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UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS Y DEL MEDIO AMBIENTE AGROINDUSTRIA CEREALES Y OLEAGINOSAS


PRUEBAS DE LABORATORIO PARA SEMILLAS Y GRANOS OLEAGINOSOS

ALFREDO PEARANDA FUENTES

1640553

UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS Y AMBIENTE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL CUCUTA, 2013

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FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS Y DEL MEDIO AMBIENTE AGROINDUSTRIA CEREALES Y OLEAGINOSAS
PRUEBAS DE LABORATORIO PARA SEMILLAS Y GRANOS OLEAGINOSOS

La Sanidad de semillas concierne principalmente la presencia o ausencia de organismos causantes de enfermedades o pestes, pero incluye adems deficiencias nutricionales de las plantas y otras condiciones como senectud de las mismas. Las pruebas de sanidad de semillas son importantes por tres razones: 1) El inculo presente en las semillas puede aumentar progresivamente el desarrollo de la enfermedad y reducir el valor comercial del cultivo. 2) A travs de lotes de semillas, los organismos causantes de enfermedades pueden ser introducidos a nuevas reas. Para efecto de cuarentena este aspecto requiere investigacin y certificacin en lo que se relaciona con el movimiento internacional de semillas. 3) Pruebas de sanidad de semillas nos dan una idea acerca de las causas de anormalidades en las plntulas y pude suplementar las pruebas de germinacin.

1. PRUEBA DE GRANULACION DE SEMILLAS El tamao de la muestra obtenida deber ser de por lo menos 1.000gr para poroto, soja, maz y otras especies con semillas de tamao similar; de 500gr. en el caso de trigo, avena y otras semillas de tamao similar y entre 150 a 250gr. para semillas ms chicas. Las tomas se deben realizar en los niveles superior, medio e inferior de la estiba, vagn, contenedor, etc.

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2. PRUEBAS DE INFECCIONES E INSECTOS EN SEMILLAS El tamao de la muestra obtenida deber ser de por lo menos 1.000gr para poroto, soja, maz y otras especies con semillas de tamao similar; de 500gr. en el caso de trigo, avena y otras semillas de tamao similar y entre 150 a 250gr. para semillas ms chicas. Las tomas se deben realizar en los niveles superior, medio e inferior de la estiba, vagn, contenedor, etc. Las pruebas deben ser repetidas, se recomienda no usar menos de 400 semillas en cada prueba. La muestra puede ser examinada para identificacin de ms de un patgeno en una sola observacin. La microflora de un lote de semillas cambia considerablemente durante el almacenamiento; las condiciones de almacenamiento de muestras a probar en fechas futuras debern ser secas y fras. METODOLOGIA Inspeccin de la semilla seca Una muestra o submuestra puede ser inspeccionada para detectar la presencia de estructuras como esclerocios, quistes de nematodos y cambios de color debidos a patgenos. Microorganismos tambin pueden estar presentes en la materia inerte, como la paja que acompaa la semilla. Debe darse especial atencin a las semillas que presentan agujeros de insectos como gorgojos y otros; algunas semillas pueden contener insectos vivos. Algunas pestes comunes tales como gorgojos, caros, polillas, etc. pueden ocasionalmente encontrarse en semillas de cereales, leguminosas y otras semillas. La semilla puede examinarse mediante un microscopio de bajo aumento cuando se trata de identificar hongos por sus cuerpos fructferos como acrvulos y picnidios en la semilla seca. Examen despus de suavizar o sumergir la semilla La semilla puede ser sumergida en agua u otro fluido a fin de lograr que los cuerpos fructferos se tornen ms visibles o para lograr (condiciones en las cuales las esporas sean liberadas tales como exudados de picndios, masas de esporas de las glumas de gramneas. En algunos casos es necesario sumergir la semilla a fin de detectar condiciones tales como "corazn hueco" en Pisum spp. Examen de material removido de las semillas por lavado Esporas de hongos, nematodos, etc. que acompaan las semillas adheridos a las mismas pueden ser removidos agitando 100 semillas o ms, en agua con un agente mojante (detergente), o en alcohol. El fluido se puede entonces filtrar, centrifugar o evaporar a un volumen reducido para luego examinar la presencia de microorganismos. En los organismos que se encuentran en las semillas y que pueden ser detectados mediante la aplicacin de este mtodo, se recomienda su empleo nicamente como prueba preliminar, la cual deber seguirse con una investigacin completa.

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Examen posterior a la incubacin La muestra puede ser examinada para detectar la presencia de organismos causantes de enfermedades, plagas y desrdenes fisiolgicos despus de un perodo de incubacin. La prueba llamada de papel secante resulta muy efectiva para ese propsito. Las semillas, sin pretratamiento alguno, son colocadas ordenadamente a fin de que las plntulas no entren en contacto. La temperatura y la humedad debern estandarizarse de acuerdo a los requisitos del patgeno y de la semilla que acta como husped, aunque las condiciones frecuentemente son similares a las empleadas para los estudios de germinacin. Debido a que la esporulacin de muchos hongos es estimulada por la luz en especial s esta es intermitente y contiene radiacin en la regin del espectro cercana a ultravioleta (UV). Se recomienda para la mayora de las semillas perodos de luz de 12 horas seguidos de 12 horas de oscuridad. En algunos casos el desarrollo de algunos hongos requiere condiciones especia les, por ejemplo: Helminthosporium victorias en avena requiere temperaturas altas (28C); Septora nodorum en algunas variedades de trigo causa protuberancias en el coleptilo de las plntulas, en especial cuando la humedad es escasa y solamente permite la germinacin. Adems, en el caso de ataque de Fusarium en trigo que resulta ms fcilmente detestable si las semillas se incuban en completa oscuridad. Aunque la presencia de ciertos organismos sin la necesidad de lentes o sea a simple vista, un microscopio estereoscpico es a menudo necesario a fin de lograr una identificacin ms precisa y un microscopio de investigacin a fin de identificar las esporas. Tambin las semillas pueden colocarse sobre agar, generalmente despus de un pretratamiento, a fin de que se desarrollen las colonias caractersticas de cada organismo; en estos casos los organismos son identifica dos microscpicamente, sin embargo a fin de ser precisos es recomendable la observacin microscpica. Los daos ocasionados por insectos pueden a menudo apreciarse mejor separando los cotiledones o cortando las semillas. Para lograr lo anterior con mayor facilidad las semillas pueden sumergirse en agua para suavizarlas o cortarlas al final del perodo de incubacin. Otro mtodo para el examen de semillas es plantndolas en arena o polvo de ladrillo seguidas de un perodo de incubacin de 10 a 14 das, sin que las semillas hayan recibido pretratamiento alguno); la humedad entonces ser alta, lo que permite a los patgenos atacar a las plntulas en desarrollo. El mtodo de incubacin puede utilizarse para detectar los siguientes grupos de organismos o condiciones: 1) Hongos o bacterias patognicas presentes en las semillas, alojadas en la misma o que atacan las plntulas.

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2) Insectos en las semillas incluyendo estados larvales o evidencia de la presencia anterior de insectos. 3) Desrdenes fisiolgicos como la muerte o manchas en el centro de los cotiledones o la presencia de plmulas necrticas. Semillas que han recibido algn tratamiento pueden ser probadas siguiendo los procedimientos descritos, algunas veces nicamente con pequeas variantes. La presencia de organismos saprofitos, aunque no siempre, es una indicacin de que la semilla no es de buena calidad ya que ha estado expuesta a condiciones desfavorables durante la cosecha, beneficio o almacenamiento; o tambin que ha estado almacenada durante un largo tiempo. Las especies de Mucor y Rhzopus crecen rpidamente e invaden el sustrato de papel y pueden llegar a provocar la descomposicin de plntulas originalmente sanas. Examen de las plntulas en crecimiento. Una forma conveniente de detectar la presencia de hongos, bacterias y virus en la semilla es plantndola y observando las plntulas a fin de detectar en las mismas, sntomas de alguna enfermedad. Las semillas de los lotes sospechosos pueden sembrarse, o tambin inculo obtenido de las semillas atacadas usado para inducir la infeccin en plantas sanas. Las plantas pueden colocarse en el invernadero o directamente en el campo, pero recordando siempre, en especial en el ltimo caso, que deben ser protegidas a fin de impedir la infeccin fortuita por patgenos.

3. DETERMINACIN DE HIERRO POR ABSORCIN ATMICA1

FUNDAMENTO Hidrlisis parcial del producto con cido clorhdrico. Filtracin. Dilucin y determinacin por espectroscopa de absorcin atmica. REACTIVOS Y MATERIALES

Reactivos cido ntrico mnimo 65% para anlisis


1

NOM-131-SSA1-1995 NORMA OFICIAL MEXICANA. Determinacin de minerales en alimentos

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cido clorhdrico fumante mnimo 37% para anlisis Solucin patrn de hierro Solucin patrn de hierro lista para el uso, 1000 mg/l Materiales Matraces aforados, 50, 100 y 1000 ml Micropipetas de 50 - 200 l y 200 - 1000 l Pipetas ajustables, 5 ml Puntas amarillas de 50 a 200 l Puntas azules de 200 a 1000 l Puntas blancas Probetas graduadas, forma alta, 10, 25 y 500 ml Matraces Erlenmeyer, cuello estrecho, 100 ml Embudos Filtros redondos (< 0,007% de cenizas) Frascos de polietileno flexible, cuello estrecho de 100, 1000 ml Cubeta de polietileno, 15 l Descontaminacin del material: En una cubeta de polietileno introducir 10 l se mezcla de cido ntrico/agua (1:1) En este bao descontaminar durante una noche todos los matraces aforados, tapones, recipientes de polietileno o de polipropileno, as como todo el material de vidrio necesario. Enjuagar con agua destilada y secar. APARATOS E INSTRUMENTOS Balanza de precisin, capacidad 4100/600g: 0,1/0,001 Lmpara de hierro de tipo ctodo hueco Espectrofotmetro de absorcin atmica Destilador de agua Bao mara o de agua

PREPARACIN DE SOLUCIONES Solucin de cido clorhdrico 1,2 N En un matraz aforado de 1000 ml introducir aproximadamente 500 ml de agua destilada y 100 ml de cido clorhdrico concentrado. Enfriar. Llevar a volumen con agua destilada. Solucin de cido clorhdrico, 4 N En un matraz aforado de 1000 ml introducir aproximadamente 500 ml de agua destilada y 330 ml de cido clorhdrico concentrado. Enfriar. Llevar al volumen con agua destilada.

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Solucin de cido clorhdrico, 6 N En un matraz aforado de 1000 ml introducir aproximadamente 300 ml de agua destilada y 500 ml de cido clorhdrico concentrado. Enfriar. Llevar al volumen con agua destilada. Solucin patrn de hierro, 1000 mg/l En un matraz aforado de 1000 ml introducir el contenido de una ampolleta de cloruro de hierro. Enjuagar la ampolleta y llevar al volumen con agua destilada. Conservada en un frasco de polietileno o polipropileno descontaminado, esta solucin es estable durante aproximadamente un ao a temperatura ambiente. Tambin puede utilizarse una solucin patrn de hierro de 1000 mg/l lista para el uso. Soluciones patrn diluidas de hierro En matraces aforados de 100 ml verter mediante una pipeta 0 - 100 - 200 - 500 y 1000 l de solucin (17.4.4). Aadir 20 ml de solucin de cido clorhdrico 6 N y llevar al volumen con agua destilada. Estas soluciones contienen respectivamente 0 - 1,0 - 2,0 - 5,0 y 10,0 g de hierro/ml. Transferir inmediatamente a frascos de polietileno o polipropileno descontaminados. Estas soluciones deben prepararse cada semana. Se recomienda comparar las nuevas soluciones con otras preparadas anteriormente a fin de detectar cualquier error grave de preparacin. PREPARACIN DE LA MUESTRA PARA ENSAYO Productos slidos Tomar una cantidad representativa de la muestra a analizar. Si es necesario moler el producto mediante un molino o un mortero. Evitar cualquier contaminacin durante esta manipulacin. Mezclar bien. Productos lquidos Mezclar bien el producto antes de abrir el recipiente. A continuacin transferir a un recipiente de vidrio o de plstico descontaminado. Guardar en el refrigerador (4C). Mezclar bien antes de su uso.

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PROCEDIMIENTO Toma de ensayo En un matraz aforado de 50 ml pesar, con una precisin de 0,01 g; 1,00 g de producto en polvo o 10,00 g de producto lquido. Aadir agua destilada hasta un volumen de aproximadamente 15 ml. Aadir 10 ml de solucin de cido clorhdrico 6 N (17.4.3). Calentar en un bao mara en ebullicin durante 30 min. Dejar enfriar a temperatura ambiente. Llevar al volumen con agua destilada. Filtrar a travs de un filtro exento de cenizas, eliminar los primeros 5 ml. Recolectar el resto del filtrado. Dilucin En matraz aforado de 100 ml verter mediante una pipeta un volumen de la solucin de toma de ensayo (17.6.1), tal que la concentracin final est comprendida entre 1 y 8 g/ml. Llevar al volumen con solucin de cido clorhdrico 1,2 N. Determinacin Ajustar el aparato de absorcin atmica segn las indicaciones del fabricante. Se recomienda utilizar mejor un quemador provisto de un nebulizador de hlice, que un nebulizador con bola de impacto. Deben respetarse las siguientes condiciones: Lmpara de hierro de tipo ctodo hueco Longitud de onda: 248,3 nm Llama: aire-acetileno, oxidante (azul, pobre en acetileno) Dejar calentar la lmpara durante 15 - 20 min. Encender la llama y esperar unos 15 min a que alcance el equilibrio. Colocar el quemador de manera ptima. Aspirar las soluciones patrn (17.4.5), luego las soluciones de la toma de ensayo (17.6.1 o 17.6.2). Despus de cada medida, aspirar un poco de solucin 17.4.2, luego agua destilada a fin de evitar que el capilar se obstruya. Despus de aspirar diez soluciones de tomas de ensayo, verificar la calibracin aspirando una solucin patrn y efectuando un "reslope". Trabajar de preferencia con la opcin "integracin"; la duracin de las medidas debe ser de por lo menos 5 segundos. Efectuar cada medida por lo menos tres veces. Ninguna solucin de toma de ensayo no debe rebasar la concentracin del patrn ms concentrado. Efectuar una nueva dilucin si es necesario.

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CLCULO Y EXPRESIN DE RESULTADOS Modo de clculo Calcular o trazar la curva de calibracin llevando la absorbancia a la ordenada y la concentracin de las soluciones patrn diluido, en g/ml, a la abscisa. Determinar la concentracin de las soluciones de las tomas de ensayo (C). Restar el valor del blanco (B) de aquellos de los productos. El contenido de hierro en el producto, en mg/100 g, es igual a:

Dnde: C = concentracin de hierro en las soluciones de las tomas de ensayo, en g/ml B = concentracin de hierro en el blanco (solucin patrn de 0 g de hierro por ml) V = volumen inicial (17.6.1), en ml (en general 50) D = factor de dilucin (17.6.2) m = masa de la toma de ensayo, en g EXPRESIN DE LOS RESULTADOS Expresar los resultados con dos cifras significativas. REPETIBILIDAD La diferencia entre dos resultados individuales obtenidos con la misma muestra, en las mismas condiciones, en un corto intervalo de tiempo, no debe exceder el 10% de su valor medio.

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