Prof Jaqueline

Cintica enzimtica A cintica enzimtica a parte da Enzimologia que estuda a velocidade das reaes enzimticas bem como os fatores que a influenciam.

Temperatura pH Concentrao da enzima Concentrao do substrato

Temperatura tima

Desnaturao

A maioria das enzimas de bactrias e do corpo humano

Temperatura tima de ~ 37C

Bactrias de fontes termais Temp. tima ~ 90C

Pode afetar de vrios modos: 1. Ionizao de aa no stio ativo 2. Alterao na ionizao de grupos que mantm a estrutura terciria Valores extremos de pH a enzima desnatura irreversivelmente

pH timo

pH timo ambiente
Pepsina estmago (pH de 1 a 2)

pH timo da pepsina = 1,6 Glicose-6-fosfatase: clulas do fgado (pH 7,2) pH timo = 7,8

Aumentando a concentrao de enzima, observamos um aumento na velocidade de reao, onde E1 < E2 < E3 < E4.

[S], temperatura e pH constantes

Para uma reao no enzimtica simples com um nico substrato relao linear entre a atividade enzimtica e a concentrao do substrato.

Para uma reao enzimtica, h geralmente uma relao hiperblica entre a velocidade de reao e a concentrao de substrato

Em altas [S] a velocidade permanece constante, e no depende da [S]

Velocidade mxima (Vmx)

Em baixas [S] velocidade proporcional [S]

Todos os stios ativos na enzima esto ocupados pelo substrato enzima saturada

Quase toda a enzima est presente como complexo ES [ES] = [Etotal]

Incrementos na [S] no provocam efeito na velocidade

Equao de Michaelis-Menten

V0 = Vmx . [S] KM + [S]

Onde : V0 = velocidade inicial (velocidade medida logo aps a adio do substrato) Vmx. = velocidade atingida quando a enzima est saturada [S] = concentrao do substrato Km = constante de Michaelis

Km tem unidades de concentrao a concentrao de substrato necessria para atingir metade da velocidade mxima (V0 = Vmx)

Km alto baixa afinidade Km baixo alta afinidade

ENZIMA A

S
ENZIMA B

P1

P2
Qual enzima mais eficiente?

A equao de Michaelis-Menten descreve o comportamento cintico da grande maioria das enzimas

V0 = Vmx . [S] KM + [S]

baixas [S] Km >>> [S] o termo [S] no denominador torna-se desprezvel V0 apresenta uma dependncia linear de [S]
A velocidade aumenta com o aumento na [S]

V0 = Vmx . [S] KM

Em altas [S] [S] >>> Km Km torna-se desprezvel , a equao fica simplificada : V0 = Vmx . [S] KM + [S]

V0 = Vmx . [S] [S]

V0 = Vmx

A velocidade permanece constante, mesmo com aumentos na [S]

Quando [S] = Km Vo = Vmx

V0 = Vmx . [S] KM + [S] Vmx/2 = Vmx . [S] KM + [S]
Dividindo por Vmx:

1/2 =

[S] KM + [S]

KM + [S] = 2 [S]

Km = [S]

Como determinar KM e Vmax

EQUAO DE Lineweaver-Burk OU GRFICO DUPLO RECPROCO

Grfico simples de V0 versus [S] Fornece valores apenas aproximados de Vmx e km

Grfico 1/V0 versus 1/[S] Determinao mais exata dos valores de Vmx e Km

Grfico duplo recproco

Os valores de Vmx e km podem ser obtidos por: interseco da reta no eixo 1/V0 =1/Vmx Interseco no eixo 1/[S]: -1/Km

10 8

1/Vmax

1/vo
-30 -20 -10

6 4 2

10

20

30

40

50

-1/KM

1/[sacarose]

1/Vmax=2,136

Vmax=0,468umoles/min
KM= 0,0456 M

- 1/KM= -21,92

Inibidores enzimticos so molculas que interferem com a catlise, diminuindo ou interrompendo as reaes enzimticas Ex.: frmacos, antibiticos, conservantes de alimentos e venenos

 Reversveis

Inibio competitiva Inibio no-competitiva Inibio incompetitiva

Irreversveis

 O inibidor competitivo compete com o substrato pelo stio ativo da enzima Muitos tm estrutura qumica similar do substrato formando um complexo EI que no leva formao de produtos

* A inibio pode ser revertida se aumentar a [S]

Sem inibidor

Com inibidor

Cintica da inibio competitiva:

Vmx no se altera Pois em altas [S] todos os stios ativos estaro ocupados pelo S

Com inibidor

Sem inibidor

Km aumenta A [S] necessria para atingir a Vmx maior O inibidor ocupa o stio ativo

lcool desidrogenase

metanol
fgado

formaldedo

Txico cegueira

Tratamento Etanol Compete pelo stio ativo da enzima, reduzindo a formao de formaldedo

Liga-se reversivelmente a enzima em local diferente do stio ativo Liga-se tanto enzima livre como ao complexo ES

Impede a catlise por mudar a forma ativa da enzima Exemplo: metais pesados (mercrio e chumbo) ligam-se a grupos sulfidrlicos

Cintica da inibio no-competitiva: Vmx diminui Uma alta [S] no consegue levar toda a enzima sob a forma ES O inibidor diminui a quantidade de enzima ativa Km para o substrato no se altera No afeta a ligao da enzima e do substrato
Com inibidor

Sem inibidor

O inibidor s se liga ao complexo ES

Inibio competitiva

Inibio nocompetitiva

Inibio incompetitiva

 I se combina com um grupo funcional da enzima essencial para sua atividade. Podem promover a destruio do grupo funcional Forma-se uma ligao COVALENTE entre o I e a E.

inativador

Enzima + inibidor
Ligao covalente

Enzima inativa

Enzima +

Inibidor suicida
Catlise parcial

Composto muito reativo

Tratamento de acidez estomacal Liga-se enzima que produz o cido

Combina-se irreversivelmente com a enzima

So enzimas que apresentam uma atividade cataltica aumentada ou diminuda em resposta a certos sinais
Tipos de enzimas reguladoras: Enzimas alostricas Enzimas reguladas por modificao covalente So reversveis Geralmente, so protenas com subunidades mltiplas

So reguladas por meio de ligaes no-covalentes e reversveis com compostos regulatrios molculas pequenas ou cofatores

Compostos regulatrios = MODULADORES

negativos

positivos

Alm do stio ativo, possuem um ou mais stios regulatrios (alostricos) para ligarem o modulador O modulador induz mudanas na conformao da enzima

formas mais ativas modulador positivo

formas menos ativas modulador negativo

Stio ativo (cataltico)

Stio alostrico (regulatrio

Mudana de conformao

No apresentam cintica de Michaelis-Menten = curva hiperblica (A)

Apresentam curva sigmide (B): Consequncia da natureza multimrica (vrias subunidades)

Efeito de cooperao:

A ligao de uma molcula de substrato em uma subunidade induz mudanas estruturais que resultam em alteraes nas afinidades dos stios vazios

A ligao de um modulador positivo: aumenta a afinidade dos stios vazios pelo substrato A ligao de um modulador negativo: diminui a afinidade dos stios vazios

[S] que d Vmx

Grupos qumicos so ligados covalentemente em um ou mais resduos de aminocidos da molcula Altera as propriedades locais da enzima e introduz uma mudana na conformao
Ex.: fosforilao/defosforilao