PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

LABORTATORIO N 3

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERIA E.A.P. INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

Curso : Microbiologa General

Profesor

Blgo.Mblgo. Eterio ALVA MUOZ

Tema

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

Alumno

Isique Valverde David Rafael

Ciclo

IV

Nuevo Chimbote, 22 de octubre del 2013

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I.

INTRODUCCION :
La ciencia de la microbiologa se refiere al estudio de los organismos demasiado pequeos para verlos a simple vista, como las bacterias. Usualmente, estos microorganismos estn presentes en niveles muy bajos en las muestras para la mayora de los procedimientos de laboratorio. Por consiguiente, un microbilogo coloca una muestra en un medio de cultivo y lo incuba por un determinado tiempo, permitiendo que los organismos se multipliquen hasta un nivel detectable. Dependiendo de los organismos que un microbilogo desea estudiar en una muestra, la mayora de los frascos de cultivo son esterilizados en un autoclave y otros simplemente son calentados en una hornilla para matar los contaminantes. Un medio de cultivo es un sustrato o una solucin de nutrientes que permite el desarrollo de microorganismos. En las condiciones de laboratorio para realizar un cultivo, se debe sembrar sobre el medio de cultivo elegido las muestras en las que los microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar colonias. Los microorganismos son los seres ms abundantes de la tierra, pueden vivir en condiciones extremas de pH, temperatura y tensin de oxgeno, colonizando una amplia diversidad de nichos ecolgicos. Entre los requerimientos ms importantes para su desarrollo estn el carbono, el oxgeno, nitrgeno, dixido de carbono e hidrgeno. Muchas bacterias sin embargo necesitan del aporte extra de factores de crecimiento especficos en forma de suero, sangre y extracto de levadura entre otros.
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II.

OBJETIVOS:

OBJETIVOS GENERALES Preparar medios de cultivo como soporte y fuente de nutrientes para el desarrollo de los microorganismos in vitro. Manejar los instrumentos de uso rutinario, a la vez que imprescindibles, en el laboratorio de microbiologa OBJETIVOS ESPECIFICOS Preparar medios de uso general en el laboratorio Conocer los nutrientes en cada medio preparado y su funcin que ejerce cada uno. Identificar colonias bacterianas en forma macroscpica Conocer los materiales que utilizan en la preparacin de medios de cultivo Conocer el modo de accin del autoclave y su funcionamiento III. 2.1. MATERIAL Y MTODOS MATERIAL

2.1.1. Reactivos para: Agar comn, Caldo comn y Agar Sabouraud. Peptona Cloruro de sodio (NaCl) Extracto de carne Glucosa Agar Agar Agua destilada

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2.1.2. Material de vidrio Baln de fondo plano Bureta 2.1.3. Equipo Balanza Autoclave Cocina elctrica 2.1.4 Otros Algodn Pabilo Gasa Tijera Papel

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PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO IV. PROCEDIMIENTO

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1.

Pesar las sustancias indicadas en las formulas respectivas, calculando las cantidades en relacin a los volmenes requeridos.

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2. Disolverlas en la cantidad de agua destilada necesaria llevando a ebullicin.

3. Colocar los medios preparados dentro del autoclave pata esterilizarlos durante 15 minutos, 15 lb/in2. y 250F o su equivalente de (15 x 1atmsfera x 121C).

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4. Prender la autoclave y esperar a que llegue a 250F y 15 lb/in2. A partir de este momento, debers tomar el tiempo de 15 minutos. Debers tener cuidado de que la presin de la autoclave, nunca rebase los 20 lb/in2, ni est por debajo de los 15 lb/in2. Esto se puede controlar conectando y desconectando la autoclave. Si es que no tiene termostato, en caso contrario se har automticamente

5.

Transcurridos los 15minutos, desconecta la autoclave. Comienza a abrir la vlvula para liberar el vapor y que la presin comience a bajar. La autoclave puede abrirse nicamente cuando el manmetro marque cero. Antes no ya que podra explotar.

6. La autoclave se abre desde atrs, procurando que nadie quede de frente hacia donde se abre la tapa, ya que saldr mucho vapor caliente que causa quemaduras. Una vez que se abri con cuidado, con ayuda del trapo, sacar el matraz.

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7. Vaciar el medio en las cajas de Petri estriles siguiendo la tcnica asptica. Las cajas no pueden ser destapadas a menos que sea entre los mecheros o dentro de la campana de flujo laminar. Las tapas no se tocan por dentro con los dedos, ni se sacan del rea de esterilidad.

8. Ya slidas, se cierran adecuadamente y se etiquetan con el tipo de medio, equipo, grupo y fecha de elaboracin. Guardar en el refrigerador para utilizar la siguiente prctica. 9. Vaciar el agua de la autoclave con cuidado de no quemarse Los medios lquidos se reparten en tubos en ambiente estril y siempre frente a una llama (Mechero de Bunsen o alcohol). En el caso de los medios slidos se repartir en placa Petri un promedio de 10cm y en tubo, se les dar antes de que enfren y solidifique, la inclinacin que deben tomar al tiempo de ser

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empleados: la finalidad de esta inclinacin es la de conseguir una mayor superficie de siembra. Otra modalidad consiste en repartir el medio en los tubos y esterilizar despus. Tambin es usual esterilizar en frascos grandes y almacenar. En este caso, el reparto en tubos y petri se hace cuando el medio se va a utilizar. Tratndose de medios slidos se procede a licuarlos previamente en bao-mara. Comprobar la esterilidad en estufa a 37C durante 24 horas.

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V.

GLOSARIO : Define los siguientes trminos.

1. Elemento traza : Un elemento traza puede hacer referencia a diferentes cosas, segn el campo del saber en el que sea utilizado. En qumica analtica, un elemento traza es un elemento presente en una muestra que posee una media de concentracin menor de 100 partes por milln, realizando la medicin en un contador atmico, o menor de 100 microgramos por gramo. En bioqumica, un elemento traza en un compuesto qumico que es necesario en cantidades nfimas para el crecimiento, desarrollo y fisiologa de un organismo.1 En este campo, un elemento traza tambin puede ser referido como micronutriente. En geoqumica, un elemento traza es un elemento qumico cuya concentracin es menor de 1000 partes por milln menor del 0,1% de la composicin de una roca. Este trmino se utiliza principalmente en el campo de la petrologa gnea. 2. Macronutrientes : Son esos nutrientes que suministran la mayor parte de la energa metablica del organismo. Los principales son hidratos de carbono, protenas, y grasas. Otros incluyen alcohol y cidos orgnicos. 3. Micronutrientes : Los micronutrientes como las vitaminas y minerales en que estos son necesarios en pequeas cantidades para mantener la salud pero no para producir energa Se conoce como micronutrientes a aquellas sustancias que el organismo de los seres vivos necesita en pequeas dosis. Son indispensables para los diferentes procesos bioqumicos y metablicos de los organismos vivos y sin

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ellos moririan. Desempean importantes funciones catalizadoras en el metabolismo, al formar parte de la estructura de numerosas enzimas 4. Reactivo grado reactivo o qumicamente puro : Son aquellos cuyo grado de impureza es mnimo, son utilizados en laboratorios. 5. Peptona : Las peptonas son polipptidos formados durante la degradacin enzimtica de protenas. Son la principal fuente de nitrgeno en el medio orgnico para el cultivo de bacterias. Contienen aminocidos libres y cadenas cortas de pptidos, 1 ciertas vitaminas y a vecescarbohidratos. Es soluble en agua e insoluble en etanol y ter 6. Cloruro de sodio : El cloruro de sodio como la mayora de las sales inicas confiere propiedades coligativas a sus disoluciones, es decir es capaz de variar la presin de vapor de la disolucin, elevar el punto de ebullicin y descender el punto de congelacin segn su concentracin molar. El cloruro de sodio quimicamente puro no es higroscpico, el que la sal ordinaria se humedezca se debe a las impurezas de cloruro de magnesio, sustancia que si absorbe la humedad atmosfrica.

7. Extracto de carne : El Extracto de Carne es preparado a partir de materiales bajos en grasa y libre de tendones como msculo esqueltico y mdula sea de la columna espinal de bovino. El Extracto de Carne preparado en polvo es altamente nutritivo y es utilizado en la preparacin de medios de cultivo microbiolgicos. Es recomendado en la preparacin de medios utilizados para el anlisis de agua, leche y otros materiales. 8. Glucosa : La glucosa es un carbohidrato, y es el azcar simple ms importante en el metabolismo humano. La glucosa se llama un azcar simple o un monosacrido, porque es una de las unidades ms pequeas que tiene las caractersticas de esta clase de hidratos de carbono. La glucosa tambin se llama a veces dextrosa.
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9. Agar : El Agar Bacteriolgico es un agar procesado especialmente para ser utilizado como agente solidificante en medios de cultivo microbiolgicos. El agar es un polisacrido obtenido de cierto tipo de algas de la clase Rhodophyceae procesado para reducir al mximo su contenido en pigmentos, sales e impurezas. El agar posee una alta solubilidad y claridad en solucin. En su estado slido proporciona una superficie con la dureza necesaria para poder inocular y estriar las muestras observndose el desarrollo colonial. Su estado de gel permanece hasta los 65 C, permitiendo as los perodos y tiempos de incubacin requeridos sin que el medio se modifique. El agar generalmente es resistente a la degradacin por enzimas bacterianas.

10. Autoclave : Aparato destinado a la esterilizacin por calor hmedo. Consta de un recipiente hermtico, provisto de un manmetro y una vlvula de seguridad, formado por dos compartimientos separados por una reja: el inferior se llena de agua y en el superior se coloca el material a esterilizar.

b) Haz un diagrama de flujo del procedimiento a seguir en esta prctica.

INICIO

ESTABLECER MEDIO PROPORCION MEDIO/ AGUA A PREPARAR

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PESAR MEDIO EN LA BALANZA

PESAR MEDIO EN BALANZA

ADICIONAR AGUA DESTILADA ESTERIL

MEDIO LIQUIDO
ENVASAR

CALENTAR MEDIO HASTA INICIO DE EBULLICION

CUBRIR LA BOLA DE DESTILACION CON ALGODONES Y SELLAR CON EL HILO PABILO

REQUIERE ESTERILIZAR

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AUTOCLAVEAR A MEDIO

DEJAR ENFRIAR

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