UNIVERSIDADE FEDERAL DE SO CARLOS

CENTRO DE CINCIAS EXATAS E DE TECNOLOGIA DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA QUMICA Laboratrio de Engenharia das Reaes Prof. Dr. Raquel de Lima Camargo Giordano

Experimento 2 Cintica de Reao Heterognea em Reator de Batelada

Christian Carlos Cndido da Silva Mariana Stefani Machado Milton Quaresma Gomes Junior Patrcia Metolina Rodrigo Toscano Santos Thas Sousa de Sateles

RA: 389234 RA: 389340 RA: 389480 RA: 388998 RA: 389498 RA: 389366

SO CARLOS SP 2013

SUMRIO
1 INTRODUO................................................................................................................ 3 1.1 1.2 1.3 1.4 2 3 4 Enzimas ................................................................................................................... 3 Mecanismo geral de catlise enzimtica .................................................................. 3 Imobilizao da enzima ........................................................................................... 5 Efeitos difusivos ....................................................................................................... 6

OBJETIVOS ................................................................................................................... 7 PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL .............................................................................. 8 RESULTADOS E DISCUSSO ...................................................................................... 9 4.1 4.2 4.3 Determinao dos parmetros cinticos .................................................................. 9 Clculo da energia de ativao .............................................................................. 13 Clculo da efetividade ........................................................................................... 16

5 6

CONCLUSO ............................................................................................................... 25 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS .............................................................................. 26

1
1.1

INTRODUO
Enzimas

As enzimas so protenas especializadas na catlise de reaes biolgicas. So catalisadores biolgicos extremamente eficientes e aceleram em mdia 10 9 a 1012 vezes a velocidade da reao, transformando de 100 a 1000 molculas de substrato em produto por minuto de reao, sem participar dela como reagente ou produto. A especificidade das enzimas se deve existncia, na superfcie da enzima, de um local denominado stio de ligao do substrato. O stio de ligao do substrato de uma enzima pelo arranjo tridimensional especial dos aminocidos de uma determinada regio da molcula, geralmente complementar molcula do substrato, configurada espacial e eletricamente para a ligao do mesmo.(1) Alguns modelos procuram explicar a especificidade substrato/enzima. O Modelo Chave/Fechadura prev um encaixe perfeito do substrato no stio de ligao, que seria rgido como uma fechadura. Por outro lado, o Modelo do Ajuste Induzido prev um stio de ligao no totalmente pr-formado, mas sim moldvel molcula do substrato.(1)

1.2

Mecanismo geral de catlise enzimtica

As enzimas aceleram a velocidade de uma reao por diminuir a energia livre de ativao da mesma, sem alterar a termodinmica da reao. Uma reao enzimtica pode ser expressa pela seguinte Equao (1), onde E a enzima, S, o substrato, ES, o Estado de Transio e P, o produto formado: E + S <=> [ES] => E + P (1)

Para superar a energia de ativao de uma reao, h a formao de um estado intermedirio, o "Estado de Transio" (ES), um composto instvel e de alta energia, representado por ES, ligado com altssima afinidade ao stio cataltico, mas no considerado um intermedirio e rapidamente convertido em produto. A Figura 1 mostra a comparao entre a reao com catalisador e a reao sem catalisador e a diminuio da energia de ativao proporcionada pela enzima.(2)

Figura 1 Energia de ativao da reao com catalisador e da reao sem catalisador

Fonte: Biocincia (2011).

A atividade das enzimas condicionada pelos seguintes fatores: Temperatura: medida que se eleva a temperatura, a taxa de reao

aumenta. No entanto, estabilidade da protena decresce devido desnaturao trmica, ocorrendo a perda da atividade biolgica da enzima. Dessa forma, toda enzima tem uma temperatura tima para que atinja sua atividade mxima. pH: as enzimas tm um pH timo de atuao, acima e abaixo do qual a sua

atividade diminui e se inativam. O pH do meio influencia a conformao do centro ativo da enzima e, consequentemente, a sua interao com o substrato. Concentrao do substrato: o aumento da concentrao de substrato

corresponde o aumento da atividade enzimtica at que todos os centros ativos fiquem ocupados e a atividade enzimtica estabiliza. Concentrao de enzima: aumentando a concentrao da enzima, aumenta

a velocidade da reao desde que haja substrato disponvel. Inibidores: a presena de inibidores diminui a atividade enzimtica. A catlise enzimtica pode ser homognea e heterognea. Na catlise homognea, reagentes e catalisador encontram-se na mesma fase, proporcionando melhor interao entre esses componentes e, consequentemente, resultando em melhor rendimento de reao. catalisador do meio de reao.(3) A catlise heterognea envolve mais de uma fase, sendo que o catalisador , geralmente, um slido e os reagentes e produtos lquidos ou gasosos. Nesse No entanto, a aplicao industrial da catlise

homognea normalmente limitada, devido s dificuldades de separao do

caso, o catalisador fornece uma superfcie onde os reagentes iro reagir mais facilmente, e com menor energia de ativao. As principais vantagens da utilizao de catalisadores heterogneos so a sua grande estabilidade trmica (suportam temperaturas elevadas) e a sua facilidade de recuper-los no fim da reao. A principal desvantagem a falta de seletividade. 1.3 Imobilizao da enzima

Os vrios mtodos de imobilizao empregados baseiam-se nas ligaes fsicas e qumicas entre a biomolcula e o suporte. Os mais utilizados so: adsoro fsica e qumica, imobilizao por confinamento em matriz ou microcpsula e ligao cruzada. Na imobilizao em matriz de gel, a enzima est livre em soluo, mas com seu movimento restrito por uma rede de gel ou polmero. A enzima misturada aos componentes que formaro o gel e, quando esse formado, a enzima fica presa matriz. A porosidade da matriz deve evitar a perda de enzima e, ao mesmo tempo, permitir o livre movimento do substrato e do produto.(5) Aps a imobilizao, as propriedades fsicas e qumicas da enzima podem sofrer modificaes. Devem ser considerados os efeitos da imobilizao sobre a estabilidade, as propriedades cinticas e especificidade, alm da produtividade da enzima. As diferenas no comportamento da enzima imobilizada, quando comparada sua forma em soluo, devem-se aos seguintes fatores: efeitos conformacionais modificao conformacional da molcula de enzima devido alterao na estrutura terciria do stio ativo; efeitos estereoqumicos uma parte da molcula da enzima imobilizada numa posio tal que o stio ativo relativamente inacessvel; efeitos difusionais tm origem na resistncia de difuso do substrato at o stio cataltico da enzima, e do produto da reao; efeitos microambientais resultantes do mtodo de imobilizao utilizado ou da presena do suporte na vizinhana da enzima.(5)

1.4

Efeitos difusivos

Para promover uma determinada reao qumica com catalisador, a condio desejada que a etapa controladora seja a cintica qumica. Mas em reaes heterogneas ocorrem diversos outros fenmenos, como efeitos difusivos externos e internos. Para uma molcula reagente alcanar o stio ativo onde a reao de fato ocorre, h vrias etapas: 1) 2) 3) 4) Difuso da molcula reagente do seio do fluido para a superfcie da partcula; Difuso da molcula reagente da superfcie da partcula pelo interior do poro; Reao qumica no stio ativo; Difuso da molcula do produto formado do interior do poro para a superfcie

da partcula; 5) fluido. H duas possibilidades de ocorrncia do fenmeno externo ao catalisador. A primeira quando a transferncia de massa atravs do filme rpida. Neste caso a taxa global da reao ser determinada pela velocidade da reao qumica na superfcie do catalisador e a reao qumica ser a etapa limitante do processo. E a segunda quando a transferncia de massa atravs do filme lenta e, portanto, a etapa limitante. Neste caso, h uma barreira difusional provocada pelo filme ao redor da superfcie do catalisador. Os fenmenos difusivos internos devem ser levados em conta quando se emprega catalisadores porosos, os quais contm stios ativos localizados no interior dos poros. Portanto, as molculas reagentes devem difundir pelos poros at atingir o sitio ativo, onde ocorrer a reao qumica. Difuso da molcula do produto da superfcie da partcula para o seio do

OBJETIVOS
O experimento teve como objetivo estudar a isomerizao de frutose a glicose

catalisada por glicose isomerase imobilizada em gel de quitosana ativado com glutaraldedo. Atravs da estimativa dos parmetros cinticos e da determinao da efetividade experimental e comparao com a terica, analisaram-se os efeitos provocados ao empregar diferentes temperaturas e dimetros de partculas de catalisador na reao heterognea, operada em reator batelada.

PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL
Inicialmente, cada tubo Falcon contendo 10 mL de soluo de frutose em

cinco diferentes concentraes molares de 1,5, 0,8, 0,3, 0,2 e 0,1 M permaneceram imersos em um banho termosttico para o controle da temperatura. Foram estudadas a enzima solvel (livre) e a enzima glicose isomerase, imobilizada em gel de quitosana ativada com glutaraldedo, em trs diferentes tamanhos de dimetros. A Tabela 1 demonstra os dimetros, as atividades tericas e as massas de gel empregadas. Para o experimento desse grupo, as reaes foram realizadas com enzima imobilizada de dimetro P, temperatura de 50C. Tabela 1 Caractersticas da enzima glicose isomerase empregadas. Tamanho P M G Livre Dimetro (mm) 0,05-0,3 1,70-0,85 3,36-2,36 Atividade Terica (UI/ggel) 1000 757 782 287 Massa de gel (mg) 28,7 37,9 36,7 -

Cada uma das diferentes configuraes da enzima empregadas foi utilizada por um grupo experimental e em cada uma delas havia cinco frascos contendo as enzimas a serem adicionadas num reator para a determinao da velocidade inicial da reao, correspondente a cada concentrao inicial de substrato. Foi empregado um reator em batelada encamisado para manter o controle da temperatura, sob agitao de aproximadamente 300 rpm. Aps adio das partculas de enzima imobilizada ao reator, para cada uma das cinco concentraes iniciais Cs, retirou-se 100 L de amostra do reator nos tempos de 10, 20 e 30 minutos. Cada amostra foi recolhida em frascos do tipo Eppendorf, j contendo 100 L soluo de HCl 20% (vol/vol). Em seguida, fechou-se o frasco e o agitou imediatamente para acelerar a mistura com o cido e interromper a reao. Em seguida, adicionaram-se 800 L de gua destilada e agitou-se novamente o frasco, mantendo-o reservado e devidamente identificado.

Para a anlise colorimtrica, foram utilizados 50 L de cada amostra inativada para reagir com 1mL de reagente GOD-PAP, por 10min, a 37C, mantida em banho termosttico. Nesse mtodo analtico enzimtico, a glicose oxidase (GOD) oxida a glicose presente na amostra e produz perxido de hidrognio. Por sua vez, a peroxidase catalisa a oxidao de fenol e aminofenazona (PAP) na presena de perxido, gerando um complexo colorido. Colorao esta que pode ser medida em espectrofotmetro e relacionada com a concentrao de glicose inicialmente presente na amostra.

4
4.1

RESULTADOS E DISCUSSO
Determinao dos parmetros cinticos

Neste experimento, trabalhou-se com a reao de isomerizao de frutose a glicose, catalisada pela enzima glicose isomerase imobilizada. Com os valores de absorbncia (Abs) medidos em diferentes instantes para cada soluo de frutose, foram calculadas as concentraes de glicose (Cp) atravs da curva de calibrao do espectrofotmetro fornecida, expressa pela Equao (1): (1) Uma vez que foi realizada uma diluio 1:2, a concentrao real de produto foi obtida pela relao: (2) Na Tabela 1, esto dispostas as absorbncias em funo do tempo para as diferentes solues de frutose e as concentraes de glicose obtidas.

10

Tabela 1 Valores de absorbncia e concentrao de glicose. Amostra Cs0 (mol/L) S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 S14 S15 1,5 Cs0 (g/L) 270 Tempo (min) 10,133 19,983 29,850 9,967 19,917 29,817 10,000 19,933 30,000 10,233 19,917 29,967 10,233 20,000 30,083 Abs 0,137 0,252 0,347 0,079 0,179 0,274 0,039 0,067 0,130 0,022 0,051 0,098 0,021 0,048 0,080 Cp,dil (g/L) 0,601 1,095 1,503 0,352 0,782 1,190 0,180 0,300 0,571 0,107 0,232 0,434 0,103 0,219 0,356 Cp (g/L) 1,202 2,191 3,007 0,704 1,563 2,380 0,360 0,601 1,142 0,214 0,463 0,867 0,206 0,438 0,713

0,8

144

0,3

54

0,2

36

0,1

18

Na isomerizao da frutose, 1 mol de frutose convertida a 1 mol de glicose, ambas com massa molar de 180 g/mol. Assim, as concentraes de substrato (frutose), Cs, e de produto (glicose), Cp, em unidades molar e mssica, esto relacionadas numa proporo de 1 para 1 e a velocidade de consumo de substrato, rs, pode ser calculada por: (3) Com os dados da Tabela 1, foi realizada regresso linear atravs da origem dos dados de concentrao de produto em funo do tempo, sendo as velocidades de consumo de substrato equivalentes aos coeficientes angulares de cada reta ajustada. A Figura 1 apresenta os dados da concentrao de produto em funo do tempo para cada uma das concentraes iniciais de substrato para obteno de -rs. Os valores encontrados esto dispostos na Tabela 2.

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Figura 1 Concentrao de produto em funo do tempo para cada uma das concentraes iniciais de substrato.
3.5 3.0 2.5 Cp (g/L) 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 Tempo (min) 25.0 30.0 35.0 y = 0.0267x R = 0.9417 y = 0.0229x R = 0.9860 y = 0.1046x R = 0.9733 y = 0.0788x R = 0.9946 y = 0.0357x R = 0.9459 1,5 M 0,8 M 0,3 M 0,2 M 0,1 M

Tabela 2 Valores de rs para as diferentes solues de frutose. Cs0 (g/L) 270 144 54 36 18 -rs (g/L.min) 0,1046 0,0788 0,0357 0,0267 0,0229

Para determinar os parmetros cinticos aparentes foi utilizado o modelo cintico de Michaelis-Menten, o qual relaciona a concentrao de substrato com a sua velocidade de consumo em uma reao enzimtica, conforme a Equao (4). (4) onde vmx e Km so os parmetros cinticos do modelo de Michaelis-Menten para a reao enzimtica. A constante Km representa a afinidade da enzima pelo substrato (reagente) e vmx expressa a velocidade mxima da reao. A equao de Michaelis-Menten pode ser aproximada por uma hiprbole descrita pela Equao (5).

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(5) em que y = -rs, x = Cs, P1 = vmx e P2 = Km. Dessa forma, foi realizado um ajuste de hiprbole com os dados de rs em funo de Cs (Tabela 2), por meio do software Scidavis, conforme apresentado na Figura 2, de onde foram obtidos vmx = 0,179 g/(L min) e Km = 190,14 g/L. Figura 2 Ajuste hiperblico dos valores de rs em funo de Cs0.

Rearranjando a Equao (4), obtm-se a Equao (6), que representa a linearizao de Lineweaver-Burk da equao de Michaelis-Menten. (6) Assim, construindo-se um grfico com os dados de 1/-rs versus 1/Cs, pode-se obter os parmetros Km e vmx por meio de um ajuste linear. Na Tabela 3 esto dispostos os valores de 1/-rs e 1/Cs0 e a Figura 3 apresenta o ajuste linear realizado. Os valores tachados na Tabela 3 foram desprezados na regresso, pois se distanciaram significativamente da tendncia linear.

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Tabela 3 Valores de 1/-rs e 1/Cs0 para linearizao da equao de MichaelisMenten. 1/Cs0 (L/g) 0,00370 0,00694 0,01852 0,02778 0,05556 1/-rs (L.min/g) 9,560 12,695 28,032 37,405 43,652

Figura 3 Valores de 1/-rs em funo de 1/Cs0.

40 35 30 1/-rs (L.min/g) 25 20 15 10 5 0 0.00 y = 1184.5x + 5.0601 R = 0.9966

0.01

0.01

0.02 1/Cs0 (L/g)

0.02

0.03

0.03

Pela Figura 3, tem-se:

4.2

Clculo da energia de ativao

Dados experimentais obtidos pelos grupos de cada turma, em trs temperaturas e trs diferentes tamanhos de dimetros de gel foram utilizados para calcular a energia de ativao da reao para a enzima imobilizada e para a livre, conforme apresentado na Tabela 4.

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Tabela 4 Dados cinticos para temperaturas e dimetros de partcula diferentes. Dimetro da partcula Temperatura (C) vmx (g/L.min) 60 Enzima livre 50 40 60 P 50 40 60 M 50 40 60 G 50 40 0,711 0,256 0,109 0,675 0,198 0,104 0,509 0,146 0,063 0,211 0,108 0,047 Km (g/L) 150,6 268,6 100,5 151,5 234,1 108,3 287,6 119,8 82,3 253,2 207,0 78,9

A equao de Arrhenius permite calcular a variao da constante de velocidade de uma reao qumica com a temperatura, conforme a Equao (7). (7) em que k = constante de velocidade, A = constante pr-exponencial, Ea = Energia de ativao (kcal/mol), R = constante dos gases (kcal/mol.K) e T = Temperatura (K). A Equao (7) pode ser linearizada utilizando o logaritmo natural, de modo a se obter a Equao (8). ( ) ( ) (8)

Na prtica, usa-se ln (k) = ln (vmx), uma vez que vmx proporcional a k. Assim, obtm-se a Equao (9). ( ) ( ) (9)

Logo, a partir dos dados da Tabela 4, pode-se construir o grfico de ln (vmx) em funo de 1/T, como ilustra a Figura 4. Os valores utilizados para a construo das retas encontram-se na Tabela 5.

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Tabela 5 Valores de ln (vmx) em funo de 1/T. Dimetro da partcula 1/T (1/K) ln (vmx) 0,00300 Enzima livre 0,00309 0,00319 0,00300 P 0,00309 0,00319 0,00300 M 0,00309 0,00319 0,00300 G 0,00309 0,00319 -4,435 -5,457 -6,311 -4,487 -5,714 -6,358 -4,770 -6,018 -6,859 -5,650 -6,320 -7,152

Figura 4 ln (vmx) em funo de 1/T para cada dimetro.

-3.500 -4.000 -4.500 ln(vmx) -5.000 -5.500 -6.000 -6.500 -7.000 0.00280 0.00300 0.00320 1/T (1/K) 0.00340 ln(vmx) -5.000 -5.500 -6.000 -6.500 -7.000 0.00280

Livre
y = -9770.1x + 24.852 R = 0.9952

-4.000 -4.500

Pequeno
y = -9721.7x + 24.584 R = 0.9622

0.00300 0.00320 1/T (1/K)

0.00340

-4.000 -4.500 -5.000 ln(vmx) -5.500 -6.000 -6.500 -7.000 -7.500 0.00280

Mdio
y = -10873x + 27.786 R = 0.9831 ln(vmx)

-4.000 -4.500 -5.000 -5.500 -6.000 -6.500 -7.000

Grande

y = -7839.6x + 17.901 R = 0.998

0.00300 0.00320 1/T (1/K)

0.00340

-7.500 0.00280

0.00300 0.00320 1/T (1/K)

0.00340

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Os valores obtidos para a Ea (kJ/mol) atravs da linearizao da equao de Arrhenius foram calculados de acordo com a Equao (10): (10) onde a (K) o coeficiente angular da reta obtida a partir do ajuste linear dos dados da Tabela 5 e R = 8,314 J/(mol.K). A Tabela 6 apresenta os valores da energia de ativao em funo do dimetro da partcula. Tabela 6 Energia de ativao em funo do dimetro da partcula. Dimetro da partcula Ea (kJ/mol) Ea (kcal/mol) Enzima livre P M G 81,2 80,8 90,4 65,2 19,4 19,3 21,6 15,6

4.3

Clculo da efetividade

A relao existente entre a velocidade de reao com a enzima imobilizada e a velocidade que deveria ser obtida na ausncia de difuso, considerando a enzima totalmente livre, dada pela efetividade experimental (exp): (11) onde vimobilizada a velocidade aparente da reao com enzima imobilizada e vlivre, a velocidade da reao considerando a enzima livre. A efetividade experimental (exp) varia entre 0 e 1. Os dados de velocidade obtidos com a enzima livre e a enzima imobilizada, juntamente com a efetividade experimental, para cada uma das concentraes de substrato, dimetro de enzima e temperatura esto mostrados nas Tabelas de 7 a 9.

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Tabela 7 Valores de efetividade experimental em funo da concentrao de substrato e dimetro da partcula (a 60C). Cs0 (g/L) 270 144 54 36 18 Enzima livre -rs (g/L.min) 0,508 0,356 0,191 0,126 0,078 Enzima ImP -rs (g/L.min) 0,453 0,343 0,202 0,110 0,074 exp 0,893 0,964 1,059 0,876 0,953 Enzima ImM -rs (g/L.min) 0,225 0,191 0,074 0,060 0,030 exp 0,443 0,536 0,389 0,475 0,385 Enzima ImG -rs (g/L.min) 0,087 0,076 0,036 0,031 0,014 exp 0,170 0,213 0,190 0,245 0,175

Tabela 8 Valores de efetividade experimental em funo da concentrao de substrato e dimetro da partcula (a 50C). Cs0 (g/L) 270 144 54 36 18 Enzima livre -rs (g/L.min) 0,143 0,083 0,053 0,039 0,016 Enzima ImP -rs (g/L.min) 0,105 0,079 0,036 0,027 0,023 exp 0,734 0,945 0,671 0,689 1,421 Enzima ImM -rs (g/L.min) 0,119 0,073 0,043 0,035 0,026 exp 0,831 0,879 0,806 0,898 1,632 Enzima ImG -rs (g/L.min) 0,082 0,065 0,020 0,013 0,009 exp 0,577 0,783 0,373 0,340 0,571

Tabela 9 Valores de efetividade experimental em funo da concentrao de substrato e dimetro da partcula (a 40C). Cs0 (g/L) 270 144 54 36 18 Enzima livre -rs (g/L.min) 0,073 0,063 0,040 0,029 0,016 Enzima ImP -rs (g/L.min) 0,060 0,080 0,034 0,026 0,015 exp 0,830 1,275 0,849 0,870 0,916 Enzima ImM -rs (g/L.min) 0,052 0,050 0,023 0,016 0,012 exp 0,719 0,794 0,591 0,552 0,727 Enzima ImG -rs (g/L.min) 0,041 0,028 0,026 0,011 0,009 exp 0,567 0,443 0,652 0,388 0,561

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Para determinar a efetividade terica, os clculos seguintes foram realizados para a comparao de condies reacionais e unidades equivalentes. Inicialmente foi necessrio corrigir a unidade em que se expressa a velocidade mxima de reao atravs da Equao (12). (12) Em seguida, converteu-se vmx, que estava em unidade de volume do reator para vmx, em unidade de volume de catalisador, conforme Equao (13). (13) onde vmx a velocidade mxima de reao em funo da massa de substrato (gfrutose/(min.cmcat), Cgel, a concentrao de catalisador por volume de reator (ggel/L) e gel, a densidade do catalisador (ggel/cmcat). A partir das concentraes iniciais de substrato (Cs*) e da constante de Michaelis-Menten (Km), foi calculado o adimensional () pela Equao (14): (14) onde Cs* corresponde concentrao de substrato na pelcula de fluido ao redor da partcula. Na presena de alta agitao, considera-se que Cs* apresenta o mesmo valor que a concentrao no meio, ou seja, Cs* = Cs0. Atravs do baco que relaciona a efetividade em funo do mdulo de Thiele, , para diferentes valores de (Figura 5), foi possvel encontrar os valores de para cada concentrao, dimetro de catalisador e temperatura. Figura 5 Efetividade interna em funo de , para diferentes valores de .

Fonte: Roteiro Experimental

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Com o mdulo de Thiele, estimou-se a difusividade efetiva, Deff, a partir da Equao (15). (15) onde Rp o raio da partcula de gel. As Tabelas de 10 a 12 apresentam os valores de e obtidos para cada concentrao de substrato, dimetro de partcula e temperatura, bem como os dados das respectivas difusividades. Para os casos em que a efetividade calculada foi maior que 1, no foi possvel estimar o Mdulo de Thiele. Tabela 10 Valores estimados de , e Deff (a 60C). Dimetro do catalisador Cs0 (g/L) 270 144 P 54 36 18 270 144 M 54 36 18 270 144 G 54 36 18 1,782 0,950 0,356 0,238 0,119 0,939 0,501 0,188 0,125 0,063 1,066 0,569 0,213 0,142 0,071 3,0 1,5 2,0 0,8 6,5 5,0 4,5 4,0 4,0 10,0 8,5 8,0 7,5 7,0 Deff (m2/min) 1,4910-8 5,9410-8 3,3410-8 1,8510-7 5,0510-8 8,5410-8 1,0510-7 1,3310-7 1,3310-7 5,2410-8 7,2510-8 8,1810-8 9,3110-8 1,0710-7

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Tabela 11 Valores estimados de , e Deff (a 50C). Dimetro do catalisador Cs0 (g/L) 270 144 54 36 18 270 144 54 36 18 270 144 54 36 18 1,153 0,615 0,231 0,154 0,077 2,253 1,202 0,451 0,300 0,150 1,304 0,696 0,261 0,174 0,087 6,0 2,0 4,0 3,0 4,0 3,0 2,0 1,5 6,0 3,0 7,0 8,0 3,0 Deff (m2/min) 7,0410-10 6,3410-9 1,5810-9 2,8210-9 9,1910-8 1,6310-7 3,6810-7 6,5310-7 9,0710-8 3,6310-7 6,6710-8 5,1010-8 3,6310-7

Tabela 12 Valores estimados de , e Deff (a 40C). Dimetro do catalisador Cs0 (g/L) 270 144 54 36 18 270 144 54 36 18 270 144 54 36 18 2,494 1,330 0,499 0,332 0,166 3,282 1,751 0,656 0,438 0,219 3,420 1,824 0,684 0,456 0,228 5,0 2,0 1,5 1,0 6,0 4,5 5,5 5,0 4,0 8,0 7,5 5,0 7,0 4,5 Deff (m2/min) 1,1610-9 7,2310-9 1,2910-8 2,8910-8 2,5510-8 4,5410-8 3,0410-8 3,6710-8 5,7410-8 5,8310-8 6,6310-8 1,4910-7 7,6110-8 1,8410-7

A partir de Deff, calculou-se Ds, pela seguinte relao: (16)

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onde p a porosidade do gel (p = 7), a tortuosidade do gel ( = 0,98) e H o coeficiente de restrio. H pode ser obtido pela Equao de Renkin (17): ( sendo y dado por: (18) em que raioS o raio do soluto e raioP o raio do poro de catalisador. Com o valor de y, foi obtido H = 0,9814, a partir do qual se calcularam as diferentes difusividades Ds. As Tabelas de 13 a 15 apresentam os valores calculados de Ds para cada uma das condies estudadas durante o experimento. Tabela 13 Valores estimados de Ds (a 60C). Dimetro do catalisador Cs0 (g/L) 270 144 P 54 36 18 270 144 M 54 36 18 270 144 G 54 36 18 Ds (cm2/s) 1,0810-7 4,3210-7 2,4310-7 1,3510-6 3,6810-7 6,2210-7 7,6810-7 9,7110-7 9,7110-7 3,8110-7 5,2810-7 5,9610-7 6,7810-7 7,7810-7 )( ) (17)

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Tabela 14 Valores estimados de Ds (a 50C). Dimetro do catalisador Cs0 (g/L) 270 144 54 36 18 270 144 54 36 18 270 144 54 36 18 Ds (cm2/s) 8,5410-7 7,6910-6 1,9210-6 3,4210-6 6,6910-7 1,1910-6 2,6710-6 4,7610-6 6,6010-7 2,6410-6 4,8510-7 3,7110-7 2,6410-6

Tabela 15 Valores estimados de Ds (a 40C). Dimetro do catalisador Cs0 (g/L) 270 144 54 36 18 270 144 54 36 18 270 144 54 36 18 Ds (cm2/s) 8,4210-9 5,2610-8 9,3610-8 2,1110-7 1,8610-7 3,3010-7 2,2110-7 2,6710-7 4,1810-7 4,2410-7 4,8310-7 1,0910-6 5,5410-7 1,3410-6

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4.4

Discusso

O experimento realizado utilizou o modelo cintico de Michaelis-Menten. Para isso, foi necessrio estabelecer algumas condies e hipteses para a validade do modelo. Assim, trabalhou-se com concentraes de frutose muito maiores que a concentrao de enzima, e considerou-se a hiptese de Briggs e Haldane do estado pseudo-estacionrio, ou seja, a velocidade de formao do complexo enzimasubstrato igual a sua velocidade de decomposio, considerada de primeira ordem. Alm disso, o modelo de Michaelis-Menten pressupe apenas um substrato, que o caso da isomerizao da frutose. A partir dos dados experimentais, construiu-se o grfico de velocidade de consumo do substrato em funo de sua concentrao inicial. A linearizao da equao de Michaelis-Menten realizada foi considerada satisfatria, obtendo-se um valor de R igual a 0,9966. Comparando-se os valores obtidos de velocidade mxima de consumo de substrato, possvel afirmar que o aumento da concentrao inicial de frutose promoveu o aumento da velocidade da reao. De fato, o crescimento na concentrao de substrato promove a maior ocupao dos stios ativos da enzima, aumentando, assim, a interao substrato-catalisador. Pde-se perceber tambm que o aumento do dimetro da partcula acarretou na diminuio da velocidade de reao, j que, quanto maior a partcula, maior o efeito difusivo, dificultando ainda mais a transferncia de substrato ao interior do catalisador, onde se encontram alojados os stios ativos da enzima. O aumento da temperatura tambm ocasionou o aumento da velocidade de formao de produto, pois a enzima atua melhor a temperaturas entre 60C e 80C(6). No foi possvel verificar, durante o experimento realizado, a desnaturao trmica do catalisador, que ocorre com o crescimento da temperatura. Os parmetros vmx e Km determinados para a enzima livre so intrnsecos a enzima, enquanto que os parmetros obtidos para a enzima imobilizada so aparentes, pois refletem o que ocorrem na superfcie ou interior do catalisador, sendo estimados na presena de efeitos difusionais internos e externos. O experimento realizado trabalhou com o gel quitosana ativado com glutaraldedo. Por ser um suporte poroso, os efeitos difusivos internos e externos

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no so levados em conta separadamente, ou seja, a efetividade encontrada foi determinada experimentalmente e representa, principalmente, aquela interna. Em virtude da inconsistncia dos dados experimentais, no foi possvel avaliar a difusividade do catalisador. Como cada grupo empregou condies operacionais diferentes, o erro de cada experimentador promoveu uma srie de propagao de erros que influenciaram de forma significativa nos dados experimentais. Alm disso, o emprego de diferentes solues de GOD-PAP, a perda de massa de catalisador durante a sua transferncia at o reator encamisado, problemas no momento da pipetagem tambm contriburam para a obteno de dados experimentais inadequados. A alta agitao no reator (por volta de 300 rpm, considerando a sensibilidade da enzima) permite que se faa uma aproximao da concentrao de substrato prximo a superfcie do catalisador como igual a concentrao do meio. Assim, subentende-se que os efeitos difusivos internos so mais relevantes que os externos, efeitos estes expressos a partir da efetividade experimental. Por fim, tambm no foi possvel realizar uma anlise da influncia do dimetro de catalisador na energia de ativao, devido variao dos valores medidos, os quais no apresentaram uma tendncia definida. Contudo, espera-se que a energia de ativao aumente com o dimetro do catalisador, pois o aumento difusivo diminui a velocidade de reao, desacelerando a catlise.

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CONCLUSO
Os parmetros cinticos obtidos para todos os grupos apresentaram-se

condizentes com o esperado, j que de forma geral, os valores de vmax aumentaram com a temperatura e diminuram com o tamanho de partcula de catalisador. Os valores de difusividade molecular (Ds) calculados se apresentaram da mesma ordem de grandeza dos valores disponveis na literatura
(7)

, apesar da

inconsistncia de tais valores entre as diferentes temperaturas e dimetros, devidos principalmente aos erros referentes leitura do baco de Thiele e erros experimentais propagados. Por fim, o experimento se mostrou adequado no que se prope ao estudo dos efeitos difusivos na cintica de uma reao catalisada por enzima imobilizada, processo de grande importncia econmica e tecnolgica.

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6
[1]

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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Queiroz" - ESALQ USP. Disponvel em: <http://docentes.esalq.usp.br/luagallo/ enzimas.html>. Acesso em 25 de outubro de 2013. [2] MARIOTTO, J.R. Cintica Enzimtica. Estgio de Docncia. Julho de 2006.

30p. Disponvel em: <http://www.enq.ufsc.br/labs/probio/disc_eng_bioq/apostilas/ Apostila_cinetica_enzimatica_ju.pdf>. Acesso em 07 de outubro de 2013. [3] BIOCINCIA. Actividade enzimtica. Abril de 2011. Disponvel em: Acesso

<http://bio12-ciencia.blogspot.com.br/2011/04/actividade-enzimatica.html>. em 07 de outubro de 2013. [4]

DIAS, F.R.F.; FERREIRA, V.F.; CUNHA, A.C. Uma Viso Geral dos

Diferentes Tipos de Catlise em Sntese. Rev. Virtual de Qumica. 2012, 4 (6), 840-871. [5] CARDOSO, C. L.; MORAES, M. C.; CASS, Q.B.. Imobilizao de enzimas

em suportes cromatogrficos: uma ferramenta na busca por substncias bioativas. Qum. Nova [online]. 2009, vol.32, n.1, pp. 175-187. [6] FABER, M. O. Isomerizao Enzimtica de Glicose a Frutose em

Biorreator de Leito Fixo Alimentado Continuamente. Dissertao de Mestrado. Rio de Janeiro: UFRJ, 2011. Disponvel em: <http://tpqb.eq.ufrj.br/download/ isomerizacao-enzimatica-de-glicose-e-frutose.pdf>. Acesso em 07 de outubro de 2013. [7] GIORDANO, R. L. C.; GIORDANO, R. C.; COONEY, C. L. A study on intradiffusion effects in enzymatic reactions: glucose-fructose

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