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Busqueda de compuestos
antifiingicos
Intrcducci6n al usc de este Manual
SUSANAA. ZACCHINO
Farmacognosia. Facultad de Ctenctas Bioquimicas y Farmaceuucas,
Universidad Nacional de Rosario, Rosario, Argentina
I.IINTRODUCCION
Durante las ultimas dccadas ha habido un aumento significat ivo de las infecciones
fungicas en humanos como rcsultado de las deficiencias en cl sistema inmuno16gico
asociadas con la quimioterapia anticanceri gena, transplantes, nutricion parenteral ,
usa de antibi6ticos de amplio espectro, el Sindromc de Inmunodcficiencia Adquirida
(SIDA) y otras.'
A pesarde que hay cinco c1ases de drogas antifungicas disponibles en el mercado
cuya situaci6n actual es ampliamente tratada en el capitul o 2, todas elias tienen series
desventajas: algunas no poseen amplio espectro de accion, otras no son selectivas
para el hongo siendo toxicas para cl bucspcd y muchas son fungistaticas y no fungi-
cidas produciendo recurrencia. A esto sc suma la aparicion de ccpas resistentes a los
antifungicos en uso clinico, que es actualmente un problema de diflcil solucion.'
Por todas estas razones, existe un consenso general de que son necesarios nuevas
drogas con acti vidad antifungica, las cuales puedan constituir altemati vas para el
tratamient o de las infecciones fungi cas. tan diflci les de erradicar.'
Para la busqueda de compuestos con actividad antifungica, se cstablecc un esque-
ma de ensayos, comcnzando con un ensayo que tenga una capacidad relativamente
grande, de modo de rcalizar un cribado de todos los compuestos en un tiempo breve,
detectando a los mas intere santes y descartando aquellos con moderada 0 baja acti-
vidad.v Los compuestos seleccionados son sometidos a cnsayos de mayor orden. En
este segundo tipo de ensayos, se continua la actividad obscrvada en el primer ensayo
y los compuestos seleccionados se someten a otras pruebas incluyendo estudios de
,
Zacch lno-Gupta I

Nanual de Tecnlcas in vitro para la detecti on de compuestos ilntifungicos
modo de accion (E.M.A.), que pueden consistir cn pruebas celulares simples y otras
mas sofisticadas a nivel molecular. Asl, de una gran cantidad de compuestos someti-
dos a ensayos primaries, surgen unos pocos candidatos para continuar su estudio.
Estudios en animales de experimentacion y ensayos toxicologicos completan los
estudios de actividad biolcgica de un compuesto Interesarne, eI cual sera objeto de
modificaciones quimicas de modode encontrar los mejores candidatos para los estu-
dios pre-clfnicos y clfniccs.
J.2 ENSAYOS DE PRIMER ORDEN
Para esta primera instaneia dc cribado, se utilizan metodos celulares sin diana espc-
cifica. En estos bioensayos, la actividad antifungica puede ser detectada observando
la inhibicion del crecimiento del hongo como respuesta a la accion de aquellos com-
puestos 0 extractos que se ponen en contacto con ellos.S
Los bioensayos mas utilizados son:
I. Metodo de difusion (tratado en capitulo 6).
2. Metodos bioautognificos (tratado en capitulo 7).
3. Metodos de dilucion (tratado en capitulos 8 y 9).
Los metodos de difusi6n y bioautograficos son utiles como metodos 0
semicuantitativos, mientras que los de dilucion penniten cuantificar la minima con-
centracion a la cual el hongo es inhibido [Concentraci6n Inhibitoria Minima (ClM)]
o a 13cual se produce su muerte [Concentracion Fungicida Minima (CFM)].
Los resultados de los metodos celulares sin diana especifica estan profundamente
influcnciados por un gran numero de variables tales como el panel de microorga-
nismos usados como blanco, preparacion del in6culo, tamanc del mismo, tiempo
y temperatura de incubacion, composici6n del media de cultivo y criterio para la
observaci6n del punto final, entre otros.'
La seleccicn de los microorganismos para eI panel de prueba depende del propo-
sito de la investigacion. Si la investigacicn es de caracter general, deben seleccio-
narse espccies fungicas representativas de todos los grupos importantes de hongos
oportunistas y patogenicos para el humano, incluyendc los causantes de infeccioncs
superficiales y sub-cutaneas. Si por el contrario, se buscan inhibidores de una especie
en particular. eI panel estara compuesto por diferentes cepas de la especie de interes.
Los capitulos 3 y 4 orientan sobre la seleccion del panel de hongos prueba. En cuanto
a la fuente de donde provengan los hongos que confonnan el panel. 10 mas adecuado
es utilizar hongos estandarizados provistos por colecciones de cultivo reconocidas
intemacionalmcnte tales como ATCCC' (American Type Culture Collection, Rockvi-
lle, MD, USA), CECT (Coleccion Espanola de Cultivos Tipo, Valencia, Espana) 0
mucbas otras, de modo de que estas pruebas puedan ser repetidas en otros labora-
1
Capitulo I - Oife rentes as pect05 a considerar en la BUsqueda de Compuestos Anti fUngicos
tori os de investi gaci on (ver capitulo 5). Por d contrario, si uno esta iuteresado en
encontrar el ant ifungico apropiado paid pacientes con infccciones fungi cas, muchas
veces resistentes a todo t ratamicnto, es apropiado conformar el panel con aislados
cllnicos de Hospital cs 0 Centres de Salud.
Las ot ras variables que infiuyen en los resultados scran tratados en los capitulos
6.7 y 8.
1.3 ENSAYOS BASADOS EN MECANISMO DEACCI6N
En la Figura 1.1 sc muestra un esquema de: la celula fungica y algunas de: las dianas
posibles para ensayos antifungicos.
Dentro de: los variados blancos para determinar mecanismos de: accton.v hemos
incl uido en este Manual a aqucllos que: han dado lugar a los mas utiles antifungicos
en uso cllnico co las dos tiltimas decades: la membrana fungica (dafio a la mi sma,
union al ergosterol 0 inhibic ion de su biosintesis) que se tratara en los capitulos 12 y
13. Yla pared cel ular fungica (incluyendo el estudio de la inhibicion de la stntesis de
sus poll meros constituyentes y la metodologfa para detcctar malformaciones de las
hifas) que se tratara en los capitulos 10 Y I I .
Metabolismo
l ntermediarlo
1.!I l bldO. de fmorn de v1n1Ie. d a
Pared eetutar
Otras dianas
FiJtQf"'II 1. 1: Esquema do: la celul a fungica adonde se indican las dianas utiles para compuestos ant ifun-
gicos (Esquema n:produci do de: la Ref. 7 con permiso).
Actualmente existen nuevas tendenci es en el descubrimiento de agentes antifun-
gicos, que han sido posibles gracias at gran avance de la gencmica y la proteomi ca.
Las mismas son desarrolladas en el capitulo 14.
)
Zacchino-Guptil I Manual de Tecnicas in vitropara la derec clcn de compuestos antifungicos
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