UNIVERSIDAD CENTROAMERICANA UCA, Managua

DEPARTAMENTO DE TECNOLOGIA Y AMBIENTE

DIPLOMADO: ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD MICROBIOLOGICA DE LOS ALIMENTOS REPORTE DE LABORATORIO Prctica N I: DIAGNOSTICO DE: COLIFORMES TOTALES COLIFORMES FECALES Y E! c"#i Tut"r: Lic! Eric$ San%"&a#! R'a#i(a%" )"r: Ing! *"+',%a Cri-tina Van'ga- Ca-ti##"! F'c.a R'a#i(aci/n: Entr'ga R')"rt': 12 0uni" %' 2009 22 1uni" %' 2009

C.inan%'ga 0uni" 2334

OB0ETIVO GENERAL R'a#i(ar a tra&5- %' #a 6't"%"#"g7a tra%ici"na# 8NMP9 '# Diagn/-tic" %' C"#i:"r6'- T"ta#'- C"#i:"r6'- F'ca#'- , E! c"#i

OB0ETIVO ESPECIFICO A)#icar #"- c"n"ci6i'nt"- t'/ric"- a%;uiri%"- )ara '# Diagn/-tic" C"#i:"r6'- T"ta#'- C"#i:"r6'- F'ca#'- , E! c"#i

An#i-i- %' C"#i:"r6'- T"ta#'- :'ca#'- , E!c"#i:

El trmino Coliformes aparece en 1893 por Blachstein, el se refiere a los bacilos que se asemejan a E.coli y producen colonias similares. El grupo Coliformes es definido en base a las reacciones bioqumicas, no ay ninguna relaci!n gentica, el termino Coliformes no tiene ninguna "alide# ta$on!mica.

%os Coliformes son aerobios y anaerobios facultati"os, gram negati"os, no formadores de esporas, fermentan la lactosa, forman acido y gas a 3& 'C, el grupo Coliformes podra contener organismos que no est(n incluidos en la familia enterobacterias, ej. Aeromonas )unque coliformes eran f(ciles de detectar, su asociaci!n con contaminaci!n fecal es cuestionable debido a que algunos coliformes se encuentran naturalmente en muestras ambientales. Esto lle"! a la introducci!n de los coliformes fecales como indicador de contaminaci!n. Coliformes fecales, se define sobre la base de las obras de Eij*man, es un subconjunto del de coliformes totales que crece y fermenta la lactosa a ele"ada temperatura de incubaci!n, por lo tanto, tambin denominado coliformes termo tolerante. El grupo coliforme fecal consiste principalmente de la E. coli, pero algunos otros, como Klebsiella, Enterobacter, y Citrobacter que tambin fermentan la lactosa a ++.&'C, se consideran como coliformes fecales. %a inclusi!n de ,lebsiella spp en la definici!n de coliformes fecales a disminuido la correlaci!n de este grupo con la contaminaci!n fecal. Como resultado de ello, E. coli a reaparecido como un indicador, en parte facilitado por la introducci!n de nue"os mtodos que pueden identificar r(pidamente la E. coli )ctualmente, los 3 grupos se utili#an como indicadores, pero en diferentes aplicaciones. %a detecci!n de coliformes se usa como un indicador de calidad sanitaria del agua o como un indicador general de la condici!n sanitaria en el entorno de procesamiento de alimentos. %os Coliformes fecales, siendo el indicador est(ndar de elecci!n para la recolecci!n de moluscos, crust(ceos, aguas- y E. coli se utili#a para indicar la contaminaci!n fecal reciente. Casi todos los mtodos utili#ados para la detecci!n de E. coli, coliformes totales y coliformes fecales son los mtodos de enumeraci!n Materiales: .ubos Campanas Drham Tapones plsticos Gradillas Marcadores Pipetas serolgicas estriles de 1.0 ml Pipetas serolgicas estriles de 10.0 ml Asas de 10 l !ecipientes de lic"adora estriles Mechero C"chillos estriles

Mesa de diseccin desin#ectada. Pin$as estriles. Ti%eras estriles. &spt"las estriles. Pro'etas de 100 ( )00ml estriles. Pro'eta con sol"cin desin#ectante. Ca'ina de resiem'ra E;ui)"-: *a+o mar,a -nc"'adora a .) /C A"tocla0e *alan$a 1orte2 3ic"adora Pipet aid !e#rigerador R'acti&"-: Peptona Caldo Laurilsulfato4 Caldo E.c ms MUG Caldo Brilla

M5t"%":
1. /esar &0g de cualquier alimento 1bien picado2. 3. )4adir +&0ml de soluci!n bufferada en una licuadora, y licuar durante 3 min. 3. Esto resulta en la diluci!n 1051, a partir de esta diluci!n proceder a reali#ar m(s diluciones 1053, 1053. en agua peptonada estril al 0.16 +. 7tili#ar pipetas estriles, y pipetas que no dejen el 106 de "olumen en la pipeta, por ejemplo por ejemplo no utilice una pipeta de 10ml para pipetear 1ml, &. .odas las diluciones agtelas de manera "igorosa unos 10 segundos en un "orte$. 8. 9o puede transcurrir m(s de 1& min. para reali#ar las diluciones y la siembra

:. 8. 9. 10. 11. 13. 13. 1+. 1&. 18. 1:. 18.

;e cada una de stas diluciones transferir 1ml con una pipeta serol!gica estril a 3 tubos de caldo %aurilsulfato 1total 9 tubos %<.=muestra2. )gitar bien cada uno de los tubos inoculados y taparlos >ncubar a 3&'C ?1 'C por 3+ oras. <i ay ausencia de turbide# y de gas a las 3+ , dejar incubando por 3+ m(s a la misma temperatura. Considerar la lectura como negati"a si a las +8 , no se produce ni turbide# ni gas. Considerar la lectura como presuntamente positi"a si ay presencia de gas y de turbide# en el caldo %aurilsulfato. ;e cada tubo considerado positi"o se trasfiere una asa, a un tubo de caldo @rilla, caldo EC A B7C. >ncubar el caldo @rilla a 3& 'C y el EC A B7C en un ba4o mara a +&.&'C por 3+ . Considerar la lectura positi"a si ay presencia de gas y de turbide# en el caldo @rilla, para coliformes totales Considerar la lectura positi"a si ay presencia de gas y de turbide# en el caldo EC A B7C, para coliformes fecales Considerar la lectura positi"a si ay presencia de fluorescencia, con o sin gas en el caldo EC A B7C, para E.coli Contar el nDmero de tubos positi"os y ese nDmero buscarlo en la tabla de 3 tubos de diluciones 10.10, 0.01, 0.001g2

E<PRESI=N DE RESULTADOS Resultados NMP con el 95% de l mite de confidencialidad !ara "arias com#inaciones de resultados !ositi"os $ ne%ati"os cuando se utili&an ' en concentraciones de 0(1, 0(01, $ 0(001% inoculados

0.10g 0 0 0 0 0

)u#os !ositi"os 0.01g 0.001g 0 0 0 1 1 0 1 1 3 0

NMP*% E3.0 3.0 3.0 8.1 8.3

0.10g 3 3 3 3 3

)u#os !ositi"os 0.01g 0.001g 3 0 3 1 3 3 3 0 3 1

NMP*% 31 38 3& 39 38

0 1 1 1 1 1 1 1 1 3 3 3 3 3 3

3 0 0 0 1 1 3 3 3 0 0 0 1 1 1

0 0 1 3 0 1 0 1 0 0 1 3 0 1 3

9.+ 3.8 :.3 11 +(, 11 11 1& 18 9.3 1+ 30 1& 30 3:

3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3

0 0 0 1 1 1 1 3 3 3 3 3 3 3 3

0 1 3 0 1 3 3 0 1 3 3 0 1 3 3

33 38 8+ +3 :& 130 180 93 1&0 310 390 3+0 +80 1100 F1100

Guente- @)B del G;) 8"a Edition.

R-./0)123. En la muestra anali#ada se obser"o a las 3+ oras turbide# y presencia de gas en tres de los tubos de caldo %auril <ulfato, se inoculo en caldo Brila 1>ncuba a 3:HC2 y caldo -C mas M/4 1>ncubar++.& HC2. ) las 3+ oras solamente dos de los tubos de caldo Brila dieron presencia de turbide# y gas, procediendo a la lectura en la tabla siendo el resultado para coliformes totales el siguienteI 0(10% 1 0(01% 1 0(001% 0 NMP*% +(,

En los tubos inoculados de EC con B7C no ubo presencia de turbide#, ni gas, lo que da como resultado ne%ati"o !ara coliformes fecales