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UNIVERSIDAD CENTROAMERICANA UCA, Managua

DEPARTAMENTO DE TECNOLOGIA Y AMBIENTE

DIPLOMADO: ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD MICROBIOLOGICA DE LOS ALIMENTOS REPORTE DE LABORATORIO Prctica N I: DIAGNOSTICO DE AEROBIOS MESOFILOS Tut r: Lic! Eric" San# $a%! R&a%i'a# ( r: Ing! ) *&+#a Cri,tina Van&ga, Ca,ti%% ! #& 2//3 #& 2//3

F&c-a R&a%i'aci.n: /0 1uni Entr&ga R&( rt&: 42 5uni

C-inan#&ga6 1uni

2//3

OB1ETIVO GENERAL

R&a%i'ar &% Diagn.,tic #& Bact&ria, A&r *i , M&,.7i% , uti%i'an# %a 8&t # % g9a tra#ici na% #& i#&nti7icaci.n + r&cu&nt t ta% #& *act&ria, a&r *ia, M&,.7i% , a :/C! OB1ETIVOS ESPECIFICOS A(%icar % , c n ci8i&nt , t&.ric , a#;uiri# , (ara &% Diagn.,tic #& A&r *i , M&,.7i% ,! C t&5ar % , r&,u%ta# , *t&ni# , c n % , $a% r&, (&r8iti# , &n NTON ;u& ,& &,t uti%i'an# &n &% Pa9, (ara &$a%uar ,i &,tn #&ntr #& % , rang , ac&(ta# , (ara c n,u8 -u8an ! INTRODUCCION L , an%i,i, 8icr *i %.gic , , n r&a%i'a# , a% a%i8&nt 7r&,c (r c&,a# (ara $a% rar %a ca%i#a# c n ;u& &,t& (r #uct -a ,i# 8ani(u%a# ant&, #& %%&gar a% c n,u8i# r6 + a,9 a,&gurar,& ;u& &, un (r #uct a(t (ara &% c n,u8 -u8an !

MARCO TEORICO M&,.7i% ,:


En este grupo se incluyen todas las bacterias, mohos y levaduras capaces de desarrollarse a 30 C en las condiciones establecidas. En este recuento se estima la microflora total sin especificar tipos de microorganismos. Refleja la calidad sanitaria de un alimento, las condiciones de manipulacin, las condiciones higi nicas de la materia prima.

!n r&cu&nt *a5 #& a&r *i , 8&,.7i% , no implica o no asegura la ausencia de patgenos o sus to"inas, de la misma manera un recuento elevado no significa presencia de flora patgena. !n r&cu&nt &%&$a# #& a&r *i , 8&,.7i% , puede significar E"cesiva contaminacin de la materia prima #eficiente manipulacin durante el proceso de elaboracin $a posibilidad de %ue e"istan patgenos, pues estos son mesfilos $a inmediata alteracin del producto El recuento de mesfilos nos indica las condiciones de salubridad de algunos alimentos

M<t # , uti%i'a# , (ara R&cu&nt #& A&r *i , M&,.7i% , M<t # #& P%aca F%ui#a: S& toma 1 ml de la muestra diluida, se coloca en

un plato petri, y se le adiciona el medio de cultivo preparado con anticipacin &no m's de 2 horas antes de utili(arlo) a una temperatura no mayor de *+ ,C, se homogeni(a moviendo el plato suavemente en c-rculos, se deja enfriar, hasta %ue la placa solidifi%ue. .ncubando a 30 ,C por 24 horas /e utili(a medios de cultivo como el 0gar 1utritivo, el 02C o un e%uivalente, sea el nombre seg3n la casa comercial %ue lo distribuya. M<t # #& (%aca #i7u,a: /e preparan los platos con anterioridad dej'ndolos a una temperatura d 38, C para %ue se deshidraten un poco y as- puedan absorber con mayor facilidad la muestra inoculada %ue en este caso es de 0.1 ml de muestra diluida. .ncubando a 30 ,C por 24 horas. E;ui( ,6 Mat&ria%&, + R&acti$ ,: 4. Estufa. 5. 0utoclave. 3. 6alan(as. *. Contador de colonias 7uebec. +. 6otellas de dilucin. 8. .ncubadora. 9. :orte". ;. 2latos petri. <. 2ipetas, 2ipetas aids. 40.Refrigerador 44.=ermmetros 45.>rea de trabajo. 43.?edios @ A02CB o un e%uivalente 4*.0sa espaciadora

PROCEDIIENTO En esta pr'ctica de laboratorio el m todo %ue utili(aremos es el de la placa difusa.


Pr&(araci.n #& %a, (%aca,: :ierta de 4+ml del medio deseado en los platos petri, deje solidificar el agar, haga un secado de la placa demo %ue pierde un 5 3g de agua de un d-a a otro. !tilice las placas preC secadas inmediatamente.

2ara preCsecar y utili(ar las placas el mismo d-a vierta 5+ml del medio en el plato petri y se%ue en un flujo laminar sin cubierta a temperatura ambiente &5* @ 58C) asi consigue una perdida de 5C3g de agua. Di%uci.n #& %a 8u&,tra: 1. 2esar 50g de alimento &Camarn) 2. 0Dadir 450ml de solucin bufferada en una licuadora, y licuar durante 5 min. 3. /iendo esta nuestra dilucin 10-1 a partir de esta dilucin proceder a reali(ar dos diluciones m's 10-2, 10-3, en nuestra caso, per se pueden reali(ar m's si el alimento lo amerita. 4. !tili(ar pipetas est riles, y pipetas %ue no dejen el 10% de volumen en la pipeta, por ejemplo por ejemplo no utilice una pipeta de 40ml para pipetear 1ml, 5. =odas las diluciones ag-telas de manera vigorosa unos 10 segundos en un vorte". 6. 1o puede transcurrir m's de 15 min. para reali(ar las diluciones y la siembra 9. Evite tomar espuma como muestra. 8. 2ipetear de 0.1-0.5ml de cada dilucin sobre los agares preparados. <. Con la varilla de vidrio o pl'stico est ril distribuya el inoculo sobre la superficie del medio, girando el disco con la mano o con una placa giratoria. 40.#eje %ue el inoculo sea absorbido por el medio antes de incubar. 11. .ncubar a 35 C por 48horas.

Int&r(r&taci.n #& R&,u%ta#


R&cu&nt (%aca #i7u,a! .nmediatamente despu s de la incubacin cuente todas las colonias de las placas seleccionadas. !tilice un contador de colonias 7uebec. /olo se consideraran las placas %ue muestren colonias entre 30 y 300 !EC. Cuente las placas donde hubo crecimiento aplicando la EormulaF 1 G C H I&4 J n4) K &0.4 J n5)L H &d) 1G n3mero de colonias. C G la suma de todas las colonias en los platos n 4G 13mero de platos contados en la primera dilucin. n 5G 13mero de platos contados en segunda dilucin. d G factor de dilucin de la primera cuenta RESULTADOS OBTENIDOS

En la muestra anali(ada se obtuvieron los siguientes resultadosF En los plato s de la dilucin 10-1 Plato N 1 - 10-1 4 40 4.0 x10

Plato N 2 - 10-1 En los plato s de la dilucin 10-2 Plato N 1 - 10-2 Plato N 2 - 10-2 En los plato s de la dilucin 10-3 Plato N 1 - 10-3 Plato N 2 - 10-3

90 9.0 x 10

1 1

100 1.0 x10-2 100 1.0 x 10-2

<1 1

< 1000 < 1.0 x10-3 1000 1.0 x10-3

/iguiendo el procedimiento establecido por la norma se toman los platos de las diluciones %ue cumplen con el criterio de aceptacin = 30 > 300 colonias. La, #i%uci n&, ;u& ,& t 8aran (ara a(%icar %a 7 r8u%a , n %a, # , (ri8&ra, 10-1 y 10-2 1 G C H I&4 " n4) K &0.4 " n5)L H &d) 1 G 40+90+100+100 (1 x 2) + (0.1 x 2) / 10-1 N ? 15 Ufc / g

ANALISIS DE RESULTADOS /eg3n los resultados obtenidos el recuento de aerobios mesfilos en los 50 g de camarn anali(ados es de 15 U7c @ g, encontr'ndose este valor dentro de los criterios establecidos por nuestros compradores e"tranjeros AB1.0 x 10-5), pero en nuestro 2a-s actualmente las normas %ue establecen estos criterios microbiolgicos no tienen un valor especifico para este tipo de alimentos,

solamente cuando se refiere a pescados, moluscos, e%uinodermos y crust'ceos enlatados siendo el l-mite m'"imo permitido de < 10 U7c @ g. CONCLUSION /e reali( un an'lisis de aerobios mesfilos a una muestra de camarn y seg3n los resultados obtenidos en el conteo de colonias este alimento es apto para el consumo humano, seg3n los criterios establecidos de normas internacionales.

BIBLIOGRAFIA R&g%a8&nt T<cnic C&ntr a8&rican C RTCA 67. 04. 50: 08 Alim n!os. "#i! #ios $ic#o%iol&gicos 'a#a la Inoc(i)a) ) los Alim n!os