TEMA 4: EL AGUA COMO BIOMOLCULA.

http://profesorjano.wordpress.com/ http://www.youtube.com/watch?v=sOe8S1DTcX4 clase 3 http://www.youtube.com/watch?v=XWkyNH6Hqhg clase 1

1.-INTRODUCCIN.

El agua es, con mucho, la sustancia ms abundante en los sistemas vivos, constituyendo un 70% o ms del peso de la mayora de los organismos. Est presente en todos los lugares de la clula, es el medio de transporte de los nutrientes celulares y el medio de reaccin en el que tiene lugar la inmensa mayora de las reacciones qumicas del metabolismo; es, en definitiva, el medio en el que se mueven e interactan las dems biomolculas. La abundancia y ubicuidad del agua en la materia viva no deben conducirnos al error de considerarla como un lquido inerte con la nica misin de rellenar espacios vacos en los organismos vivos. Muy por el contrario, el agua participa activamente como reactivo en muchas reacciones qumicas celulares y, lo que es ms importante, la estructura y propiedades de muchas biomolculas y otros componentes celulares dependen de su interaccin con las molculas de agua que los rodean.

2.-

ESTRUCTURA HIDRGENO.

MOLECULAR

DEL

AGUA:

EL

PUENTE

DE

Como se puede comprobar en la tabla adjunta, el agua tiene un punto de fusin, punto de ebullicin, calores de fusin y vaporizacin y tensin superficial ms elevados que la mayora de los lquidos comunes. Otras sustancias qumicamente afines a ella, como el NH3 y el SH2, son gases a temperatura ambiente, mientras que el agua, como es obvio, se encuentra en estado lquido a esa temperatura. Estas propiedades fsicas excepcionales delatan la existencia de poderosas fuerzas intermoleculares que mantienen unidas entre s las molculas de agua adyacentes, ya que de lo contrario, los cambios de estado de slido a lquido y de lquido a gas no consumiran tanta energa como parecen indicar dichas propiedades. Analizaremos a continuacin la estructura de la molcula de

agua, con el objeto de identificar la naturaleza de esas fuerzas intermoleculares responsables de tan elevado grado de cohesin interna. Punto de fusin (C) 0 -98 -117 -127 -90 -95 -98 6 -135 -63 Calor de Punto de ebullicin vaporizacin (C) (J/g) 100 65 78 97 117 56 69 80 -0,5 61 2260 1100 654 687 590 523 423 394 381 247

Substancia AGUA METANOL ETANOL PROPANOL BUTANOL ACETONA HEXANO BENCENO BUTANO CLOROFORMO

En la molcula de agua (H2O) cada tomo de hidrgeno comparte un par electrnico con el de oxgeno para formar un enlace covalente simple. La geometra de la molcula est determinada por la forma de los orbitales electrnicos ms externos del tomo de oxgeno que son los que participan en los enlaces. Estos orbitales describen un tetraedro casi regular con los electrones compartidos con el hidrgeno en dos de sus vrtices y los electrones sin compartir en los otros dos (Figura 4.1). De este modo, los tres tomos de la molcula forman un ngulo de 104,45, algo menor que los 109,51 de un tetraedro regular, debido a que la repulsin entre los orbitales no

enlazantes del oxgeno comprime ligeramente a los orbitales enlazantes con el hidrgeno. Por otra parte, el ncleo del tomo de oxgeno atrae hacia s con ms fuerza los electrones compartidos que el ncleo del tomo de hidrgeno, es decir, el tomo de oxgeno es mselectronegativo. Por lo tanto, en la molcula de agua el oxgeno y los hidrgenos comparten los electrones de forma desigual: los electrones estn ms tiempo cerca del oxgeno que del hidrgeno, de alguna manera "pertenecen" ms al oxgeno que al hidrgeno. Esta forma desigual de compartir los electrones provoca la aparicin de cargas elctricas parcialesen distintas zonas de la molcula: sobre los tomos de hidrgeno, parcialmente desposedos de sus electrones, aparece, por defecto, una carga parcial positiva (+); correspondientemente el exceso de densidad electrnica sobre el tomo de oxgeno se traduce en la aparicin sobre el mismo de una carga parcial negativa (-) que se encuentra repartida entre sus dos orbitales no enlazantes (Figura 4.2). As, la molcula de agua, an siendo elctricamente neutra (carga neta=0), se convierte en un dipolo elctrico doble, con una carga parcial positiva sobre cada tomo de hidrgeno y una carga parcial negativa en cada uno de los orbitales no enlazantes del oxgeno. Las cuatro cargas parciales se encuentran en disposicin tetradrica alrededor del ncleo del oxgeno. La existencia de cargas elctricas parciales permite que se establezcan interacciones electrostticas entre molculas de agua vecinas: las cargas parciales de signo contrario situadas en una y otra molcula se atraen mutuamente. Este tipo particular de interaccin electrosttica se conoce con el nombre de puente de hidrgeno (Figura 4.3). As, los puentes de hidrgeno entre molculas de agua vecinas son las fuerzas intermoleculares responsables de la elevada cohesin interna del agua y, por lo tanto, de sus excepcionales propiedades fsicas. Los cambios de estado en el agua implican la rotura de un cierto nmero de puentes de hidrgeno; los elevados puntos de fusin y ebullicin, as como los elevados calores de fusin y vaporizacin, se

explican porque es necesario emplear una cantidad considerable de energa para romper dichos puentes de hidrgeno. Cada molcula de agua, con sus cuatro cargas parciales en disposicin tetradrica, puede unirse mediante puentes de hidrgeno con otras cuatro molculas vecinas que a su vez se disponen tetradricamente alrededor de la molcula central (Figura 4.3). En el hielo, cada molcula de agua se encuentra unida de este modo a exactamente cuatro de sus vecinas configurando una red cristalina regular. Cuando el hielo se funde se rompen algunos puentes de hidrgeno de manera que a temperatura ambiente cada molcula de agua est unida a un promedio de 3,4 molculas adyacentes. Si se compara la rigidez del hielo con la extrema fluidez del agua lquida, resulta sorprendente esta pequea diferencia entre ambos en lo que se refiere al grado de ligazn entre sus molculas; si las molculas del agua lquida estn tan intensamente unidas por puentes de hidrgeno sta debera ser mucho ms viscosa. La explicacin a este curioso fenmeno reside en la corta vida del puente de hidrgeno. Dado que la energa implicada en la formacin de un puente de hidrgeno es del mismo orden de magnitud que la energa trmica presente en el agua a temperatura ambiente, stos se establecen y se rompen con suma facilidad: se ha calculado que la vida media de un puente de hidrgeno es del orden de 10-9 seg. Esta circunstancia permite a las molculas de agua una gran movilidad en un radio corto, ya que cada una puede formar en muy poco tiempo sucesivos puentes de hidrgeno con muchas de sus vecinas. Por ltimo, los puentes de hidrgeno no son exclusivos del agua. Se pueden formar fcilmente entre cualquier tomo electronegativo y un tomo de hidrgeno unido covalentemente a otro tomo electronegativo de la misma o de otra molcula. Puesto que en las biomolculas abundan los grupos funcionales capaces de formar puentes de hidrgeno, este tipo de interaccin tiene una gran importancia biolgica. En la Figura 4.4 se puede apreciar un modelo espacial compacto de una molcula de agua.

3.-EL AGUA COMO DISOLVENTE. Entre las excepcionales propiedades fsicas del agua destaca por su importancia biolgica la extraordinaria capacidad que presenta para disolver una amplia gama de sustancias. Otras propiedades son aprovechadas por algunos seres vivos en los que el agua desempea funciones especficas, sin embargo, dado que la gran mayora de las biomolculas se encuentran en las clulas en disolucin acuosa, las propiedades disolventes del agua son de importancia capital para todas las formas de vida. Al igual que las dems propiedades fsicas, la capacidad disolvente del agua est basada en su naturaleza dipolar, que le permite establecer interacciones electrostticas con determinados tipos de solutos. Podemos considerar tres tipos de sustancias en lo que se refiere a su solubilidad en agua: sustancias hidroflicas, sustancias hidrofbicas, y sustancias anfipticas. a) Sustancias hidroflicas (del griego "amantes del agua").- Son netamente solubles en agua. Entre ellas podemos diferenciar las sustancias inicas, que poseen carga elctrica neta, y las sustancias polares, que presentan en su molcula cargas parciales. Muchas biomolculas son sustancias inicas, como las sales minerales y las biomolculas orgnicas poseedoras de grupos funcionales ionizados al pH de la clula (por ejemplo los aminocidos). Otras muchas son sustancias polares, como las biomolculas orgnicas con grupos funcionales capaces de formar puentes de hidrgeno (por ejemplo los azcares). El agua es un buen disolvente de este tipo de sustancias porque su molcula, al presentar cargas parciales, puede establecer interacciones electrostticas con las molculas de soluto: cuando una sustancia inica o polar se disuelve en agua las interacciones agua-soluto sustituyen de manera energticamente favorable a las interacciones soluto-soluto de la red cristalina. En el caso de las sustancias polares estas interacciones son del tipo que conocemos con el nombre de puentes de hidrgeno.

La capacidad del agua para disolver sustancias hidroflicas tiene su expresin matemtica en el elevado valor de suconstante dielctrica. En la siguiente expresin

F es la fuerza con la que se atraen dos cargas elctricas Q1 y Q2 separadas por una distancia r en un medio cuya constante dielctrica es D. Cuanto mayor es el valor de D menor es la fuerza atractiva. Entre todos los lquidos conocidos el agua es el que tiene una mayor constante dielctrica. Por lo tanto, cuando una sustancia inica se encuentra en medio acuoso, las fuerzas electrostticas que mantienen unidas sus molculas en una red cristalina se debilitan considerablemente, lo que favorece en gran medida el proceso de disolucin. En realidad, el elevado valor de la constante dielctrica del agua no es ms que una consecuencia de su carcter dipolar. b) Sustancias hidrofbicas (del griego "miedo al agua").- Son totalmente insolubles en agua. Se caracterizan por no poseer cargas elctricas netas ni parciales, es decir, son totalmente apolares. Este carcter apolar les impide establecer interacciones energticamente favorables con las molculas de agua, es ms, interfieren con los puentes de hidrgeno entre ellas, por lo que, cuando se encuentran en medio acuoso, tienden a agregarse y precipitar. De este modo ofrecen al agua la mnima superficie de contacto posible, y as se minimizan tambin las interferencias que ejercen sobre los puentes de hidrgeno entre sus molculas. Algunas biomolculas como las grasas neutras y las ceras son de naturaleza hidrofbica; tambin lo son los gases biolgicamente importantes, como el O2, el CO2 y el N2, que son muy poco solubles en agua. c) Sustancias anfipticas.Son sustancias que presentan en su molcula una parte polar (o cargada) y otra no polar. Cuando estas sustancias se mezclan con el agua las dos zonas de su molcula

experimentan tendencias contrapuestas: la zonas polares tienden a establecer interacciones electrostticas con las molculas de agua mientras que las zonas no polares tienden a agregarse para ofrecer la mnima superficie de contacto con ella. El resultado de estas dos tendencias contrapuestas es que las molculas anfipticas se asocian para constituir unas estructuras estables denominadas micelas (Figura 4.5) en las que las zonas polares se disponen hacia el exterior, en contacto con el agua, mientras que las zonas no polares lo hacen hacia el interior, aisladas del contacto con el agua y unidas entre s por unas atracciones dbiles llamadas interacciones hidrofbicas. En determinadas condiciones las sustancias anfipticas en el seno del agua pueden dar lugar a bicapas cerradas sobre s mismas que constituyen la base estructural de las membranas celulares. Algunas biomolculas importantes son sustancias anfipticas; entre ellas se encuentran los cidos grasos, las protenas globulares y una amplia categora de lpidos llamados lpidos de membrana.

4.-DISOLUCIONES ACUOSAS EN LOS SERES VIVOS.

Puesto que el agua es el disolvente en el que se hallan disueltas la gran mayora de las biomolculas, resulta evidente que las propiedades de las disoluciones acuosas sern de una gran importancia para los seres vivos. Analizaremos a continuacin qu tipos de disoluciones acuosas se hayan presentes en los seres vivos as como sus propiedades ms relevantes desde el punto de vista biolgico. Se reconocen dos tipos de disoluciones acuosas de inters biolgico atendiendo al tamao de las partculas del soluto: a) Disoluciones moleculares (o verdaderas).- En ellas las partculas del soluto miden menos de 10 nm. Cada partcula es una molcula individual. Disoluciones coloidales.- En ellas el tamao de las partculas de soluto oscila entre 10 nm y 100 nm. Estas partculas pueden ser agrupaciones de molculas (por ejemplo micelas) o bien molculas individuales de gran tamao (macromolculas).

b)

Dado que las biomolculas presentan tamaos muy variados podemos concebir el medio celular como una compleja disolucin acuosa en la que coexisten multitud de solutos, algunos de tamao molecular y otros muchos de tamao coloidal. La presencia de solutos disueltos altera la geometra caracterstica de las agrupaciones de molculas de agua. Cada molcula o ion del soluto interacta con una serie de molculas de agua a su alrededor obligndolas a ordenarse de manera diferente a como lo haran en ausencia de soluto. Esta alteracin en la estructura del agua se manifiesta mediante la aparicin de una serie de propiedades nuevas, caractersticas de la disolucin, denominadas propiedades coligativas. Entre estas propiedades figura el descenso del punto de fusin, el aumento del punto de ebullicin y la disminucin de la presin de vapor, pero la que presenta un mayor inters biolgico es la smosis, por lo que le prestaremos una especial atencin. Cuando dos disoluciones acuosas de diferente concentracin como las representadas en la Figura 4.6 se encuentran separadas por una membrana semipermeable, es decir, por una membrana que permite el paso de molculas de agua pero no de molculas de soluto, la tendencia del disolvente a diluir al soluto se manifiesta mediante un flujo diferencial de agua a travs de la membrana: pasa ms agua desde la disolucin ms diluida a la ms concentrada que en sentido inverso. Este fenmeno se conoce con el nombre de smosis, y su base fsico-qumica consiste en que las interacciones electrostticas entre las molculas de agua y las de soluto, ms abundantes en la disolucin ms concentrada, retienen en mayor medida a las molculas de agua en el compartimento que alberga dicha disolucin. El flujo diferencial al que hacemos referencia provoca un aumento del nivel del lquido en el compartimento de la disolucin ms concentrada. Cuando el lquido alcanza una determinada altura (h) la presin hidrosttica generada por este volumen adicional de lquido contrarresta el mencionado flujo diferencial, alcanzndose el equilibrio cuando dicho flujo es de igual magnitud en ambos sentidos. Esta presin hidrosttica, necesaria para alcanzar el equilibrio, se conoce con el nombre de presin osmtica.

El inters biolgico de esta propiedad de las disoluciones que llamamos smosis reside en que las membranas celulares son membranas semipermeables: permiten el libre paso de molculas de agua pero ejercen una permeabilidad selectiva sobre la mayora de las biomolculas disueltas en ella. Como

consecuencia,

las

clulas

estn

sometidas

afenmenos

osmticos, que dependern de la concentracin de solutos en el medio en que se encuentran (Figura 4.7). Si la concentracin de solutos en el medio es mayor que en el interior de la clula (medio hipertnico), sta perder agua por smosis sufriendo una retraccin que en grado extremo acarrear la muerte celular. Si la concentracin de solutos en el medio es igual a la del interior de la clula (medio isotnico), sta estar en equilibrio osmtico con su entorno y no sufrir cambios. Por ltimo, si la concentracin de solutos en el medio es inferior a la del interior celular (medio hipotnico), la consiguiente entrada de agua en la clula producir un aumento de la presin osmtica en su interior. En un primer momento este aumento se traducir en una mayor turgencia de la clula; ms tarde, cuando la presin osmtica en el interior vence la resistencia mecnica de la membrana (que es muy limitada), sobrevendr la lisis (rotura de la membrana con prdida del contenido celular) y con ella la muerte de la clula.

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Las clulas deben protegerse de alguna manera frente a los fenmenos osmticos desfavorables a los que se hallan expuestas. Dos son las estrategias evolutivas que han adoptado para conseguirlo. La primera de ellas consiste en habitar exclusivamente en entornos isotnicos con respecto al interior celular, tal y como hacen algunos organismos unicelulares y tambin las clulas de los animales superiores, que se han dotado de un medio interno isotnico. La segunda, tpica de las bacterias y de las clulas vegetales, consiste en dotarse de una pared celular resistente que les permite soportar las elevadas presiones

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osmticas generadas por los medios hipotnicos en los que habitualmente viven. Las disoluciones coloidales, adems de presentar las propiedades caractersticas de todas las disoluciones, poseen otras adicionales como resultado del elevado tamao de las partculas del soluto. Entre estas propiedades adicionales cabe destacar partculas la sedimentacin (capacidad del soluto por de sedimentar las

ultracentrifugacin),

la adsorcin (tendencia de las partculas coloidales a adherirse a las superficies de determinados slidos), la turbidez, etc.

Algunas de estas propiedades de las disoluciones coloidales son de gran utilidad en los procesos de purificacin y caracterizacin necesarios para el estudio de las macromolculas.

5.- IONIZACIN TAMPONES.

DEL

AGUA.

CIDOS

BASES.

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Aunque gran parte de las propiedades del agua como disolvente se pueden explicar en funcin de su molcula sin carga (H2O), el pequeo grado de ionizacin del agua en iones hidrgeno e iones hidroxilo tambin debe ser tenido en cuenta. Adems, los cidos dbiles y las bases dbiles cuando se disuelven en agua alteran las cantidades relativas de estos iones en la disolucin, bien aportando iones hidrgeno por disociacin si son cidos, o bien retirndolos por protonacin si son bases. Por ello, dado que muchos procesos biolgicos se ven afectados por las concentraciones de iones hidrgeno e hidroxilo, es

conveniente que prestemos ahora atencin a la ionizacin del agua y de los cidos y bases dbiles disueltos en ella. La molcula de agua tiene una ligera tendencia a ionizarse reversiblemente dando lugar a un ion hidrgeno y un ion hidroxilo segn la reaccin

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Aunque adoptaremos esta simplificacin para analizar el proceso de autoionizacin del agua debemos tener en cuenta que este proceso no da en realidad lugar a iones hidrgeno "desnudos" sino a iones hidronio, como se puede apreciar en la figura 4.9

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Para

la

ionizacin

reversible

del

agua, como

para

cualquier otra reaccin qumica, podemos escribir su constante de equilibrio:

La constante de equilibrio de la ionizacin reversible del agua nos permite describir este proceso en trminos

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cuantitativos, es decir, conocer en qu grado se encuentra ionizada el agua a una temperatura determinada. El valor de [H2O] en el agua pura es 55,5 M (1.000 g de agua en un litro dividido por su masa molecular, o sea, 1.000/18=55,5). Dado que las concentraciones de iones

hidrgeno e hidroxilo en el agua pura son muy bajas, este valor es esencialmente constante (no disminuye significativamente cuando el agua se ioniza), por lo que podemos sustituirlo en la ecuacin anterior y reordenarla como sigue:

El trmino Kw se conoce como producto inico del agua, y es constante para una temperatura dada. El valor de Keq, que se ha determinado a partir de las medidas de conductividad

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elctrica en el agua pura, es de 1,8 x 10-16 M a 251C. Sustituyendo este valor en la ecuacin anterior tenemos:

As, el valor del producto inico del agua a 25C es 10-14. A partir de este valor se puede calcular la concentracin de iones hidrgeno e iones hidroxilo en el agua pura a 25C. Puesto que por cada molcula de agua que se disocia se obtiene un ion hidrgeno y un ion hidroxilo podemos deducir que

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Es decir, en un instante dado slo una de cada diez millones de molculas se encuentra ionizada en el agua pura a 25C.
+

[H ] (M) 100 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8 10-9 10-10 10-11 10-12 10-13 10-14
Tabla 4.2

pH 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14

[OH] (M) 10-14 10-13 10-12 10-11 10-10 10-9 10-8 10-7 10-6 10-5 10-4 10-3 10-2 10-1 100

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En una disolucin acuosa, si [H+] es igual a [OH-], tal como ocurre en el agua pura, se dice que la disolucin esneutra; si [H+] es mayor que [OH-] se dice que es cida; y si [H+] es menor que [OH-] se dice que es bsica. En cualquier caso, el producto de ambas concentraciones (Kw) es constante e igual a 10-14 a 25C, de tal modo que si una de las dos concentraciones es elevada la otra debe ser proporcionalmente reducida para que el producto inico del agua permanezca constante (Tabla 4.2).

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A partir del producto inico del agua se introduce la escala de pH. La escala de pH constituye una forma gil y cmoda de expresar las concentraciones de iones hidrgeno (y consiguientemente de iones hidroxilo) en disoluciones acuosas diluidas. Su uso evita tener que manipular cifras engorrosas del tipo de 0,000001 M o 10-8 M. Es vlida para expresar

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concentraciones entre 10-14 M y 1 M de iones hidrgeno (ver Tabla 4.2). El pH se define como el logaritmo negativo de la concentracin de iones hidrgeno:

Una disolucin acuosa neutra tiene un pH=7 ya que en ella [H+]=10-7 y por lo tanto:

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De la misma manera, el pH de una disolucin cida ser menor que 7 y el de una disolucin bsica mayor que 7. Obsrvese que la escala de pH es logartmica, no aritmtica: decir que dos disoluciones difieren en una unidad de pH significa que una de ellas posee una concentracin de iones hidrgeno diez veces superior a la de la otra. El pH de una disolucin puede medirse de manera aproximada utilizando indicadores (sustancias que cambian de color con las variaciones de pH), o de una manera ms precisa mediante aparatos denominados pHmetros. La medida del pH es una de las operaciones ms corrientes en la investigacin bioqumica ya que sus variaciones tienen efectos importantes sobre muchas biomolculas. Aunque existen definiciones de cidos y bases de aplicacin ms general, los conceptos introducidos en su da por Brnsted y Lowry son de mayor utilidad para describir el comportamiento de cidos y bases en sistemas acuosos como los

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que estamos tratando. Segn el concepto de Brnsted-Lowry un cido es un dador de protones, y una base es un aceptor de protones. A cada cido corresponde una base conjugada de modo que, aplicando este formulismo, cidos y bases no se tratan por separado, sino como integrantes de pares cido-base conjugados. Por ejemplo, el cido actico, un dador de protones, y el anin acetato, su correspondiente aceptor, forman un par cido-base conjugado relacionado por la reaccin

reversible

El amonaco, un aceptor de protones, es la base conjugada del ion amonio, su correspondiente dador, segn la reaccin

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Cada cido tiene una tendencia caracterstica a ceder su protn. Los cidos fuertes tienen una tendencia elevada a ceder su protn, mientras que los cidos dbiles lo ceden con ms dificultad. A un cido fuerte corresponde una base conjugada dbil (con poca afinidad por el protn) mientras que a un cido dbil corresponde una base conjugada fuerte (con gran afinidad por el protn). La mayor o menor tendencia de un cido AH a ceder su protn para formar la base conjugada A- segn la reaccin

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puede expresarse de un modo cuantitativo mediante la constante de equilibrio de dicha reaccin, que en este caso recibe el nombre de constante de disociacin (Ka)

Los cidos fuertes presentan valores altos de Ka, mientras que los cidos dbiles presentan valores bajos de Ka. Estas constantes de disociacin son caractersticas de cada par conjugado cido-bsico para una temperatura determinada. Al igual que ocurre con los valores de [H+] en las disoluciones acuosas diluidas, los valores de Ka resultan a veces engorrosos en lo que a su manipulacin se refiere. Por ello, de manera anloga a como se introdujo el concepto de pH,

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introduciremos ahora el concepto de pK, que se define como el logaritmo negativo de la constante de disociacin:

Cuanto ms fuerte sea un cido ms bajo ser el valor de su pK; por el contrario, los cidos dbiles presentan pK's elevados. Debemos tener en cuenta que el pK expresa tanto la tendencia de un cido a ceder protones como la de su base conjugada a aceptarlos; es, pues, una constante caracterstica de cada par conjugado cido-bsico a una temperatura determinada.

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La

titulacin

es

un

procedimiento

que

se

usa

habitualmente en qumica para conocer la concentracin de un cido en una disolucin. Se parte de un volumen conocido de la disolucin problema a la que se va aadiendo gota a gota otra disolucin de una base fuerte (generalmente NaOH) de

concentracin conocida. Cuando se produce la neutralizacin, lo que se determina mediante un colorante indicador, se puede

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determinar la concentracin inicial del cido a partir del volumen de disolucin bsica aadido y de su concentracin. Si en el curso de una titulacin vamos midiendo peridicamente con un pHmetro el pH de la disolucin problema, y lo representamos grficamente frente a la cantidad de disolucin bsica aadida, obtendremos la curva de titulacin caracterstica del par cidobsico titulado. En la Figura 4.10 se representa a modo de ejemplo la curva de titulacin del cido actico (HAc). Esta curva revela cmo va variando el pH y las cantidades relativas de la especie dadora y aceptora de protones a medida que transcurre el proceso de titulacin. En este proceso estn implicados dos equilibrios qumicos cuyas constantes caractersticas deben

permanecer inalteradas a lo largo de toda la titulacin:

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Al principio, antes de aadir hidrxido sdico, el cido actico est slo ligeramente disociado, en un grado que viene dado por su constante de disociacin; a medida que se va aadiendo hidrxido sdico, los iones hidroxilo adicionados se van combinando con los iones H+ libres en la disolucin para formar agua de modo que el producto inico de sta permanezca constante; al ir desapareciendo iones H+ libres el cido actico se disocia para formar acetato y liberar nuevos iones H+,

satisfaciendo as su propia constante de disociacin; al final del proceso todo el cido actico inicial habr cedido sus protones transformndose en acetato.

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Las curvas de titulacin de diferentes pares cido-base conjugados presentan siempre la misma forma y slo se diferencian en su posicin ms o menos desplazada verticalmente sobre la escala del pH (Figura 4.11). Este hecho sugiere que dichas curvas deben reflejar algn tipo de relacin matemtica comn a todas ellas. Tal relacin se conoce con el nombre deecuacin de Henderson-Hasselbalch, y se puede deducir fcilmente reenunciando de manera conveniente la expresin de la constante de disociacin de un cido dbil (Ka) tal y como sigue:

Despejando [H+] tenemos:

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Tomando ahora el logaritmo negativo de ambos miembros:

Sustituyendo -log [H+] por pH y -log Ka por pK tenemos:

31

Y cambiando el signo:

Esta ltima expresin es la ecuacin de HendersonHasselbalch que describe la forma de la curva de titulacin de cualquier par conjugado cido-bsico en el que AH es la especie dadora de protones y A- la especie aceptora de protones. La ecuacin de Henderson-Hasselbalch es de gran utilidad en el tratamiento cuantitativo de los sistemas cido-base pues permite,

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por ejemplo, calcular el pH de una disolucin conociendo el pK del par conjugado y la relacin molar entre la especie aceptora y la especie dadora de protones, o bien calcular el pK del par conjugado a partir del pH y de dicha relacin molar. Sin embargo, el principal inters biolgico de esta ecuacin, y de las curvas de titulacin que describe, es que ponen de manifiesto cmo un par conjugado cido-bsico puede funcionar como sistema tampn. Nos ocuparemos de ello seguidamente. Los sistemas tampn son disoluciones acuosas que tienden a responder a la adicin de cantidades moderadas de cidos o de bases con pequeas variaciones en su pH. Ilustraremos su funcionamiento a travs del siguiente ejemplo: si se aade 1 ml de HCl 10 N a un litro de agua pura (pH 7) el pH descender aproximadamente hasta un valor de 2; si se aade la misma cantidad de HCl a un litro de plasma sanguneo, que tiene su propio sistema tampn, el pH slo descender desde 7,4 hasta aproximadamente 7,2. Un sistema tampn (o simplemente

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un

tampn), consiste en una disolucin de un par cido-bsico que presenta concentraciones

conjugado

aproximadamente iguales de la especie dadora y de la especie aceptora de protones. Si se aade un cido a una disolucin de tales caractersticas, lo que implica un aumento en la concentracin de iones H+, el par conjugado reacciona desplazando su equilibrio de disociacin en el sentido de retirar iones H+ de la disolucin de manera que el pH no vara o lo hace muy poco. Si por el contrario se aade una base, los iones hidroxilo retirarn iones hidrgeno de la disolucin para formar agua y el par conjugado reaccionar desplazando su equilibrio de disociacin en el sentido de liberar ms iones H+ consiguiendo as que el pH tampoco vare. As pues, el efecto tampn es el resultado de la accin conjunta de dos equilibrios qumicos: el de ionizacin del agua y el de disociacin del par conjugado cidobase. Tanto la especie dadora como la aceptora de protones tienen que estar presentes en la disolucin para que el par conjugado funcione como tampn.

34

35

Las

curvas

de

titulacin

de

los

diferentes

pares

conjugados cido-bsicos reflejan perfectamente este efecto tampn: todas ellas presentan un tramo casi horizontal a lo largo del cual las variaciones de pH son mnimas en relacin a la

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cantidad de disolucin bsica aadida (ver Figuras 4.10 y 4.11). En el punto medio de esta regin tamponante, exactamente cuando se igualan las concentraciones de la especie dadora y de la especie aceptora de protones, la capacidad de tamponamiento del par conjugado es mxima. Aplicando la ecuacin de

Henderson-Hasselbalch podemos deducir que en este punto el pH de la disolucin es numricamente igual al pK del par conjugado:

Puesto que en el punto medio de la regin tamponante [A]=[AH]:

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38

Por lo que podemos afirmar que todo par conjugado cidobsico tiene capacidad de tamponamiento para valores de pH prximos a su pK. La regin tamponante propia de cada

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par conjugado se extiende aproximadamente 0,5 unidades de pH a ambos lados su punto medio, en el que se igualan los valores de pH y pK. Ms all de estos lmites el par conjugado no tiene capacidad de tamponamiento. Los tampones tienen una gran importancia biolgica ya que muchos procesos vitales se ven influidos de una u otra manera por las variaciones en el pH del medio acuoso en el que transcurren. Entre las biomolculas abundan las que contienen grupos funcionales ionizables como los grupos amino y carboxilo; del grado de ionizacin de dichos grupos funcionales, que se ve claramente afectado por los cambios en el pH del medio, depende en muchos casos la actividad biolgica de la molcula. Por ejemplo, los enzimas, de cuya actividad depende en gran medida la vida de las clulas, tienen un ph ptimo para el cual su actividad cataltica es mxima, y se inactivan rpidamente si el pH del entorno vara ms all de unos lmites estrechos con respecto a dicho pH ptimo. Por esta razn, los seres vivos se

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ven obligados a regular el pH de sus clulas y fluidos corporales de manera que el estado inico de sus biomolculas sea el ms adecuado para que stas puedan desempear correctamente sus funciones. Para ello utilizan tampones, que mantienen constante el pH de estos fluidos en unos valores que, en la mayor parte de los casos, estn prximos a la neutralidad (pH 7). Muchas biomolculas poseen grupos funcionales

ionizables que contribuyen al poder tamponante de los fluidos biolgicos; sin embargo, existen dos sistemas tampn que, por estar presentes en muchas formas de vida, tienen una especial relevancia: el sistema tampn del fosfato, que regula el pH en el citoplasma de todas las clulas, y el sistema tampn del bicarbonato, que acta en la sangre y en los lquidos intersticiales de los vertebrados. Estos son sus equilibrios de disociacin:

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El sistema tampn del fosfato, con un pK de 6,86, presenta clara capacidad de tamponamiento al pH celular, que est prximo a la neutralidad. Resulta curioso sin embargo, que el sistema tampn del bicarbonato, con un pK de 3,77, tenga capacidad de tamponamiento para valores de pH prximos a 7. Esta capacidad reside en que el cido carbnico, an estando casi totalmente disociado a estos valores de pH, puede reponerse a partir del CO2 disuelto en la sangre, que a su vez est en equilibrio con el CO2 gaseoso presente en los pulmones.

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43

La accin conjunta de estos tres equilibrios qumicos es la responsable del poder tamponante a pH fisiolgico del tampn bicarbonato.

6.-INTERACCIONES ACUOSOS.

DBILES

EN

LOS

SISTEMAS

Como ya se explic en el captulo precedente, las llamadas interacciones dbiles entre tomos o grupos de tomos vecinos son de una extraordinaria importancia biolgica ya que de ellas dependen muchos de los procesos en los que descansa el fenmeno de la vida. Las circunstancias en que tienen lugar estas interacciones, as como la mayor o menor fortaleza de las mismas, se ven influidas de manera determinante por la naturaleza acuosa del medio en el que tienen lugar.

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Las interacciones dbiles se caracterizan porque las cantidades de energa que se ponen en juego en su formacin o ruptura (energas de enlace) son netamente inferiores a las correspondientes a los verdaderos enlaces qumicos: la energa necesaria para romper un enlace covalente de tipo medio es del orden de 100 kcal/mol, mientras que las energas necesarias para romper los diferentes tipos de interacciones dbiles oscilan entre 1 y 5 kcal/mol. Consideraremos cuatro tipos de interacciones dbiles de importancia biolgica: los puentes de hidrgeno, las interacciones inicas, las interacciones hidrofbicas y las fuerzas de Van der Waals. a) Puentes de hidrgeno.- Como ya hemos visto, son interacciones electrostticas entre cargas parciales, que aparecen cuando a un un tomo tomo de hidrgeno se unido halla

covalentemente

electronegativo

prximo a otro tomo electronegativo. En las biomolculas

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existe una gran variedad de grupos funcionales capaces de establecer puentes de hidrgeno entre s. Estos puentes pueden ser intramoleculares, presentes en si se dan entre grupos

funcionales

una

misma

molcula,

o intermoleculares, si dichos grupos se encuentran en molculas diferentes.

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b)

Interacciones

inicas.- Son

interacciones

electrostticas entre tomos o grupos de tomos que presentan carga elctrica neta. Pueden

ser atractivas o repulsivas, siendo aquellas las de mayor importancia biolgica. En los diferentes tipos de

biomolculas existen grupos funcionales que presentan

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carga neta a pH 7 y que por lo tanto son susceptibles de participar en este tipo de interacciones (Figura 4.14). La razn de que incluyamos a las interacciones inicas de importancia biolgica entre las llamadas dbiles y no entre los verdaderos enlaces qumicos estriba en que, por tener lugar en medio acuoso, estas interacciones tienen energas de enlace sensiblemente inferiores a las que tendran de tener lugar en cualquier otro medio. Ello es debido a que el agua, gracias a su elevada constante dielctrica, tiene el efecto de reducir considerablemente las fuerzas

electrostticas que operan en su seno. c) Interacciones hidrofbicas.- Se producen cuando

zonas hidrofbicas de una misma molcula o de molculas diferentes se aproximan entre s, excluyendo el agua que las rodeaba, para establecer entre ellas un contacto estable, tal y como ocurre, por ejemplo, en las micelas. La fuerza de estas interacciones no reside en una atraccin intrnseca

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entre las regiones hidrofbicas, sino en la tendencia de stas a ofrecer al agua la mnima superficie de contacto posible(Figura 4.13).

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Las interacciones hidrofbicas intervienen en procesos como la determinacin de la estructura tridimensional de las protenas o la construccin de las membranas celulares por lo que son de una gran importancia biolgica. d) Fuerzas de Van der Waals.- Cuando tomos no cargados se encuentran muy prximos entre s, las

variaciones aleatorias en la posicin de los electrones alrededor de los ncleos pueden inducir la aparicin sobre dichos tomos de dipolos elctricos entre transitorios. dipolos Las se

atracciones

electrostticas

estos

denominan fuerzas de Van der Waals. Son fuerzas muy dbiles, inespecficas y de naturaleza fluctuante, sin

embargo, la accin combinada de muchas de ellas puede conferir gran estabilidad a una asociacin molecular dada. En captulos sucesivos iremos viendo numerosos

ejemplos que pondrn de manifiesto la gran importancia biolgica de las interacciones dbiles.

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7.-EL AGUA COMO REACTIVO.

El agua no es tan slo el disolvente en el que tienen lugar las reacciones qumicas de las clulas vivas, sino que a menudo participa efectivamente como reactivo en dichas reacciones. Un tipo de reaccin qumica muy comn en los seres vivos es la hidrlisis (del griego "rotura por el agua") en la que una molcula de agua se adiciona a un enlace qumico rompindolo. Esta reaccin participa en la degradacin biolgica de distintos tipos de biomolculas. En otros casos, el agua es un producto de las reacciones qumicas del metabolismo celular. Por ejemplo, en el proceso de la respiracin celular distintos tipos de biomolculas energticas se oxidan en presencia de oxgeno para rendir CO2 y H2O. El

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"agua metablica" as formada es de hecho suficiente para permitir que algunos animales que viven en ambientes muy secos puedan sobrevivir sin beber agua durante largos perodos.

8.-OTRAS VIVOS.

FUNCIONES

DEL

AGUA

EN

LOS

SERES

Adems de ser el disolvente en el que se mueven e interactan las dems biomolculas, lo que constituye su principal funcin biolgica, el agua desempea otras funciones importantes en los seres vivos, que se han adaptado eficazmente a su entorno acuoso desarrollando medios para explotar en su provecho las excepcionales propiedades fsicas del agua. As, elelevado calor especfico del agua es aprovechado por los animales

homeotermos para regular su temperatura corporal. Adems,

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algunos vertebrados utilizan el elevado calor de vaporizacin del agua para eliminar el exceso de calor mediante la evaporacin del sudor. Por otra parte, el alto grado de cohesin interna del agua lquida da lugar a fenmenos de capilaridad que son

aprovechados por las plantas para transportar los nutrientes en ella disueltos desde la raz hasta las hojas. Incluso el que el agua lquida sea ms densa que el hielo tiene consecuencias

importantes para los organismos acuticos: los estanques, lagos y mares se congelan en invierno desde arriba hacia abajo de manera que la capa superficial de hielo asla al agua subyacente del aire fro impidiendo as que sta se congele.

La influencia del agua en la evolucin biolgica ha sido profunda y determinante. Los seres vivos se han ido adaptando progresivamente al entorno acuoso en el cual se originaron. Si han aparecido formas de vida en algn otro lugar del universo es razonable pensar que en ese lugar deben existir grandes cantidades de agua disponible como disolvente

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