SINTESIS DE PROTEINAS

SNTESIS DE PROTENAS

Proceso en el que se componen nuevas protenas, a partir de 20 aminocidos esenciales. En este proceso, se transcribe el ADN en ARN para luego ser traducido en protenas. La sntesis de protenas se realiza en los ribosomas situados en el citoplasma celular. El flujo de

ADN

ARN

Protena

informacin gentica sigue la secuencia:

Ribosomas

Son partculas ribonucleoprotenicas, cuya masa es proporcionada por ARNr. Su forma es similar en todos los ribosomas. La subunidad pequea, 30s, es de forma alargada y est constituida por un cuerpo que contiene aproximadamente dos tercios de su masa dividida. En esta se conoce la localizacin de aproximadamente todas las protenas. La subunidad grande, 50s, es mas esfrica, con un pednculo prominente en la parte derecha y una protuberancia central. Cada subunidad contiene un ARNr mayor nico, de 16s y 23 s en las procariotas, y de 18s y 28s en el citosol eucaritico. Tambin hay ARNr menores, 5s localizado en la subunidad grande. Los ARNr presentan un extenso apareamiento de bases, principalmente en forma de cortos tallos dplex apareados de manera imperfecta con lazos de cadena nica.

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La estructura cristalina muestra que en la subunidad 30s la distribucin del ARN y las protenas es asimtrica, el primero est concentrado en la interfase con la subunidad 50s. La SU 50s tiene una superficie de protenas con varillas largas de ARN de cadena doble que se entrecruzan sobre la estructura. La unin entre las SU implica contactos entre el ARNr 16s y ARNr 23s. La interfase entre las SU es muy rica en contactos disociables, en ambas ocurren cambios estructurales cuando se unen para formar un ribosoma completo. Cada SU tiene varios centros activos concentrados en el dominio de traduccin del ribosoma, donde las protenas son sintetizadas. Estas ltimas abandonan al ribosoma a travs del domino de salida, el cual puede asociarse con una membrana. La conformacin del ribosoma puede cambiar en etapas de la sntesis proteca; se han detectado diferencias en la accesibilidad de regiones especficas de los ARNr mayores.

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Numerosas clases diferentes de ARN se combinan para dirigir la sntesis de las protenas: ARNm

Contiene una serie de codones que interactan de tal manera con los anticodones de los aminoacil-RNAt que la serie correspondiente de aminocidos es incorporada a una cadena polipeptdica. El ribosoma proporciona el ambiente necesario para controlar la interaccin entre el ARNm y el aminoacil-ARNt al comportarse como una pequea fbrica migratoria que viaja a lo largo del molde conduciendo rpidos ciclos de sntesis de enlaces peptdicos.

ARNt

Se encarga de suministrar los aminocidos al ribosoma para que ste haga el ensamblaje de la protena. Una vez que el ribosoma ha utilizado el aminocido que estaba pegado al ARNt, ste se separa del ribosoma y se desplaza por el citoplasma buscando nuevos aminocidos.

Sitio que lleva el aa

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Anticodn (se adhiere al ARNm)

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La sntesis de protenas comprende los siguientes pasos:

Iniciacin

Elongacin
Terminacin
Transcripcin

1- Iniciacin: Una ARN-polimerasa comienza la sntesis del precursor del ARN a partir de unas seales de iniciacin "secuencias de consenso " que se encuentran en el ADN. 2. Alargamiento: La sntesis de la cadena contina en direccin 5' 3'. Despus de 30 nucletidos se le aade al ARN una cabeza (caperuza o lder) de metil-GTP en el extremo 5 con funcin protectora. 3- Finalizacin: Una vez que la enzima (ARN polimerasa) llega a la regin terminadora del gen finaliza la sntesis del ARN. Entonces, una poliA-polimerasa aade una serie de nucletidos con adenina, la cola poliA, y el ARN, llamado ahora ARNm precursor, se libera. 4. Maduracin: El ARNm precursor contiene tanto exones como intrones. Se trata, por lo tanto, de un ARNm no apto para que la informacin que contiene sea traducida y se sintetice la correspondiente molcula proteica. En el proceso de maduracin un sistema enzimtico reconoce, corta y retira los intrones y las ARN-ligasas unen los exones, formndose el ARNm maduro.

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Traduccin

La precisin de la sntesis protenica es controlada por mecanismos especiales Considerando que la mayor parte de las protenas se produce en grandes cantidades, la tasa de error es muy baja como para incidir en el fenotipo de la clula. El ribosoma puede cometer dos tipos de errores en la sntesis protenica: provocar un cambio en el marco de lectura al omitir una base cuando lee el ARNm o bien, permitir que un aminoacil-ARNt incorrecto se aparee erroneamente con un codn, provocando la incorporacin de un aminocido incorrecto. Una RNAt sintetasa puede provocar dos tipos de errores: 1. Colocar un AA equivocado en su RNAt o cargar a su AA en el RNAt incorrecto. 2. La incorporacin de un aminocido errneo, la ms comn, probablemente por que el RNAt ofrece una superficie mas extensa con la cual la enzima puede hacer muchos mas contactos para garantizar la especificidad.

La iniciacin en las bacterias requiere de SU 30s y de factores accesorios

La iniciacin de la sntesis proteca no es una funcin de los ribosomas intactos, la asumen las subunidades independientes, las cuales se reasocian durante esta reaccin. Tiene lugar en una secuencia especial en el RNAm sitio de unin con el ribosoma- que es una secuencia pequea que precede a la regin codificadora. Las SU grande y pequea se asocian en un reaccin de dos pasos: 1. Reconocimiento del RNAm. Ocurre cuando se une una SU pequea para formar un complejo de iniciacin en el sitio de unin con el ribosoma.
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2. Una SU grande se une al complejo para formar el ribosoma completo.

Para llevar a cabo las reacciones que unen el RNAm con el RNAt, se requieren de protenas adicionales: Factores de Iniciacin, IF. Se encuentran slo en las SU 30s y se liberan cuando stas se asocian a las SU 50s para formar los ribosomas 70s. Los IF estabilizan a las SU 30s libres y unen al RNAt iniciador con el ompejo 30s-RNAm El IF-2 tiene actividad Gtasa dependiente de ribosomas liberando la energa almacenada en el enlace. El GTP es hidrolizado cuando se une a la SU 50s para la formacin del r. completo.

Las bacterias utilizan tres factores de iniciacin

El IF-1> se une a las SU 30s slo como parte del complejo de iniciacin completo. Se une al sitio A y evita que entre el amioacilRNAt. Tambin puede impedir que la SU 30s se una a la 50s El IF-2> se une a un RNAt iniciador especial y controla su entrada al ribosoma. El IF-3> permite que las SU 30s se unan especficamente a los sitios de iniciacin del RNAm

El IF-3 tiene mltiples funciones

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Estabiliza SU 30s libres y las habilita para que se unan al RNAm. Inspecciona la exactitud del reconocimiento del 1er aminoacil-RNAt. Controla el equilibro entre los estados ribosmicos. Es escasa, su disponibilidad determina el nmero de SU libres. Posee reaccin estequimtrica con la SU 30s: una molcula de IF-3 se une a cada SU.

Un RNAt iniciador especial empieza la cadena polipeptdica

El codn AUG puede ser transportado por dos tipos de RNAt, uno utilizado para la iniciacin y el otro para el reconocimiento del los codones AUG durante la elongacin. En las bacterias y organelos eucariticos, el RNAt iniciador transporta una metionina formilada en su grupo amino: N-formilmetionil-RNAt. El RNAt iniciador adquiere a su aa modificado en 2 etapas: Primero se carga con el aa para generar Met-TNAt y posteriormente la reaccin de formilacion bloquea al grupo NH libre.

El uso del fMet-RNAt es controlado por el IF-2 y el ribosoma.

El nico aminoacil-RNAt que puede formar parte del complejo de iniciacin es el iniciador, el cual tiene la propiedad de nica de poder entrar directamente al sitip P parcial para reconocer a su codn. El IF-2 se une al fMet-RNAt iniciador y le permite entrar al sitio P parcial de la SU 30s

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Cuando la SU grande se une al complejo, los sitios parciales de unin al RNAt se convierten en los sitios intactos P y A. El fMet-RNAt ocupa el sitio P y el A est disponible para la entrada del aminoacil-RNAt complementario del segundo codn del gen.

La iniciacin implica el apareamiento de bases entre el RNAm y el RNAr

Un sitio de iniciacin del RNAm bacteria est formado por el codn de iniciacin AUG precedido de un espacio de ~10 bases que contiene el hexmero de polipurina ShineDalgarno.

El RNAr de la SU ribosmica 30s bacteriana tiene una secuencia complementaria que se aparea con la secuencia SD localizada cerca del extremo 3 del RNAr 16s durante la iniciacin.

Las mutaciones puntuales de la secuencia Shine-Dalgarno pueden impedir la traduccin de un RNAm. Esta, asu vez, puede ser suprimida por una mutacin compensadora en ele RNAr que restaure el apareamiento de bases.

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Adems, la introduccin de mutaciones en la secuencia complementaria del RNAr es perjudicial para la clula y cambia el patrn de sntesis protenica. La secuencia que se encuantre eb el extremo 3 del RNAr se conserva en procariotas y eucariotas, con la diferencia de que en las eucariotas tiene lugar la deleccin de la secuencia CCUCC, que es el complemento principal de la secuencia SD.

Las eucariotas utilizan un complejo formado por numerosos factores de iniciacin

El RNAt iniciador eucaritico es un Met-RNAt diferente del utilizado en la elongacin, pero la metionina no est formilada. La diferencia radica nicamente en la porcin de RNAt (utilizada para iniciacin o elongacin). Las clulas eucariticas tienen ms factores de iniciacin que las bacterias que participan en todas las etapas del proceso (12).

Algunos IF se unen a la Sur 40s para formar el complejo 43s; en tanto otros, se unen l RNAm. Cuando el complejo 43s se une al RNAm, rastrea al codn de iniciacin y forma el complejo 48s. En la iniciacin eucaritica, el eIF-2 forma un complejo terminal con el Met-RNAt. Este se une a SU 40s libres, extremo 5 del RNAm. Despus en la reaccin, el GTP es hidrolizado cuando el eIF-2 es
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liberado en forma de eIF2-GDP.

El factor de elongacin Tu carga al aminoacil-RNAt en el sitio A

El EF-Tu es una protena G monomrica cuya forma activa (unida al GTP) se une al aminoacilRNAt y lo coloca en el ribosoma. El complejo EF-TuGTP-aminoacil-RNAt se une al sito A ribosmico. Esta reaccin asegura que el aminoacilRNAt y el peptidil-RNAt estn correctamente posicionados para la formacin del enlace peptdico.

El EF-Ts es necesario para mediar el remplazo de GDP x GTP (la reaccin consume P). Slo se une en el sitio A de los ribosomas cuyos sitios P ya estn ocupados por un peptidil-RNAt. El nico aminoacil-RNAt que no puede ser reconocido es el fMet-RNAt, cuya incapacidad para unirse evita que responda a los codones internos AUG o GUG.

La kirromicina es un antibitico que inhibe la funcin del EF-Tu.

Su presencia continua evita la formacin del enlace peotdico entre el peptidil y el aminoacil, de tal forma que el ribosoma se queda atascado en el RNAm, frenando la Sntesis proteca.
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La cadena polipeptdica se transfiere al aminoacil-ARNt.

La SU 50s tiene actividad peptidil transferasa, responsable de la sntesis del EP. La cadena polipeptdica naciente se transfiere del sitio P al sitio A. La sntesis de enlaces peptdicos genera RNAt desacilado en el sitio P y peptidil RNAt en el sitio A.

El enlace peptdico implica la prdida de una molcula de agua y la formacin de un enlace covalente CO-NH.

La translocacin mueve al ribosoma

El ciclo de adicin de aa a la cadena polipeptdica creciente culmina con la translocacin. Desplaza al RNAm tres bases a lo largo del ribosoma. Lleva al RNAt desacilado al interior del sitio E y al peptidil-RNAt al interior del sitio P, adems de vaciar el sitio A. Ocurre en 2 etapas: la SU 50s se mueve respecto de la unidad 30s; posteriormente, sta se desplaza a lo largo
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de RNAm para restaurar la conformacin original

Los codones de terminacin son reconocidos por factores protenicos

El fin de la traduccin implica: la reaccin de terminacin, que es la liberacin de la cadena protenica del ltimo ARNt; y la reaccin de posterminacin, que implica la liberacin del RNAt y del RNAm, y la disociacin del ribosoma. Ninguno de los factores de terminacines representado por un RNAt, funcionan de manera muy diferente a los otros codones y son reconocidos directamente por factores protenicos. Actan en el sitio A y requieren de polipeptidil-RNAt en el sitio P. En los eucariotas solo existe un factor de liberacin clase 1: eRF; Son asistidos por factores de liberacin clase 2, que no son especficos de ningn codn (protenas de unin a GTP). RF1 y RF2 se encargan de identificar a los codones de terminacin y activan el ribosoma para hidrolizar al peptidil-RNAt.. La divisin del polipptido y el RNAt riene lugar mediante una reaccin anloga a la transferencia usual del grupo peptidil, excepto que el aceptor es HO en vez de aminoacil-RNAt. En este punto el RF1 o RF2 es liberado del ribosoma por el factor de clase 2, RF3-GDT se une al ribosoma antes de que ocurra la reaccion de terminacion y es remplazado por GTP,

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