ACTINOMICETOS EN LA INDUSTRIA

El advenimiento de la moderna biotecnologa abri por completo nuevas perspectivas para el uso de microorganismos como generadores de productos farmacuticos. A la vista de la inmensa variedad de grupos de genes biosintticos de productos naturales que ahora son accesibles a travs de la secuenciacin de alto rendimiento, es deseable establecer tecnologas eficientes de modificacin, transferencia y expresin. Los mtodos que la ingeniera gentica provee pueden ser utilizados para la produccin de productos naturales derivados de microorganismos de lento crecimiento o incluso de aquellos que no se pueden cultivar. Estos mtodos pueden modificar genes biosintticos o insertar genes especficos dentro del ADN de una cepa productora de antibiticos para obtener metabolitos secundarios modificados. Aunado a lo anterior, nuevos metabolitos se pueden obtener por combinar al azar los genes de dos o ms grupos de genes que tienen influencia en rutas biosintticas similares. El presente artculo describe brevemente diferentes clases de sustancias mdicamente tiles producidas por actinomicetos con aplicaciones farmacolgicas. Adems, se mencionan los efectos de algunos compuestos sobre diferentes organismos y la bacteria que lo produce.

Los microorganismos viven en ambientes naturales, donde su crecimiento es afectado tanto por interacciones con otras poblaciones (sinrgicas, antagnicas, etc.) como por las caractersticas fsicas y qumicas de su entorno. Como consecuencia de esas interacciones, se producen metabolitos secundarios con actividades biolgicas variadas, que juegan un papel importante en su sobrevivencia. En contraste a los metabolitos secundarios producidos por las plantas, cuyo uso contra enfermedades tiene sus races en la medicina tradicional, los compuestos de importancia farmacutica obtenidos de microorganismos son el resultado de intensas investigaciones de la naturaleza como fuente de compuestos bioactivos llevados a cabo por un gran nmero de laboratorios en todo el mundo. La identificacin y caracterizacin biolgica y molecular de microorganismos tiles como agentes de biocontrol, productores de compuestos bioactivos o sustitutos de antibiticos, ha sido de gran inters para la medicina y la agricultura moderna. En este contexto se han evaluado microorganismos, se han aislado y caracterizado qumica y biolgicamente sus metabolitos secundarios, y se ha estudiado el papel que estos juegan en el control de enfermedades y en las respuestas de defensa (Martn, 2003; National Research Council (NRC), 2003 www.item.ba.crr.it/biopesti.htm.) Originalmente la bsqueda de compuestos tiles se realizaba siguiendo varios pasos, entre los cuales se pueden mencionar los siguientes: 1) colectar sistemticamente microorganismos del suelo, 2) crecerlos en cultivos axnicos, 3) probar la capacidad de los medios donde crecan los microorganismos para inhibir el crecimiento de organismos patgenos, y 4) recuperar las sustancias activas producidas por los microorganismos. De est bsqueda se obtuvo que los actinomicetos eran los organismos que con mayor frecuencia producan compuestos inhibidores del crecimiento de bacterias patgenas, en particular cerca del 50% de las cepas aisladas de Streptomyces presentan algn compuesto activo principalmente contra bacterias Gram-positivas. De tal manera que al inicio de los aos sesenta se descubrieron miembros de las principales familias de antibiticos clnicamente tiles. Con excepcin de las penicilinas, cefalosporinas y algunos productos menores, todos eran producidos por los actinomicetos. De manera colectiva su espectro de accin cubra prcticamente todos los patgenos bacterianos importantes (www.bib.gbf.de/ ergebnisbenisberech/1997/english/section-c/c3/ c3english.htm). Sin embargo, a pesar de la gran cantidad de compuestos aislados, surgi la necesidad de una revisin a fondo de los objetivos y los mtodos para buscar compuestos tiles. Esto se dio por el hecho de que el

nmero de antibiticos aislados fue tal que la competencia por descubrir nuevos compuestos se volvi cada vez ms frecuente. Sin embargo, considerando la dificultad y costos elevados de aislar nuevas estructuras y agentes antimicrobianos con formas novedosas de actuar, el descubrimiento de nuevos compuestos entr en una fase de decaimiento acelerado (DiMasi et al., 1994), sobretodo si se toma en cuenta que la probabilidad de encontrar en los microorganismos compuestos bioactivos tiles es de 1 por cada 10,000 cultivos examinados por los mtodos microbiolgicos tradicionales (Clark, 1996). En este sentido, la bsqueda de compuestos activos comenz a dar un giro importante, principalmente teniendo como objetivo la bsqueda de compuestos contra hongos, virus o cepas bacterianas resistentes a antibiticos. Por lo tanto, la estrategia de bsqueda de metabolitos novedosos se cambi lentamente en muchos laboratorios, tomando en cuenta que menos del 1% de las especies bacterianas y menos del 5% de las especies de hongos son conocidas, y que millones de especies microbianas permanecen desconocidas, por lo que es grande el potencial de los microorganismos como proveedores de compuestos bioactivos tiles (Yung, 1997), algunos de ellos han optado por mtodos de bsqueda masiva de microorganismos inusuales o raros (como algunos actinomicetos) u organismos que viven en ambientes marinos peculiares, principalmente en ambientes de temperatura extrema o de elevadas presiones (www.febras.ru/vpiboc/english/newpsoe1.htm; Carte, 1996). Otros grupos han enfocado su investigacin a la bsqueda de nuevos sitios blanco de los compuestos ya conocidos, en vez de aislar nuevos organismos productores. El resultado de todo ello ha sido el descubrimiento de agentes antimicrobianos nuevos e importantes, sustancias con actividad antitumoral e inhibidores de enzimas de mamferos de potencial inters farmacutico, entre otros compuestos. Sin embargo, a pesar de contar con un nmero importante de metabolitos, se requiere de nuevos productos que cubran diferentes necesidades en las reas mdica, agrcola y alimenticia. Por ejemplo, en la medicina se requiere de nuevos productos debido a: 1) el desarrollo de resistencia de microorganismos patgenos, 2) la aparicin de nuevas enfermedades (SIDA, virus Hanta, virus del bola, enfermedad de Lyme, Escherichia coli 0157:H7, entre otras), 3) la existencia de bacterias resistentes naturalmente y 4) la toxicidad de algunos compuestos actualmente en uso (Demain, 1999); en la agricultura se requiere de compuestos tiles para combatir bacterias, virus, insectos y nematodos fitopatgenos; para la nutricin animal se requiere de compuestos que puedan utilizarse para la preservacin de alimentos. Los progresos de la biotecnologa moderna han abierto nuevas perspectivas para el uso de microorganismos como productores de metabolitos con aplicaciones farmacuticas, auxilindose de la ingeniera gentica como herramienta que provee de nuevos mtodos para la obtencin de metabolitos secundarios modificados que cubran las necesidades actuales.

METABOLITOS SECUNDARIOS PRODUCIDOS POR ACTINOMICETOS Los metabolitos secundarios producidos por bacterias son molculas relativamente pequeas producidas por un nmero limitado de cepas, que al parecer no tienen una funcin determinada en el crecimiento celular. De hecho, las cepas productoras de stos, que por alguna mutacin han perdido su capacidad de producirla, presentan crecimiento y caractersticas normales. Estos metabolitos incluyen diferentes tipos de compuestos de importancia econmica, dentro de los cuales se encuentran los antibiticos, pigmentos, toxinas, feromonas, inhibidores enzimticos, agentes inmunomoduladores, antagonistas y agonistas de receptores, pesticidas, agentes antitumorales y promotores del crecimiento en animales y plantas. Esta gran variedad de compuestos producidos en la naturaleza se ve reflejada en cerca de los ms de 23,000 metabolitos microbianos conocidos, de los cuales el 42% los producen hongos, 32% actinomicetos y el resto producidos por otros grupos de bacterias (Lazzarini et al., 2000). En el caso de los actinomicetos, es ampliamente reconocida la capacidad que tienen de producir una gama muy variada de metabolitos secundarios (Baltz & Hosted, 1996), algunos de los cuales se describen a continuacin y que son relevantes por su uso como frmacos.

CLASIFICACION -Lactmicos

Aminoglucsidos

Tetraciclinas

Macrlidos

Polienos

ANTIBITICO Cefoxitina. (Cefamicina semisinttica). Inhibe sntesis de pared celular. A nivel clinico se usa la tretraciclina y clortetraciclina producida por S.aureofaciens Estreptomicina. Inhibe sntesis de protenas. Unin en la subunidad ribosomal 30S. El productoprincipal es la estreptomicina producida por Streptomyces griceus Tetraciclina. Inhibe sntesis de protenas. Unin en la subunidad ribosomal 30S. Eritromicina. Inhibe sntesis de protenas. Unin en la subunidad ribosomal 50S. El miembro representativo de este grupo es Saccharopolyspora erythrea Amfotericina B. Alteracin de permeabilidad en la membrana. Vancomicina. Inhibe sntesis de pared celular. Rifampicina. Inhibicin de sntesis de RNA. Unin a la RNA polimerasa. Cloranfenicol. Inhibe sntesis de protenas. Unin en la subunidad 50S.

Glicopptidos

Rifamicinas

Fenicoles

I. Antibiticos Los metabolitos microbianos ms importantes son los antibiticos, sustancias que a bajas concentraciones inhiben el crecimiento de diferentes especies de microorganismos y que ejercen su mayor efecto sobre la salud, nutricin y economa de la sociedad. Un aspecto importante es el gran nmero de antibiticos existentes, de los aproximadamente 8,000 reportados hasta 1999, 45.6% eran producidos por estreptomicetos, 16% por otros actinomicetos, 16.9% por otras bacterias y 21.5% por hongos (Lazzarini et al, 2000). Otro aspecto importante de los antibiticos se refiere a la variedad de estructuras qumicas que presentan, en donde todas las clases de molculas de la qumica orgnica estn representadas: cadenas alifticas, anillos aromticos aislados o condensados, anillos

Actinomiceto

Los actinomicetos son un grupo de microorganismos unicelulares, muy abundantes en el suelo, aguas estancadas, estircoles y, en general en lugares donde los restos vegetales

se descomponen aerbicamente . Son un grupo de bacterias filamentosas, que tienen similitud con los hongos, por su morfologa, tipo de reproduccin y crecimiento en medios de cultivo slido y lquidos . Son bacterias Gram positivas (que tienen en su pared celular peptidoglicano), resistentes a la penicilina, lo que constituye la principal diferencia con los hongos filamentosos. Pese a que etimolgicamente actinomiceto significa hongo en forma de rayo de sol, actualmente se les engloba dentro del grupo de los Esquizomicetos, donde constituyen el orden de los Actinomicetales . La principal caracterstica de los Actinomicetales es su capacidad para formar filamentos delgados ramificados o un micelio ramificado similar a los hongos (aunque de menor dimetro). Adems, al igual que los hongos, producen esporas . Es interesante destacar que las condiciones climticas controlan su nmero y variedad poblacional. La mayora son seres aerobios estrictos, que crecen bien a temperaturas del orden de los 25C, son por tanto, microorganismos mesfilos; y a pH alcalino (pH 9). En estas condiciones pueden alcanzarse densidades de poblacin entre 108 y 1011 UFC/gramo de suelo . Actualmente, los actinomicetos se clasifican en diferentes familias, segn el manual de Bergey (2000) . Las ms importantes por su abundancia son: 1. Streptomycetes: constituyen el 95% de los Actinomicetales. Tienen hifas no fragmentadas, un micelio areo extenso, esporas o conidias en cadena. Los gneros representativos son: Streptomyces, Microeliobosporia y Sporichthya. 2. Actinomycetes del tipo Nocardia: constituyen el 1,98% de los Actinomicetales. Poseen hifas fragmentadas con pequeas estructuras redondeadas. Los gneros ms representativos son: Pseudonocardia, Nocardioides y Terrabacter. Estos microorganismos son un grupo muy importante desde el punto de vista biotecnolgico debido a que producen vitaminas (principalmente del grupo B), antibiticos y pigmentos de gran inters industrial .

Principales funciones de los actinomicetos. Produccin de estreptomicina. Una vez se tiene una idea de qu son los actinomicetos y qu clases hay, es necesario conocer sus funciones ms caractersticas, para as entender sus mltiples aplicaciones biotecnolgicas. Las principales funciones que presentan los actinomicetos, segn Waksman, son las siguientes :
o

Actan en la descomposicin de residuos animales y vegetales liberando amonaco y cidos orgnicos. Estos ltimos son capaces de formar complejos muy importantes en edafognesis (proceso de formacin y evolucin de un suelo) y en la nutricin vegetal, ya que tienen una gran movilidad y capacidad quelante para ceder a las races el nutriente que se requiera.

Mineralizacin del humus con la consiguiente liberacin de principios tiles para la nutricin de las plantas. Participan activamente en los procesos de humificacin, particularmente en laformacin de sustancias melnicas. Su micelio presenta una parte interesante de la materia prima para la sntesis decompuestos hmicos, adems posee unas protenas (hidrofobinas) que tienen capacidad para que el micelio resista a la falta de agua. Estas protenas han adquirido un importancia ya que uno de sus componentes, rico en cistenas (SC3), est relacionado con el Alzheimer. Secrecin de sustancias antibiticas como la estreptomicina, tetraciclina, etc., con el fin de producir equilibrios genricos o antagnicos especficos hacia los componentes de la microflora bacteriana. Incluso son capaces de producir una accin fitopatognica ejercida por algunas especies sobre plantas de inters agrcola. Es interesante estudiar ms en detalle cmo se lleva a cabo la produccin de antibiticos, como la estreptomicina, por parte de estas bacterias. La estreptomicina es un antibitico aminoglucsido producido por Streptomyces griseus. Este antibitico se transporta de forma activa a travs de la membrana bacteriana, y una vez en el interior celular se une de forma irreversible a protenas receptoras especficas de la subunidad 30S de los ribosomas bacterianos. As, interfieren en el complejo de iniciacin de la traduccin dando lugar a la produccin de protenas no funcionales. Todo esto genera un transporte acelerado de aminoglucsidos aumentando la ruptura de las membranas citoplasmticas de las bacterias y por tanto su muerte (por tanto, es bactericida) . El proceso de produccin industrial del antibitico comienza con un cultivo primario (de pequeo volumen) donde se deja crecer el microorganismo, siempre con los nutrientes necesarios y en las condiciones ptimas. Segn ste va creciendo, se va aumentando el volumen del cultivo, para finalmente llegar al fermentador. Una vez en el reactor, se le somete a una situacin de estrs (medio cido), para que comience a producir la estreptomicina . El antibitico obtenido se purifica. Para ello primero se neutraliza con una solucin bsica y posteriormente, se filtra para eliminar impurezas. A continuacin, se evapora la solucin para concentrar el producto. El elemento concentrado se lava y se le somete a una hidrogenacin cataltica. Todo ello se vuelve a filtrar y se liofiliza (eliminacin del agua) comprobando que est completamente estril. Por ltimo, el antibitico esterilizado se encapsula (se hace un ensayo de esterilidad), se etiqueta, empaqueta y se expide [9]. Agricultura sostenible: actinomicetos y biofertilizacin. Otro ejemplo de la importancia de los actinomicetos en la industria biotecnolgica, es la aplicacin de estas bacterias para mejorar cultivos con el fin de establecer un nuevo tipo deAgricultura Sostenible .

Una de las cualidades que se observan en estas bacterias es su presencia en la rizosfera(zona del suelo afectada por el desarrollo de las races), por ello se les denominan rizobacterias. Debido a esta particular localizacin, los diferentes gneros resultan muy beneficiosos para las plantas, ya que favorecen su crecimiento, controlan la aparicin de hongos no deseables y ayudan a la asimilacin de hierro, fsforo y nitrgeno. Se puede hablar de simbiosis planta-bacteria o incluso, de helper bacteria (bacteria ayudante). La Biofertilizacin, por tanto, consiste en el aumento del nmero de microorganismos en un suelo para acelerar los procesos microbianos y aumentar la cantidad de nutrientes asimilables por la planta . Este tipo de tratamiento de la planta con actinomicetos presenta numerosas ventajas: disminuye el uso intensivo de fertilizantes, disminuye los costes de produccin de muchos alimentos, y aumenta la competitividad en el mercado. En resumen, una buena biofertilizacin reduce el uso de energa de la planta a la hora de absorber los distintos nutrientes, disminuye la degradacin del agro-ecosistema y reduce la prdida de nutrientes del suelo por lixiviados, sobre todo de nitrgeno. Esta misma aplicacin se ha utilizado en Mxico , donde el cultivo de la papa reporta muchos beneficios, pero hay un hongo que destruye gran cantidad de cultivos (de un 20 a un 50%), por lo que acarrea prdidas sustanciosas. La solucin es la misma que en el caso anterior, control biolgico por actinomicetos. Se ha visto que son efectivos frente a numerosos patgenos de la planta, son baratos, duraderos, no contaminan y no alteran el ecosistema. As pues, se reducen aquellos microorganismos indeseables en el suelo favorecindose los organismos tiles para los cultivos, con lo que la produccin de la planta aumenta [8]. Hoy en da ya hay empresas biotecnolgicas que se dedican a la comercializacin de concentrados de distintos microorganismos favorables para la planta. Uno de estos productos incluye actinomicetos del gnero Streptomyces [7]. Sheila Blanco Barrientos, Concepcin Garca Montas y Lidia Sanz Somolinos