CITOESQUELETO E MOTILIDADE CELULAR Funes: forma celular apropriada, estrutura fsica forte e dinmica, organizao estrutural interna.

Rearranjos contnuos permitem o controle das atividades celulares em resposta aos estmulos. O citoesqueleto composto por trs famlia de proteinas que atuam conjuntamente: Filamentos de actina (forma da superfcie celular e locomoo), filamentos intermedirios (fora mecnica, d rigidez), microtbulos (posio das organelas e transporte intracelular). Filamentos de actina e microtubulos so capazes de se arranjar e rearranjar rapidamente, montam e desmontam com facilidade. Microtubulos saem do interior da clula e se irradiam para fora. A sua dinmica de formao requer uma estrutura que esta na regio central da clula. Filamentos de actina esto mais espalhados pela clula e se concentram na regio mais apical da clula. Dinamica do citoesqueleto no ciclo celular: microtubulos (forma de estrela, origem no centro, formam estruturas de locomoo intracelular), actina (reveste a face interna, forma diversos tipos de projees), filamentos intermedirios (revestem a face interna do envelope nuclear, fortes cabos, formam apndices como pelos e unhas queratina formada a partir de filamentos intermedirios.) O fuso mittico nada mais do que um conjunto de microtublos que vai aderir aos cromossomos e vai puxar um para cada lado na hora da mitose. Quem faz o anel contrtil que vai estrangular o citoplasma na citocinese so os filamentos de actina. A estrutura de filamento intermedirio da sustentao para clula e para o tecido, pois o filamento intermedirio de uma pode interagir com o de outra clula. Os desmossos recebem ancoragem de filamentos intermedirios dos dois lados, das duas clulas vizinhas. Reorganizao rpida da rede de actina permite que ela altere a orientao e direo de seus movimentos em poucos segundos. O CITOESQUELETO PODE FORMAR UMA VARIEDADE DE ESTRUTURAS - FILAMENTOS DE ACTINA (5 a 9 nm) Alfa-helice de dois protofilamentos. O filamento formado por vrios monmeros de actina (protena) at formar um fiozinho. um polmero. Subunidades menores unidos por ligaes covalentes. Formao de microvilosidades, lamelipodios (protuberncia de uma extremidade da clula, projeo do citoplasma mais larga, uma aba), contrao muscular, e fibras de estresse dependem de filamentos de actina. Todos esses casos esto relacionados com a forma e a mobilidade da clula. - MICROTUBULOS (25nm) 13 (protofilamentos) Fiozinhos formando a parede de um canudinho. Para formar o microtubulo temos duas formas de tubulina (alfa e beta). Elas se unem aos pares formando um fiozinho longo, formando um protofilamento. A unio de 13 protofilamentos forma o cilindro que o microtubulo. Se organizam lateralmente. Eles formam feixes. Na

clula temos mais microtubulos do que cromossomos. Todos esses so formados a partir de um centrossomo. (na hora da diviso o centrossomo se duplica, vai uma para cada lado da clula e cada um vai emitir microtubulos para fazer as fibras do fuso de cada lado para puxar os cromossomos). Os microtublos esto envolvidos na interfase celular, no fuso mittico, e nas clulas ciliadas (na base de cada clio h organizao de microtubulo estrutura especializada) - FILAMENTOS INTERMEDIARIOS (10nm) Tem uma estrutura uma pouco diferente, nos outros a unidade que forma o filamento uma protena globular. J no filamento intermerdiario a protena que subunidade do filamento uma protena linear (longa). A quantidade de ligaes laterais que temos entre uma protena e outra no filamento muito maior, a rea de contato muito maior, isso a primeira caracterstica que d mais rigidez para os filamentos intermedirios. So vrios filamentos laterais que vo formar um filamento intermedirio. Estrutura semelhante a uma corda, que vai conferir resistncia a clula. uma rede densa, so eles que do sustentao para os nossos tecidos. Esto em grande quantidade em nossas clulas. MICROTUBULOS E FILAMENTOS DE ACTINA SUBUNIDADES PEQUENAS E GLOBULARES Reorganizao e flexibilidade: quando se tem um sinal, o polmero se desfaz e os monmeros se reorganizam. Isso acontece constantemente. O citoesqueleto mantido por interaes no-covalentes fracas. Proteinas acessrias que fazem a sinalizao que permitem que isso acontea com uma rapidez muito grande. O que permite que a clula responda rpido aos estmulos. OS FILAMENTOS SE FORMAM A PARTIR DE PROTOFILAMENTOS. Os protofilamentos so os fiozinhos e os filamentos so os fiozinhos ligados tanto na dirao horizontal quanto na vertical. NOS FILAMENTOS INTERMEDIARIOS OS CONTATOS LATERAIS PREDOMINAM. Para cada unio longitudinal temos vrias laterais. Contatos laterais fortes entra hlices alfa supertorcidas. Estruturas fortes. Resistem a tores e estiramentos. POLIMERIZAO DOS FILAMENTOS TEM UMA FASE DE NUCLEAO. No caso de actina e tubulina tem uma afinidade natural entre os monmeros. Na clula tem que ter uma concentrao mnima de monmeros para que eles tendam a formar polmeros. O tempo que demora para formao dos primeiros conjuntos de monmeros chamada de fase de nucleao, depois que eles j tem uma quantidade de filamentos mnimos a fase de crescimento rpido, a o filamento se elonga. Depois tem o estado de equilibro, onde a entrada de monmeros igual a sada de monmeros. Isso que rege a formao do polmero naturalmente, se nos tivssemos as protenas em soluo. Mas se tivermos uma soluo onde tivermos filamento pr-formados, no teremos a fase de nucleao, h acelerao do processo. Isso similar ao que acontece na clula, em nossas clulas h um mecanismo de controle da nucleao que j fornece a base para o filamento crescer. (o grfico no comea com um reta, j comea com um subida)

A VELOCIDADE DE POLIMERIZAO ASSIMETTRICA NOS DIFERENTES TERMINAIS Na extremidade (+) o crescimento e a dissociao ocorrem mais rapidamente. Quando o monmero entra no filamento ele sofre alterao na forma (sua ponta que era reta vira uma setinha biquinho para dentro). Isso o que rege qual das pontas do filamento cresce mais rpido. Pois os monmeros vo se encaixar melhor na ponta mais, ela favorece a entrada do que est solto, compatvel. Acontece entrada e sada nas duas pontas, mas na ponta mais entra com mais facilidade. FILAMENTOS INTERMEDIARIOS Esto associados com a funo de resistncia da clula, e depende da ligao lateral e do contato entre os monmeros da protena. Se eu no tiver filamento intermedirio e eu esticar o tecido, vai haver ruptura do tecido. A protena monmero do filamento linear. As proteinas se unem formando um dmero espiralado sobre ele mesmo (torcido), esse dmero se une a outro dmero igual a ele, so que em sentido contrario (um do N para o C terminal e o outro invertido. Se unem em antiparalelo) o que acaba com a polaridade do filamento, as pontas so iguais. O encaixe entre eles desigual, h desnvel no alinhamento o que d mais rigidez ainda na ligao, as cabeas ficam desalinhadas, estrutura mais firme. A unio de vrios tetrmeros forma um protofilamento, que retorcido formando uma estrutura semelhante a de uma corda. O que confere: fora, resistncia e flexibilidade. Existem vrios tipos de protenas que formam os filamentos intermedirios. Queratina filamento de clulas epiteliais Vimentina msculos? Neurofilamento filamento intermedirio em clulas nervosas Laminas nucleares formam estrutura proteica que da sustentao ao envelope nuclear MUTAES NA QUERATINA DAS CELULAS DA LAMINA BASAL CAUSAM EPIDERMLISE BULBOSA. Caracteriza pela formao de bolhas na pele. Consegue romper as clulas basais. (forma bolha entre epitlio e conjuntivo, pois o epitlio no tem sustentao e fora para aderir) PROTEINA PLECTINA UNE OS FILAMENTOS INTERMEDIARIOS A MICROTUBULOS E FILAMENTOS DE ACTINA. Filagrina: feixes de filamentos de queratina e conferem resistncia Plectina: interliga filamentos intermedirios a microtubulos e filamentos de actina. MICROTUBULOS Uma das principais funes de microtubulos so os fusos mitticos. Os mirotubulos formam cilindrozinhos que so formados de alfa e beta tubulina. Existe na ligao entre uma tubulina com a outra uma molcula de GTP. A hidrolise de GTP que rege a estabilidade do microtubulo (a sua capacidade de polimerizar e despolimerizar).

Quando a tubulina entra no filamento ela traz o GTP associado, depois de um tempo l ela hidrolisa o GTP a GDP e isso vai ter impacto na estrutura do filamento. Na ponta (+) temos preferencialmente tubulina ligada a gtp, j na ponta menos tempos preferencialmente tubulinas associadas a gdp (j que a dinmica de entrada menor, entrada e sada mais lenta, mais tempo para que a hidrolise do gtp ocorra). E isso afeta a dinmica de polimerizao. Se a ponta mais sofrer uma hidrolise descontrolada e aparecer tubulinas ligadas a gdp teremos um evento de encurtamento rpido, chamado de catstrofe. Teremos uma tendncia a despolarizao. A ponta mais protegida por um cap de gtp. A hidrolise o gtp promove uma alterao conformacional na tubulina, dando um conformao curva, dando uma tendncia a despolimerizar, encurtar, entortar. A estrutura curta menos estvel que a estrutura reta, a curva tende a desmanchar. Se perdeu a ponta protetora a tendncia a desmanchar muito grande. Microtubulos so essenciais para uma serie de processos: diviso celular, trafego de vesculas e protenas. DROGAS QUE AFETAM A POLIMERIZAO DE MICROTUBULOS. Drogas que conseguem alterar a viabilidade celular. Tem como alvo o citoesqueleto celular. Taxol quimioterpico. Se liga e estabiliza o microtubulo, impede a despolimerizao. Impedimento do processo de diviso celular. Colchicina e vimblastina se liga na subunidade e impede a polimerizao. Impede o crescimento do microtubulo.

PROTENAS Y-TUBULINA FORMAM UM ANEL, ONDE SE INICIA A POLIMERIZAO DOS MICROTBULOS No centrossomos tem vrias estruturas que servem de base para inicio da nucleoao dos microtublos: - centro organizador de microtublos (MTOC) - complexo em anel de y(gama)-tubulina (y-TURC) O anel de gama tubulina existe no centrossomo. OS MICROTUBULOS BROTAM DE UMA REGIAO ORGANIZADORA DENOMINADA CENTROSSOMMO. Dali parte o microtubulo que vai crescer at as extremidades da clula, o centrossomo fica prximo ao ncleo. DIVERSAS PROTEINAS REGULAM A POLIMERIZAO Alteram o padro de polimerizao: estatimina (se une aos dmeros de tubulina, e impede que eles polimerizem. Favorece a despolimerizao. Vai fazer com que o microtubulo tenda a diminuir, se as subunidades esto sendo impedidas de entrar, o tamanho vai diminuir), tips (gruda na ponta do microtubulo, ponto de ancoragem do microtubulo em outras estruturas celulares, tem efeito de estabilizar o microtubulo no tamanho que ele ta e o prende em outras estruturas celulares.), cinesina 13 (se liga a ponta do microtubulo e favorece o evento de catstrofe), catanina (promove quebras na regio interna do microtubulo), maps (se ligam

lateralmente ao microtubulo e promovem a estabilizao, impedem quebra e favorecem crescimento), xmap215 (se liga na ponta mais e favorece a entrada de novas subunidades, favorece a polimerizao), tau e map 2 (favorecem a formao de redes/feixes de microtubulos, unem microtubulos lateralmente) tau (feixes com microtubulos mais prximos um dos outros), map 2 (feixes com microtubulos mais distantes uns dos outros por ser uma protena maior), plectina (favorece ligao dos microtubulos em rede, favorece a ligao dele com outros filamentos do citoesqueleto, formando um rede proteica que favorece o arranjo do citoesqueleto dentro da clula). MICROTUBULOS ATUAM COMO TRILHOS PARA O TRASNPPORTE DE MOLECULAS E ORGANELAS Alm das proteinas que alteram a polimerizao dos microtubulos, temos proteinas que funcionam como motores moleculares, como se o microtubulo fosse um trilho e a protena andasse sobre esse trilho. Essas proteinas so responsveis por levar molculas, vesculas, proteinas, rna dentro da clula de um local para outro. Todo deslocamento longo dentro da clula, feito atravs de transportadores que andam nos trilhos de microtubulos. Os microtubulos sao todos iguais, sua estrutura sempre a mesma, o que muda so as proteinas motoras. So diferentes tipos de proteinas que caminham em um ou outro sentido. MOTORES CELULARES EXECUTAM ESSE PROCESSO Dienina: caminha para o terminal menos do microtubulo Cinesina: caminha para o terminal mais. Essas duas proteinas so proteinas dimericas, possuem duas cabeas formada por estruturas globulares (capazes de aderir ao microtubulo e ter movimento, ora liga, ora desliga, e conforme vai fazendo isso, vai andando no microtubulo, como se fosse dando passos), e tem uma cauda. A cabea globular quem executa a capacidade de caminhar e na cauda est presa a carga que vai ser transportada. Isso possvel porque existem vrios tipos de cinesina e dieninas, cada tipo capaz de carregar cargas diferentes. Protenas que tem a mesma propriedade mas tem sequencias diferentes. Nem sempre a ligao entre um motor molecular e o que ele carrega direta. Muitas vezes tem um complexo proteico que faz uma ponte entre a protena e a carga. Isso tambm d possibilidade de diversidade do que as proteinas podem carregar. MOLCULAS DE CINESINA CAMINHAM SOBRE OS MICROTBULOS COM CONSUMO DE ATP H quebra (hidrlise) do nucleotdeo(atp) controlando o liga/desliga da cabea globular no microtbulo. Com a energia da quebra de atp ela vai se movimentar sobre o trilho, jogando a cabea que est atrs para frente e assim ela vai girando.

ACTINA O filamento de actina mais fininho, formado por uma alfa-helice, no tem a capacidade de se desmontar tao rapidamente quanto o microtubulo tem. No caso da actina temos a ao de outras proteinas regulando a polimerizao. OS FILAMENTOS DE ACTINA SO FINOS, FELIXIVEIS E POLARIZADOS

O filamento um parzinho de protofilamentos enrolados um no outro formando um alfahelice. OS FILAMENTOS SO ALTAMENTE DINAMICOS. O atp/adp fica em um bolso bem no interior da molcula de actina. A actina que entra no filamento, que gruda na ponta mais, ela vem ligada a uma molcula de atp. E depois que ela j esta grudada no filamento a algum tempo vai tempo hidrolise desse atp, na ponta menos tempos preferencial actina associada a adp, e na ponta mais a atp. PROTENAS ARPS FAZEM NUCLEAO DOS FILAMENTOS Arps: provoca nucleao do filamento de actina, pode tambm se ligar a lateral de outro filamento de actina, associado a estruturas presentes na borda anterior das clulas com capacidade migratria. Quando o complexo ativado e ele se fecha, ele est apto a receber os monmeros de actina, que facilitada e ocorre rapidamente. Entre um monmero atrs do outro rapidamente. A ponta onde comeou a nucleao a ponta menos, a ponta que polimeriza rapidamente a ponta mais. O complexo arp tem a capacidade de interagir com outros filamentos de actina, formando um ngulo de 70, formando um estrutura em rede, com vrios pontos de nucleao, e vai se direcionando a vrios locais da clula. O que vai permitir a clula a emitir citoplasma e algumas direes. PROTEINAS FORMINAS FAZEM A NUCLEAO DOS FILAMENTOS A protena formina forma um anelzinho que se liga a ponta mais do filamento de actina, esse anelzinho tem uma inclinao e vai girando, conforme entra um monmero de actina, para o lado oposto. Ele vai girando e se inclinando conforme vao entrando outros monmeros. Esse anelzinho vai proteger a ponta mais, e vai facilitar (tem afinindade) a entrada de novos monmeros, e impede que os que j entraram saiam (como se fosse um anel de proteo). Os que j esto no filamento tem menos tendncia a se dissociar. Proteinas arp na base e formina na ponta, vai permitir que o filamento cresa naquele sentido que est sendo estimulado na clula. A EMISSAO DE LAMELIPODIOS E FILOODIOS PERMITE A PROTRUSAO. Coordenao de polimerizao e despolimerizao que vai permitir a clula de caminhar. Velocidade de polimerizao: 1 micrometro por segundo. O CRESCIMENTO DO LAMELIPODIO MEDIADO PELAS ARPS E PROTEINAS AUXILIARES. Protruso: a membrana est sendo jogada para frente. A polimerizao acontece no sentido que a clula esta caminhando, e a despolimerizao vem acontecendo do centro na clula para a borda, desmontando os filamentos, parte mais posterior da clula. Assim a clula consegue realizar o movimento. SUCESSAO DE EVENTOS DA ATIVIDADE MIGRATORIA Elas se movem sobre um substrato. Uma ponta da clula faz a protruso, ao mesmo tempo despolimeriza a parte posterior, contraindo o citoplasma daquela parte, e assim a clula

ancora e adere no substrato mais adiante. Os eventos sucessivos de protruso e contrao vao permitir que a clula ande. Proteinas sequestradoras: desfavorecem a polimerizao Tem proteinas que unem filamentos diferentes (proteinas de cross-link), tem proteinas que se ligam na ponta e fazem um cap de proteo que evita quebra, tem proteinas que se ligam lateralmente e favorecem a polimerizao, e tem proteinas que se ligam a filamentos diferentes e aproximam esses filamentos formando um feixe, promovendo a polimerizao lateral, e tem proteinas motoras que vao se ligar nos filamentos e escorregar um sobre o outro, promovendo a CONTRAO MUSCULAR. (promovida pela associao de filamentos de actina e miosina) PROTEINAS ALFA-ACTININA E FIMBRINA ORGANIZAM OS FEIXES A alfa actinina deixam espaos maiores entre os feixes o que permite um espao para entrada de outras proteinas (exemplo miosina para contrao muscular), j a fimbrina no deixa espao para entrada de motores moleculares, ela une os filamentos mais proximamente uns dos outros. A PROTEINA FILAMINA ESTABILIZA AS INTERAES DOS FILAMENTOS NO CORTEX CELULAR A filamina prende o dmero na regio de interao. Isso muito importante para a organizao do citoesqueleto da clula, o que d estrutura para membrana dessa clula. Quando no temos essa rede bem formada a clula tem problemas para manter sua estrutura. PARA A FINALIZAO DO MOVIMENTO SO NECESSARIOS O ANCORAMENTO E A CONTRAO. Ancoramento: contatos focais de integrina e finalmente... Contrao: interao com os motores de miosina. As molculas de integrina esto ligadas a membrana, fazendo interao com a matriz extracelular e com o citoesqueleto. Quando a clula adere ao substrato, toda a estrutura celular est aderida ao substrato. Uma das proteinas de membrana chamada vinculina, faz o vinculo entre o citoesqueleto e a integrina que est na membrana celular. PROPRIEDADES MOTORAS DESTE SISTEMA SO UTILIZADAS POR BACTERIAS PATOGENICAS O CONTROLE DA ATIVIDADE DESTAS PROTEINAS FEITO POR PEQUENAS GTPases DA FAMILIA Rho. Rho: controla a clivagem entre estado ativo (gtp) e inativo (gdp) Cdc42: formao de filopdios e pequenas protuses = microespculas Rac: estabiliza o lamelipdio e inibe a formao de fibras de estresse contrteis. ESTRUTURA BSICA DO MOTOR MOLECULAR DE MIOSINA Miosina: responsvel pela gerao de fora para a contrao muscular. Miosina 2: um dmero formado por uma subunidade que se espirala a outra igual a ela.

A MIOSINA 1 PODE MOVIMENTAR VESICULAS OU A MEMBRANA PLASMATICA EM RELAO AOS FILAMENTOS DE ACTINA Est mais envolvida no transporte de vesculas sobre o trilho de actina ou de membrana plasmtica sobre o trilho de actina. CICLOS REPETIDOS DE LIGAO E LIBERAO PROMOVIDOS PELA HIDROLISE DO ATP GERAM O MOVIMENTO A miosina vai se ligando a filamento de actina e vai puxando ele. A cabea globular no sai do lugar, o que sai do lugar o filamento de actina. OS DMEROS DE MIOSINA TAMBM PODEM SE ASSOCIAR FORMANDO FILAMENTOS Centenas de cabeas de miosina, orientadas em direes opostas nas duas extremidades. ESSE ARRANJO PERMITE A CONTRAO MUSCULAR No momento da contrao o filamento de miosina gruda na actina e puxa, e essa estrutura toda encurta, pois eles vao entrar no espao que h entre os filamentos de miosina. Isso regulado por clcio. Tem o estimulo nervoso que chega na clula muscular, que libera o clcio do reticulo para o citoplasma. A CONTRAO MUSCULAR INDUZIDA POR UM SUBITO AUMENTO NA CONCENTRAO DE CA++ O AUMENTO NA CONCENTRAO DE CALCIO PROVOCA ALTERAO NAS PROTEINAS TROPONINA E TROPOMIOSINA. Essas proteinas protegem o filamento de actina da ligao da miosina (no deixam a miosina ligar) na presena de clcio a troponina sai do lugar e o sitio de ligao da miosina aparece, ai ela consegue se ligar e puxar a actina.

PEGAR FINAL DA AULA QUE EU FUI EMBORA.