe mit
aktiven MMPs und ihren Proenzymen. Bei der Invasion
muss das fein regulierte Gleichgewicht zwischen Proteina-
sen und ihren Inhibitoren als Voraussetzung für eine er-
höhte Enzymaktivität gestört sein: Dies kann theoretisch
durch vermehrte Expression des Proteinase-Gens, ver-
mehrte Aktivierung des Proenzyms bzw. verringerte Ex-
pression des Antiproteinase-Gens oder erhöhte enzyma-
tische Inaktivierung des Proteinaseinhibitors eintreten.
Auch Cytokine beeinflussen die Aktivität von Proteinasen
und Antiproteinasen (. Abb. 35.16).
2 Ort der Änderungen und der Häufigkeit der Änderungen
. Abb. 35.16. Regulation der Aktivität von Matrix-Metallopro-
teinasen durch TIMPs und Cytokine. PA = Plasminogen-Aktivator;
PAI = Plasminogen-Aktivator-Inhibitor. (Einzelheiten 7 Text). (Nach Ries
u. Petrides 1995)
1157 35
35.8 Tumorentstehung durch
Cancerogene
35.8.1 Chemische Cancerogenese
! Mutagene hinterlassen Fingerabdrücke im Genom.
Obwohl inzwischen nachgewiesen ist, dass Änderungen in
bestimmten DNA-Sequenzen Krebs verursachen, sind die
Rolle der primären Faktoren, die diese Veränderungen her-
beiführen, und die Mechanismen, über die sie wirken, im
Detail noch unklar. Sequenzänderungen in Genen können
nach Exposition mit Stoffen auftreten, die die DNA schädi-
gen, wie z.B. elektrophile Mutagene oder auch spontan.
Auch die Zellproliferation als Reaktion auf einen Entzün-
dungsstimulus oder aufgrund der toxischen Wirkung von
Carcinogenen erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass gene-
tisch veränderte Zellen entstehen. Die Mutationen entste-
hen dabei nicht statistisch verteilt in einem bestimmten
Gen, sondern gehäuft in bestimmten Regionen. Jedes Mu-
tagen oder jeder mutagene Prozess hinterlässt einen cha-
rakteristischen Fingerabdruck von DNA-Veränderungen,
der sich hinsichtlich der Natur der Änderungen (d.h. wel-
che Nucleotide ein bestimmtes Basenpaar ersetzen), den
in dem Gen unterscheiden. Durch Analyse des Spektrums
von Mutationen, wie z.B. beim p53-Gen (. Abb. 35.8), kön-
nen Arbeitshypothesen über die umweltinduzierten und
körpereigenen molekularen Vorgänge aufgestellt werden,
die zur Entwicklung der Krebserkrankung beitragen. So
wurde z.B. die Hypothese aufgestellt, dass die G o T-Mu-
tationen in Codon 249 des p53-Gens bei Patienten mit Le-
berkrebs, die in Hochrisikoregionen in China leben, auf ein
Aflatoxin in der Nahrung zurückzuführen sind, da dieses
Toxin eine starke mutagene Aktivität besitzt und nach Mu-
tagenesestudien vor allem diese Transversion hervorruft.
! Viele Cancerogene sind elektrophil.
Bei der Mehrzahl der chemischen Cancerogene handelt es
sich um organische Moleküle mit einem Molekulargewicht
von weniger als 500 kDa: Neben polycyclischen aroma-
tischen Kohlenwasserstoffen, die in Autoabgasen, Zigaret-
tenrauch oder Kaffee (. Abb. 35.17) vorkommen, sind dies
aromatische Amine und Amide, alicyclische Nitrosamine
und Nitrosamide, halogenierte aliphatische und alicyclische
Kohlenwasserstoffe sowie komplexe Pyrrolizidinalkaloide.
Aber auch Metalle wie Cadmium, Beryllium, Kobalt, Blei
oder Nickel können cancerogen sein. Auffallende Gemein-
samkeit vieler organischer Cancerogene ist ihre Elektrophi-
lie, d.h. ihr Streben nach elektronenreichen Zentren ande-
rer Moleküle, die meist erst nach enzymatischer Aktivie-
rung der Cancerogene im Wirtsorganismus entsteht.
Elektronenreiche Zentren finden sich vor allem an Stick-
stoff-, Sauerstoff- und Schwefelatomen wie dem N7, dem C8
und dem Sauerstoffatom am C8 von Guanin, den Stickstoff-
 1158 Kapitel 35 · Tumorgewebe
. Abb. 35.17. Chemische Cancerogene
atomen1 und 3 von Adenin sowie dem Stickstoffatom 3 von
Cytosin in Nucleinsäuren.
! Die meisten Cancerogene sind Procancerogene, die
durch Zellenzyme aktiviert werden müssen.
In allen Fällen wird dann eine stark elektrophile Verbin-
dung gebildet. Enzyme, die Cancerogene aktivieren, sind in
vielen Zellen mit unterschiedlicher Spezifität und Aktivität
35 vorhanden. Polycyclische aromatische Kohlenwasserstoffe
werden zu Epoxiden (cyclische Äther) oder Radikalen um-
gewandelt: 3,4-Benzpyren wird unter Beteiligung von Cyto-
chrom P450 (Genfamilie I, 7 Kap. 15.2.2) im endoplasma-
tischen Retikulum zum Arenoxid oxidiert, das durch eine
Epoxidhydratase in ein Transdihydrodiol überführt wird.
Durch erneute Epoxidierung dieses als vorläufig bezeich-
neten Cancerogens entsteht das endgültige Cancerogen,
das covalent unter Öffnung des Epoxidrings mit nucleo-
philen Basen wie der Aminogruppe von Guanin reagiert
(Bildung von Benzpyrendiolepoxid-DNA-DNA-Adduk-
ten). Entgiftungsreaktionen überführen vorläufiges und
endgültiges Cancerogen in die entsprechenden Phenole
und Glutathionverbindungen. Ist durch eine Mutation die
entsprechende Glutathion-S-Transferase reduziert, so ist
dies mit einem erhöhten Krebsrisiko verbunden (7 Kap.
15.3). Der oxidative Stoffwechsel chemischer Fremdsub-
stanzen durch die Leber, der einen lebenswichtigen Ent-
giftungsmechanismus darstellt (7 Kap. 33.2.1), macht somit
die chemisch inerten Cancerogene erst zu Krebs auslö-
senden Stoffen. Die Organspezifität bestimmter Cancero-
gene ist möglicherweise auf die unterschiedliche Ausstat-
tung einzelner Gewebe mit diesen Enzymen zurückzu-
führen.
35.8.2 Physikalische Cancerogenese
Ultraviolettes Licht ist hoch mutagen, was zumindest teil-
weise auf die charakteristischen Pyrimidin-Dimerschäden
in der DNA zurückzuführen ist. Nicht reparierte Cytosin-
Dimere rufen Tandemmutationen hervor, bei denen zwei
benachbarte Cytosinreste (Cytosin-Cytosin) durch zwei
Thyminbasen (Thymin-Thymin) ersetzt werden. Diese
Änderung tritt praktisch nur nach Exposition mit UV-
Strahlung auf (7 Kap. 7.3).
35.10 · Früherkennung von Tumoren
35.9 Stoffwechsel von Tumorgeweben
! Tumorzellen weisen oft einen erhöhten Glucosedurch-
satz auf.
Etwa vor 60 Jahren bemerkte Otto Warburg (1883–1970),
einer der Begründer der heutigen Biochemie, dass verschie-
dene Tumoren auch in Anwesenheit von Sauerstoff große
Mengen von Lactat bilden. Er postulierte, dass die hohe
Glucoseabbaurate zu Lactat auch in Gegenwart von Sauer-
stoff die Folge eines Defekts der Atmungskette sei, und dass
Krebs entstehe, wenn die Zelle auf eine irreversible Schädi-
gung ihrer Atmung mit der Adaptation an die Glycolyse zu
Lactat antwortet. Nach Warburg können diese Zellen ihren
differenzierten Zustand nicht aufrechterhalten und wach-
sen als entdifferenzierte Zellen unkontrolliert. Seine Beo-
bachtungen führten ihn zu der apodiktischen Aussage
(1956), dass »die Ära vorbei sei, in der die Glycolyse zu
Lactat in Tumorzellen und ihre Bedeutung für die Tumo-
rentstehung diskutiert werden, und niemand heutzutage
bezweifelt, dass wir den Ursprung der Tumorzellen erken-
nen werden, wenn wir wissen, wie die hohe Glycolyserate
zu Lactat zustande kommt, oder um es vollständiger zu
fassen, wenn wir wissen, wie die gestörte Atmung und die
exzessive Lactatbildung zustande kommen«. Durch Unter-
suchungen seit Mitte der fünfziger Jahre sind die Ergeb-
nisse von Warburg relativiert worden, da auch Tumoren
existieren, die Glucose in normalen Mengen oxidieren.
Dennoch weisen viele Tumoren eine erhöhte Glucoseauf-
nahme auf, was auch die Grundlage der sog. Fluordesoxy-
glucose-(FDG)-Methode zur PET-Analyse von Tumoren
darstellt.
! Mammakarzinome sind in ihrem Wachstum auf Östro-
gene angewiesen.
Bereits normales Brustdrüsengewebe ist von weiblichen
Sexualhormonen abhängig, sodass die Hormonabhängig-
. Tabelle 35.4. Tumormarker (Auswahl)
Freigesetzte Substanz Vorkommen bei Tumoren
Onkofetale Antigene
Carcinoembryonales Antigen (CEA) Carcinom (Colon, Rektum, Pankreas,
Gallenblase u. a.)
α1-Fetoprotein Hepatom, malignes Teratom
CA 19-9 Pankreascarcinom
CA 12-5 Ovarialcarcinom
Enzyme
Prostata-spezifisches Antigen (PSA) Prostatacarcinom
Alkalische Phosphatase Osteosarkom, Knochenmetastasen (besonders
(Knochenisoenzym) Brust, Prostata, Schilddrüse)
Hormone
Choriongonadotropin (HCG) Choriocarcinom, Testiscarcinom
Calcitonin Medulläres Schilddrüsencarcinom
(Pro-)ACTH Lungentumoren
1159 35
keit davon abgeleiteten Tumorgewebes nicht überrascht.
Die Hormone wirken dabei über die Induktion der Bildung
von Polypeptidwachstumsfaktoren wie IGF, EGF oder
TGF-D. Die Antagonisierung von Östrogenen ist deshalb
ein wesentlicher Bestandteil der Therapie des Mamma-
karzinoms: diese kann entweder durch Antiöstrogene wie
Tamoxifen erfolgen, die Östrogen kompetitiv vom Östro-
genrezeptor verdrängen, durch Hemmstoffe der endogenen
Östrogensynthese, sog. Aromatasehemmstoffe oder durch
Medikamente, die zu einem Abbau des Östradiolrezeptors
führen (7 Kap. 27.6.2).
35.10 Früherkennung von Tumoren
Zu den dringlichsten Problemen in der klinischen Onkolo-
gie gehört die Früherkennung von Krebserkrankungen. Die
ideale Substanz zur Früherkennung einer Tumorerkennung
wäre ein stabiles Molekül, das ausschließlich von Tumorzel-
len (eines Gewebes) synthetisiert und sezerniert wird und
im Plasma und/oder Urin nachweisbar ist. Alle bisher be-
kannten von Tumorzellen abgegebenen und als Tumor-
marker bezeichneten Moleküle werden jedoch auch von
gesunden Geweben produziert. Da von Tumoren abgege-
bene Moleküle in den Körperflüssigkeiten verdünnt wer-
den, muss eine bestimmte Anzahl von Tumorzellen vor-
handen sein, um nachweisbare Quantitäten zu bilden: Die
chemische Grenze liegt etwa bei 104 bis 105 Zellen, das sind
vier bis fünf Zehnerpotenzen weniger als das Minimum
von 109 Zellen, welches 1 cm3 Tumormasse entspricht, das
zum radiologischen Nachweis (z.B. durch Computertomo-
graphie) erforderlich ist. Aus diesem Grunde sind die Er-
krankungen bei dem erstmaligen Nachweis eines Tumor-
markers i.a. bereits in einem fortgeschrittenen Stadium.
Tumormarker eignen sich deshalb weniger zur Früher-
kennung als zur Verlaufsbeurteilung der Therapie einer
Krebserkrankung: klinisch wichtige Tumormarker sind
Vorkommen bei nicht-malignen
Erkrankungen
Gewebenekrose, starkes Rauchen,
Darmerkrankungen
Lebercirrhose, Hepatitis
Prostatitis
Osteomalazie
 1160 Kapitel 35 · Tumorgewebe
das D-Fetoprotein, das carcinoembryonale Antigen (CEA),
das Prostata spezifische Antigen (PSA) und Hormone, die
von bestimmten Tumoren ektopisch produziert werden
(. Tabelle 35.4).
Eine wichtige Früherkennungsmethode ist die Unter-
suchung des Stuhls auf okkultes Blut (das aus Darmtumo-
ren stammen kann). Der auch als Haemokkult bezeichnete
Test nutzt die Pseudo-Peroxidaseaktivität von Hämoglobin
aus. Empfindlichere – in Entwicklung befindliche – Tests
versuchen, Mutationen in Tumor-DNA, die aus Stuhl extra-
hiert wird, nachzuweisen.
In der Diagnostik von Leukämien und Tumorerkran-
kungen finden zunehmend Mikroarray- und Proteom-
analysen Anwendung (Beispiel, 7 Kap. 7.4.4), bei denen die
Probe auf die unterschiedliche Expression von Tausenden
von Genen bzw. Proteinen untersucht wird.
35.11 Krebstherapie
! Cytostatika hemmen die Zellteilung über eine Hem-
mung des DNA-Stoffwechsels.
4 Cytostatika greifen an definierten Stellen des Zellzyklus
ein; sie können aber nur auf Zellen wirken, die sich in
Teilung befinden (was bei Tumorgewebe nicht für alle
Zellen zutrifft):
4 Alkylanzien (wie z.B. Cyclophosphamid) führen über
eine covalente Brückenbildung zwischen den DNA-
Strängen zu einer Hemmung der Replikation
4 Anthracycline interkalieren zwischen den DNA-Strän-
gen und verwehren der DNA-Polymerase damit den
Zugang
4 Verschiedene Cytostatika hemmen für die DNA-Syn-
these essentielle enzymatische Systeme wie die Topoi-
somerase (so z.B. Etoposid)
4 Vincaalkaloide wirken über eine Hemmung des Spin-
delapparats in der M-Phase
4 Antimetaboliten (wie Fluorouracil) hemmen spezifisch
in der S-Phase die Thymidylat-Synthase und damit die
DNA-Synthese (7 Kap. 19.1.5)
35 4 Im Gegensatz dazu aktivieren die ebenfalls in der
Krebstherapie eingesetzten Cytokine Interferon-α oder
Interleukin-2 Immunvorgänge (7 Kap. 25.5; 34.6.2)
! Neue Therapieansätze entwickeln sich aus dem zuneh-
mend besseren Verständnis der Biochemie von Tumoren.
Das zunehmend bessere Verständnis der biochemischen
Grundlagen von Tumorerkrankungen erlaubt die Entwick-
lung einer zielgerichteten Tumortherapie: Schwerpunkt der
bisherigen Entwicklung sind monoklonale Antikörper und
Tyrosinkinaseinhibitoren: beim Darmkrebs wird der EGF-
Rezeptor von einem Teil der Patienten überexprimiert,
beim Brustkrebs das HER2-Neu-Onkogen, ein Verwandter
des EGF-Rezeptors. Monoklonale Antikörper gegen diese
Proteine (Cetuximab bzw. Trastuzumab) sind therapeutisch
wirksam und werden für die Behandlung dieser Krebsarten
eingesetzt. Ebenso ist ein Antikörper gegen vEGF (Bevazu-
zimab), der die Angiogenese hemmt, für die Therapie von
Darmtumoren zugelassen.
Tyrosinkinasen sind wichtige Vermittler der Signal-
transduktion einer Vielzahl von Membranrezeptoren
(7 Kap. 25.5.1). Bei der chronisch myeloischen Leukämie
wird die BCR/ABL-Fusions-Tyrosinkinase (siehe oben)
effektiv durch den Tyrosinkinase-Inhibitor STI 571 ge-
hemmt. Deshalb hat auch dieses Molekül Eingang in die
Leukämietherapie gefunden. Die Tyrosinkinaseinhibitoren
Erlotinib und Gefitinib hemmen über eine selektive Hem-
mung der ATP-Bindungsstelle die EGF-Rezeptor-Tyrosin-
kinase und werden zur Behandlung des Bronchialkarzi-
noms angewandt.
! Tumorzellen entwickeln Resistenzmechanismen gegen
Cytostatika.
Werden Tumorzellen in vitro mit pflanzlichen Cytostatika
wie Vincaalkaloiden, Actinomycin D oder Anthracyclinen
inkubiert, entstehen resistente Varianten. Im Allgemeinen
sind diese Zellvarianten nicht nur gegen das Medikament
resistent, das sich in dem Inkubationsmedium befindet,
sondern auch gegenüber anderen aus natürlichen Pro-
dukten. Deshalb wird dieser Zustand als Multidrug-Resis-
tenz (MDR) bezeichnet. Diese Resistenz erklärt, warum
viele Tumorerkrankungen des Menschen nur schlecht auf
die Behandlung mit Cytostatika ansprechen. Vermittelt
wird sie u.a. durch eine Familie membranständiger Trans-
portproteine, die die Cytostatika aus dem Cytosol wieder in
den Extrazellulärraum zurücktransportieren. Zu dieser Fa-
milie gehört auch das bei der cystischen Fibrose gestörte
Transportsystem. Beim Menschen gibt es zwei Mitglieder
der MDR-Familie (MRD-1 und -2). Beide Proteine weisen
einen hohen Homologiegrad auf. Beim Menschen wird das
MDR-1-Protein (. Abb. 35.18) in Nieren, Colon, Placenta,
Nebennieren und spezialisierten Strukturen wie Endothel-
zellen, die an der Bildung der Blut-Gehirn- und Blut-Ho-
den-Schranke beteiligt sind, gefunden. Es wird ihnen des-
halb eine physiologische Funktion beim ATP-abhängigen
Transport von Steroidhormonen und der Ausscheidung
natürlicher Toxine zugeschrieben. Das MDR-1 codiert für
ein Glycoprotein mit einem Molekulargewicht von 170 kD
(P-Glycoprotein, P-170), das MDR-2 ist offenbar am stär-
ksten in der Leber exprimiert. Interessanterweise sind Tu-
moren, die aus Geweben mit hoher MDR-1-Expression
entstehen, chemotherapieresistent, wohingegen die initiale
Therapieempfindlichkeit von Leukämien und Lymphomen
mit einer niedrigen MDR-1-Expression normaler hämato-
poietischer Zellen einhergeht. Tumorzellen können offen-
bar nicht nur dadurch, dass sie sich in der G0-Phase befin-
den, sondern auch durch eine vermehrte MDR-1-Expres-
sion gegenüber der Chemotherapie resistent sein. Die
Isolierung des MDR-1-Gens hat somit einen molekularen
35.12 · Gentherapeutische Ansätze bei Krebserkrankungen
. Abb. 35.18. Strukturmodell des MDR1-Proteins (P170-Glycoprotein), das als transmembranäres Protein in der Zellmembran ver-
ankert ist
Marker zur Verfügung gestellt, der zur Beurteilung der
Chemotherapieresistenz dienen kann. Daneben spielen
auch Änderungen der Expression anderer Enzyme wie der
Topoisomerase II (7 Kap. 7.2.3) oder der Glutathion-S-
Transferase (7 Kap. 15.3) eine Rolle für die Chemothera-
peutikaresistenz.
35.12 Gentherapeutische Ansätze
bei Krebserkrankungen
! Die Gentherapie von Krebserkrankungen steht am
Beginn ihrer Entwicklung.
Die kausale Behandlung des durch Mutationen hervorgeru-
fenen Gendefekts bei Tumorzellen ist die Einführung des
normalen Gens in die Tumorzelle. Bei Genverlusten oder
-störungen (wie z.B. solcher der Antionkogene) ist das Ziel,
durch Transfektion ein neues Gen in das zelluläre Genom
einzubringen (Additionstherapie) oder das defekte Gen
durch homologe Rekombination (7 Kap. 7.4.4) durch ein
neues zu ersetzen (Substitutionstherapie). Das ersetzte
fremde Genmaterial tritt dabei an die Stelle des defekten
endogenen Gens und wird wie dieses reguliert. Die homo-
loge Rekombination gelang jedoch bisher nur an kulti-
vierten Zellen der Maus (7 Kap. 7.4.5). Die Transfektion,
d.h. die Einbringung eines zusätzlichen funktionellen Gens
in eine Zelle, kann durch die in Kapitel 7 (7 Kap. 7.4.1, 7.4.2)
besprochenen Methoden erreicht werden; dies funktioniert
in vitro zwar leicht, ist aber in vivo bei einem soliden Tumor
bisher sehr viel schwieriger zu erreichen. Die Effizienz der
Transfektion ist immer noch sehr niedrig und auch von
Zelle zu Zelle stark unterschiedlich. Die meisten mensch-
lichen Zellen können zudem nur kleine Mengen fremder
DNA integrieren (etwa 6 kb). Weiterhin wird das trans-
fizierte Gen aus noch unbekannten Gründen nur für einige
Monate exprimiert. Daher versucht man, durch selektive
Promotoren die Transkription der transfizierten Gene zu
beeinflussen.
1161 35
! Mit der Anti-Gentherapie sollen Gene der Tumorzelle
gehemmt werden.
Andere Ansätze bedienen sich der Antisense-Oligonuc-
leotide, d.h. kurzen synthetischen Nucleotidsequenzen,
die zu DNA- und RNA-Sequenzen komplementär sind
und diese durch Hybridisierung inaktivieren (7 Kap. 7.4.4).
Durch Bindung dieser Nucleotide an ihr jeweiliges Ziel-
molekül können Transkription oder Translation des dazu-
gehörigen Gens selektiv gehemmt werden. Wenn dieses
Gen ursächlich an der Entstehung der Tumorkrankheit be-
teiligt ist, könnte seine Inaktivierung zu einer Regression
des malignen Phänotyps führen. Die mRNA im Cytosol
stellt ein geeigneteres Ziel als die DNA im Zellkern für
diesen Ansatz dar, da die Antisense-Oligonucleotide –
neben der Zellmembran – nicht auch die Kernmembran
permeieren müssen.
! Der Einbau von Cytokingenen soll natürliche Abwehr-
mechanismen stimulieren.
Cytokine können eine Wirkung auf das Tumorwachstum
haben, besitzen jedoch bei systemischer Gabe Nebenwir-
kungen und eine sehr kurze Halbwertszeit. Deshalb ver-
sucht ein neuer Ansatz, Gene für Cytokine (Interleukin-2,
Interleukin-4, Interferone, Tumornekrosefaktor) in Zellen
einzubringen, die spezifisch mit Tumorzellen in Wechsel-
wirkung treten, wie z.B. tumorinfiltrierende Lympho-
zyten (TIL). So wurden solche Zellen mit dem Gen für
Tumornekrosefaktor transfiziert. Durch Markierung mit
einem Markergen wie Neomycinphosphotransferase konn-
te nachgewiesen werden, dass sich diese Zellen im Tumor
anreichern und dort bis zu 10 Monaten fremde Gene expri-
mieren.
! Gentherapeutische Manipulation erlaubt die lokale
Produktion eines Cytostatikums.
Ein weiterer Therapieansatz ist die virusdirigierte Enzym-
Medikamentenvorstufen-Therapie, die darauf beruht,
dass ein Vektor spezifisch in Tumorzellen, aber nicht in
 1162 Kapitel 35 · Tumorgewebe
normalen Zellen exprimiert wird. So wird ein Virusgen
in der normalen Leberzelle nur dann exprimiert, wenn es
an den Albuminpromotor gekoppelt ist, aber nicht bei
Kopplung an den D-Fetoprotein-Promotor. In der Leber-
tumorzelle ist dies genau umgekehrt: Koppelt man z.B.
In Kürze
Der programmierte Zelltod, die Apoptose, ist ein Vorgang,
der im Zuge der Tumorentstehung fehlreguliert sein kann.
Onkogene und Antionkogene sind die Krebsgene, deren
Mutationen die Tumorentstehung verursachen. Mehrere
Hundert dieser Gene sind inzwischen bekannt. Onkogene
und Antionkogene sind im nicht-mutierten Zustand an
der Regulation des Zellwachstums beteiligt. Onkogene
werden durch Mutationen aktiviert. Die mutierten Gene
werden auf die nächste Tumorzellgeneration weiter-
gegeben. Die Inaktivierung von Antionkogenen trägt
ebenfalls zur Tumorentstehung bei. Mutationen in Genen
für Reparaturenzyme verursachen Tumoren. Bei vielen
Leukämien sind Translokationen bekannt, die zur Bildung
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35
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selektiven Promotor, so führt die Expression dieses Gens
in der Zielzelle dazu, dass angebotenes 5-Fluorocytosin
intrazellulär in das Cytostatikum 5-Fluorouracil umge-
wandelt wird.
von Fusionsgenen und damit -proteinen mit veränderter
Funktion führen. Invasion und Metastasierung erfordern
zusätzliche genetische Veränderungen. Expression von Pro-
teinasen und Neubildung von Gefäßen (Angiogenese) sind
Schlüsselvorgänge in dem Mehrschrittprozess der Tumori-
genese. MMPs und vEGF sind dabei von entscheidender Be-
deutung, sodass an der Entwicklung von Inhibitoren gear-
beitet wird. Mutagene Stoffe sind in unserer Umwelt und
Nahrung vorhanden.
Die Krebstherapie entwickelt sich von einem empiri-
schen zu einem auf den Erkenntnissen der Biochemie ba-
sierenden Ansatz. Beispiele dafür sind monoklonale Anti-
körper und Tyrosinkinase-Inhibitoren.
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