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Helicobacter pylori vaccine strategies triggering gut reaction.

Helicobacter pylori (Hp) is a microaerophilic, spiral, gramnegative bacillus first isolated from human gastric antral ephitelium in 1982. It is now recognized as a humanspecific gastric pathogen that colonizes the stomachs of at least half the worlds population. Hp survives largely within the gastric mucus layer without attaching to host cells. Most infected individuals are asymptomatic. However, for a significant number, infections is associated with the development of duodenal and gastric ulcers, gastric adenocarcinoma, mucosa associated lymphoid tissue (MALT) lymphoma and primary gastric non-Hodgkins lymphoma. Well defined and validated triple or quadruple drugs combinations have proven to be curative in many cases, but are rather complicated, expensive and not always effective because Hp strains are becoming resistant to antibiotics. Eradication therapy in asymptomatic patients or in those with undefined dyspepsia has led to antibiotic resistance of other pathogenic bacteria present in the gastronintestinal tract. Antimicrobial treatment against Hp includes bismuth compounds, acid inhibitory drugs and proton-pump inhibitors whose combinations can be toxic to the host. Furthermore, recent studies have suggested that patients who are successfully treated for Hp are at increased risk of developing gastroesophageal reflux disease (GERD) and Barretts mucosa, which can progress to adenocarcinoma of the esophagus. The development of appropriate intervention strategies through vaccination can reduce morbidity and mortality due to the two major gastroduodenal diseases: peptic ulceration and gastric cancer. Humans appear to be the natural host of the Hp and the organism has adapted exquisitely to the ecological niche of the stomach. Hp colonization, survival and transmission are achieved by the production of specific virulence gene products such as urease, adhesions, chemotactic proteins, vacuolating cytotoxins CagA and VacA, heat shock proteins and phospholipases. Some of these products are being investigated as vaccine candidates and are discussed in further detail below. Feasibility of an Hp vaccine and ideal characteristics The feasibility of producing an effective vaccine against Hp has been questioned due to the fact that natural immunity appears to be inadequate for clearing the infections. Therapeutic intragastric vaccination against Hp in mice eradicates an otherwise chronic infection and confers protections against reinfection. A key issue is the type of immune responses required to control Hp infection. Result of therapeutic vaccine studies in murine models show that a switch from an existing T helper type 1 (Th 1) to a T helper type 2 (Th2) response is possibly required for the prevention and eradication of Hp infection. This situation might be also the case for human hosts because a Th 1 response in infected individuals is not only ineffective at clearing Hp infection, but also causes tissue damage and induction of chronic active gastritis. Indeed it has been proposed that the ability of the bacterium to induce a Th 1 response is part of a defense mechanism. Nevertheless, the views concerning Th1/Th2 balance are controversial, and probably a mixed Th1 and Th2 response is crucial to protection conferred by vaccination, but with each response occurring at a specific stage of the infectionthat is, Th1 as an initial cell response with Th2 becoming dominant later. The ideal Hp vaccine should comprise a well-conserved, immunogenic, Hp antigen(s) that will be processed primarily by the MHC II pathway. It should trigger an immune response in the upper digestive track that is probably biased towards a Th2 type, and is able to prevent initial colonization of the gastric mucosa without any harmful effects to the host. It must also stimulate immunological memory and should probably include an adjuvant. In order to design an optimal vaccine, new methods are being used such as the inclusions of transgenic animals to assess protective mechanisms, structural biology analysis to determine the conformation of potential antigens, and functional genomics to screen microbial gene products as vaccine candidates. Selection os antigenic targets The selection of antigenic targets is critical in the design of an Hp vaccine. To date, this area is somewhat underresearched, with the majority of studies focusing on the urease enzyme. Other putative virulence determinants that might prove to be vaccine candidates in future studies include the cytotoxin VacA, the immunodominant antigen CagA and the phospholipase PIdA (Table 1). Although some of these antigens have been used in vaccination studies with promising results, the majority of studies did not result in 100% clearance of Hp from the gastric mucosa and prevent infection or reinfection depending on the antigenic proteins selected and their delivery systems. Urease is essential for virulence and colonization of the gastric mucosa. It hydrolyses urea to carbon dioxide and ammonia and is thought to be important in neutralizing the immediate microenvironment of Hp in the stomach. It is accessible to immunoglobulin A (igA) antibodies, which neutralize enzymatic activity by recognizing a conformational epitope that involves the two urease subunits UreA (265 kD) and UreB (61 kD) at a stoichiometric ratio 1:1. Human gastric epithelial cells in particular are stimulated by Hp urease to induce proinflammatory cytokines, particularly interleukin 6 (IL-6) and tumour necrosis factor (TNF- ) which are associated with tissue inflammations and mucosal damage. The antigenic potential of urease has been demonstrated clearly in animal studies and prototype vaccine studies in mice and monkeys have proved encouraging. However, it is likely that Hp urease or its individual subunits in combination with other defined Hp antigens may prove a more effective vaccine against infection by this bacterium. In a series of studies, mice immunized with both heat shock protein A (HspA) and UreB or the engineered heat shock protein GroES and UreB, as well as vacuolating cytotoxin (VacA) and urease were found to be highly protected from infection.

Hp antigenic protein UreB HspA HspB Cag Ab GroES homologue and UreB VacA HP-NAP VacA rUreB HP-MPI PIdA CheA, CheY1, CheY2 Urease

Functional Role 8 subunit of the urease operon, important for Hp survival in the acid environment of the stomach Heat shock protein A Heat shock protein B Vacuolating cytotoxin-surface exposed antigen Heat shock protein and B subunit of urease Vacuolating cytotoxin Neutrophil activation and adhesion to the endothelium Vacuolating cytotoxin Recombinant urease B subunit lacking enzymatic activity Component of the inner membrane of Hp Degradation of mucosal phospholipids Motility, chemotaxis Neutralization of acidic environment

Host organism

Immune responses Systemic IgG Systemic IgG Systemic IgG Inflamatory cell inflammation of lamina propria, intraepithelial granulocytes IgG1, Th2 involvement Neutralizing antisera Neutralization of neotrophil adherence IgA, IgG2a Proliferative response of splenic CD4+ cells, IL-4 secretion, anti-urease IgA IL-I, TNF-, IL-8, macrophage inflammatory protein I Anti-Hp serum Anti-Hp antibody responses Serum IgG (IgG1, IgG2a depending on the adjuvant), salivary IgA

Human Human Human Mouse Mouse Rabbit Rabbit Mouse Mouse Human Mouse Mouse Mouse

Antigen delivery systems and route of immunization Antigen delivery systems can influence the immune response qualitatively as well as quantitatively. Thus, the way antigen (whether it be DNA or protein) is delivered to the immune system can be crucial for the success of a prototype vaccine. In the case of Hp, antigen delivery can be critically important as it might be necessary to stimulate substantial levels of mucosal immunity possibly with a Th 2 bias in the absence of side effects. Several approaches have been investigated, although most have focused on bacterial systems or toxins. In addition, the route of antigen administration might profoundly affect the success of vaccine. Rationally attenuated Salmonella strains have been used in several studies for the delivery of antigens from various pathogens, including Hp, to target tissue. The urease subunits A and B of Hp have been cloned in the Salmonella typhimurium SL3261 aro A mutant strain and delivered orally in mice. In ten independent experiments the investigators observed a 100% protection against Hp. Other vaccination studies have used bacterial delivered toxin as adjuvants. Oral immunization with recombinant Hp urease combined with cholera toxin (CT) was found to cross-protect against Helicobacter felis infection in mice. In a similar study with nonhuman primates, heat-labile toxin of Escherichia coli (LT) was used as an adjuvant. This antigen/adjuvant combination proved less immunogenic in primates than in mice, as salivary urease-specific IgA responses were weaker. However, a significant reduction in colonization and gastric inflammation was observed in the vaccinated animals. In a clinical trial, Michetti and colleagues studies the immunogenicity of recombinant enzymatically inactive, urease given orally with LT in Hp-infected asymptomatic humans. The vaccinated individuals showed tolerance to the substances and the amount of Hp in their gastric mucosa was reduced, but diarrhea was noted in 66% of the 24 volunteers.

CT has proven to be effective in many animal models, but as toxicity and allegenicity are mucho higher in humans. LT on the other hand is less toxic but causes diarrhea. Although vigorous attempts are being made to reduce the side effects caused by such toxin-based adjuvants using protein-engineering techniques, their general applicability to human vaccines remains in question. Few investigation have been made using conventional adjuvants such as alum. Although such reagents are not generally thought to be strong stimulation of mucosal immunity, their ability in the case of Hp vaccines remains to be determined. However, in one recent study, oral delivery of an Hp lysate was achieved using nanoparticles of the organic polymer poly (D,L-lactide-coglycolide). This combination triggered anti-Hp IgA, IgG1, IgG2b and Th2 responses in mice without producing side effects. Any antigen-adjuvants delivery method that induces local muosal immunity is an attractive concept for Hp vaccination because the bacterium inhabits the mucosal lining of the stomach, and is therefore easily exposed to the lymphoid organs and antigen presenting cells ops the mucosal immune system. This area of research warrants vigorous experimentation. DNA vaccination and the promise of the post-genomic era All Hp vaccine development studies published to date have been performed with protein antigens. However, nucleic acid (DNA) vaccination is a highly attractive alternative strategy, especially when combined with functional genomic studies. Indeed, DNA vaccines can offer considerable technical advantages over conventional protein immunization and are considered to be easier and safer for neonates. This characteristic might prove a great advantage for large scale, prophylactic Hp eradication because the pathogen is usually acquired in childhood. Thus, when and prophylactic vaccine against Hp becomes generally available, it should be administered during early childhood, particularly in highly affected countries such as China or Thailand. On the other hand, in countries less exposed to Hp infection, therapeutic vaccination infected individuals against specific virulent strains such as those + that are CagA might be more beneficial since it has been suggested that eliminating all Hp strains from the

population could prove harmful. Perhaps the only cautionary note that should be sounded regarding DNA vaccination is that it tends to drive Th1-mediated responses. As discussed earlier, these may not be safer and more effective. DNA-based vaccines can be delivered in several ways to induce enhanced immune responses, and the vaccine constructs can be engineered to trigger the desirable Th2-dominant response and this objective is one of the main aims of our current investigation. Intradermal administration by means of a gene gun, a device that employs compressed helium to propel DNA coated gold particles (biolistics) into the epidermis. Genegun immunization is a particularly effective technique that requires 100-1000-fold less DNA than and intramuscular injection due to the immunocompetence of the skin. Biolistic vaccination directly transfects dendritic cells and induces cytotoxic cells and long-lived memory responses. Other delivery techniques include co-injection of the DNA with immunostimulatory (IS) sequences of a cytosine preceding a guanosine (CpG) pattern, the use of cationic lipids and microencapsulation. Hp strain 26695 was the first enteropathogen to be fully sequenced and, recently, the sequence of a second strain J99 has been reported. Whole genome sequences from Hp will provide unprecedented opportunities for vaccine desing as the complete inventory of genes encoding every virulence factor and potential immunogen will be available for selection. DNA itself is an attractive proposition for immunization strategies as it is stable and easy to produce. One approach to identifying candidates for DNA vaccines is to immunize animals with pools of test DNA fragments and then re-examine the positive pools to identify the DNA molecule that elicits the most potent immune response. This method-expression library screening or genomic vaccination- has been tested for the mouse pathogen Mycoplasma pulmonis and, through the availability of whole genome sequences, offers a systematic unbiased approach to the discovery of vaccine candidates. Genome sequences can be used to generate attenuated microbial pathogens, which are vaccine candidates in their own right and can also be used as vectors for vaccine delivery. Attenuation can be approached at the genome level by identifying and deleting genes or sets of genes required for virulence, to produce optimally attenuated, safe and inexpensive vaccines. The combination of 2D-gel electrophoresis and immunoblot analysis of the whole organism, or a subset such as the cells envelope, should identify all immunodominant proteins. Concurrent with the availability of whole-genome sequences is the availability of post-genomic approaches such as bioinformatics, proteome analysis, hybridization technology, mutagenesis and protein chemistry. These will allow a multi-dimensional view of what makes the organism function, and a comprehensive understanding of the complex and dynamic interaction of the organism with the human host.

Concluding remarks The increasing power of genomics and bioinformatics leads to a continuous revelation of new antigenic targets that can be used in vaccine studies. The knowledge of the mechanisms by which the immune response protects from and / or eliminates Hp is crucial for the production of vaccine candidates and the design of adjuvants. Here, we have suggested that immunopotentiated Hp vaccination at the genomic level is an alternative immunization technique, which might prove to be of great efficiency against this problematic pathogen.

Helicobacter pylori estrategias de vacuna desencadenar reacciones instintivas.

Helicobacter pylori (Hp) es un microaerfilos, espiral, bacilo gram-negativo aislado por primera vez en humanos gstrica antral epitelio en 1982. Ahora es reconocido como un patgeno gstrico humano especfico, que coloniza el estmago de al menos la mitad de la poblacin mundial. HP sobrevive en gran medida dentro de la capa mucosa gstrica sin asociar a las clulas husped. La mayora de los individuos infectados son asintomticos. Sin embargo, para un nmero significativo, las infecciones se asocia con el desarrollo de las lceras duodenales y gstricas, adenocarcinoma gstrico, tejido linfoide asociado a mucosas (MALT) y linfoma gstrico primario no-Hodgkin. Bien definidos y validados combinaciones de drogas triples o cudruples, han demostrado ser curativo en muchos casos, pero son bastante complicados, costosos y no siempre eficaces ya que las cepas de Hp se estn volviendo resistentes a los antibiticos. La terapia de erradicacin en pacientes asintomticos o en aquellos con dispepsia indefinido ha llevado a la resistencia de otras bacterias patgenas presentes en el tracto gastronintestinal. El tratamiento antimicrobiano contra Hp incluye compuestos de bismuto, cido frmacos inhibidores y los inhibidores de la bomba de protones, cuyas combinaciones pueden ser txicos para el husped. Adems, estudios recientes han sugerido que los pacientes que son tratados con xito por Hp tienen un mayor riesgo de desarrollar la enfermedad por reflujo gastroesofgico (ERGE) y la mucosa de Barrett, que puede progresar a adenocarcinoma de esfago. El desarrollo de estrategias de intervencin adecuadas a travs de la vacunacin puede reducir la morbilidad y la mortalidad debido a las dos principales enfermedades gastroduodenales: lcera pptica y cncer gstrico. Los seres humanos parecen ser el anfitrin natural de la Hp y el organismo se ha adaptado exquisitamente al nicho ecolgico del estmago. Colonizacin CV, la supervivencia y la transmisin se obtienen por la produccin de productos especficos de genes de virulencia como la ureasa, adherencias, protenas quimiotcticas, vacuolizante citotoxinas CagA y VacA, protenas de choque trmico y fosfolipasas. Algunos de estos productos estn siendo investigados como candidatos vacunales y se discuten en mayor detalle ms adelante.
Viabilidad de una vacuna contra el Hp y las caractersticas ideales.

Sin embargo, las opiniones relativas a la balanza Th1/Th2 son controvertidos y, probablemente, una mezcla de Th1 y Th2 es crucial para la proteccin conferida por la vacunacin, pero con cada respuesta que ocurren en una etapa especfica de la infeccin, es decir, como una respuesta Th1 inicial de la clula Th2 con convertirse en dominante a medida. El ideal de la vacuna contra Hp debe incluir un buen estado de conservacin, antgeno inmunognico, Hp(s) que sern "procesados principalmente por la va de MHC II. Se debe dar lugar a una respuesta inmune en el tracto digestivo superior, que es probablemente sesgada hacia un tipo Th2, y es capaz de prevenir la colonizacin inicial de la mucosa gstrica, sin ningn efecto perjudicial para el husped. Tambin se debe estimular la memoria inmunolgica y, probablemente, debe incluir un adyuvante. Para el diseo de una vacuna ptima, los nuevos mtodos estn siendo utilizados como las inclusiones de animales transgnicos para evaluar los mecanismos de proteccin, anlisis de la biologa estructural para determinar la conformacin de los antgenos potenciales, y la genmica funcional a los productos de genes microbianos pantalla como candidatos vacunales. Seleccin de los objetivos antignicos La seleccin de objetivos antignica es crtica en el diseo de una vacuna contra el Hp. Hasta la fecha, esta zona es algo poco investigado, con la mayora de los estudios centrados en la enzima ureasa. Otros determinantes de virulencia putativos que podran llegar a ser candidatas a vacunas en futuros estudios incluyen la citotoxina VacA, CagA el antgeno inmunodominante y el PIDA fosfolipasa (Tabla 1). Aunque algunos de estos antgenos se han utilizado en estudios de vacunacin con resultados prometedores, la mayora de los estudios no se han traducido en 100% de desaparicin de Hp de la mucosa gstrica y prevenir la infeccin o reinfeccin en funcin de las protenas antignicas seleccionados y sus sistemas vectores. La ureasa es esencial para la virulencia y la colonizacin de la mucosa gstrica. Se hidroliza la urea en dixido de carbono y amonaco, y se cree que es importante en la neutralizacin del microambiente inmediato de Hp en el estmago. Se puede acceder a los anticuerpos de inmunoglobulina A (IgA), que neutralizan la actividad enzimtica mediante el reconocimiento de un eptopo conformacional que involucra a las dos subunidades de ureasa urea (265 kD) y UreB (61 kDa) en una relacin estequiomtrica 1:1. Humanos clulas gstricas epiteliales, en particular, son estimulados por Hp ureasa para producir citocinas proinflamatorias, en particular, interleucina 6 (IL-6) y factor de necrosis tumoral (TNF-), que se caracteriza por la inflamacin del tejido y dao de la mucosa.
El potencial antignico de la ureasa ha sido claramente demostrado en estudios en animales y estudios prototipo de la vacuna en ratones y monos han demostrado ser prometedores. Sin embargo, es probable que Hp ureasa o de sus subunidades individuales en combinacin con otros antgenos de Hp definido puede ser una vacuna ms eficaz contra la infeccin por esta bacteria. En una serie de estudios, los ratones inmunizados con las dos protenas de choque trmico A (HSPA) y UreB o la Groes calor ingeniera de protenas de choque y UreB, as como citotoxina vacuolizante (VacA) y de la ureasa resultaron ser altamente protegidos de la infeccin.

La viabilidad de producir una vacuna eficaz contra el Hp ha sido cuestionada debido a que la inmunidad natural parece ser insuficiente para limpiar las infecciones. La vacunacin teraputica contra el Hp intragstrico en ratones erradicar una infeccin crnica de otra manera y confiere proteccin contra la reinfeccin. Un tema clave es el tipo de respuesta inmune necesaria para controlar la infeccin por Hp. Resultado de los estudios de vacunas teraputicas en modelos murinos muestran que un cambio de un tipo de ayuda ya existentes T 1 (Th1) a un tipo T helper 2 (Th2) la respuesta es que pueden exigirse para la prevencin y erradicacin de la infeccin por Hp. Esta situacin podra ser tambin el caso de los ejrcitos humanos, porque una respuesta Th1 en las personas infectadas no slo es ineficaz para drenar la infeccin por Hp, pero tambin causa dao a los tejidos y la induccin de la gastritis crnica activa. De hecho, se ha propuesto que la capacidad de la bacteria para inducir una respuesta Th1 es parte de un mecanismo de defensa.

Hp protena antignica UreB

HspA HspB Cag Ab GroES homlogo y UreB VacA HP-NAP VacA rUreB HP-MPI PIdA CheA, CheY1, CheY2 Ureasa

Papel Funcional 8 subunidades del opern ureasa, importante para la supervivencia de Hp en el ambiente cido del estmago Protena de choque trmico A Protena de choque trmico B Citotoxina vacuolizante antgeno de superficie expuesta Protenas de choque trmico y la subunidad B de la ureasa Citotoxina vacuolizante La activacin de neutrfilos y la adhesin al endotelio citotoxina vacuolizante Subunidad B recombinante de ureasa que carecen de actividad enzimtica Componente de la membrana interna de HP La degradacin de los fosfolpidos de la mucosa Motilidad, quimiotaxis La neutralizacin de ambiente cido

Hospedero Humano

Respuesta Inmune Sistemicos IgG

Humano Humano Raton Raton Conejo Conejo Raton Raton Humano Raton Raton Raton

Sistemicos IgG Sistemicos IgG La inflamacin de clulas inflamatorias de la lmina propia, granulocitos intraepitelial La participacin de IgG1, Th2 antisueros neutralizantes La neutralizacin de la adhesin de neutrofilos IgA, IgG2a Respuesta proliferativa de las clulas CD4 + en las clulas del bazo, la secrecin de IL-4, anti-ureasa IgA IL-I, TNF-, IL-8, protena inflamatoria de macrfagos I Anti-Hp en suero Anti-Hp respuestas de anticuerpos Suero IgG (IgG1, IgG2a en funcin de los adyuvantes), IgA en saliva

Sistemas de suministro de antgeno y la va de inmunizacin Sistemas de suministro de antgeno pueden influir en la respuesta inmune tanto cualitativa como cuantitativamente. Por lo tanto, el antgeno de forma (ya sea ADN o de protenas) se entrega con el sistema inmunolgico puede ser crucial para el xito de un prototipo de vacuna. En el caso de HP, entrega antgeno puede ser muy importante, ya que podra ser necesario para estimular importantes niveles de inmunidad de la mucosa, posiblemente, con un sesgo Th2, en ausencia de efectos secundarios. Varios mtodos han sido investigados, aunque la mayora se han centrado en los sistemas bacterianos o toxinas. Adems, la va de administracin antgeno se puede afectar el xito de la vacuna. Las cepas de Salmonella atenuadas racionalmente se han utilizado en varios estudios para la entrega de los antgenos de diversos patgenos, incluyendo HP, para dirigirse a los tejidos. Las subunidades de ureasa A y B de HP han sido clonados en la Salmonella typhimurium SL3261 aro una cepa mutante y administradas por va oral en ratones. En diez experimentos independientes los investigadores observaron una proteccin 100% contra el Hp. Otros estudios han utilizado la vacunacin toxina bacteriana entregado como adyuvantes. La inmunizacin oral con recombinante ureasa Hp junto con la toxina del clera (CT) se encontr proteccin cruzada contra la infeccin por Helicobacter felis en ratones. En un estudio similar con primates no humanos, la toxina lbil al calor de Escherichia coli (LT) fue utilizado como un adyuvante. Esta combinacin de antgenos / adyuvante result ser menos inmunognicas en los primates que en los ratones, como la saliva ureasa respuestas especficas IgA son ms dbiles. Sin embargo, una reduccin significativa de la colonizacin y la inflamacin gstrica se observ en los animales vacunados. En un ensayo clnico, Michetti y los estudios de sus colegas de la inmunogenicidad de recombinantes enzimticamente inactiva, la ureasa por va oral con LT en los humanos infectados por Hp asintomticos. Los individuos vacunados mostraron tolerancia a las sustancias y la cantidad de Hp en la mucosa gstrica se redujo, pero la diarrea se observ en el 66% de los 24 voluntarios.

TC ha demostrado ser eficaz en muchos modelos animales, pero como la toxicidad y son allegenicity Mucho mayor en los seres humanos. LT por otro lado es menos txico, pero causa diarrea. A pesar de los intentos vigorosos se estn realizando para reducir los efectos secundarios causados por la toxina de adyuvantes basados en la ingeniera de protenas como el uso de tcnicas, su aplicacin general a las vacunas humanas sigue siendo en cuestin. Investigacin se han hecho pocos utilizacin de adyuvantes convencionales tales como el alumbre. A pesar de estos reactivos no son por lo general cree que la fuerte estimulacin de la inmunidad de la mucosa, su capacidad en el caso de las vacunas Hp queda por determinar. Sin embargo, en un estudio reciente, la administracin oral de un lisado de Hp se logr utilizando nanopartculas de polmeros orgnicos poli (D, L-lcticocogliclido). Esta combinacin provoc anti-Hp IgA, IgG1, IgG2b y las respuestas Th2 en ratones, sin producir efectos secundarios. Cualquier mtodo de entrega de antgenos adyuvantes que induce inmunidad en la mucosa local es un concepto atractivo para la vacunacin contra la bacteria Hp, porque habita en la mucosa del estmago, y por lo tanto fcilmente expuestos a los rganos linfoides y las clulas presentadoras de antgeno operaciones del sistema inmunolgico de la mucosa. Esta rea de investigacin de las rdenes de experimentacin vigorosa. ADN de vacunacin y la promesa de la era post-genmica Todos los estudios de la vacuna Hp desarrollo publicados hasta la fecha se han realizado con los antgenos proteicos. Sin embargo, el cido nucleico (ADN) que la vacunacin es una estrategia alternativa muy atractiva, especialmente cuando se combina con los estudios de genmica funcional. De hecho, las vacunas de ADN puede ofrecer considerables ventajas tcnicas con respecto a la inmunizacin convencionales de protena y se considera que ser ms fcil y ms seguro para los recin nacidos. Esta caracterstica podra resultar una gran ventaja para los de gran escala, la erradicacin de Hp profilctico debido a que el patgeno se adquiere usualmente durante la niez. Por lo tanto, cundo y vacuna profilctica contra el HP es por lo general, sta debe ser administrada durante la primera infancia, especialmente en los pases muy afectados como China o Tailandia.

Por otro lado, en los pases menos expuestos a la infeccin por Hp, los individuos infectados la vacunacin teraputica contra determinados cepas virulentas como las que se CagA + podra ser ms beneficioso, ya que se ha sugerido que la eliminacin de todas las cepas de Hp de la poblacin puede resultar perjudicial. Quizs la nica nota de cautela que debe sonar en relacin con la vacuna de ADN es que tiende a la unidad de las respuestas mediadas por clulas Th1. Como se seal anteriormente, estos no pueden ser ms seguros y ms eficaces. Las vacunas basadas en ADN pueden ser entregados en varias maneras para inducir una mayor respuesta inmune, y las construcciones de la vacuna pueden ser diseados para activar la conveniente respuesta Th2-dominante, y este objetivo es uno de los principales objetivos de nuestra investigacin actual. La administracin intradrmica por medio de una pistola de genes, un dispositivo que emplea compresin de helio para impulsar partculas de ADN recubierto de oro (biolstica) en la epidermis. Gene-gun inmunizacin es una tcnica especialmente efectiva que requiere de ADN 100-1000-veces menor y la inyeccin intramuscular, debido a la inmunocompetencia de la piel. Vacunacin biolstica directamente transfecta clulas dendrticas y los induce a las clulas citotxicas y de larga duracin respuestas de memoria. Otras tcnicas incluyen la entrega de co-inyeccin del ADN con inmunoestimulante (IS), las secuencias de una citosina que precede a una guanosina (CpG) patrn, el uso de lpidos catinicos y la microencapsulacin. Hp cepa 26695 fue el enteropatgeno primer secuenciado en su totalidad y, recientemente, la secuencia de una segunda cepa J99 ha sido reportado. Secuencias completas del genoma de HP proporcionar oportunidades sin precedentes para la vacuna de diseo como el inventario completo de todos los genes que codifican factores de virulencia y potencial inmungeno estar disponible para la seleccin. ADN en s es una propuesta atractiva para las estrategias de inmunizacin, ya que es estable y fcil de producir. Una forma de identificar candidatos para las vacunas de ADN es inmunizar a los animales con las piscinas de fragmentos de ADN de prueba y luego volver a examinar las piscinas positiva para identificar la molcula de ADN que provoca la respuesta inmune ms potente. Este mtodo de deteccin de la biblioteca genmica de expresin o la vacunacin ha sido probado para el ratn Mycoplasma pulmonis agente patgeno y, a travs de la disponibilidad de la secuencia del genoma completo, ofrece un enfoque imparcial sistemtico para el descubrimiento de las vacunas candidatas. Secuencias del genoma puede usarse para generar microorganismos patgenos atenuados, que son candidatos a la vacuna en s mismos y tambin se puede utilizar como vectores para la administracin de la vacuna. La atenuacin puede ser abordada a nivel del genoma mediante la identificacin y eliminacin de genes o conjuntos de genes necesarios para la virulencia, para producir de manera ptima atenuados, vacunas seguras y de bajo costo. La combinacin de 2D-gel de electroforesis y el anlisis de inmunoblot de todo el organismo, o un subconjunto, como el sobre de las clulas, deben identificar todas las protenas inmunodominantes. Al mismo tiempo que la disponibilidad de las secuencias del genoma completo es la disponibilidad de post-genmica enfoques tales como la bioinformtica, anlisis del proteoma, la tecnologa de hibridacin, mutagnesis y la qumica de protenas. Estos permitirn una visin multidimensional de lo que hace la funcin de organismo, y una cabal comprensin de

la compleja y dinmica interaccin del organismo con el husped humano. Observaciones finales El creciente poder de la genmica y la bioinformtica, conduce a una continua revelacin de nuevas dianas antignicas que pueden ser utilizados en estudios de vacunas. El conocimiento de los mecanismos por los cuales la respuesta inmune protege y / o elimina Hp es crucial para la produccin de vacunas y el diseo de los adyuvantes. En este sentido, han sugerido que la vacunacin Hp immunopotentiated a nivel genmico es una tcnica de vacunacin alternativo, que podra resultar de gran eficacia contra este patgeno problemtico