- TOXICIDAD: capacidad relativa de un compuesto de ocasionar dao mediante efectos biolgicos adversos.

- TOXICIDAD GENTICA: capacidad de los agentes de tipo fsico, qumico y/o biolgico de provocar alteraciones sobre el material gentico - RIESGO GENETICO: es la probabilidad de transmisin de una alteracin a la descendencia.

Efecto de los agentes mutagnicos

Biomonitoreo

FACTOR DE RIESGO

PUNTO FINAL

EXPOSICION

BIOMARCADOR

EFECTO

INDICADORES O MARCADORES BIOLOGICOS

Representan cambios en el organismo o en la clula que pueden ser medidos en diferentes sistemas biolgicos permitiendo detectar eventos relacionados con su fisiologa de manera cuali o cuantitativa

BIOMARCADOR DE EXPOSICION
- Seala la presencia de una sustancia exgena o sus metabolitos en un organismo - Un xenobitico en fluidos o tejidos es una seal de que el organismo tuvo contacto con este, es decir, ha estado expuesto a el

BIOMARCADOR DE SUSCEPTIBILIDAD - Es un indicador de una limitacin adquirida o inherente de un organismo en respuesta a la exposicin a un agente toxico - Son indicadores de un incremento del riesgo en cualquier etapa del proceso patolgico

BIOMARCADOR DE EFECTO
- Es un indicador de alteracin bioqumica, fisiolgica, gentico o de otro tipo que, dependiendo de su magnitud, pueden ser reconocidas como un dao o como una patologa potencial o efectivo sobre la salud

- Se constituyen en seales de advertencia temprana

BIOMARCADORES EVALUACION DE RIESGO

EXPOSICION EXTERNA ALTERACION O CAMBIO EFECTOS TEMPRANOS

DOSIS INTERNA

DOSIS BIOLOGICA EFECTIVA

ENFERMEDAD

PRONOSTICO

BIOMONITOREO BIOENSAYOS. METODOS Y PLAZOS.

STT (CORTO TERMINO) LTT (LARGO TERMINO) ESPECIES Naturales

Niveles de complejidad creciente

- Bioterio - Laboratorio - Estacin biolgica - Centros de cra

EVALUACION NIVELES DE COMPLEJIDAD CRECIENTE 1. 2. 3. 4. Primario (Organismos sencillos ) (I) Secundario (cultivo de clulas) (II) Terciario (Organismo Entero) (III) Cuaternario (Epidemiolgico) (IV)

Primer Nivel Nivel molecular o bacteriano Ensayos en procariotas o eucariotas inferiores Ejemplo: Test de Ames

Segundo Nivel Nivel "in vitro" Ensayos en cultivos de celulas eucariotas Ejemplo: Aberraciones cromosomica s (AC) en cultivo de LSP

Tercer Nivel Nivel "in vivo" Ensayos en eucariotas Ejemplos: Ensayos en plantas, animales o humanos expuestos

Cuarto Nivel Nivel epidemiologico Ensayos en poblaciones expuestas Ejemplo: exposicion accidental, terapeutica o laboral de individuos expuestos

S9-MIX

Fraccin Microsomal Heptica

Aroclor 1254 (500mg/kg i.p 5 das) Beta-naftoflavona (80mg/kg) + Fenobarbital sdico (50mg/kg) - CC de Protenas 40 mg/L - Esterilidad

- Agua destilada - Fosfato de sodio dibasicomonohidrato - Fosfato de sodio monobasicomonohidrato - KCl - MgCl - NADP - D glucosa 6 Fosfato

CLASIFICACION DE MUTAGENOS HUMANOS - POSIBLES: han demostrado inducir mutaciones gnicas o cromosmicas en cualquier organismo - PROBABLES: han demostrado inducir mutaciones gnicas o cromosmicas en organismos relacionados filogenticamente con el ser humano - MUTAGENOS: han demostrado inducir mutaciones gnicas o cromosmicas en el ser humano

ESTRATEGIAS

DOSIS

SUSTRATOS Niveles I, II, III, IV

In vivo: DL50, DT, DD, DM

In vitro: concentraciones

REFERENTES
Control negativo Blanco

Factores ambientales y genticos

Eventos biologicos tempranos Eventos Biologicos tardios
Enfermedad Clinica

PRINCIPALES ENSAYOS USADOS EN GENETICA TOXICOLOGICA

Mutaciones gnicas Test de Ames Ensayo de reversin a Triptofano en E.coli Mutaciones gnicas en cultivo de clulas de mamfero (HPRT o TK) Mutaciones recesivas ligadas al sexo en Drosophila Evaluaciones citogenticas en clulas de mamfero Ensayo de aberraciones cromosmicas Ensayo de intercambio de cromatides hermanas Ensayo del micronucleo Evaluacin de Aneuploidias Otros ensayos Dao y reparacin en clulas de memifero Esudios de recombinacin mittica en levaduras y/o Drosophila Ensayo del locus especifico en raton Ensayo del letal dominante Anlisis citogenetico y Ensayo de traslocaciones heredables Ensayo de alteraciones esquelticas en raton

MONITOREO Y ENSAYOS DE CORTO PLAZO

Dada la gran cantidad de compuestos qumicos, fsicos y otros que sera necesario evaluar a fin de determinar si producen un dao gentico, se han propuesto una serie de ensayos de corto plazo donde se incluyen sistemas que permitan observar y determinar (inserciones, deleciones, transiciones, transversiones, frameshift) b. cntricos, anillos, roturas, fragmentos acntricos, figuras de intercambio, traslocaciones, inversiones, deleciones terminales, aneuploidas). ) (di

Biomonitoreo y bioindicadores - Estudios in vivo e in vitro. - Niveles de complejidad creciente

Las bacterias y levaduras como sustrato para monitoreo genotxico en los Ensayos de corto plazo (STT) Monitoreo citiotxico/genotxico. Uso de bacterias (ventajas y controversias) caractersticas y alcances del modelo in vitro

Mutaciones y retromutaciones - Salmonella typhimurium (no patgena)* - Escherichia coli* - Bacillus subtilis* - Saccharomyces cerevisiae - Schizosaccharomyces pombe - Neurospora crassa - Aspergillus nidulans Deleciones, No disyuncin y Recombinacin: - Saccharomyces cerevisiae - Schizosaccharomyces pombe - Aspergillus nidulans

MUTAGENESIS- CARCINOGENESIS Se ha informado profusamente acerca de la existencia de una gran correlacin entre el potencial carcinognico de un agente qumico y la induccin de revertantes detectables a travs de los ensayos microbiolgicos (MccCann y Ames, 1976)

TEST DE AMES - Es el Sistema ms utilizado internacionalmente en el screening inicial - Se basa en el uso de cepas de Salmonella typhimurium - Ames desarrollo cepas bacterianas de S.typhimurium auxtrofas para Hys (la requieren para crecer) - El mtodo evala la capacidad de la sustancia en estudio para provocar una mutacin que la revierta al prototrofo original (crezcan en medio s/ Hys)

- Se incorporan otras mutaciones que permiten aumentar la sensibilidad al ensayo: rfa (mayor permeabilidad de la pared bacteriana a los agentes qumicos) uvr B (bloquea el mecanismo de reparacin) Bio (requieren de biotina para el desarrollo) PKM101 (plsmido que otorga resistencia a ampicilina y aumenta la sensibilidad) mucA y mucB (realzan el sistema de reparacin)

UN ORGANISMO MUTADO PUEDE REVERTIR EL PROCESO POR DIVERSOS MECANISMOS

- La reversin puede ser verdadera, cuando una 2 mutacin en el sentido opuesto vuelve a originar la situacin molecular primitiva en la secuencia nucleotidica del gen - La retromutacion por supresin interna o intragenica, sobreviene cuando una segunda mutacin que ocurre en un lugar diferente, equilibra los efectos de la primer mutacin. - La retromutacion por supresin externa o intergenica, se manifiesta cuando la segunda mutacin restituye la capacidad de introducir un aminocido compatible con la funcionalidad de la protena

BIOMARCADORES DE EXPOSICION: Seala la presencia de una sustancia exgena o sus metabolitos, o el producto de una interaccin entre el agente y una molcula blanco o clula DE SUSCEPTIBILIDAD: Indicador de una limitacin adquirida o inherente de un organismo en respuesta a la exposicin a un xenobitico. DE EFECTO: Indicador de alteracin bioqumica, fisiolgica, gentica resultado de la exposicin a un xenobitico.

COMO? Estudio de las bases moleculares y citolgicas de la herencia. El material hereditario de un organismo est dispuesto en sus cromosomas. Alteraciones microscpicamente visibles PARA QUE? Utilizar distintos ensayos como endotelio-points citogenticos en evaluaciones toxicolgicas de agentes qumicos industriales, nuevos compuestos de la industria farmacutica, monitoreo ecolgico y ambiental y asesoramiento de exposiciones laborales POR QUE? La salud se manifiesta como una relacin armnica entre el hombre y su ambiente y focaliza su atencin sobre tres elementos indiscutibles: - Fomentar la salud del individuo - Conservar un ambiente sano - Atacar debidamente la enfermedad utilizando los medios disponibles y creando los necesarios para lograr la prevencin o un diagnstico temprano que permita reducir las fuentes de exposicin.

CROMOSOMA METAFASICO

Mtodos para visualizar el dao en los cromosomas

IN VIVO

IN VITRO

Para observar TODOS los cromosomas del complemento humano y reconocer su morfologa

CELULAS EN DIVISION

- Clulas humanas de un donante - Lneas celulares

Para estudios de genotoxicidad se pueden analizar roturas, variaciones en la morfologa y en el nmero de cromosomas

IN VIVO IN VITRO

Individuos expuestos contra control

Adicionar agente en estudio al cultivo

Biomarcadores de efecto CITO Y GENOTOXICO

CITOTOXICIDAD: ndice mittico: disminucin del porcentaje de clulas en proceso de divisin celular. Cintica de proliferacin celular: alteracin de la velocidad del ciclo celular Viabilidad celular: forma de expresin de muerte

GENOTOXICIDAD:
Electroforesis de una sola clula: roturas doble y simple cadena del ADN Intercambio de cromtide hermanas: aumento de la inestabilidad cromosmica Alteraciones cromosmicas: alteracin de la morfologa y numero cromosmico (clastogenicidad) Test del micronucleo: aneuploidas y clastogenesis Test de retardo en anafase: aneuploidas, alteraciones del centrmero.

Siembra del cultivo de linfocitos de sangre perifrica

ABERRACIONES CROMOSOMICAS El dao al ADN puede ser visualizado a nivel microscpico mediante la modificacin de la estructura normal de los cromosomas, dando por resultado la aparicin de aberraciones cromosmicas Dan una idea del efecto clastognico de una sustancia Existen diferentes tipos de alteraciones estructurales en los cromosomas: Gaps, rotura cromtide, rotura isocromatide, di cntricos, anillos, fragmentos acntricos, figuras de intercambio (trirradiales, cuadrirradiales), entre otros

Metafase parcial de LSP con aberraciones cromosmicas

AC EN LINEA CELULAR CHO

Ejemplos de distinto tipo de aberraciones en LSP

Figuras de intercambio en lnea celular de ovario de hmster chino CHO