Citogentica

M.Sc. Luis Carlos Lizrraga Vargas

Qu es la Citogentica?
GENES DE COLOR DE OJOS

DIVISION CEULAR

ALBERTS B.- Molecular Biology of the Cell- 5th edition, 2008

Historia
18821956: PERIODO DE GESTACION DE LA CITOGENETICA
1882. Walther Flemming (21 abril 1843 a 4 agosto 1905) visualiz y dibuj los cromosomas. Fundador de la Citogentica.

Ilustraciones de las clulas con los cromosomas y la mitosis, a partir del libro, Sustancia celular, Nucleo y Divisin celular 1882

TRES ETAPAS EN LA HISTORIA DE LA CITOGENTICA

LA ERA PRE-BANDEO

 1888. Heinrich Waldeyer introdujo el trmino de CROMOSOMAS Griego, formado por khroma (color) y soma (cuerpo) o sea cuerpo coloreado

 Ya desde principios del 1900 se aceptaba la idea de que el material hereditario estaba contenido en los cromosomas hiptesis que fue confirmada por los experimentos de Theodor Boveri en erizo de mar en 1902.
Echinus Sphaerechinus

Theodor Boveri

 En 1949 MURRAY BARR demostro que es posible determinar genticamente el sexo de un individuo dependiendo de que exista o no una masa de cromatina en la superficie interna de la membrana nuclear.
CARBOL FUCSINA

XY

XX

 1950. Tao-Chiuh Hsu descubri accidentalmente la utilizacin de soluciones hipotnicas para dispersar los cromosomas mitticos
Medio hipotonico

Medio isotonico

Medio Hipertonico

 1956. Tjio , estudiando clulas fetales del pulmn en mitosis y DESCUBRIERON QUE EL NMERO CORRECTO DE CROMOSOMAS EN HUMANOS ES 46 (23N).

Klaus Patau (1961) grupos cromosmicos A - G

Jrme Lejeune (1966)

AVANCES EN TCNICAS DE CITOGENETICA

Gran avance en el desarrollo de las tecnicas de Solucion isotonica solucin Hipotonica citogentica: la solucin hipotnica por Tao-Chiuh Hsu , para obtener una mejor diseminacin de los cromosomas y as hacer un mejor anlisis, Peter Novell quien descubri que la fitohemaglutinina (PHA -M)estimulaba la divisin de los glbulos blancos el efecto de la colchicina por Levan como un agente que inhibe la citocinesis Sin embargo, lo ms importante fue la introduccin de las tcnicas de bandeamiento por Caspersson.

LA ERA POST-BANDEO
Hacia fines de los aos 60 Caspersson observo que los cromosomas teidos con ciertos colorantes del ADN como la Quinacrina presentaban un patrn de bandas especfico.

TINCIN CON MOSTAZA DE QUINACRINA BANDEO Q

Tincin con Giemsa: Bandeo G

Dra. Seabright en Inglaterra consista en colorear los preparados luego de someterlos a una digestin con una enzima proteoltica: la tripsina.

bandas G-plidas

bandas G-oscuras

DNA rico en GC
replicacin temprana Muchos genes

DNA rico en AT
replicacin tarda Pocos genes

BANDEO C
tie especficamente regiones centromricas
Sumner 1972 Hidrlisis con HCL 0.2 N

El bandeo NOR (Nocleolar Organizer Regions)

LA ERA MOLECULAR

PCR

CROMOSOMAS

Elementos caractersticos del cromosoma (metafsico)

CROMTIDA Y CROMOSOMA

replicacin
S

divisin
M

cromosoma de las clulas antes de replicarse: un cromosoma con una cromtida

cromosoma metafsico: un cromosoma con dos cromtidas hermanas (DNA duplicado)

cromosoma de las clulas despus de dividirse

Estructura y composicin qumica de los cromosomas

Condensacin de la cromatina

Richard J. Reece , Analysis of Genes and Genomes, 2004

Del cromosoma al ADN

Nucleosomas

Fibras de cromatina Looped domains

Cromosoma metafasico

NUCLEOSOMA

elevada conservacin evolutiva

Richard J. Reece ,Analysis of Genes and Genomes, 2004

Protenas cromosmicas no histnicas: el armazn proteico scaffold

sulfato de dextrano y heparina

Laemmli en 1977

CROMOSOMA

p-Arm (petit)

q-Arm (queue)

TIPOS DE CROMOSOMAS

2:1

Sub

MORFOLOGA CROMOSMICA
BRAZO CORTO

CENTROMERO
BRAZO LARGO

METACENTRICO CENTROMERO CENTRAL

CENTROMERO

SUBMETACENTRICO BRAZOS DESIGUALES

CENTROMERO

ACROCENTRICO CENTROMERO EN POSICION SUBTERMINAL (UN BRAZO MUY CORTO)

CARIOTIPO

Caritipo: Es un arreglo sistematizado de los cromosomas de una clula y ordenada de acuerdo al tamao, y morfologa. Es caracterstico en una especie y no VARIA

Idiograma: Representacin esquemtica mediante un dibujo , que incluya las bandas e interbandas, del cariotipo de una especie.

ISCN 2009
An International System for Human Cytogenetic Nomenclature (ISCN) (2009)
The complete citation for reference lists is:
ISCN(2009):An International System for Human Cytogenetic Nomenclature, L.G. Shaffer, M.L. Slovak, L.J. Campbell (eds); S.Karger, Basel, 2009

ISCN (1985, 1991, 1995, 2005,2009)

ISCN
Normal male
46,XY

Normal female
46,XX

Human Chromosome Nomenclature

How do you read a Chromosome Cariotipo? International System for Human Cytogenetic Nomenclatuer (ISCN) Always counting outwards from centromere:

Centromere

-A. Chromosome/Arm ( Xp) -B. Region ( Xp1) -C. Band ( Xp11) -D. Sub-bands(Xp11.2) -E. Sub-sub-bands(Xp11.21)
X-Chromosome NCBI, 2012

Cytogenetic maps

ABREVIATURAS

IDENTIFICACIN DE LOS CROMOSOMAS

CONSTANTES CROMOSOMICAS
Caracterizan a una especie. Se evidencian fundamentalmente en metafase.

48N

48N

23N 24N 24N 48N 48N

nmero cromosmico
El complemento somtico diploide (2n) del ser humano es 46 formado por el aporte haploide de cada gameto (23 cr=n) (n23+n23=2n46)

MORFOLOGA CROMOSMICA
Presentan 2 brazos cromosmicos
Brazo corto: p Brazo largo: q

Se clasifican de acuerdo a la posicin del centrmero en:

Metacntricos Submetacntricos Acrocntricos Telocntricos (no existen en el hombre)

En funcin de su centromero y tamao:

LOS CROMOSOMAS SE SUBDIVIDEN EN GRUPOS:

GRUPO A El cromosoma 1 es el ms grande del metacentrico.

El cromosoma 2 es metacntrico

El cromosoma 3 es el ms pequeo del grupo, es el ms metacntrico.

GRUPO B El cromosoma 4 y el 5 son los submetacntrico s ms grandes

GRUPO C Este grupo consta de 7 pares de cromosomas de tamao mediano submetacntricos los cuales se organizan de mayor a menor, adems en este grupo se incluye el cromosoma X (uno o dos segn el sexo).

Grupo D Est formado por 3 pares de cromosomas acrocntricos, medianos.

Grupo E consta de 3 pares de cromosomas que son del 16-18 de tamao pequeo que son submetacntricos

GRUPO F Son los cromosomas 19 y 20, los cuales pueden ser metacntricos GRUPO G Son los cromosomas 21 y 22 y a ste grupo se incluye el cromosoma Y, estos se caracterizan por que son acrocntricos.

El cariotipo una vez completado sera el siguiente:

5 13 6 1 8 22 9

19

3 14

21
6 10

13
11

2 7 y
20 X 17 15 4 8

5 16 1 12 16 18

15 21 19 9 20 17

12

11

22
4

14

18
2

10

MTODOS DE ESTUDIOS CITOGENETICOS

MTODOS DE ESTUDIOS CITOGENETICOS

inclusin en parafina cortes con micrtomo, tcnica de aplastado

cultivo celulares "in vitro".

Existen mltiples factores que inciden en la obtencin exitosa de un cultivo: esterilidad, medios de cultivos apropiados

y sus aditivos,
dispositivos el cultivo, apropiados para

temperatura, (37C)
pH, (neutro) tensin del gas.(CO2)

TECNICA DE CARIOTIPO BANDAS GTG

BANDEO G:
Bandas transversales claras y oscuras Localizacin fija, Su nombre se debe a que la tincin se realiza con Giemsa Corresponden a: 1) genes de replicacin tarda ricas en AT (oscuras) 2) Genes de replicacin temprana ricas en GC (claras)

Criterios de clasificacin
Denver 1960
-Tamao

-Posicin del centrmero

-Presencia o ausencia de satlites

Pars 1971
-Patrn especfico de bandas

Metodologa citogentica
Linfocitos de sangre perifrica Mdula sea Lquido amnitico Vellosidades coriales Piel

Material

Mtodo

Directo: Indirecto: cultivo antes del procesamiento

Procesamiento

Bandas G:
(Seabright, 1971)

Tratamiento con tripsina + Giemsa Regiones ricas en AT (bandas oscuras)

METODOLOGIA

1000 rpm x 10 min 100 ul de colchisina

1000 rpm x 10 min

5 13 6 1 8 22 9

19

3 14

21
6 10

13
11

2 7 y
20 X 17 15 4 8

5 16 1 12 16 18

15 21 19 9 20 17

12

11

22
4

14

18
2

10

INDICACIONES CLNICA
Esta indicado cuando se sospecha o se debe descartar la presencia de una anormalidad cromosmica de estructura y de nmero. En todo expresin fenotpica anormal de impresin diagnstica desconocida. En toda pareja infrtil. A todo producto de aborto. A todo tumor.

ABORTO RECURRENTE

ANOMALAS CROMOSMICAS: CLASIFICACIN

QU SON LAS MUTACIONES CROMOSMICAS?

Son aquellas que afectan la estructura o el nmero de los cromosomas de un individuo. Se deben a errores en la separacin de los cromosomas durante la meiosis.

Mutaciones - enfermedades - evolucin

ANOMALAS CROMOSMICAS: CLASIFICACIN

Euploidias
En el nmero Aneuploidas Mosaicismo Anomalas cromosmicas En la estructura Monosomias

Trisomias Tetrasomias

Translocaciones Deleciones Inserciones Inversiones Isocromosoma Duplicaciones

Numerica
Euploidy = 3N - 4N Whole chromosome set Triploidy, 69 Tetraploidy, 92 Aneuploidy Autosomal trisomy, 47 Sex chromosomes, 45, 47, 48, 49

Euploidias o Poliploidia

3n - triploidia

4n - tetrapoidia

ANEUPLOIDAS
Supone la existencia de un cromosoma de ms o uno de menos. Si falta uno es una monosoma (2n-1 : sindrome de Turner). Si hay uno de ms es una trisoma (2n+1 : sindrome de Down).

Trisoma del 21 Sindrome de Down

Cromosomas sexuales anormalidades

Turner Syndrome 45,XO (female)

Trisomy X
Klinefelter Syndrome

47, XXX (female)

47,XXY (male)

Extra Y chromosome

47,XYY

(male)

4n

2n

Estructurales

ALTERACIONES EN LA ESTRUCTURA
Se puede perder o amplificar parte de los cromosomas. A veces no tiene consecuencias. Pero si no hay equilibrio en las ganancias y perdidas se produce enfermedad.

 Es el intercambio de material gentico entre cromosomas no homlogos.

Pueden ser: reciprocas o robertosianas.

TRANSLOCACIN RECIPROCA

Reciprocal

TRANSLOCACIN ROBERTSONIANA

 Reversal of segment of chromosome

If too small cannot detect by karyotype Very rare in humans Selected against as would get reduced fertility

Pericentric
reversed segment includes centromere.

Paracentric
within one chromosome arm.

Inversions Pericentric

Pericentric

Inversions Paracentric

Paracentric

 Segment of 1 chromosome inserted into another

derA

der

 Terminal
loss of end of chromosome 46,XY,del(10)(q26) missing long arm of 10

Interstitial
loss of segment from within chromosome 46,XY,del(10)(q24q26)

All result in unbalanced karyotype Partial monosomy Serious clinical effect

DELECION TERMINAL

DELECION INTERSTISIAL

derA

 Two copies of the same arm Mirror image around centromere

Enfermedades Genticas

ANEUPLOIDIAS

Sndrome de Patau: 47,XX, + 13

El fenotipo est caracterizado por : -Microcefalia -Microftalmia -Labio leporino (fisura del labio superior) y paladar hendido. -Polidactilia -Cardiopata congnita -Defectos renales. -Pies en mecedora -Retraso mental.

Sndrome de Patau

Sndrome de Edwards: 47, XY, +18

 El fenotipo est caracterizado por micrognatia, orejas de implantacin baja, cardiopata congnita, malformaciones renales, pies en mecedora (calcneo desarrollado). Presentan retraso mental y viven poco tiempo, pocos nios superan el ao.

Sndrome de Edwards

Down Syndrome

El fenotipo est caracterizado por:

Hipotona muscular Cara redonda (oval) La lengua suele ser grande y hacer protrusin Hipertelorismo. Pliegues epicnticos en los prpados Pliegue simiesco en la palma de la mano (pliegue palmar nico)
Presentan retardo mental

Down Syndrome

Translocation Down Syndrome:

46, XY, rob(14;21) (q10;q10), +21

Key male female

miscarriage

Normal

Carrier

chromosome 14

chromosome 21

Robertsonian translocation

der(14;21)(q10;q10) Normal Carrier Normal

Down syndrome

Carrier

Down syndrome

Normal

ANEUPLOIDAS EN CROMOSOMAS SEXUALES

Sndrome de Klinefelter

Sndrome de Klinefelter

Sndrome de Klinefelter
El fenotipo en estos individuos es el de varones con: ginecomastia

Atrofia testicular azoospermia

con

Talla elevada y a veces con cierta desproporcin.

Sndrome de Klinefelter diagnstico de esterilidad.

El cariotipo clsico es de 47,XXY. Uno de los X constituye un Corpsculo de Barr.

Monosomia Sndrome De Turner

CARIOTIPO 47, XYY

(tambin llamado sndrome del superhombre)

CARIOTIPO TRIPLE X

Alteracin Cromosmica Estructurales

Sndrome de Lejeune: (Maullido del gato, monosoma parcial del par 5)

El signo ms significativo es el carcter agudo del grito del nio, que recuerda el maullido de un gato.

Son tpicos as mismo una marcada microcefalia con micrognatia y hipertelorismo que se atena con la edad. El retraso mental es profundo, el C.I. suele ser inferior a 20. La letalidad es baja, llegando muchos a la adultez.

Philadelphia Chromosome

Cromosoma Filadelfia t(9;22). Se observa en 90% de pacientes con LMC (leucemia mieloide crnica)

Genes involucrados

Gen: ABL (9q34)

Gen: BCR (22q11)
Fusion 5bcr c-abl

Un hombre honesto, provisto de todo el conocimiento existente en la actualidad, solamente podra decir que, en algn sentido, el origen de la vida se presenta casi como un milagro. Francis Crick

GRACIAS

POR

SU

ATENCIN