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BIOMEDICINA
Jssica Galina Arajo de Oliveira, 12 Isabelle Matheus Mendes, 10 Professora Sheila Menegatti
ITU 2013
OBJETIVO
INTRODUO
O exame de tipagem sangunea serve para determinar o tipo de sangue, com relao ao Sistema ABO e Fator Rh. Ele consiste na determinao da presena ou no de protenas da membrana da hemcia, com base em reao antgeno/anticorpo. O Sistema ABO possui quatro fentipos mais comuns: A, B, AB e O, alm de subgrupos de A e B. O Sistema Rh composto por 49 antgenos, sendo o antgeno D o mais imunognico. Os antgenos do Sistema Rh so especficos das clulas vermelhas do sangue e comeam a se desenvolver na 8 a 12 semana de gestao. O mais imunognico destes antgenos o D, que pode se apresentar de vrias formas: D normal, D fraco e D Parcial. A tcnica utilizada foi a Tcnica em tubo.
RELATRIO
Tipagem Direta ou Fenotipagem Direta Pesquisa-se o Antgeno presente na membrana do eritrcito, utilizando soros comerciais: Anti-A, Anti-B e Anti-D. Tipagem ou Fenotipagem Reversa Pesquisa-se o Anticorpo presente no soro/plasma utilizando hemcias comerciais: Antgeno A, Antgeno B e Antgeno D. No se realiza em recm-nascido. inversa Tipagem Direta. Imunoglobulinas (Anticorpos): Anti A, Anti B, Anti AB e Anti D. Dentre as imunoglobulinas existem 5 classes: IgG, IgM, IgA, IgE e IgD. Sendo de maior importncia clnica em imunohematologia, IgG e IgM, porque esto em maior concentrao nos grupos ABO/Rh. IgG: molcula nica atravessa barreira placentria. IgM: pentmero reage melhor em temperatura at 25C (Anticorpo frio). Uma preocupao em imunohematologia pelo poder reacional dele, e porque ele ativa a cascata do complemento (composto por protenas da membrana plasmtica e solveis no sangue e participam das defesas inatas e adquiridas. Essas protenas reagem entre elas para opsonizar os patgenos e induzir uma srie de respostas inflamatrias que auxiliam no combate infeco.). Protenas: C1, C2, C3, C4 e C5, marcam a clula portadora do Antgeno ou corpo estanho, para ser destruda. O IgM, est presente, por exemplo, no Anti A; numa gestao pode causar uma Doena Hemoltica do Recm-Nascido por ABO (que mais preventora por Rh) e no mais por Rh
Mtodos e Materiais: 01 tubo marcar nmero e pipetar 50 a 100 L de sangue total homogeneizado (1 ou 2 gotas), completar o tubo com soluo fisiolgica e centrifugar por 5 minutos 3.000 RPM repetir este procedimento 3 vezes. Em sangue de recm nascido, geralmente coletado sangue do cordo umbilical, portanto deve-se realizar o processo de lavagem por 8 vezes, pois a intenso deixar apenas o anticorpo eritrocitrio, sem que hajam interferentes. Em trs novos tubos colocar uma gota:
ANTI A
ANTI B
Anti A: Universalmente azul Anti B: Universalmente amarelo Anti D: incolor E preferencialmente, colocar esse soro comercial (anticorpo) antes de colocar a amostra. Aps as lavagens, preparar uma suspenso de hemcias, que fique aproximadamente entre 3 a 5%. Suspenso de hemcias: Aproximadamente 50 a 100 L de sangue lavado, mais 19 gotas de soro fisiolgico. Para, ento colocar uma gota dessa suspenso nos tubos com Antgenos, se passar dessa quantidade de 50 a 100 L, tero mais hemcias para pouco anticorpo, podendo, ento, ocorrer a liberao de um falso resultado, devido a essa
ANTI D
alta concentrao, por isso, no se deve realizar esse processo em lmina que utiliza sangue puro (sem lavagem), com todos os antgenos, o que pode camuflar o processo de aglutinao. In vivo: Sangue do tipo A, possui antgeno A e anticorpo B; Sangue do tipo B, possui antgeno B e anticorpo A In vitro: Anti A comercial aglutina amostra antgeno A Anti B comercial aglutina amostra antgeno B Pesquisa de DU ( D fraco) caso tivesse dado negativo: Colocar tubo de D em banho-maria 37C durante 15 minutos, ocorre, ento, uma amplitude trmica. Verificar se no existe reao antgeno/anticorpo que no ocorreu porque estava em temperatura ambiente. Caso no tenha ocorrido, centrifugar 15 segundos em rotao alta e verificar se ocorre a positividade ou no. Se aps esse processo de amplitude trmica e centrifugao positivar, como soltar esse resultado? Rh D negativo, Rh D positivo aps amplitude trmica. Se mesmo aps essa amplitude trmica continuar negativo, deve-se lavar com soluo fisiolgica como na primeira etapa e aps a ltima lavagem, colocar 2 gotas de soro de coombs.
A hemcia, atravs de uma fora inica, ela repele esse anticorpo, porm para o anticorpo vencer essa zona, coloca-se o soro de coombs, que neutraliza essa zona de potencial zeta (anula e aproxima o anticorpo ao antgeno). Nesse caso s se enxerga a reao (D fraco) aps fase de coombs. Como liberar esse resultado? Rh negativo, DU positivo aps fase de coombs. Como verificar na primeira fase se positivo ou negativo? Positivo: aps centrifugao formar um boto ao fundo do tubo, e ao deitar ligeiramente o tubo, este boto no de desmanchar. Negativo: aps centrifugao formar um boto ao fundo do tubo, e ao deitar ligeiramente o tubo, este boto se desfar, formando um cordo.
1. CONSIDERAES FINAIS
Pode haver resultado inconclusivo? Sim, isto pode ocorrer em pacientes politransfundidos. O Rh D Fraco apresenta menor quantidade de stios antignicos, levando a uma fraca reatividade ou baixa expresso do antgeno D. Isto pode ser interpretado erroneamente como Rh Negativo. Os reagentes utilizados nesta tcnica no so to sensveis para fentipos Rh D Fraco, uma vez que 85% da populao caucasiana Rh Positivo. Sendo assim, para os casos de Rh Negativo, exige-se uma tcnica auxiliar para confirmao deste resultado com reagente mais sensvel. O que pode interferir no bom resultado da Tipagem Sanguinea? Alguns fatores podem interferir no bom resultado, por exemplo: - Erro na informao da data de nascimento: h diferenas entre a tcnica aplicada para Tipagem sangunea de crianas e de adultos. A principal delas a determinao da Prova Reversa, pois os antgenos ABO esto presentes a partir da 5 a 6 semana de vida intra-uterina e embora ao nascimento expressem um menor nmero de stios antignicos, estes s alcanaro expresso plena ao redor dos 2 a 4 anos de vida. Os idosos tambm podem apresentar baixa expresso. - Pacientes submetidos a transplante de Medula ssea. - No confirmao de um Rh Negativo. - Pacientes com teste de COOD DIRETO Positivo. - Gelia de Wharton, no caso de recm-nascidos.
2. REFERNCIAS