Pgina: 1 de 15 Nota tcnica: Principios Bsicos de la Liofilizacin Fecha: Mayo 6, 2009 Rev 1 Autor: JOHN BARLEY, GERENTE DE PRODUCTO,

SP INDUSTRIES INC. RESMEN La liofilizacin es la accin de remover hielo u otros solventes congelados de un material a travs de un proceso de sublimacin y de remocin de los enlaces de las molculas de agua a travs de un proceso de desorcin. Los trminos liofilizacin y criodesecacin se utilizan alternativamente dependiendo del tipo de industria o ubicacin del lugar donde se lleve a cabo el secado. Una liofilizacin controlada mantiene la temperatura del producto lo suficientemente baja durante el proceso para evitar cambios en la apariencia y en las caractersticas de este producto liofilizado. Es un mtodo excelente para preservar una amplia variedad de material sensible al calor tales como protenas, microbios, productos farmacuticos, tejidos y plasma. SUBLIMACION La sublimacin es un proceso mediante el cual un slido (hielo) cambia directamente al estado gaseoso (vapor) sin pasar primero por la fase lquida (agua). El entendimiento profundo del concepto de sublimacin, representa una pieza clave para lograr un mayor conocimiento acerca de la liofilizacin. Como se muestra en ms abajo en el diagrama de fases del agua, se requieren bajas presiones para que se lleve a cabo la sublimacin.

La sublimacin es un cambio de fase y se debe de agregar energa en forma de calor al producto congelado para que se lleve a cabo el proceso. La sublimacin dentro del proceso de liofilizacin se puede describir simplemente como sigue: 1. CONGELAMIENTO El producto se encuentra completamente congelado, normalmente dentro de un vial, matraz o charola. 2. VACO Posteriormente el producto se coloca bajo un profundo vaco, muy por debajo del punto triple del agua. 3. SECAD0 Entonces se agrega energa en forma de calor al producto provocando que el hielo se sublime.

critical point

triple point

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DIAGRAMA DE FASES DEL AGUA RESMEN SOBRE EL PROCESO DE LIOFILIZACIN Los pasos que se requieren para liofilizar un producto durante el proceso de un lote, se puede resumir de la siguiente manera: Pre-tratamiento / Formulacin Carga / Contenedor (en masa, en matraces, en viales) Congelamiento (tratamiento trmico) a presin atmosfrica Secado primario (sublimacin) bajo vaco Secado secundario (desorcin) bajo vaco Relleno y sellado (para productos en viales) bajo presin parcial Remocin de la liofilizadora del producto seco

Adems de alargar la vida de anaquel del producto, una liofilizacin exitosa debe de dar como resultado un producto con un corto tiempo de reconstitucin a niveles aceptables de potencia. El proceso debe de ser reproducible con parmetros bien definidos de temperatura, presin y tiempo en cada paso. Las caractersticas visuales y funcionales del producto seco tambin son importantes en muchas aplicaciones.

Productos exitosamente liofilizados

LIOFILIZADORES Los principales componentes de una liofilizadora son los siguientes: Sistema de refrigeracin Sistema de vaco Sistema de control Cmara del producto o soporte con puertos (manifold) Condensador

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Pgina: 3 de 15 Nota tcnica: Principios Bsicos de la Liofilizacin Fecha: Mayo 6, 2009 Rev 1 El Sistema de refrigeracin enfra al condensador (hielo) ubicado dentro de la liofilizadora. Este sistema tambin se puede utilizar para enfriar los entrepaos de la cmara del producto para el congelamiento del mismo. El sistema de vaco est formado por una bomba de vaco separada del equipo pero conectada a un condensador hermtico conectado a la cmara de producto. El sistema de control vara en complejidad y normalmente incluye la capacidad de ser sensible a la temperatura y a la presin. Unos controles avanzados permiten la programacin de una receta completa para liofilizar e incluir las opciones necesarias para monitorear el progreso del proceso de liofilizacin. La seleccin del sistema de control para la liofilizadora, depende de la aplicacin y del uso (es decir, laboratorio vs produccin). Tpicamente, las cmaras de producto son un soporte con puertos para matraces, o una cmara grande con un sistema de entrepaos donde se coloca el producto. El objetivo del condensador es el de atraer los vapores que se estn sublimando desde el producto. Debido a que el condensador se mantiene en un nivel de energa ms bajo en relacin al hielo del producto, los vapores se condesan y regresan a su estado slido (hielo) en el condensador. El hielo sublimado se acumula en el condensador y se retira de manera manual al final del ciclo de lioflizacin (paso de descongelamiento). La temperatura requerida del condensador se establece de acuerdo al punto de congelamiento y temperatura de colapso del producto. El sistema de refrigeracin debe de ser capaz de mantener la temperatura del condensador sustancialmente por debajo de la temperatura del producto. En el caso de liofilizadoras de entrepaos, el condensador se puede colocar dentro de la cmara de producto (condensador interno) o en una cmara separada (condensador externo) conectada a la cmara de producto por un puerto para vapor. Las liofilizadoras de soporte con puertos (manifold) dependen de las condiciones ambientales para proporcionar el calor necesario para sublimar el producto. La entrada de este calor no derrite al producto debido a que al vaporizar el solvente, se remueve una cantidad de calor equivalente. Las liofilizadoras de entrepaos avanzadas, pueden proporcionar una fuente de calor para controlar/acelerar el proceso de secado y tambin pueden utilizar el sistema de refrigeracin para permitir el congelamiento del producto dentro de la unidad. Las liofilizadoras se pueden clasificar de manera informal de acuerdo al tipo de cmara de producto: (1) secadoras de soporte con puertos (manifold) donde el producto tpicamente se encuentra pre-congelado y en matraces, (2) secadoras de entrepaos en las que el producto se coloca en una charola o directamente en un entrepao, (3) unidades combinadas con ambas opciones de secado.

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Secadora tpica de soporte con puertos

Liofilizadora de entrepaos

Liofilizadora de combinacin para laboratorio

Las liofilizadoras tambin se pueden agrupar por tamao y aplicacin: (1) unidades de mesa para laboratorio para R&D, (2) unidades piloto para el desarrollo de procesos y mejoras, y (3) unidades de produccin ms grandes. Se debe de tomar en cuenta que adems del trabajo de mejoras en el proceso, las liofilizadoras tamao piloto se usan comunmente para productos R&D as como para aplicaciones en produccin de volumen pequeo.

Liofilizadora de mesa

Liofilizadora piloto

Liofilizadora de produccin

La eleccin de una liofilizadora depende tanto de las caractersticas del producto como de muchos otros variables en funcin de la aplicacin incluyendo el recipiente en el que se secara el producto, el rea del entrepao o el nmero de puertos que se requieren para acomodar la cantidad de material que se secar en cada lote, el volumen total de hielo que se condensar y si se utilizarn solventes orgnicos. Tambin se debe considerar el tipo y la forma del producto que se secar y su uso final.

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Pgina: 5 de 15 Nota tcnica: Principios Bsicos de la Liofilizacin Fecha: Mayo 6, 2009 Rev 1 CONTENEDORES PARA PRODUCTOS Y SISTEMAS DE CONTENCIN Se debe seleccionar un sistema de contenedores adecuados para el producto. Los contenedores de producto ms comunes son los matraces, viales y charolas. Si fuera posible, se recomienda seleccionar un contenedor que mantenga como mximo un espesor mximo a menos de (2cm). Tambin se cuenta con contenedores especiales fabricados de Gore-Tex & Tyvek para aplicaciones especficas en las cuales es determinante la contaminacin del producto. Cuando se trabaja con viales, se dispone de charolas para producto con el fondo removible. Se colocan los viales en la charola, se pone en el entrepao de la liofilizadora y posteriormente se saca la parte inferior de la charola. Esto permite que los viales descasen directamente en el entrepao y aumenta la transferencia de calor hacia el producto. Se requieren sistemas de contencin, como cabinas de guantes, para liofilizar ciertos productos, especialmente cuando se encuentre presente algn material txico.

PROPIEDADES FSICAS DE LOS MATERIALES Y SU FORMULACIN El entendimiento de las propiedades fsicas de los materiales que se liofilizarn, es una parte clave para el desarrollo de un proceso exitoso de liofilizacin. A pesar de que solo pocos productos son materiales cristalinos, la gran mayora de ellos son amorfos y forman estados vidriosos cuando se congelan. El procesamiento y el desarrollo de la formulacin son pasos importantes que muchas veces se siguen para preparar un producto antes de liofilizarlo y se utiliza de acuerdo a la aplicacin especfica . La seleccin de sustancias adhesivas excipientes agregadas en la formula, puede afectar severamente las caractersticas trmicas del producto y su habilidad para ser liofilizado en un perodo de tiempo razonable.

RECETA PARA LIOFILIZAR La liofilizacin en una liofilizadora de entrepao requiere el diseo de un proceso de trabajo o ciclo el cual en ocasiones se le conoce como receta. Tpicamente existen mltiples pasos implicados tanto para el congelamiento como para el secado del producto. En cada paso se debe determinar los valores de la temperatura individual, de la presin y del tiempo. Cada producto especfico o formulacin que se vaya a liofilizar, requiere del desarrollo de un proceso de liofilizacin basado en las caractersticas nicas el producto, la cantidad del mismo y el recipiente que se utiliza. No existe una receta universal segura que funcione para todos los productos.

CONGELAMIENTO Resulta extremadamente importante que la muestra se encuentre completamente congelada antes de aplicar el vaco y de iniciar el proceso de secado. El material que no se encuentra congelado puede expandirse fuera del contenedor cuando se coloca bajo vaco. .

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Producto que no se encontraba completamente congelado antes de iniciar el vaco y el secado! Con un soporte con puertos o manifold sencillo, el producto se coloca en un vial o matraz dependiendo de la cantidad, y posteriormente se congela en otra parte del sistema. Las opciones disponibles incluyen congeladores de laboratorio estndar, baos de congelamiento (Shell bath) o de inmersin directa en nitrgeno liquido. El bao de congelamiento (Shell bath) involucra la rotacin de un matraz que contiene la muestra de manera que sta se congela en las paredes del matraz. Este mtodo de descongelamiento maximiza el rea de superficie del producto y minimiza el espesor. No es recomendable congelar un gran bloque de muestra en el fondo del matraz debido a que la muestra estara muy gruesa para llevar a cabo una remocin eficiente de agua. As mismo, el matraz podra romperse debido a que sufrira un estrs no uniforme.

Congelamiento de matraz en un bao de shell

Las liofilizadoras de entrepao avanzadas, tienen la capacidad de congelar en el entrepao del producto lo cual permite que el congelamiento de la muestra se lleve a cabo dentro de la liofilizadora. El producto se pre-carga en los viales los cuales posteriormente se transferirn al entrepao o se cargarn en lote directamente en la charola del producto. Las liofilizadoras de entrepao permiten un control preciso de las tasas de enfriamiento lo cual afecta a las mismas tasas del congelamiento del producto y al tamao del cristal. Los cristales de hielo grandes aumentan la velocidad del proceso de liofilizacin debido a que se producen rutas de vapor ms grandes en la porcin seca del producto a medida que se subliman los cristales de hielo.
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Pgina: 7 de 15 Nota tcnica: Principios Bsicos de la Liofilizacin Fecha: Mayo 6, 2009 Rev 1 Las tasas de enfriamiento ms lentas de los entrepaos no necesariamente generan cristales de hielo ms grandes debido a los efectos del super-enfriamiento. Cuando el lquido de super-enfriamiento finalmente congela, esto sucede extremadamente rpido dando por resultado cristales de hielo ms pequeos. En un ambiente de cuarto limpio con muy pocas partculas para la formacin de ncleo de hielo, hay una cantidad significativamente mayor de super-enfriamiento. Algunos productos biolgicos no toleran grandes cristales de hielo y deben de liofilizarse con cristales de menor tamao.

TEMPERATURA EUTCTICA / COLAPSO La determinacin de la temperatura crtica de colapso de un producto es un paso importante para establecer y optimizar el proceso de liofilizacin. Esta temperatura crtica determina el valor mximo que el producto puede tolerar durante el secado primario sin derretirse o colapsarse. El anlisis trmico (Escaneo diferencial calorimtrico & Microscopio de liofilizacin) y el anlisis de resistencia dielctrica, son mtodos usados con frecuencia para determinar esta temperatura crtica del producto. Los productos congelados se pueden clasificar de acuerdo a su estructura como vidrio cristalino o amorfo. Los productos cristalinos tienen un punto eutctico de congelamiento/derretimiento el cual es su temperatura de colapso. Los productos amorfos tiene una temperatura de transicin de vidrio correspondiente y son mucho ms difciles de liofilizar. La temperatura de colapso de los productos amorfos es tpicamente unos pocos grados ms caliente que su temperatura de vidrio de transicin. A pesar de que la mayora de los materiales que se liofilizan son amorfos, el trmino eutctico se usa (errneamente) con frecuencia para describir el punto de congelamiento/derretimiento de cualquier producto. La gua Inspecciones de liofilizacin de parenterales de la US FDA (http://www.fda.gov/ora/inspect_ref/igs/lyophi.html ) establece que el fabricante debe conocer el punto eutctico del producto (temperatura crtica de colapso). Es una buena prctica el caracterizar la temperatura de colapso de todas las nuevas frmulas de medicinas inyectables o ingeribles que se liofilizan. Si no se conoce la temperatura crtica del producto, se debe de hacer un anlisis de prueba y error para determinar las temperaturas de secado primarias. Inicialmente se puede usar un ciclo conservador lento con baja temperatura y presin. Posteriormente los valores de temperatura y la presin se pueden elevar en ciclos siguientes hasta que se vea una evidencia de colapso o descongelamiento indicando que el producto est muy caliente.

Producto colapsado- se excedi la temperatura crtica

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Pgina: 8 de 15 Nota tcnica: Principios Bsicos de la Liofilizacin Fecha: Mayo 6, 2009 Rev 1 ALINEAMIENTO Algunos productos amorfos (tales como el manitol o la glicina), forman un vidrio metastable con una cristalizacin incompleta cuando se congelan por primera vez. Estos productos se pueden beneficiar con un proceso de tratamiento trmico, tambin conocido como alineamiento. Durante este proceso la temperatura del producto se cicla (por ejemplo de -40C a -20C) por unas cuantas horas y posteriormente se egresa a -40C para lograr ms cristalizaciones completas. El alineamiento tiene la ventaja adicional de que tiene un crecimiento de hielo grande y tiempos ms cortos correspondientes.

SOLVENTES ORGNICOS El uso de solventes orgnicos requiere una mayor atencin en el proceso de liofilizacin. Se requieren temperaturas ms bajas para congelar y condensar solventes y fcilmente pueden pasar al condensador con el riesgo de que se dae la bomba de vaco. Se cuenta con diseos de refrigeracin para liofilizacin en los cuales se ofrecen las temperaturas ms bajas del entrepao y del condensador necesarias para congelar y posteriormente condensar algunos solventes orgnicos. Podran requerirse cartuchos de filtros especiales o trampas de nitrgeno lquido (LN2) para capturar/condensar algunos solventes con temperaturas de congelamiento muy bajas. Al manejar materiales voltiles y/o potencialmente dainos, se debe de tener consideraciones en cuanto a la seguridad.

Trampa de LN2

Cartucho de filtro

El lote de solventes orgnicos tpicamente se remover al principio del proceso de liofilizacin.

SECADO PRIMARIO La etapa de secado en la liofilizacin en realidad es un proceso de dos partes, un Secado primario y un Secado secundario. El volumen de agua removido del producto durante la liofilizacin se realiza por medio de sublimacin de todos los cristales de hielo libres durante el paso de secado primario. Los solventes orgnicos tambin se remueven durante el secado primario.. El secado primario (sublimacin) es un proceso lento llevado a cabo a temperaturas ms bajas, llevadas con seguridad por debajo de la temperatura crtica de colapso del producto. La sublimacin requiere energa calorfica para llevar a cabo el proceso de cambio de fases de slido a gas . Los tres mtodos de transferencia de calor, conduccin, conveccin y radiacin deben de considerarse cuando se liofiliza un producto.
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Pgina: 9 de 15 Nota tcnica: Principios Bsicos de la Liofilizacin Fecha: Mayo 6, 2009 Rev 1 En un soporte de secado sencillo con puertos, el calor se transfiere al matraz/producto en primer lugar por medio de conveccin y radiacin del ambiente que lo rodea. Teniendo poco control sobre el flujo de calor hacia el producto, resulta ms difcil tener control sobre el proceso. Cuando se trabaja con productos que tienen bajas temperaturas de colapso, puede ser necesario envolver o aislar el matraz para disminuir la tasa de transferencia de calor y evitar el colapso. En una lioflizadora de entrepaos, la mayor parte del calor se transfiere al producto a travs de conduccin y es importante maximizar la superficie de contacto del producto/contenedor/charola con el entrepao. Sin embargo, tambin debe considerarse en cuanto a la uniformidad del producto y de los procesos de control. El calor que irradia de las paredes internas de la cmara de producto, hace que los productos/viales que se encuentran en el permetro del entrepao se sequen ms rpido que los que se encuentran al centro del entrepao (lo cual se conoce en liofilizacin como el efecto de las orillas). La radiacin que se origina a travs de las puertas de acrlico presentes normalmente en las liofilzadoras piloto y R&D, tiene un efecto an mayor y el producto situado en la parte frontal de estos secadores, tpicamente sern los que se sequen ms rpido de todos. Por este motive las liofilizadoras de produccin se disean con puertas metlicas y ventanas de revisin pequeas. Se puede colocar un pedazo de papel aluminio frente al producto en la parte interna de la liofilizadora piloto como una proteccin claro que esto impedir que se vea el producto y no permitir la observacin durante el proceso. Debido a que el contacto en el entrepao muchas veces es inconsistente, la transferencia de calor convectivo puede ayudar a promover un secado uniforme del producto. La presin del sistema dentro de un rango de 100 mTorr a 300 mTorr normalmente facilita una adecuada cantidad de conveccin. A una presin ultra baja del sistema a menos de 50 mTorr, hay menos molculas de gas presentes para que haya conveccin y es ms probable que el secado sea menos uniforme/ms lento.

El secado primario es un proceso de arriba hacia abajo con una sublimacin frontal bien definida movindose a travs del producto a medida que este se seca. Por arriba de la interface del hielo se encuentra el producto seco, o pastel; por debajo de esta interface se encuentra el producto con cristales de hielo an en espera de ser subliminados. Al final del secado primario cuando todos los cristales de hielo libres se han sublimado, el producto se mostrar aparentemente seco. Sin embargo, el contenido de humedad an puede estar dentro del rango del 5-10% debido a la presencia de molculas de agua absorbidas pegadas al producto.

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Pgina: 10 de 15 Nota tcnica: Principios Bsicos de la Liofilizacin Fecha: Mayo 6, 2009 Rev 1 PRESIN Y TEMPERATURA DURANTE EL SECADO PRIMARIO Como se mencion anteriormente, cada producto congelado tiene su propia temperatura crtica. Es necesario mantener la temperatura del producto con cuidado por debajo de su temperatura crtica durante el secado primario para evitar el colapso. La temperatura del producto depende de la presin de vapor en la interface de hielo y a su vez, esta presin de vapor depende tanto de la tasa de transferencia de calor hacia el producto (la cual se controla ajustando la temperatura del entrepao) y del punto de inicio del nivel de vaco del sistema. Una vez que se ha identificado la temperatura del producto meta (tpicamente varios grados ms frio que la temperatura crtica), las nicas dos variables que quedan para determinar/controlar son la temperatura del entrepao y el nivel de vaco del sistema. Durante el secado primario, la presin del sistema y la temperatura del entrepao se establecen y se controlan en combinacin para lograr una temperatura de producto apropiada. Se recomienda que primero se establezca la presin del sistema utilizando la presin de vapor de la table de hielo. La temperatura del producto se monitorea utilizando termopares y posteriormente el punto de inicio de la temperatura del entrepao se aumenta lentamente hasta que el producto alcance su temperatura objetivo. Cuando se logra la temperatura del producto meta, la temperatura se conserva de manera constante para el balance del secado primario. Algunos productos con alta resistencia al flujo de vapor en la porcin seca del pastel, podran necesitar que la temperatura del entrepao se reduzca hacia la parte final del secado primario para mantener la temperatura del producto en su objetivo y para evitar el colapso. No se recomienda que arbitraria y repetitivamente se aumente la temperatura del entrepao durante el secado primario, como se observa en algunos ciclos de hace tiempo. El uso de la presin de vapor de la tabla de hielo, es una forma cientfica de determinar una presin adecuada para liofilizar. Como gua general se debe seleccionar una presin de Sistema que sea el 20 a 30% de la presin de vapor de hielo de la temperatura del producto meta. Cuando el punto inicial del nivel de vaco es ms profundo que la presin de vapor del hielo a la temperatura actual del producto, puede presentarse la sublimacin. De manera tpica, los niveles de vaco para liofilizar se encuentran entre 50mTorr y 300mTorr siendo de 100mTorr a 200mTorr el rango ms comn. Una vez que se han establecido los parmetros de temperatura y presin, el secado primario sigue durante un perodo de tiempo lo suficientemente largo como para que se sublimen todos los cristales de hielo.

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Pgina: 11 de 15 Nota tcnica: Principios Bsicos de la Liofilizacin Fecha: Mayo 6, 2009 Rev 1

VAPOR PRESSURE OF ICE

Temp Deg C 0 -2 -4 -6 -8 -10 -12 -14 -16 -18 -20 -22 -24 -26 -28 -30 -32 -34 -36 -38 -40 -42 -44 -46 -48 Vapor Pressure mTorr 4,584.00 3,883.00 3,281.00 2,765.00 2,325.00 1,949.00 1,630.00 1,359.00 1,130.00 936.80 774.40 638.20 524.30 429.40 350.50 285.10 231.20 186.80 150.30 120.60 96.30 76.70 60.80 48.00 37.70 mBar 6.111480 5.176893 4.374295 3.686353 3.099737 2.598446 2.173149 1.811846 1.506539 1.248960 1.032446 0.850861 0.699007 0.572485 0.467294 0.380101 0.308240 0.249045 0.200383 0.160786 0.128389 0.102258 0.081060 0.063995 0.050262 Temp Deg C -50 -52 -54 -56 -58 -60 -62 -64 -66 -68 -70 -72 -74 -76 -78 -80 -82 -84 -86 -88 -90 -92 -94 -96 -98 Vapor Pressure mTorr 29.500 23.000 17.900 13.800 10.600 8.100 6.160 4.660 3.510 2.630 1.960 1.450 1.060 0.780 0.570 0.410 0.290 0.210 0.150 0.100 0.072 0.049 0.034 0.023 0.015 mBar 0.039330 0.030664 0.023865 0.018398 0.014132 0.010799 0.008213 0.006213 0.004680 0.003506 0.002613 0.001933 0.001413 0.001040 0.000760 0.000547 0.000387 0.000280 0.000200 0.000133 0.000096 0.000065 0.000045 0.000031 0.000020 VirTis FTS Genevac Hotpack

Helping you make more time for science

845.255.5000 www.SPIndustries.com

Como se puede ver en la tabla anterior, la temperatura y la presin tienen una relacin directa, mientras ms baja sea la temperatura del hielo, la presin saturada de vapor sobre ella, ser ms baja. Debido a que la mayora de las liofilizadoras comerciales no pueden controlar el vaco de manera consistente por debajo de los 30mTorr, a temperaturas de producto muy fras (menos de -40C), resulta imposible tener un valor inicial del sistema de presin que sea del 20 al 30% de la presin de vapor del hielo. A estas fras temperaturas del producto, la liofilizacin se hace extremadamente lenta. En las liofilizadoras de soporte con puertos (manifold), el proceso es guiado por el punto de inicio del sistema de presin y de la temperatura ambiental del laboratorio. Debido a la falta de control sobre la tasa de transferencia de calor hacia el producto, la mayora de las liofilizadoras con manifold operan de manera conservadora a presiones bajas para ayudar a mantener la temperatura del producto ms baja.

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Pgina: 12 de 15 Nota tcnica: Principios Bsicos de la Liofilizacin Fecha: Mayo 6, 2009 Rev 1 DETERMINACIN DEL FINAL DEL SECADO PRIMARIO Se dispone de muchos mtodos analticos para determinar que el secado primario ha concluido. El mtodo bsico consiste en el monitoreo de la temperatura del producto con un sensor termopar. La temperatura medida del producto ser ms fra que el punto inicial de la temperatura del entrepao durante el secado primario activo debido a que el calor del entrepao se utiliza para el cambio de fases por sublimacin. Cuando termina la sublimacin de los cristales de hielo, la temperatura del producto incrementar y se acercar a la temperatura del entrepao. Cuando la temperatura del producto iguala a la del entrepao, se puede inferir que el secado primario ha terminado. Nota: El vial especfico que contiene el cable del termopar tpicamente se secar ms rpido que los otros viales en el entrepao debido a que el cable conducir ms calor al vial especfico. Similarmente, si se seca un lote, el rea alrededor del cable del termopar se secar ms rpidamente que otras reas del producto en la charola. Es importante permitir un tiempo adicional de secado (de 30 minutos a 2 horas dependiendo de las caractersticas del producto) despus asegurar que todo el hielo del lote se ha sublimado por completo. Debido a que el producto se secar desde la parte superior hacia abajo, la punta del termopar siempre se debe colocar en el fondo y al centro del contenedor. No hay problema si el termopar toca el fondo del recipiente. Si se est secando en viales, es una buena prctica insertar el termopar en un vial ubicado en la parte media del entrepao. Los efectos del calor radiado provocar que los viales/productos en la periferia del entrepao para que se seque ms rpido.

Herramientas para colocar el termopar

Se dispone de herramientas adicionales para la determinacin del punto final para el secado primario en las liofilizadoras ms grandes equipadas con sistemas de control de proceso avanzados. Uno de esos mtodos implica la comparacin de lecturas paralelas de presin entre un manmetro Pirani y otro de capacitancia. Este ltimo siempre proporciona una lectura de presin verdadera en la cmara de producto. Sin embargo, el manmetro Pirani, dar una lectura falsa alta en presencia de vapor de agua. Cuando la lectura de presin baja en el Pirani y se acerca a la lectura de presin verdadera del manmetro de capacitancia, hay poco o nada de vapor presente y se puede concluir que el secado primario ha concluido. Para las liofilizadoras diseadas con condensador externo, se cuenta con otra herramienta. Se puede colocar una vlvula de aislamiento en el Puerto de vapor que conecta la cmara de producto al condensador. Esta vlvula se puede cerrar por un corto periodo de tiempo y se puede medir el subsecuente incremento de presin en la cmara de producto. Cuando este incremento de presin llegue a cero, no se genera ms vapor de agua va sublimacin.

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Pgina: 13 de 15 Nota tcnica: Principios Bsicos de la Liofilizacin Fecha: Mayo 6, 2009 Rev 1 SECADO SECUNDARIO Adems del hielo libre que se sublime durante el secado primario, queda una cantidad sustancial de molculas de agua que se unen al producto. Esta es el agua que se ha removido (deasorbido) durante el secado secundario. Debido a que todo el hielo libre se ha removido durante el secado primario, ahora la temperatura puede incrementarse considerablemente sin riesgo de que se derrita o que se colapse.. De hecho, el secado secundario inicia durante la fase primaria pero a temperaturas elevadas (tpicamente en el rango de los 30 a 50C), la desorcin sucede mucho ms rpidamente. Las tasas del secado secundario dependen de la temperatura del producto. El sistema de vaco puede continuar al mismo nivel usado durante el secado primario; los niveles de vaco ms bajos no mejorarn los tiempos del secado secundario. Los productos amorfos podran requerir que se controle el incremento de la temperatura del secado primario al secundario a una tasa de rampa lenta para evitar un colapso. El secado secundario continua hasta que el producto tenga un contenido de humedad aceptable para un almacenamiento a largo plazo. Dependiendo de la aplicacin, el contenido de humedad en productos completamente secos tiene un valor tpico entre 0.5% y 3%. En la mayora de los casos mientras ms seco se encuentre el producto, mayor ser su vida de anaquel. Sin embargo, algunos productos como complejos biolgicos podran secarse demasiado para lograr ptimos resultados en el almacenamiento y el proceso de secado secundario se debe de controlar en proporcin. Durante el secado secundario se puede utilizar un mecanismo de ladrn de muestras para remover peridicamente viales de la liofilizadora para su determinacin de contenido de humedad residual.

Ladrn de muestras- para retirar viales durante el secado secundario

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Pgina: 14 de 15 Nota tcnica: Principios Bsicos de la Liofilizacin Fecha: Mayo 6, 2009 Rev 1 OPTIMIZACIN DEL CICLO Adems de disear una receta que seque un producto con xito, tambin es extremadamente valioso optimizar (acortar) la duracin de un ciclo, especialmente si potencialmente se puede repetir el proceso o incrementarlo para el rea de produccin. La liofilizacin puede ser un proceso que lleve mltiples das. El ciclo de tiempo muchas veces se puede reducir sustancialmente si se investigan varios factores: Congelamiento y alineamiento maximiza el tamao de los cristales y la cristalizacin para aumentar las tasas de secado. Espesor del producto las molculas de vapor de agua experimentan una resistencia al salir de la porcin seca del producto. Las muestras ms delgadas ofrecen menos resistencia al flujo de vapor dando como resultado un secado ms rpido. El congelamiento por medio del bao puede ser til cuando se secan lotes de productos en matraces. Temperatura de colapso crtica esta es la pieza de informacin ms importante en cuanto a la optimizacin del ciclo. La habilidad de correr un secado primario a temperaturas ms altas de los productos, reduce enormemente el tiempo de secado creando un diferencial en la presin entre la presin del vapor sobre el hielo en el producto y la presin en el o condensador. Cada incremento de 1 C en la temperatura del producto puede disminuir el tiempo de secado primario en un 13%.

La optimizacin del ciclo utilizando la informacin acerca de la temperatura eutctica/colapso, requiere un acercamiento repetitivo para tomar mediciones en tiempo real de la temperatura del producto durante el secado primario para que posteriormente se hagan los ajustes correspondientes a los valores de la temperatura del entrepao. Esto se puede llevar a cabo manualmente utilizando termopares para el producto o, si se seca en viales, se puede usar un sistema SMART.

CONSIDERACIONES EN LA MEJORA DEL PROCESO Las liofilizadoras de entrepaos para Laboratorio del tamao de una piloto, se utilizan con frecuencia para desarrollar un ciclo que se utilizara para mejorar un proceso hacia una unidad ms grande de produccin. De manera similar en cuanto las caractersticas de la transferencia de calor y de la uniformidad de temperatura del entrepao, es importante asegurar que el proceso de liofilizacin desarrollado en el laboratorio, se puede transferir con xito a una liofilizadora de produccin. Uno de los factores ms importantes que se deben considerar es la diferencia entre el ambiente de cuarto limpio tpico de una liofilizadora de produccin y el ambiente en el laboratorio donde operan la mayora de las liofilizadoras piloto. La diferencia en las partculas pueden afectar en gran medida al congelamiento del producto y al tamao de del cristal de hielo. Las liofilizadoras de produccin normalmente se configuran para operar en un ambiente de cuarto limpio y pueden tener la habilidad de limpiarseen su-lugar (CIP) y de tener esterilizacin con vapor (SIP). Otra consideracin en la produccin tiene que ver con el cumplimiento con la regulacin US FDA 21 CFR 11, si se requiere. Esta regulacin necesita ciertos estndares en el control del proceso y en la seguridad.

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Pgina: 15 de 15 Nota tcnica: Principios Bsicos de la Liofilizacin Fecha: Mayo 6, 2009 Rev 1 ALMACENAMIENTO DEL PRODUCTO SECO Los productos liofilizados son extremadamente hidroscpicas y deben de estar sellados en recipientes hermticos despus de la liofilizacin para evitar la rehidratacin al estar expuestos a la atmsfera. Las liofilizadoras se pueden configurar con la opcin del sellado para sellar el producto cuando an se encuentra bajo un vaco parcial dentro de la unidad. De manera tpica el sellado se lleva a cabo en viales con tapones parcialmente insertados. Los entrepaos se colapsan de de manera que cada uno oprime los viales / tapones que se encuentran en el entrepao adyacente. Tambin es comn rellenar con un gas inerte como el nitrgeno antes de sellar el producto.

Mecanismo de sellado en una liofilizadora de produccin Adems del descongelamiento del condensador y de la limpieza del sistema despus de cada ciclo, la rutina de mantenimiento de la liofilizadora tpicamente incluye el cambio peridico del aceite de la bomba de vaco y la revisin visual de todos los sellos y empaques. Los controladores avanzados ofrecen la capacidad de correr pruebas peridicas del sistema y/o pruebas de fugas para asegurar que la unidad est operando de acuerdo a las especificaciones originales de fbrica.

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