Anlisis de nitrgeno por el mtodo Kjeldahl Daniela Vidal Huertas (201225635) 1.

Introduccin El mtodo de Kjeldahl tiene como objetivo la determinacin de la cantidad de nitrgeno orgnico en una amplia gama de muestras. A travs de tres etapas fundamentales: digestin, destilacin y titulacin, este mtodo se usa comnmente para estimar el contenido de protenas de los alimentos. El mtodo de Kjeldahl se basa en la digestin de una muestra en cido sulfrico concentrado hasta que el nitrgeno en la misma se convierte en sulfato de amonio. Aadiendo un exceso de solucin de hidrxido de sodio, el cual neutraliza el cido sulfrico, el amoniaco liberado es destilado y recogido sobre una solucin estndar de HCl, de la cual, una fraccin es neutralizada por el amoniaco. Finalmente, se valora el HCl no consumido a travs de una titulacin por retroceso con NaOH estndar y se halla la cantidad de amoniaco recogido. El mtodo de Kjeldahl en la actualidad tiene una gran variedad de aplicaciones, desde la determinacin de nitrgeno en alimentos y bebidas, como en carne, cereales y forrajes. Cunto porcentaje de nitrgeno estar presente en una muestra de harina de trigo? El objetivo principal de la prctica es la determinacin del porcentaje de nitrgeno en una muestra dada por medio del mtodo Kjeldahl, durante la cual, se busca entender y realizar una digestin con cido sulfrico, una destilacin del amoniaco y una valoracin por retroceso. 2. Procedimiento Anlisis de nitrgeno por el mtodo Kjeldahl Para efectos de esta prctica se implement harina de trigo como muestra problema, se pesaron 0,5g de la harina sobre papel filtro que posteriormente se introdujo en el frasco de kjeldahl y se aadieron 25mL de cido sulfrico concentrado, se procedi a pesar sobre papel filtro 10g de K2SO4 y 0,1g de selenio. Sin embargo, debido al cuello angosto del frasco de kjeldahl, no se pudieron introducir el K2SO4 y el selenio junto con el papel, as que fueron aadidos directamente al frasco de kjeldahl sin el papel, por lo que no fue necesario hacer un blanco. Se dej el frasco de kjeldahl de manera Paula Guerrero (201222774)

inclinada en la campana de extraccin para que se calentara, vigilando que la solucin no subiera lo suficiente como para salir del frasco, se continu la digestin hasta que la solucin se torn de color amarillo plido, una vez adquiri este color, se procedi a realizar la destilacin, en la cual al agregar NaOH a la mezcla obtenida por digestin se liber NH3 gaseoso. El calentamiento destil el gas que lleg a un colector con HCl el cual reaccion con el NH3. Una vez finalizado este procedimiento se realiz la titulacin de la muestra con NaOH para saber cunto HCl no reacciono. Estandarizacin del HCl y NaOH Para la estandarizacin del cido clorhdrico se utiliz el indicador verde de bromocresol. Tras calcular la cantidad necesaria de Na2CO3 requerida para reaccionar con 15mL de HCl 0.1M, se pes esta cantidad de Na2CO3 (0.0801g). Una vez contenido en un Erlenmeyer, se diluyo con 15mL de agua destilada y se agregaron tres gotas del indicador; con una bureta de 25mL se procedi a realizar la titulacin, agregando HCl hasta que la solucin se torn verde, utilizando en total 24.3mL de HCL. Para el NaOH se pesaron 0,315g de biftalato cido de potasio, cantidad necesaria para que reaccione con 15mL de NaOH 0.1M. Luego de ubicarlo en el Erlenmeyer, se diluy con 15mL de agua destilada y se le adicionaron tres gotas de fenolftalena, se titul hasta que el cambio de color permaneciera de 10 a 15 segundos; se requirieron 16mL de NaOH para completar la titulacin. Para la realizacin de clculos, se tuvo en cuenta que las relaciones estequiomtricas entre el cido clorhdrico, el hidrxido de sodio y el amoniaco es de uno a uno. Por lo tanto basta con hallar la diferencia entre las moles de HCl y el NaOH resultado de la titulacin y multiplicarlos por el peso molecular del amoniaco para hallar su cantidad en gramos. Despus se divide este valor por el de los gramos de harina que se pesaron inicialmente y se multiplican por 100 para obtener el porcentaje de nitrgeno. Todo esto esta expresado en la ecuacin 1. Para hallar el porcentaje de protenas se multiplica el valor resultante de la ecuacin 1 por el valor del factor de jones que es de 5,7. Los clculos estadsticos consistieron principalmente en el uso del Q test para descartar los datos inconsistentes y la t de student para obtener el intervalo de confianza tanto del porcentaje de protena como el de nitrgeno en la muestra.

(Ecuacin 1) (Ecuacin 2) (Ecuacin 3) 3. Resultados

Tabla 1. Determinacin de nitrgeno y protenas por mtodo Kjeldahl

(Ecuacin 4)

Porcentaje N 1,80% Porcentaje de protena 10,50% Intervalo de confianza N 0,075<<3,6 Intervalo de confianza Protena 0,42<<20,6 Desviacin estndar del% N 1,12 Desviacin estndar del % Protena 6,36 La tabla 1 contiene los datos estadsticos del mtodo de Kjeldahl sobre la muestra de harina. Los resultados tanto del porcentaje de nitrgeno como del de protena estn contenidos dentro de su intervalo de confianza correspondiente. La desviacin estndar, como se puede observar para el nitrgeno es baja, por lo que los resultados no varan de manera significativa respecto a la media, es decir, son precisos. Mientras que para el porcentaje de protenas es un poco mayor, indicando que los datos obtenidos varan entre s. 4. Discusin Como se mencion anteriormente, el mtodo de Kjeldahl se divide en tres etapas fundamentales: la digestin, la destilacin y la titulacin; en la digestin la harina de trigo se trat con cido sulfrico que destruye toda la materia orgnica y convierte el nitrgeno orgnico en el ion amonio. Durante este paso existe la posibilidad de que el

nitrgeno orgnico no provenga nicamente de las protenas, esta etapa se realiz utilizando como catalizador el selenio para lograr que la digestin sea lo ms completa posible, sin embargo, el selenio puede causar perdida de nitrgeno. La adicin de K2SO4 aumenta el punto de ebullicin del cido sulfrico, lo que permiti trabajar con temperaturas ms altas, acelerando el proceso de digestin que culmin cuando la solucin se torn color amarillo plido. Si se aadi sulfato de potasio en exceso esto puede resultar en una descomposicin por calor y, en consecuencia, se pierde amoniaco1. Durante la segunda etapa la adicin de NaOH neutraliz el cido sulfrico y el nitrgeno se desprendi en forma de amoniaco. El amoniaco destilado se recogi sobre un exceso de HCl estndar, al llegar a este paso, se puede haber presentado una conversin incompleta de nitrgeno en amoniaco. Finalmente la etapa de titulacin permiti medir la cantidad de cido neutralizado por el amoniaco disuelto, indicando la cantidad de nitrgeno presente en la muestra problema. Al llegar a esta etapa se ha perdido nitrgeno durante los pasos anteriores y se ha tenido en cuenta el nitrgeno de origen no proteico lo cual contribuye negativamente en la obtencin del resultado final. Para la determinacin del porcentaje de nitrgeno en la muestra de harina se realizaron 4 repeticiones, de las cuales se obtuvo un porcentaje de nitrgeno, por medio de la ecuacin 1, igual a 1,8%, este porcentaje se multiplica por un factor de 5,7 (ecuacin 2) para obtener el porcentaje de protena presente (10,5%). Este factor se denomina el factor de Jones usado para pasar de porcentaje de nitrgeno a porcentaje de protenas. Su valor general de 6,25, se usa porque la mayora de las protenas tienen aproximadamente un 16% de nitrogeno2, sin embargo, no es un porcentaje universal, el porcentaje de nitrgeno en las protenas vara desde el 13 hasta el 19%, haciendo que el factor de Jones tome valores desde 5,26 hasta 7,693. El valor depende de la muestra a trabajar. Usar un factor errneo tiene como consecuencia incrementar o disminuir el contenido calculado de protena, por lo que fue necesario emplear el factor de Jones especfico para la harina de trigo (5,7)4 en la realizacin de los clculos. El uso del factor de Jones apropiado hace que el porcentaje de protenas calculado sea ms exacto, sin embargo, este factor se basa en la suposicin de que todo el nitrgeno en la muestra proviene de los aminocidos que constituyen las protenas. Esta suposicin no

es cierta ya que el nitrgeno adems de estar presente en los aminocidos puede provenir de aminocidos libres, cidos nucleicos, fosfolpidos, algunas vitaminas, iones de amonio, etc. Tambin puede provenir de macromolculas como los lpidos y carbohidratos. Lo anterior hace que el uso del factor de Jones realmente proporcione un porcentaje aproximado de protenas en la muestra trabajada. 5. Conclusiones El mtodo de Kjeldahl tiene como ventajas su aplicabilidad a una alta gama de productos, que es relativamente simple, y que es el mtodo oficial para medir el contenido de protena pura. La realizacin de la prctica permiti identificar distintos factores que influyen en la veracidad y exactitud de los resultados obtenidos por medio de este mtodo. Se presentan distintas fuentes de error durante el experimento como lo son la interferencia de compuestos nitrogenados no proteicos, la prdida de nitrgeno durante la digestin, digestin incompleta y la conversin parcial de nitrgeno en amoniaco. Adicionalmente el uso del factor de jones contribuye al error del porcentaje de protenas ya que en la determinacin de este factor no se realizan correcciones de nitrgeno no proteico. Para la correccin del factor de Jones sera necesario utilizar la composicin de los aminocidos del alimento a analizar, que se complica al tener alimentos combinados, la complejidad de este proceso, ha hecho continuar con el uso de los factores tradicionales. Existen varios catalizadores para usar en el mtodo de Kjeldahl, entre los cuales se encuentra el xido de mercurio y el sulfato de cobre (que son los ms usados). Sin embargo, el xido de mercurio forma un compuesto estable con el amoniaco que debe ser descompuesto con adicin de tiosulfato de sodio y adems, el sulfato de cobre es menos efectivo en recuperar el nitrgeno.

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