UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIS ESCOLA DE VETERINRIA E ZOOTECNIA PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM CINCIA ANIMAL

Disciplina: SEMINRIOS APLICADOS

TANINOS E SAPONINAS

Fernanda Vieira Castejon Orientador: Prof. Dr. Jos Henrique Stringhini

GOINIA 2011

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FERNANDA VIEIRA CASTEJON

TANINOS E SAPONINAS

Seminrio apresentado junto disciplina Seminrios Aplicados do Programa de Psgraduao em Cincia Animal da Escola de Medicina Veterinria e Zootecnia da Universidade Federal de Gois

Nvel: Mestrado

rea de concentrao: Produo animal

Linha de pesquisa: Metabolismo nutricional, alimentao e forragicultura na produo animal

Orientador: Prof. Dr. Jos Henrique Stringhini EVZ/UFG Comit de orientao: Prof. Dr. Edemilson Cardoso da Conceio FF/UFG Prof. Dra. Elisabeth Gonzales EVZ/UFG

GOINIA 2011

iii SUMRIO

1 2 2.1

INTRODUO ............................................................................................. 1 REVISO DA LITERATURA ........................................................................ 3 TANINOS ................................................................................................. 3 Caracterizao qumica e classificao ................................................ 3 Atividade biolgica ................................................................................ 5 Complexao taninos-protenas ............................................................ 9 Utilizao comercial ............................................................................ 10 Taninos na nutrio animal ................................................................. 11 SAPONINAS........................................................................................... 14 Caracterizao qumica e classificao .............................................. 14 Distribuio no reino vegetal ............................................................... 15 Propriedades biolgicas ...................................................................... 16 Utilizao comercial ............................................................................ 18 Saponinas na nutrio animal ............................................................. 18

2.1.1 2.1.2 2.1.3 2.1.4 2.1.5 2.2 2.2.1 2.2.2 2.2.3 2.2.4 2.2.5 3

CONSIDERAES FINAIS ....................................................................... 20

REFERNCIAS ................................................................................................ 21

INTRODUO

Taninos e saponinas so substncias conhecidas por algumas de suas caractersticas marcantes, como a adstringncia e fator antinutricional dos taninos e a funo emulsificante das saponinas. Porm, as caractersticas de conhecimento comum so poucas frente a diversidade de mecanismos de ao e possveis usos ainda desconhecidos na indstria em geral. H vrias linhas de pesquisas sobre compostos tnicos e saponinas, tanto na fisiologia vegetal, quanto na atividade biolgica/farmacolgica desses compostos. So estudos feitos sobre metodologias de identificao e determinao em plantas; avaliao da variao da concentrao na planta, entre plantas da mesma espcie e relacionadas ao clima; relao com insetos herbvoros; usos na alimentao humana; alimentao animal; usos em processos industriais, etc. Na alimentao humana e animal, a busca crescente por alimentos nutracuticos e aditivos fitognicos que substituam produtos industriais atualmente utilizados em maior escala tem se constitudo em grande motivao de pesquisas. Os taninos e saponinas j foram identificados como princpios ativos de vrios extratos vegetais pesquisados pela farmacognosia mundial. Uma vertente de pesquisas dentro da farmacognosia que tem sido utilizada com o objetivo de facilitar o processo de descoberta de novas substncias a etnofarmacologia. A etnofarmacologia o ramo da Etnobiologia/Etnobotnica que associa informaes obtidas de comunidades que fazem o uso da flora medicinal com estudos qumicos/farmacolgicos realizados em laboratrios especializados. No o interesse principal isolar todos os compostos ou um composto em particular, e sim identificar os compostos responsveis pela ao farmacolgica (ELISABETSHY, 2001). Assim, tem se interesse em conhecer os principais princpios ativos das plantas com potencial de uso tanto na medicina humana, quanto na animal. Os compostos tnicos so responsveis pela adstringncia de muitos frutos e outros produtos vegetais. A adstringncia ocorre devido precipitao de glicoprotenas salivares, levando perda do poder lubrificante (BRUNETON, 1991). So compostos fenlicos, e portanto so altamente reativos quimicamente que formam pontes de hidrognio, intra e

2 intermoleculares (MONTEIRO et al. 2005). Estes compostos so facilmente oxidveis, tanto por enzimas vegetais especficas quanto por influncia de metais, como cloreto frrico, o que ocasiona o escurecimento de suas solues (MELLO & SANTOS, 2001). Possuem a habilidade de formar complexos insolveis em gua com alcalides, gelatina e outras protenas, caractersticas nas quais so baseados os principais testes de deteco. A complexao entre taninos e protenas a base para suas propriedades como fator controlador de insetos, fungos e bactrias, assim como para seus principais usos industriais (Ex: manufatura do couro). So compostos do metabolismo secundrio vegetal ou metabolismo especial e so importantes nas interaes entre a planta e seu ecossistema. As saponinas em soluo aquosa formam espuma persistente e abundante. Essas atividades provem do fato de apresentarem em sua estrutura uma parte lipoflica denominada aglicona ou sapogenina e uma parte hidroflica constituda por um ou mais acares (SCHENKEL et al., 2001). A espuma formada estvel ao de cidos minerais diludos, diferenciando-se dos sabes comuns. Alguns dos compostos saponsidos desorganizam a membrana dos glbulos vermelhos do sangue, o que pode levar hemlise. Outra caracterstica encontrada a capacidade de complexar com esterides, que utilizada para explicar a ao antifngica e hipocolesterolmiante (CUNHA & ROQUE, 2005). Em animais que ingerem raes com saponinas como aditivo, h reduo da liberao de amnia das fezes (reduzindo o odor) e aumento da consistncia das mesmas. Tais caractersticas so interessantes para a criao de ces e gatos, e em criaes comerciais de sunos e aves. Pode resultar em melhoria da qualidade do ar, qualidade de cama, facilidade de limpeza de instalaes, e outros benefcios que levam melhoria do desempenho produtivo. Sendo, portanto, molculas promissoras como aditivos em raes animais. Com essa reviso, objetivou-se estudar esses dois importantes princpios ativos encontrados em plantas: taninos e saponinas.

3 2 REVISO DA LITERATURA

2.1

TANINOS

2.1.1 Caracterizao qumica e classificao

Os taninos so divididos de acordo com a estrutura qumica em dois grandes grupos: taninos hidrolisveis e taninos condensados. Os taninos hidrolisveis esto presentes nas famlias Choripetalae das dicotiledneas, dicotiledneas herbceas e lenhosas (MELLO & SANTOS, 2001). Algumas rvores desta classe, como o castanheiro e o carvalho so utilizadas como fontes industriais de tanino. Taninos hidrolisveis (figura 1) possuem um grupo poliol central (em sua maioria, -d- glicose, mas tambm o cido qunico, outros fenis e outros glicsidos); e hidroxilas esterificadas pelo cido glico (parte fenlica) (KHANBABAEE & REE, 2001).

FIGURA 1 - Estrutura de taninos hidrolisveis FONTE: NAKAMURA et al. (2003)

Os taninos hidrolisveis so ainda classificados em galotaninos e elagitaninos. Os galotaninos so compostos por unidades de cido glico unidos por ligaes depsdicas entre elas (figura 2). CLIFFORD et al. (2000) relataram que so extremamente raros na dieta humana. De acordo com os autores, o cido tnico, utilizado comercialmente uma mistura de vrios taninos glicos. extrado principalmente de folhas e galhas de arbustos do

4 gnero Rhus (sumagre), das vagens de Caesalpinia spinosa (tara) e das galhas de vrias espcies de carvalho.

FIGURA 2 - Exemplo de ligao depsdica formada entre o grupo fenlico superior e o grupo inferior de uma unidade de cido glico FONTE: HARVEY (2001).

Os elagitaninos so molculas que possuem um ou dois resduos de hez-hidroxidifenoila de configurao R ou S, os quais so obtidos pelo acoplamento oxidativo C-C entre dois resduos de cido glico adjacentes. Aps a hidrlise cida das ligaes steres, ocorre a liberao do cido difnico, que se rearranja espontaneamente para o cido elgico. Os elagitaninos isolados at o presente so monmeros, dmeros, trmeros e tetrmeros (MELLO & SANTOS, 2001). Na alimentao humana, os elagitaninos so encontrados apenas em grupos restritos de alimentos tais como framboesa, morango, castanha, avel, caju e pistachio. Estes taninos foram encontrados, tambm, em partes no comestveis de plantas, como as folhas. possvel encontrar taninos elgicos em vinhos envelhecidos em barricas de madeira de carvalho, como resultado da sua difuso da madeira durante o estgio de produo em barricas (CLIFFORD et al., 2000). Os taninos condensados ou proantocianidinas esto distribudos por diversas famlias do reino vegetal, em geral, em plantas lenhosas. So polmeros de flavan-3-ol e/ou flavan-3,4-diol (figura 3), produtos do

metabolismo do fenilpropanol (HEIL et al., 2002). As proantocianidinas so assim denominadas pelo fato de apresentarem pigmentos avermelhados da

5 classe das antocianidinas, como cianidina e delfinidina. As molculas tm grande variao estrutural, resultante de padres de substituies entre unidades flavnicas, diversidade de posies das ligaes e a estereoqumica (MELLO & SANTOS, 2001).

FIGURA 3 - Estrutura qumica de taninos condensados FONTE: LEKHA & LONSANE (1997).

A anlise de proantocianidinas nos alimentos torna-se difcil pela, j mencionada, variedade de estruturas existentes e escassez de tcnicas analticas que permitam a sua separao, identificao e quantificao. Apesar de os polmeros constiturem a maioria dos polifenis das plantas, a anlise qumica se limita, normalmente, a monmeros, dmeros e alguns trmeros (CHEYNIER, 2005). Os taninos condensados so mais comuns na dieta humana do que os taninos hidrolisveis. Esto presentes em concentraes relativamente importantes em alguns frutos (uvas, mas, etc.) e suas bebidas derivadas, no cacau e chocolate (SANTOS-BUELGA & SCALBERT, 2000).

2.1.2 Atividade biolgica

Diversos

estudos

sobre

atividade

dos taninos evidenciaram

importante ao antibacteriana, ao sobre protozorios, na reparao de tecidos, regulao enzimtica e protica, entre outros. Estes efeitos dependem da dose, tipo de tanino ingerido e perodo de ingesto.

6 Atividades bactericidas e fungicidas ocorrem por trs caractersticas gerais comuns aos dois grupos de taninos: complexao com ons metlicos; atividade antioxidante e seqestradora de radicais livres; habilidade de complexar com outras molculas, principalmente protenas e polissacardeos (MELLO & SANTOS, 2001). Tm sido atribudas aos taninos muitas atividades fisiolgicas humanas, como a estimulao das clulas fagocticas e a ao tumoral, e atividades antiinfectivas (LOGUERCIO, 2005). Em processos de cura de feridas, queimaduras e inflamaes, os taninos auxiliam formando uma camada protetora (complexo tanino-protena e/ou polissacardeo) sobre tecidos epiteliais lesionados, permitindo que, logo abaixo dessa camada, o processo de reparao tecidual ocorra naturalmente (MELLO & SANTOS, 2001). Em patologias estomacais, o mecanismo de ao bem semelhante, com a formao de uma camada de tanino-protena complexados que envolvem a mucosa estomacal (HASLAM, 1989). A atividade antioxidante e ao em lceras gstricas do extrato de Syzygium jambos cujos princpios ativos nas folhas so flavonides, taninos e leos volteis; foi investigada por DONATINI et al. (2009). O contedo de taninos das folhas e do extrato foi calculado, respectivamente, em 21,9% e 43,3%. A administrao oral prvia do extrato (400 mg/kg) a ratos Wistar reduziu significativamente as leses gstricas induzidas por etanol acidificado. Porm, no modelo de lcera subcrnica e induo de leso gstrica com cido actico a 30%, o tratamento com o extrato (400 mg/kg) no apresentou resultado significativo. O mecanismo de atividade antioxidante atribuda aos flavonides e taninos auxilia no processo de cura, j que os radicais livres so um fator importante na formao de leses ulcerativas e erosivas do trato gastrintestinal (BORRELLI & IZZO, 2000; CARBONEZI et al., 2007). Vrias doenas degenerativas (cncer, esclerose mltipla,

arteroesclerose, etc.) e o processo de envelhecimento esto associados a altas concentraes de radicais livres. Como os taninos atuam como captadores de radicais, interceptam o oxignio ativo formando radicais estveis (MELLO & SANTOS, 2001), seria interessante que houvessem mais estudos sobre taninos e sua interferncia em processos patolgicos.

7 J as propriedades antimicrobianas dos taninos, so bem

conhecidas e documentadas. Porm, os resultados ainda so controversos, e em apenas alguns trabalhos se faz a diferenciao do tipo de tanino presente no extrato, o que poderia esclarecer as dvidas quanto aos efeitos observados. SCALBERT (1991) afirma que taninos condensados e hidrolisveis no apresentam diferenas significantes frente a fungos e bactrias, e justifica que o efeito da toxicidade relacionado estrutura molecular do tanino ainda desconhecido. LOGUERCIO et al. (2005) realizaram estudo para avaliar a existncia de efeito antibacteriano do extrato hidro-alcolico a 10% (m/v) de folhas de jambolo (Syzygium cumini (L.) Skeels). As folhas so ricas em taninos e saponinas. A investigao partiu da utilizao popular como adstringente, diurtico, antidiabtico e estomquico. Foram utilizadas vrias cepas bacterianas gram positivas e gram negativas e comparado os halos de inibiao de crescimento bacteriano causados pelo extrato, etanol, soluo salina e antimicrobiano padro para teste de resistncia especfico para cada bactria. Os resultados obtidos se encontram na Tabela 1.

Tabela 1.

Dimetros mdios do halo de inibio (em mm) avaliados pelo mtodo de difuso em gar (Kirby-Bauer)

Isolado bacteriano

Extrato Etanol GRAM POSITIVAS Staphylococcus sp. 147/02 22a* 5,67b Staphylococcus sp. 558/96 20a 5b S. aureus 147/02 12a 6bc S. aureus 144/98 16,33b 1,67c S. intermedius 115/92 24b 5c S. aureus ATCC 25923 26,67b 2c Bacillus cereus 179/94 14,67b 4,33c Corynebacterium sp. 083/99 25,67b 7,33c Rhodococcus equi 488/01 19,67a 5b Streptococcus canis 154/90 15b 4c GRAM NEGATIVAS E. coli 120/93 17a 4,33bc E. coli 158/93 17,33a 2,33b E. coli ATCC 25922 23,33a 2c Salmonella typhi ATCC 6539 22,67b 1,33c S. Chorelasuis ATCC 10708 24,33a 1,33c Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 21b 1,33c Proteus sp. 447/01 12,67a 1c

Soluo Salina 1,0c 6,67b 2,67c 4c 6,33c 7,67c 4c 7,67c 5,33b 3,33c 2,67c 2b 0,67c 1,67c 2,67c 2c 0,67c

Antimicrobiano 4,33b 8b 10,67ab 24a 29,33a 38,33a 22a 31,67a 22a 29,67a 8,67b 21,33a 10,67b 31,33a 18,33b 30a 9,33b

*Mdias seguidas de letras desiguais diferem entre si pelo teste de Duncan em nvel de 5% de probabilidade de erro. Fonte: Adaptada de LOGUERCIO et al. (2005)

8 O extrato apresentou efeito inibitrio sobre vrias bactrias, inclusive apresentando resultados melhores que antimicrobianos comerciais. Diferenas de atividade frente bactrias gram-positivas e gram-negativas so atribudas constituio da parede celular bacteriana. Bactrias gram-positivas possuem paredes celulares quimicamente menos complexas e tm menor teor lipdico do que as gram-negativas. AURICCHIO et al. (2007) realizaram experimento para verificao de possveis aes antimicrobianas, antioxidantes e txicas do extrato

hidroalcolico de Eugenia uniflora L, composto por flavonides e taninos (20,06%).O extrato demonstrou atividade antimicrobiana a Staphylococcus aureus, Salmonela cholerasuis e Pseudomonas aeruginosa. Pelos dados das anlises realizadas, foi verificada a atividade antioxidante in vitro e a baixa toxicidade no ensaio agudo com camundongos. O efeito foi atribudo aos compostos fenlicos, principalmente os taninos. Ao antiviral de taninos foi pesquisada por COHEN et. al. (1964). Realizaram inoculao do extrato de Melissa officinalis em ovos embrionados com 9 a 11 dias de idade, e posteriormente desafiaram com os vrus Newcastle, Herpes, Vaccinia, Semliki Forest. A administrao prvia do extrato possibilitou a sobrevivncia dos embries, sugerindo a atuao de taninos nos mecanismos de infeco viral. A atividade antiparasitria relatada em alguns trabalhos. VILLALBA et al. (2010) realizaram experimento em que buscaram avaliar a preferncia de consumo entre feno de alfafa ou feno de alfafa misturado com quebracho (Schinopsis quebracho-colorado), que fonte de tanino, e a carga parasitria em cordeiro. O grupo de tratamento com feno de alfafa acrescido de quebracho apresentou nveis menores de carga parasitria. Os resultados obtidos da preferncia de consumo levaram os autores a concluir que os animais naturalmente infectados procuram alimentar da mistura com taninos que sugere mecanismo semelhante a auto-medicao. Em recente estudo realizado por SIA et al. (2011), foi avaliado a ao do extrato de Mimosa pudica em veneno de Naja kaouthia, e foi comparado com taninos utilizados comercialmente (cido tnico) no tratamento de picadas. A pr-incubao do veneno com o extrato manteve 100% de sobrevivncia no grupo de ratos aps 24 horas. Foi considerado mais eficaz

9 que o cido tnico comercial, neste experimento. A avaliao de protenas do veneno indicou a ausncia de dois spots de protenas indicando a regulao das mesmas pelos taninos de Mimosa pudica.

2.1.3 Complexao taninos-protenas

Os

complexos

taninos-protenas

podem

ser

reversveis

ou

irreversveis. Os reversveis so estabelecidos por pontes de hidrognio e interaes hidrofbicas, enquanto que os irreversveis ocorrem em condies oxidativas via ligaes covalentes. Acredita-se que as interaes hidrofbicas atuam como foras de atrao inicial na complexao em meio aquoso entre taninos e protenas (MELLO & SANTOS, 2001). A capacidade de complexao varia com a estrutura qumica. Peso molecular e a flexibilidade da molcula so fatores importantes no processo de complexao. Se o peso molecular muito alto, a molcula pode no intercalar entre os espaos interfibrilares das protenas ou macromolculas; se muito baixo, a molcula fenlica no forma nmero suficiente de ligaes que mantenham a estabilidade (BRUNETON, 1991). Os complexos irreversveis ocorrem, na planta, quando os tecidos so danificados, tanto por auto-oxidao quanto por oxidao catalisada por enzimas. Os fenis so transformados em quinonas que reagem com grupos nucleoflicos na protena por ligaes covalentes (HASLAM, 1989). CARVALHO (2007) estudou a interao entre trs tipos de protenas (BSA, IB8c e -amilase) e taninos condensados, e a possvel interferncia de polissacardeos comerciais (dextrano, glicose, arabinogalactana, -

ciclodextrina, pectina, goma arbica, cido poligalacturnico e xantano) na formao do complexo. Verificou-se que os polissacardeos inicos (xantano, a pectina e a goma arbica) mostraram ser bastante eficazes na inibio da agregao entre as protenas estudadas e os taninos, contrariamente a acares neutros como a glicose, a arabinogalactana e a - ciclodextrina. O mesmo autor utilizou dois mecanismos para explicar os resultados obtidos. O primeiro que os polissacardeos podem formar estruturas em soluo capazes de encapsular polifenis inibindo, assim, as interaes com as

10 protenas. Por outro lado, podem formar complexos ternrios de protenatanino-polissacardeo que, pelo carter inico dos polissacardeos, seria mais solvatado em soluo e isto poderia diminuir a agregao. Pelos resultados obtidos com as diferentes protenas (BSA, IB8c e -amilase), constatou-se que existe grande dependncia da concentrao de protena e de tanino no fenmeno da agregao.

2.1.4 Utilizao comercial

Atualmente, vrios so os usos dos compostos tnicos. O uso no curtimento do couro feito a milhares de anos merece destaque j que utiliza grandes quantidades dos taninos vegetais no dito curtimento vegetal e em outras etapas do processo. Geralmente, utilizado para produo de solas e de tipos especiais de couro, e tambm em combinao com os outros tipos de curtimento (sinttico, por exemplo). Pelo seu alto custo, os taninos so reutilizados o mximo possvel, fazendo s a reposio de soluo para o lote seguinte. Com o aumento do uso de materiais sintticos na fabricao de solas, o curtimento vegetal de couro para este fim diminuiu significativamente (PACHECO, 2005). As espcies vegetais mais utilizadas como fontes de taninos so quebracho (Schinopsis spp.) e accia (Acacia mearnsii De Wild.). Alm dessas so produzidos tambm a partir dos gneros eneros, Tsuga, Castanea, Quercus, Terminalia (MELLO & SANTOS, 2001). Taninos condensados tm sido usados para fabricao de polmeros e resinas (BATTESTIN et al., 2004 ). Esses polmeros tm sido utilizados como um meio para reduzir o fluxo de gua em barragens, para estabilizar o solo em fundaes de construes, na produo de borrachas, na fabricao de conglomerados e laminados de madeira. Na fabricao de resinas de troca catinica, as caractersticas so semelhantes s resinas derivadas do petrleo (LELIS & GONALVES, 2001). Tambm so relatados como agentes floculantes ou coagulantes para o tratamento de gua (PORTER & HEMINGWAY, 1989; citado por BATTESTIN et. al, 2004).

11 Quando sulfonados, os taninos condensados podem ser

empregados para formar complexos de metais pesados solveis em gua, utilizados em plantas ctricas com deficincia de ferro ou na complexao com chumbo no controle de poluio em rodovias. Para a preservao da madeira, complexos com cobre so efetivos biocidas (MELLO & SANTOS, 2001). Taninos tambm esto presentes em bebidas de consumo humano, nas quais so responsveis pelo sabor adstringente de vinhos, sucos de frutas, chs e outras bebidas. O cido tnico utilizado na produo de cerveja para reduzir a concentrao protica pela precipitao como complexos taninoproteicos (REINOLD, 1999). Os flavan-3-is, proantocianidinas e antocianidinas tm grande importncia para o desenvolvimento de sabor e aparncias do vinho tinto em seu processo de envelhecimento (SINGLETON, 1992).

2.1.5 Taninos na nutrio animal

Os taninos condensados so bastante conhecidos como fatores antinutricionais de alimentos utilizados em dietas dos animais de produo. Representam o grupo mais importante de polifenis na nutrio animal, em funo dos efeitos deletrios no aproveitamento das raes e no desempenho produtivo dos animais (WARREHAM et al., 1994). MITJAVILA et al. (1977) verificaram que o cido tnico adicionado na dieta de ratos aumentou a excreo de cido silico e glicosamina, indicando que o excesso de nitrognio liberado nas fezes seria de origem metablica (muco gastrointestinal). Nesse estudo, foram utilizadas pequenas doses de cido tnico, doses que so normalmente encontradas em alimentos consumidos. O aumento do muco no foi suficiente para proteo das mucosas, que na anlise histopatolgica evidenciou necrose intestinal e eroso nas clulas da camada mucosa. Os taninos na nutrio animal interferem de maneira distinta em animais monogstricos e ruminantes. Em ruminantes, os taninos podem produzir efeitos positivos reduzindo a quantidade de protena digerida no rmen e, aumentar a quantidade de protena disponvel no intestino delgado, eliminar parasitas e diminuir o timpanismo espumoso (MUELLER-HARVEY, 2010).

12 Para monogstricos, como sunos, aves e peixes, os taninos condensados afetam o valor nutricional dos alimentos, como conseqncia da formao de complexos com as protenas da dieta, com carboidratos e outros nutrientes; pela inibio da atividade de vrias enzimas digestivas, pela diminuio da absoro de outros nutrientes atravs da parede celular, devido formao de complexos com ons divalentes de metais e pela eroso de clulas epiteliais do intestino (WARREHAM et al., 1994). Podem inibir enzimas relacionadas digesto de carboidratos (-amilase, -glicosidades), de lipdios (lipase pancretica e gstrica) e de protenas (tripsina e proteases diversas) (McDOUGALL et al., 2005). Foi conduzido estudo por PINTO et al. (2001) para avaliar o efeito dos taninos condensados proveniente de produto concentrado de barbatimo no desempenho e composio da carcaa do piauu (Leporinus sp.). Concluiuse que embora a presena de at 0,69% de taninos na rao no tenha comprometido a converso alimentar aparente e taxa de eficincia protica das raes, nveis iguais ou superiores a 0,46% resultaram em ganho de peso significativamente inferior para o piauu. A espcie se mostrou sensvel presena de taninos condensados que prejudicaram o metabolismo e o valor biolgico dos nutrientes presentes nas raes. J em tilpias-do-nilo, AIURA et al. 2007 testaram fontes de taninos hidrolisveis (cido tnico 0,34 e 0,60%), taninos condensados (sorgo com alto e baixo taninos) no desempenho e deposio lipdica na carcaa. A maior deposio lipdica corporal foi observada nas dietas com cido tnico; a dieta de sorgo com alto teor de tanino resultou em carcaas mais magras do que as de sorgo com baixo teor de tanino. Dietas com sorgo proporcionaram menores teores de gordura visceral. Concluram que a presena de tanino nas raes no prejudicou o desempenho da tilpia-do-nilo. As diferenas de resultados observadas na literatura entre trabalhos com peixes podem ser explicadas pelo tipo de digesto diferenciado entre as espcies (cida ou bsica), fato que pode interferir na formao dos complexos taninos-protenas. Alguns dos principais ingredientes usados na confeco de raes comerciais que contm quantidades significantes de taninos so a soja, o

13 sorgo, a canola e o girassol. O sorgo separado em duas categorias com relao a quantidade de taninos: sorgo alto e baixo tanino. Segundo GARCIA et al. (2004), entre os alimentos alternativos, o sorgo destaca-se como capaz de reduzir os custos de forma significativa na alimentao de aves. Os autores no verificaram diferena entre os coeficientes de digestibilidade da protena bruta obtida para a dieta de sorgo alto tanino comparada com o sorgo baixo tanino. O grupo tratado com milho apresentou melhores resultados para os parmetros avaliados. Em outro trabalho, GARCIA et al. (2005) afirmam que apesar da maior parte do sorgo produzido atualmente no Brasil possuir baixo tanino, em algumas regies (Sul e Nordeste), h necessidade do cultivo de variedades com alto teor de tanino pela susceptibilidade do gro ao ataque de pssaros. Os autores avaliaram dietas com milho e farelo de soja, sorgo com alto tanino e farelo de soja e sorgo com baixo tanino e farelo de soja e o desempenho, o rendimento de carcaa e medidas gastrintestinais de frangos. Concluram, que ao utilizar sorgo com alto tanino (cultivar AG3002 com 1,89 g/kg de tanino) e sorgo com baixo tanino (cultivar SAARA com 0,49 g/kg) em substituio ao milho no houve efeito para desempenho e rendimento de carcaa, vsceras e medidas de intestinos (comprimento e peso relativo). Anteriormente, NUNES et al. (2001) observaram que ao substituir o milho pelo sorgo em dietas de frangos, houve atrofia na mucosa do leo e encurtamento das vilosidades, resultando em distoro de sua arquitetura, edema no tecido conectivo das vilosidades, hiperplasia e hipertrofia das clulas de goblet (secreo de muco), alm de hipertrofia da glndula partida. Em eqinos, OLIVEIRA et al. (2007) realizaram estudo para avaliar o efeito nutritivo de gros secos ou ensilados de sorgo de baixo e alto contedos de tanino e a cintica do trato digestrio. Os valores de digestibilidade da protena bruta para as dietas contendo gros de sorgo de baixo teor de tanino (seco ou ensilado) e gros ensilados de alto contedo de tanino foram superiores aos da dieta com gros secos de sorgo de alto nvel de tanino. Demonstra o efeito benfico da ensilagem na desativao dos taninos, evitando que se liguem protena da dieta. GOLLCHER et al. (2010) compararam o valor nutritivo de silagens de gros de sorgo de baixo e alto teor de tanino na alimentao de equinos.

14 Concluram que a utilizao da silagem de gros de sorgo com baixo tanino um alimento alternativo promissor nas formulaes das dietas de eqinos. Para diminuir os efeitos deletrios ocasionados por taninos nas dietas, alm do processo de silagem, alguns tratamentos esto sendo pesquisados. PEREIRA FILHO et al. (2003) avaliaram o tratamento da silagem de jurema-preta (Mimosa tenuiflora. Wild) com hidrxido de sdio e a interferncia na concentrao de taninos. A concentrao de tanino total na MS do feno de jurema-preta diminui linearmente com o aumento de hidrxido de sdio na soluo alcalina utilizada no tratamento qumico, reduziu em at 27% o teor de tanino.

2.2

SAPONINAS

2.2.1 Caracterizao qumica e classificao

Saponinas so glicosdeos de esterides ou de terpenos policclicos. uma estrutura com carter anfiflico, parte da estrutura com caracterstica lipoflica (triterpeno ou esteride) e outra hidroflica (acares). Essa caracterstica determina a propriedade de reduo da tenso superficial da gua e suas aes detergentes e emulsificante (SCHENKEL et al., 2001). So classificadas de acordo com o nmero fundamental da aglicona, e tambm, pelo seu carter cido, bsico ou neutro. Assim, quanto a aglicona, denominam-se saponinas esteroidais e saponinas triterpnicas.

Figura 4 cido glicirricnico, um triterpeno pentacclico FONTE: SIEDENTOPP (2008).

15 O carter cido ocorre pela presena de grupamento carboxila na aglicona ou na cadeia de acares. O carter bsico decorre da presena de nitrognio, em geral sob forma de uma amina secundria ou terciria, como nos glicosdeos nitrogenados esteroidais (SCHENKEL et al., 2001). Outra classificao refere-se ao nmero de cadeias de acares ligado na aglicona. Assim, saponinas monodesmosdicas possuem cadeia de acares, enquanto as saponinas bidesmosdicas possuem duas cadeias de acares, a maioria com ligao ter na hidroxila em C-3 e a outra com ligao ster (WINA et al., 2005).

2.2.2 Distribuio no reino vegetal

As saponinas esteroidais e triterpnicas apresentam distribuio diferenciada no reino vegetal. As saponinas esteroidais neutras so encontradas quase que exclusivamente em monocotiledneas, principalmente nas famlias Liliaceae, Dioscoreaceae e Agavaceae. Os Gneros Smilax, Dioscorea, Agave, Yucca so especialmente ricos nessas saponinas. Na alimentao humana, saponinas esteroidais so encontradas na aveia, pimentas, berinjela, semente de tomate, aspargos, inhame, feno-grego e ginseng (FRANCIS et al., 2002). As saponinas esteroidais bsicas ou alcalodicas so encontradas principalmente no gnero Solanum, pertencente famlia Solanaceae. As saponinas triterpnicas encontram-se predominantemente em dicotiledneas, principalmente nas famlias Sapindaceae, Hippocastanaceae, Sapotaceae, Polygalaceae, Caryophylaceae, Primulaceae e Araliaceae. Saponinas triterpnicas tem sido detectadas em muitas

leguminosas, como a soja, feijes, ervilhas; e tambm na acelga, chs, acar, alcauz, quinoa, girassol e ginseng. Sendo que o grupo de triterpenides mais estudados obtido a partir da Quillaja saponaria, uma rvore nativa da regio dos Andes, no Chile.

16 2.2.3 Propriedades biolgicas

As saponinas so substncias derivadas do metabolismo secundrio das plantas, relacionados, principalmente, com o sistema de defesa. So encontradas nos tecidos que so mais vulnerveis ao ataque fngico, bacteriano ou predatrio dos insetos (WINA et al., 2005), considerando-se parte do sistema da defesa das plantas e indicadas como fitoprotetoras (PIZARRO, 1999). Essa atividade seria devido a interao com os esteris da membrana (FRANCIS et al., 2002). O comportamento anfiflico das saponinas e a capacidade de formar complexos com esterides, protenas e fosfolipdeos de membranas

possibilitam aes biolgicas variadas. Vale ressaltar a ao sobre membranas celulares que pode alterar a permeabilidade ou at mesmo levar destruio (SCHENKEL et al., 2001). Relacionadas com essa ao sobre membranas, esto as atividades hemolticas, ictiotxica e molusquicida. A irritao causada nas mucosas relata por alguns autores como fator que impede o desenvolvimento de aplicaes prticas. LVARES (2006), verificou a tendncia de diminuio nos parmetros sanguneos de hemcias e hematcrito aps a adio de extrato de Yucca schidigera na rao de ces adultos. Porm, ainda permancendo dentro dos valores de referncia. No houve alteraes significativas em outros parmetros sanguneos avaliados (protenas totais, protenas plasmticas totais, albumina, globulina, ALT, AST, fosfatase alcalina, uria, creatinina, colesterol). A capacidade de ligao das saponinas com esteris (colesterol como principal objeto dos estudos) tm sido investigados principalmente na medicina humana. Atividades hipocolesterolemiante so relatadas. O

mecanismo da ao poderia ser explicado pelo aumento da excreo do colesterol por formao de complexo com as saponinas administradas por via oral, ou pelo aumento da eliminao fecal de cidos biliares com maior utilizao do colesterol para sntese dessas substncias. Outra proposta, leva em considerao as propriedades irritantes das saponinas. Com a formao dos complexos entre as saponinas e o colesterol

17 das membranas das clulas da mucosa intestinal, ocorreria uma esfoliao com perda da funo e reduo da rea de absoro (CHEEKE, 1996). FERREIRA et al. (1997) executaram ensaio in vitro para verificar o efeito de saponinas presentes na erva-mate com cidos biliares e colesterol. A partir dessas observaes, concluram que h diminuio desses cidos e aumento da sua eliminao, e, portanto, parte do colesterol da corrente sangunea seria desviado para suprir sua carncia na bile. As saponinas so importantes para a ao de drogas vegetais, destacando-se as tradicionalmente utilizadas como expectorantes e diurticas (SIEDENTOPP, 2008). Entretanto, o mecanismo de ao dessas drogas no est bem elucidado. Alguns autores argumentam que a irritao no trato respiratrio aumentaria o volume do fluido respiratrio e reduziria sua viscosidade. Outra possibilidade seria relacionada a sua tenso superficial originando, menor viscosidade e maior facilidade de expulso do muco. A atividade diurtica atribuda irritao do epitlio renal causada pelas saponinas (SCHENKEL et al., 2001). Entretanto, em pesquisa realizada por DINIZ (2006), as saponinas triterpnicas reduziram o fluxo urinrio em ratos. O mecanismo provvel seria a aumento da reabsoro de gua nos tbulos renais, j que foi verificado aumento na atividade das ATPases renais. Outros empregos destacados so como adjuvantes para aumentar a absoro de medicamentos pelo aumento da solubilidade ou interferncia nos mecanismos de absoro e, como adjuvante para aumentar a resposta imunolgica. As saponinas mais utilizadas como adjuvantes so Quil A e seus derivados QS-21, isolados da casca de Quillaja saponaria Molina. So capazes de estimular o sistema imune e as torna ideais para uso em vacinas de subunidades, vacinas contra patgenos intracelulares, e vacinas teraputicas (Ex: cncer). No entanto, saponinas Quillaja tm inconvenientes graves, como alta toxicidade, efeito hemoltico indesejvel e instabilidade na fase aquosa que limita seu uso como adjuvante na vacinao (SUN et al., 2009).

18 2.2.4 Utilizao comercial

Por suas propriedades surfactantes, so usadas na indstria na preparao de emulses para filmes fotogrficos e na indstria de cosmticos em batons e xampus (CHEEKE, 1999). So usadas na indstria alimentcia como flavorizante e agente espumante. Os extratos vegetais mais utilizados comercialmente so extrados da Yucca schidigera ou da Quillaja saponaria. As saponinas da Quillaja saponaria so amplamente utilizadas como adjuvantes em vacinas orais e injetveis e melhoram a eficcia de vacinas orais facilitando a absoro intestinal de grandes molculas (CHEEKE, 1999). Isto ocorre, provavelmente, pela interao com o colesterol das membranas dos microvilos que causam leses estruturais e com conseqente alterao da permeabilidade (JOHNSON et al., 1986). A ao imunolgica envolve a interao da saponina com o colesterol das membranas celulares dos macrfagos ou clulas apresentadoras de antgenos e facilitam a formao do complexo celular (BOMFORD, 1992).

2.2.5 Saponinas na nutrio animal

A Yucca schidigera e a Quillaja saponaria so as maiores fontes de saponinas utilizadas como aditivos em raes, sendo os principais objetivos a melhoria do desempenho e a reduo da produo de amnia e o odor de fezes de animais domsticos (DEMATT FILHO, 2004). O mecanismo de ao ainda no completamente conhecido, mas sabe-se que as saponinas alteram a microbiota intestinal, atuam no metabolismo do nitrognio, aumentam a permeabilidade de clulas da mucosa intestinal e a taxa de absoro intestinal. Atualmente, algumas empresas utilizam saponinas como aditivos em raes para animais, principalmente nas linhas pet, porm o uso em aves e sunos crescente. GEE et al. (1997) afirmaram que as saponinas alteram a absoro intestinal, o que pode ter consequncias negativas, uma vez que substncias

19 presentes na dietas que normalmente no seriam absorvidas podem aumentar o risco de sensibilizao por antgenos da dieta. Saponinas tambm so referidas como causadoras de despolarizao da membrana intestinal, o que tambm, altera o padro de permeabilidade (OLESZEK et al., 1994). Pela sua propriedade surfactante, as saponinas possuem atividade antiprotozoria, pois formam complexos com o colesterol das membranas celulares dos protozorios, causando a lise celular (CHEEKE, 2002). SCHWARZ et al. (2002) fizeram testes para avaliao do uso de diversos compostos como prebiticos e probitico substitutivos aos

antimicrobianos promotores de crescimento. Em um dos tratamentos, os grupos de aves alimentadas com saponina, probiticos + saponinas e leveduras apresentaram um melhor desenvolvimento das vilosidades do intestino das quando comparados aos tratamentos controle e com antibitico. OBA et al. (2003) demonstraram que a adio de Quillaja saponaria na dieta de frangos alternativos melhorou o rendimento de carcaa e a porcentagem de peito quando comparados a uma dieta controle. O uso de saponinas na dieta nos ltimos dez dias de gestao e na lactao de porcas, resultou em melhor escore corporal no final da lactao s fmeas, e leitegadas mais pesadas ao nascer e ao desmame. As fezes das fmeas que receberam as saponinas foram 11% mais duras em relao ao grupo no tratado (HAUPTLI & LOVATTO, 2006). SANTOS et al. (2011) testaram a incluso de Yucca schidigera e no foram observados efeitos adversos na sade e na digestibilidade ou aceitao de gatos em relao dieta, sendo indicado seu uso.

20 3 CONSIDERAES FINAIS

Taninos e saponinas, grandes molculas de origem vegetal, so consideradas princpios ativos de diversos extratos vegetais. Os estudos sobre uso de extratos vegetais como aditivos fitognicos e teraputicos tem aumentado o interesse nos mesmos. Os resultados gerados motivam outras reas de pesquisas abrindo possibilidade de novas aplicaes. So de grande importncia na alimentao humana e animal, visto que constituem alimentos utilizados rotineiramente e os taninos condensados so considerados fatores antinutricionais. As saponinas esto sendo recentemente estudadas, comparado aos taninos, principalmente pela dificuldade de isolamento e identificao desses compostos. Portanto, as descobertas de usos vm acompanhadas da evoluo das tcnicas de farmacognosia. Os principais estudos feitos so na imunologia como adjuvante em vacinas. Na nutrio animal, o uso bastante promissor. Tanto para bovinos como manipuladores da fermentao ruminal, quanto em monogstricos como substitutivos aos antibiticos promotores de crescimento. Percebeu-se, ao revisar a literatura publicada, que vrios resultados so contraditrios. Acredita-se que h a falta de estudos sobre os tipos de molculas, diferenciao, identificao e padronizao de tcnicas. Para verificao do modo de ao, o desafio a busca por ensaios in vitro que simulem condies orgnicas. Cada dia mais se restringe a utilizao de animais na experimentao animal. Nos prximos anos, muitos dos resultados que se tm hoje, podero ser definitivamente elucidados pela evoluo das metodologias de pesquisa cientfica atuais.

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