Acidul lactic

descoperit de cercettorul suedez C.W. Scheele n 1780, n laptele acru. Pasteur, Lister si Delbrueck au fost cei care au identificat acidul lactic ca fiind un metabolit microbian. exist n dou forme stereoizomere, optic active

Obinerea industrial prin procese fermentative dateaz din 1881 i a fost realizat de Avery n Littleton, MA, SUA. ncepnd cu 1990, producia mondial de acid lactic a cunoscut o cretere semnificativ, printre cei mai mari productori de acid lactic prin fermentaie numrndu-se NatureWorks LLC (SUA), Purac (Olanda), Galactic (Belgia), Cargill (SUA) i cteva companii din China.

Utilizri
Producia mondial de acid lactic era de 120.000 t la nivelul anului 2006, cu o rat de cretere anual de 5-8%. Pentru 2011 este estimat un necesar de 200.000 t, dar rata de cretere poate fi mult mai mare (14-19%) datorit polimerilor biodegradabili obinui din acid lactic. Industria alimentar 85% : - agent conservant, acidulant, aromatizant sau cu rol de tampon ntr-o mare varietate de produse alimentare cum ar fi dulciuri, pine i produse de panificaie, buturi rcoritoare (sucuri de fructe, siropuri, nectaruri), dulceuri, produse lactate, condimente, maioneze, bere, la prepararea esenelor, extractelor, precum i la fabricarea conservelor de legume, fructe, pete. Srurile de calciu sau sodiu ale esterilor acidului lactic cu acizi grai se utilizeaz drept conservani i emulgatori n panificaie. Industria farmaceutic solutie 90% reglarea florei intestinale, ca aditiv la prepararea de loiuni. Industria cosmetic la prepararea produselor hidratante, datorita caracterului higroscopic. Lactatul de etil este un important ingredient activ n produsele antiacnee. n domeniul compuilor macromoleculari, la obinerea acidului polilactic (PLA) i a unei game variate de copolimeri cu utilizri n medicin la proteze ortopedice, cardiovasculare, fire chirurgicale, sisteme de eliberare controlat a medicamentelor, respectiv n industria alimentar la obinere de ambalaje alimentare sau sisteme de eliberare controlat a aromelor/aditivilor alimentari. Alte domenii: tratarea apelor (dedurizare), ca adjuvant pentru produse peliculogene i materiale plastice, respectiv n industria textil i pielrie. Este un potenial intermediar pentru obinerea unor compui oxigenai cum ar fi propilenglicol, propilenoxid, acid acrilic, acrilai etc.

Microorganisme productoare
Principalele clase de microorganisme productoare de acid lactic sunt: Lactococcus, Lactobacillus (cea mai bogat, cuprinznd peste 125 de specii i subspecii), Streptococcus, Leuconostoc, Enterococcus, Pediococcus, Aerococcus, Oenococcus, Carnobacterium, Vagococcus, Tetragenococcus, i Weisella. Bacteriile lactice sunt heterotrofe, necesita medii nutritive complexe, cresc n condiii anaerobe, dar pot supravieui i n prezena aerului, fiind aerotolerante. Pot crete la temperaturi de la 5 la 450C i sunt tolerante la medii acide, fiind capabile s creasc i la un pH = 4.4, chiar dac domeniul optim de pH este cuprins ntre 5.5 i 6.5. Se clasific n homofermentative, care produc peste 85% acid lactic din glucoza i heterofermentative, care pe lng acid lactic, care reprezint cca 50%, produc i ali compui precum etanol, diacetil, formiat, acetoina, acid acetic i dioxid de carbon. In procesele industriale de obinere ale acidului lactic se utilizeaz doar bacterii lactice homofermentative, cu precdere Lactobacillus lactis, L. delbrueckii, L. helveticus, L. casei, L.bulgaricus, L.leichmanii, aparinnd Lactobacilaceaelor, bacterii Gram-pozitive, nesporulate, aero- i acido-tolerante, al cror produs majoritar al fermentaiei de carbohidrai este acidul lactic. unele specii de fungi, cum ar fi Mucor, Monilia sau Rhizopus, sunt la rndul lor productoare de acid lactic, cel mai cunoscut fiind Rhizopus oryzae, care poate produce acid L-lactic cu un randament de peste 70%.

Izomerii acidului lactic produi de cele mai utilizate bacterii lactice

Microorganism L. acidophilus L. lactis L. bulgaricus L. helveticus L. casei L. tolerans L. paracasei L. rhamnosus L. plantarum Lacotococcus lactis Streptococcus thermophilus Leuconostoc Acid D(-) lactic nu da da nu nu nu nu nu nu nu nu da Acid L(+) lactic nu nu nu nu da da da da nu da da nu Amestec racemic da nu nu da nu nu nu nu da nu nu nu

Biochimia acidului lactic

C6H12O6 + 2 ADP + Pa glucoz 2 CH3CH(OH)COOH+2 ATP acid lactic

Materii prime
Sursa de C - hidrai de carbon n stare pur (glucoz, zaharoz, lactoz etc.); - materiale cu coninut de hidrai de carbon cum ar fi: - melasele in prezenta de Enterococcus faecalis, -materiale cu coninut de amidon din cartofi, tapioca, gru, porumb, orz, morcovi. - materialele ligno-celulozice, precum resturile de trestie de zahr, tre de cereale, stiuleti/tulpini de porumb etc., pot constitui, de asemenea, atat materii prime dupa pretratare/hidroliza, cat si suporturi ideale pentru fermentaii n faz solid, att n prezen de fungi, ca Rhizopus oryzae, dar i de bacterii lactice, cum ar fi Lactobacillus delbrueckii .

- zer - disponibil in cantitati apreciabile, deoarece aprox. 85% din totalul cantitatii de lapte prelucrat pentru branzeturi se transforma in zer, care prezinta pentru mediu un important factor de poluare afectand structura fizico-chimica a solului (scaderea productiei agricole), sau reduce viata acvatica datorita consumului de oxigen. Aproximativ 50% din producia mondial de zer se proceseaz: o parte (45%) se folosete ca atare, 30% sub form de zer pulbere, din 15% se extrage lactoza, iar restul se folosete drept concentrat de proteine de zer. Datorita continutului de lactoza si a altor elemente nutritive esentiale cresterii microorganismelor, zerul devine o materie prima importanta in biotehnologie in special pentru obtinere de acid lactic. - leia sulfitic este o alt materie prim de viitor. Sursa de azot - hidrolizate proteice: extract sau hidrolizat de drojdie, peptone; extractul de porumb poate inlocui partial extractul de drojdie si peptonele; n completarea sursei organice de N n substrat pot fi adugate sruri de amoniu. Vitamine acid folic, riboflavin, acid lipoic, acid nicotinic etc.

Procedee de fermentaie lactic de biomasa

- Procedee discontinue, semi-discontinue, continue, in culturi submerse sau in faza solida, intr-o etapa sau doua de conversie.

Fermentaiile discontinue sunt superioare celor continue din toate punctele de vedere, mai puin cel al productivitii. Randamentul procesului poate fi mrit prin realizarea de procese discontinue repetate sau semicontinue, mai ales n cazul substraturilor scumpe. Operarea continu ofer avantajul maximizrii productivitii. O productivitate ridicat, fr reducerea randamentului, poate fi obinut prin recircularea masei celulare; Realizarea fermentaiei cu celule imobilizate in matrici polimerice, naturale sau sintetice, comparativ cu utilizarea de celule libere, conduce la creterea productivitii; dezavantajul este cel de scdere a cantitii de acid lactic datorit acumulrilor de produse secundare i a stabilitii reduse a capsulelor polimerice naturale datorit mediului acid.

Fermentaia lactic anaerob opereaz optim la un pH 5.5 6.0, in unele cazuri 6.0-6.5, la care acidul se obine sub form de sare. Valori ale pH-ului sub 4.5 inhiba puternic cresterea celulara. Asigurarea unei concentratii celulare ridicate este esentiala pentru obtinerea unor productivitati ridicate. Produciile tradiionale realizeaz procesul fermentativ concomitent cu neutralizarea acidului cu compui de calciu (hidroxid sau carbonat), realiznd precipitarea lactatului de calciu, uor de separat, iar acidul se pune n libertate ulterior prin acidulare cu acid sulfuric.

Procedeu discontinuu pe substraturi de amidon sau glucoz

Parametri de proces:
-

Concentratia sursei de C in substrat - 5-18%; Temperatura se stabileste functie de microorganismul producator, de ex. Lactobacillus delbrueckii i L. leichmanii folosite pe substraturi de glucoz, maltoz sau zaharoz - 50-520C, Lactobacillus bulgaricus pe substrat de zer - 40-450C, L. casei i Streptococcus lactis - 30-350C; pH = 5,5-6,0 mentinut prin adaos de CaCO3; Fermentaia se declaneaz dup cca 6 ore de la nsmnare; Durata procesului, functie de materia prima, 2-8 zile; Conditii anaerobe; Fermentatoare cu capacitati de 20-110m3, prevzute cu sisteme de agitare, nclzire i rcire.

Procedee de separare a acidului lactic din mediul de fermentatie

Procedeul clasic se ridic temperatura mediului de fermentaie la 80100C, iar pH-ul la 10-11, ceea ce are ca efect distrugerea microorganismelor, coagularea proteinelor, solubilizarea lactatului de Ca i distrugerea unor zaharuri neasimilate, urmat de decantarea i filtrarea mediului. Separarea acidului lactic din lactat se face prin acidulare cu acid sulfuric, concentrare, adsorbtie pe carbune activ / schimbatori de ioni a impuritatilor; dezavantaj: manipularea de solide i nmoluri, consum de calcar sau lapte de var, respectiv acid sulfuric i producere de gips (1 t/t de acid lactic produs), costul operaiilor de separare i purificare ridicndu-se la cca. 50% din costul de producie; transformarea acidului lactic ntr-un derivat uor separabil i purificabil, spre exemplu ntr-un ester; eficiena economic a procedeului propus fiind susinut de posibilitatea recuperrii i recirculrii alcoolului ntr-o proporie de peste 85%.

schimbtor de ion modificat cu SnCl2

RH

Extracia reactiv este o alt variant de recuperare a acidului lactic din mediu de fermentaie folosind amine teriare n soluii alcoolice; dezavantaj consumul relativ ridicat de solveni organici, al cror caracter toxic asupra celulelor microbiene nu este neglijabil. Separarea prin schimb ionic, utiliznd anionii, n special n cazul proceselor care se desfoar ntr-o singur etap (cu zaharificare i fermentaie simultan) n faz solid, cnd n mediu se obine preponderent acidul liber. Dezavantaj, prezena n mediul de fermentaie i a altor specii de anioni (SO42-, Cl-), care intr n competiie cu anionii de lactat, iar ndeprtarea acestora din mediu pe parcursul fermentaiei este nedorit. Separarea acidului lactic din mediul de fermentaie utiliznd site moleculare de tip Silicalite (de tip zeolitic), care prezint un diametru de pori adecvat pentru separare, prezint afinitate sczut pentru ap i se caracterizeaz prin stabilitatea termic i hidrotermic ridicat. Rezultatele obinute relev o capacitate de reinere ceva mai mic dect pe ali absorbani polimerici. Cu toate acestea simplitatea procedeului prezint un mare avantaj.

Procese membranare de separare

Modulul membranar: micro-, ultra-, nanofiltrare, osmoza inversa, electrodializa

Membranele de microfiltrare, datorit dimensiunii porilor (0.1-0.2 m), pot separa celulele microbiene, permind recircularea lor ulterioar, asigurnd astfel o concentraie celular ridicat n fermentator. Membranele de ultrafiltrare, cu dimensiuni de pori mai mici dect cele de microfiltrare, asigur reinerea nu numai a celulelor microbiene ci i a proteinelor. Membranele de nanofiltrare, avnd dimensiunile porilor ntre cele de ultrafiltrare i osmoz invers (diametru mediu de 1 nm), separ celule, proteine, nutrieni, sruri i surs de carbon neasimilat de acid lactic. Osmoza invers, cunoscut ca metod de separare cu membrane neporoase, n care separarea se realizeaz prin mecanism difuzional, reine aceiai componeni ca i n cazul nanofiltrrii, cu deosebirea c presiunile de operare sunt mult mai ridicate. n cazul utilizrii electrodializei, separarea se bazeaz pe electromigrarea ionilor prin membranele anionice, respectiv cationice.

Separarea prin electrodializ conduce la reducerea inhibiiei de produs prin recuperarea direct a acidului lactic din mediul de fermentaie, fr a mai necesita utilizarea vreunui agent de neutralizare. De asemenea, a fost dovedit efectul de intensificare a procedeului asupra productivitii. Dezavantaje: reducerea eficienei separrii n timp, datorit aderrii celulelor la membranele separatoare, trecerea i a altor anioni concomitent cu cel de lactat, ceea ce impune purificri ulterioare, costurile aferente construciei unitilor de electrodializ sunt ridicate in cazul operrii la scar mare.

Analiz comparativ a diferitelor procese de obinere ale acidului lactic

Proces Fermentaie convenional Factorii majori de cost Costuri de capital, operare, energie, reactivi chimici, mentenan; costurile de operare reprezint 50% din totalul costurilor Costul membranei reprezint 28% din costuri Operaii multiple, reprezentnd 80% din costuri Concentrarea i fermentaia reprezint 40%, respectiv 47% din costul total Avantaje i dezavantaje majore Pre sczut al materiilor prime, obinere de produs de nalt puritate, dar printr-o tehnologie poluant (generare de 1 t de deeu/ t acid) Productivitate ridicat, obinere de produs pur, tehnologie nepoluant (ecologic) Obinere de produs pur, tehnologie nepoluant (ecologic) Obinere de produs pur, tehnologie nepoluant

Fermentaie integrat cu osmoz invers Fermentaie integrat cu electrodializ Fermentaie integrat cu ultrafiltrare, osmoz invers, schimb ionic Fermentaie integrat cu osmoz invers, nanofiltrare

Exceptnd costurile membranelor, celelalte costuri (energie, operare, echipamente) sunt sczute

Productivitate ridicat, ibinere de produs de nalt puritate, tehnologie nepoluant

Procedee de fermentaie lactic a zerului

Procedeu discontinuu
Materii prime: - zer, zer deproteinizat, zer hidrolizat, permeat de zer, lapte degresat si fara cazeina; - mediul necesita suplimentare cu surse de azot: extract de drojdie, autolizat de drojdie, extract de porumb sau peptone; - suplimentarea mediului cu Mn (MnSO4H2O) are un rol important fiind un constituent al lactat-DH, de asemenea, prin adaos de Mn se reduce necesarul de extract de drojdie mentinand conversia ridicata a substratului. Inoculul se obine pe substrat de lapte, pentru a acomoda bacteria cu mediul de fermentaie. Se utilizeaz diferite tulpini de lactobacili Lactobacillus bulgaricus, L. helveticus, L. casei, L. acidophilus. Pe substrat de lapte este utilizat de preferin L. helveticus deoarece este un microorgnism homofermentativ, care produce de dou ori mai mult acid lactic, amestec dextrogir comparativ cu alte bacterii lactice homofermentative.

Fermentaia de regim se conduce anaerob, n fermentatoare confecionate din lemn sau V2A, avnd capaciti cuprinse ntre 20 i 30 m3. Fermentatoarele sunt prevzute pe lng sistemele de agitare cu o conduct de abur, utilizat att pentru nclzirea mediului de fermentaie n faza iniial, ct i pentru coagularea microorganismelor lactice n faza final. Instalaiile moderne de fermentaie sunt prevzute cu sisteme automate de reglare a temperaturii. - factori semnificativi: cantitatea de inocul i mediul de precultur, care joac un rol important n cantitatea de acid lactic produs, temperatura i pH-ul, specifice tulpinilor de microorganisme. De ex. productivitate maxim n culturi de L. helveticus se obin la 420C i un pH=5.5-5.8, n timp ce pentru L.casei productivitatea maxim se obine la 370C i un pH 5.5.

n vederea meninerii aciditii totale a mediului n jurul a 0,2% la fiecare 6 ore se adaug o suspensie de lapte de var. Prin acest procedeu de neutralizare n timp, bacteriile se menin pe toat durata procesului n activitate maxim. n final aciditatea se reduce la 0,1%. Dup coagularea bacteriilor lactice la o temperatur de 950C i decantarea acestora, lichidul limpede, respectiv filtratul dup separarea masei celulare, se decoloreaz n trepte prin tratare cu crbune activ sau kieselgur. Produsul brut decolorat se concentraz n vid, iar lactatul de calciu va cristaliza la 10-150C n decurs de 10-12 ore. Lactatul de calciu se purific prin cristalizri repetate. Dezavantajul proceselor discontinue: - perioada de lag si de fermentatie indelungata, volum mare de utilaje, costuri ridicate de operare, consum de reactivi de neutralizare (saruri de Ca sau amoniu).

Procedeul continuu
- cunoscut nc din 1931. Fermentatorul de regim, care este elementul central al instalaiei, este prevzut cu sistem automat de reglare a temperaturii (43 10C) i sisteme de dozare automat a zerului sterilizat, respectiv a suspensiei de lapte de var. Debitul de zer se regleaz funcie de coninutul de acid lactic al mediului, care se elimin continuu din fermentator. Mediul din fermentator se colecteaz ntrun rezevor intermediar i parcurge etapele de coagulare, decantare i prelucrri ulterioare. Reducerea perioadei de lag, viteze mari de cretere, consum rapid de lactoz i obinerea unor concentraii mari de acid lactic s-au obinut prin suplimentarea mediului cu extract de drojdie i microaerarea mediului. Principalul neajuns al procedeului continuu const n scderea randamentului datorit timpului redus de fermentaie. Creterea randamentului se poate obine prin: - recircularea biomasei, care permite realizarea unor concentratii celulare ridicate in fermentator, obtinerea unor cantitati sporite de acid lactic la un timp de stationare mic. In acest mod de operare productivitatea acidului lacric se poate dubla prin cresterea vitezei de dilutie; - trecerea mediului din fermentator n celula catodic a unei uniti de electrodializ, unde are loc separarea acidului lactic format i recircularea mediului n fermentator; - utilizarea ultrafiltrarii pentru separarea acidului lactic pe masura formarii.

Dezvoltarea tehnologiilor de imobilizare a atras dupa sine o serie de avantaje: - realizarea unor densitati celulare crescute in fermentator; - cresterea stabilitatii; posibilitatea reutilizarii si operarii in flux continuu; - procesare post-fermentare simplificata. Metoda cea mai eficienta si utilizata de imobilizare este cea de incapsulare in matrici polimerice naturale sau sintetice. Au fost testate si alte materiale naturale mai ieftine, cum ar fi: chipsuri de lemn, materiale lemnoase delignifiate, coaja de ou, bucati de fructe (mere), pe care imobilizarile s-au realizat prin adsorbtie.

Matrici utilizate pentru imobilzari de bacterii lactice

Microorganism L. casei Matrice de incapsulare
agar-agar, perle de sticla siterizata poroasa,chipsuri de lemn, coaja de ou, bucati de mere, gel pectina, poliacrilamida alginat, k-carageenan, agar-agar, poliacrilamida alginat, k-carageenan/guma vegetala, material celulozic delignifiat k-carageenan, fibre capilare

L. lactis L. helveticus L. brevis L. bulgaricus