Introduccion A La Fotometría

•Introducción a
la fotometría.
German Roberto Staub-Químico-U.de Concepción-Chile 1
NATURALEZA DE LA LUZ
Isaac Newton (1643-1727)

MECÁNICA CUÁNTICA
Niels Bohr
(1885-1962)
EL ESPECTRO ÓPTICO
La luz blanca está compuesta de ondas de diversas frecuencias.

Cuando un rayo de luz blanca pasa por un prisma se separa en sus
componentes de acuerdo a la longitud de onda así:

ESPECTRO ELECTROMAGNÉTICO

ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN

ESPECTROFOTOMETRÍA
• La espectrofotometría se refiere a los métodos,

cuantitativos, de análisis químico que utilizan la luz para
medir la concentración de las sustancias químicas.
• Se conocen como métodos espectrofotométricos y según

sea la radiación utilizada como espectrofotometría de
absorción visible (colorimetría), ultravioleta, infrarroja.

1. Desde 1852 la ley de Bourguer – Lambert - Beer ha
sido usada como la base cuantitativa de la
espectroscopia de absorción.
3. Bourguer en 1729 estableció empíricamente una

correlación entre la longitud de la trayectoria de la
luz y la absorción de esta.
5. Esta correlación fue formulada matemáticamente por

Lambert en 1760 y Beer descubrió la dependencia de
la absorción de luz con la concentración en 1852.
7. Actualmente esta ley es aplicable a la absorción de

luz en cualquier zona del espectro.
Inicialmente el ojo humano fue el detector para
comparar diferentes intensidades de luz y los
principios de la colorimetría o fotometría visual están
basados en el hecho de que nuestros ojos son capaces
de distinguir la intensidad de dos haces de luz con una
exactitud cercana al 1%.

ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN
LEY DE LAMBERT - BEER

PARÁMETROS DE MEDICIÓN
La Transmitancia (T) es la relación entre la intensidad de

radiación transmitida por una muestra (I) y la intensidad de
radiación que incide sobre la muestra (I0), medidos ambos
en la misma posición del espectro y con la misma rendija,
T = I / I0
Se supone que el haz es de radiación paralela y que incide

sobre las superficies planas y paralelas de la muestra,
formando ángulos rectos.
La Absorbancia (A) es el logaritmo en base diez del
recíproco de la transmitancia (T), en el que el disolvente
puro es el material de referencia; esto es,
A = log10 1/T = - log10 T

ABSORBANCIA
A= log10 P0 / P
A= log10 1 / T
A= log10 100 / %T
A = 2 - log10 %T
T= P/P0

A=abc
• b: longitud del camino recorrido por la radiación a
través del medio absorbente
• c: concentración de la especie absorbente
• a: absortividad, constante de proporcionalidad

LEY DE LAMBERT - BEER ...
• Si: b (cm), c (molL-1), a (L cm-1 mol-1)
a = absortividad molar = ε
• Para más de una especie absorbente en el medio:

las absorbancias son aditivas
A total = a1bc1 + ........ + anbcn


LEY DE LAMBERT - BEER ...

DESVIACIONES DE LA LEY DE BEER
EXCESO DE CONCENTRACIÓN

DESVIACIONES DE LA LEY DE BEER
RADIACIÓN POLICROMÁTICA

Instrumentos
• FOTOMETROS
• ESPECTROFOTOMETROS

SISTEMA ÓPTICO

FUENTE LUMINOSA
• Lámparas de H2 y D2
• Filamento de W
• Lámpara de Nerst
• Alambre de Nicrom

Fuentes de radiación
Las características que deben reunir son:
3. Debe tener potencia suficiente.
5. Debe ser estable.
7. Debe tener un estabilizador para corregir las variaciones

de la radiación, o en el sistema de doble haz, uno de
ellos no pasa por la muestra y corrige las fluctuaciones.

SELECCIONADOR DE λ
• Filtros
– Vidrio
– Interferencia
• Monocromadores
– Rejilla de difracción
– Prismas
Un sistema monocromador consiste básicamente de:
• Una rendija de entrada que proporciona una imagen óptica
estrecha de la fuente de radiación.
• Un lente colimador que hace paralela la radiación procedente de la

rendija de entrada.
• Una red de difracción o un prisma para dispersar la radiación

incidente.
• Otro lente colimador para reformar las imágenes de la rendija de

entrada sobre la rendija de salida.
• Una rendija de salida para aislar la banda espectral deseada,

bloqueando toda la radiación dispersada excepto la del intervalo
deseado.

MONOCROMADOR

La función principal de un monocromador es la de proporcionar un
haz de energía radiante con una longitud de onda nominal y una
anchura de banda dada.
La salida espectral de cualquier monocromador usado con una fuente

de radiación continua, independientemente de su distancia focal y
anchura de rendijas, consiste de una gama de longitudes de onda con
un valor promedio de longitud que se presenta en el indicador del
monocromador.

LONGITUD DE ONDA

La función secundaria de un monocromador consiste en el ajuste del
rendimiento de energía.
4. Este puede aumentarse, aumentando el ancho de la rendija de

salida, a costa de una mayor anchura de banda espectral que puede
introducir desviaciones a la ley de Beer, porque ésta exige radiación
monocromática.
7. Sin embargo, los anchos de rendijas excesivamente pequeños

provocan rendimientos de baja energía en la señal del detector,
afectando la sensibilidad analítica como resultado de la degradación
de la relación señal-ruido.

El funcionamiento de un monocromador comprende tres aspectos
correlacionados: pureza de la radiación de salida, resolución y
poder de captación de luz.
La pureza la determina principalmente la cantidad de radiación

dispersada mientras que la resolución depende de la dispersión y
perfección en la formación de la imagen.
Se requiere un poder de dispersión grande y un alto poder resolutivo

en un monocromador, para medir con precisión las líneas discretas en
los espectros de emisión o absorción atómica y para obtener los
espectros de bandas angostas de absorción molecular.

Redes o rejillas de difracción
Actualmente son los dispositivos más utilizados en los

espectrofotómetros UV-VIS.
Una rejilla o red de difracción consiste en una superficie

pulida y rayada finamente con un gran número de surcos o
estrías equidistantes que reflejan o transmiten la radiación.
La distancia entre las estrías debe ser similar al orden de

la longitud de onda de la radiación que se quiere obtener.

Rejilla de difracción

Ancho de banda espectral
La pureza de la radiación que sale del monocromador es función de la

capacidad de dispersión del monocromador y del tamaño de la
rendija.
La anchura de banda espectral corresponde al intervalo de

longitudes de onda comprendido entre los puntos en donde la
transmitancia (de la radiación emitida por la fuente y que llega a la
rendija de salida) alcanza la mitad de su máximo de transmisión o el
intervalo de longitudes de onda que contiene el 75% de la energía
radiante que proviene del monocromador.

Recipiente para la muestra
Material Radiación
Cuarzo UV-Vis
Vidrio Vis
Plástico Vis

DETECTORES
• Fotónicos (detectores de fotones):
– Fotoemisión o Fotoconducción
• Térmicos (detectores de calor):
– Aumento de temperatura se convierte en señal eléctrica

• Un sistema detector consiste en los dispositivos que permiten " ver
o detectar u observar " la radiación después de pasar por la
muestra, en las medidas de absorción, u originada por la muestra en
el caso de medidas de emisión de radiación.
• Generalmente también son transductores es decir que convierten la

radiación electromagnética o radiación lumínica en una corriente o
voltaje que se observa después de amplificar en el circuito de lectura.
• Dependiendo de la zona del espectro utilizada en el

espectrofotómetro, los detectores deben poseer características que le
permitan detectar ese tipo de radiación.

DETECTORES DE FOTONES
4. Fototubos
6. Tubos fotomultiplicadores
8. Células fotovoltaicas
10.Detector de fotoconductividad
12.Fotodiodos

Para el ultravioleta , el visible y el cercano infrarrojo se
encuentran los fototubos de vacío, de un solo paso,
que contienen un cátodo sensible a la radiación y su
ánodo.
El fotocátodo opera según el principio de que se

emiten electrones desde algunos materiales
dependiendo de la frecuencia de los fotones que
inciden en su superficie, es decir hacen uso del efecto
fotoeléctrico.

Los fotomultiplicadores son una combinación de un cátodo
fotoemisivo y una cadena interna de dínodos multiplicadores de
electrones.
La radiación incidente expulsa electrones del cátodo.
Estos electrones son enfocados por un campo electrostático y

acelerados hacia un electrodo curvo, que corresponde al primer
dínodo, el cual está cubierto con un compuesto que expulsa varios
electrones como resultado del impacto de un electrón de alta energía.
Repitiendo este proceso varias veces se produce la amplificación de la

corriente interna para finalmente llegar al ánodo.

Los fotodiodos operan según un principio completamente
diferente al de los detectores anteriores.
Este consiste de una unión semiconductora p-n, la cual

posee una polarización inversa, de modo que no existe un
flujo de corriente.
Cuando un fotón interactúa con el diodo, los electrones

llegan hasta la banda de conducción en donde pueden
actuar como portadores de carga.
De esta manera, la corriente generada es proporcional a la

potencia radiante incidente.

FOTOMETROS Y ESPECTROFOTOMETROS
• FOTOMETROS:
– Emplean filtros
– Son simples y robustos.
• ESPECTROFOTOMETROS:
– Emplean rejillas de difracción o prismas.

– Permiten variar la λ continuamente.
– Permitiendo registrar el espectro de absorción.
FOTOMETROS

Humalyzer 2000

ESPECTROFOTOMETROS

ESPECTROFOTOMETRO DE HAZ SIMPLE

Spectronic 20

1

3

4

5

ESPECTROFOTOMETRO DE DOBLE HAZ

Los Métodos y/o Técnicas que emplean
instrumentos , analizan las muestras con el
propósito de conocer alguna característica
física o química del analito y esto permite
caracterizarlo, identificarlo o cuantificarlo.
El equipo genera :
A)Señal o Respuesta
B)Tiempo de respuesta
C)Resolución
(purificación)

Cuando el Analito es sometido a un estudio bajo un
instrumento, existen dos formas de generar una señal.
Estas son : A)
midiendo directamente la actividad del analito B)
con un estimulo y midendo su respuesta
A) Actividad iónica Electrodo (VOLTAJE)

(Muestra)
B) Luz (Muestra) Fototubo

(CORRIENTE)

Componentes básicos de un instrumento analítico
Generador
Medidor
de señal
Señal o escala
Eléctrica , Señal
luminosa o De Salida
Mecánica
Transductor Transformador Transductor

De entrada de señales De salida
Señal Registrador
Analítica
12.301 Unidad
EJEMPLO Digital
Luz Luz Electricidad
Fuente Mta Dispositivo

Detector de lectura
Ejemplos de Instrumentos Analíticos
Refractómetro pHmetro HPLC
Espectrofotómetro GC Turbidimetro
IR Fluorómetro AA
ESPECTROFOTOMETRO

Radiación electromagnética
λ (nm)
Longitud de onda
ν
Ciclo Frecuencia
(Ciclos/s)
(Hz)
C= λ ν E=hν
Radiación electromagnética
λ = 450 C/λ = ν
C
nm= 3 X10 17
nm/s
ν = 6.6 X 1014 Hz
h = 6.62 X10-27 ergs-s
E = 4.36 X10-12 ergs
C= λ ν E=hν
REFRACCIÓN

Radiación
monocromática
Prisma Radiación
Luz blanca monocromática
Refracción
Espectro visible
Color λ (nm)
630 – 780
590 – 630
560 – 590
490 – 560
450 – 490
380 - 450

Rayos γ Rayos X Ultravioleta Visible Infrarojo Microondas T V Radio
Longitud de onda (λ)
Fracción VIS del Espectro EM

Espectrofotómetro
Lámpara
computadora
Detector
Celda
Selector
Payala@campus.cob.itesm.mx
Espectrofotómetro (doble haz)
Lámpara Selector Celda de

muestra
I = Intensidad Detector
A= Absorbancia
Celda de
T= transmitancia referencia
IR IM
Absorbancia y
Transmitancia A
computadora
= Log I /Io A= -
log T A= - log
(%T/100)
Log IR/IM= A
Absorbancia y Transmitancia
Io I
Lámpara Selector Celda de
muestra
Absorbancia Transmitancia
A = Log I o/ I T = I / Io
Absorbancia y transmitancia
A = Log 1/T
Absorbancia y transmitancia
A = - Log T
Absorbancia
A = - Log (%T/100)
transmitancia
%T = (100) (AntiLog –A)
ABSORBANCIA
Ejercicio 0.3
1
%T = 56 2 50
%TRANSMITANCIA
0
0 100
A =?0.251
Absorbancia
Io I
Lámpara Selector
Celda de
muestra
1) A= - log T
A=2) εcl
Ley de Beer

Absorbancia
En función de la naturaleza y de
la concentración de la muestra
A= Absorbancia
Ley de Lambert- Beer ε =coeficiente de extinción
A= εcl C= concentración molar
l= longitud de celda (cm)
POR EJEMPLO.
¿Cuál es la A de una substancia al 2.5 X 10-5 M ,
con un ε = 7,500 M-1cm-1 ?. A= 0.18
Curva de calibración
A
b
s
o
r
A b
a
n
c
i
a
Concentración
¿ABSORBANCIA?
Muestra Problema

Problema Patrón
Conc. Prob = (A Prob/A Patrón)(Conc. Patrón)
A Problema = 0.458 A
Patrón = 0.765 Conc.
Patrón= 145mg% Conc.
Problema= ?
Conc. Problema = (0.458/0.765)(145mg%)
Conc.German
Problema= 86.8 Concepción-Chile
Roberto Staub-Químico-U.de mg% 72
Espectro de Absorción
A
b 25 mM
s
o
r
A b 5 mM
a
n
c
i
a λ Max
Longitud de onda (nm)
λ
CONFIABILIDAD
Debe existir:
2. Exactitud
3. Precisión
4. Sensibilidad (Límite de detección)
5. Especificidad
Calibración
Exactitud
Incertidumbre
Fi
n

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•Introducción a

Isaac Newton (1643-1727)

La luz blanca está compuesta de ondas de diversas frecuencias.

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• La espectrofotometría se refiere a los métodos,

• Se conocen como métodos espectrofotométricos y según

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3. Bourguer en 1729 estableció empíricamente una

5. Esta correlación fue formulada matemáticamente por

7. Actualmente esta ley es aplicable a la absorción de

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La Transmitancia (T) es la relación entre la intensidad de

Se supone que el haz es de radiación paralela y que incide

A = log10 1/T = - log10 T

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• c: concentración de la especie absorbente

• a: absortividad, constante de proporcionalidad

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• Si: b (cm), c (molL-1), a (L cm-1 mol-1)

• Para más de una especie absorbente en el medio:

A total = a1bc1 + ........ + anbcn

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Las características que deben reunir son:

3. Debe tener potencia suficiente.

5. Debe ser estable.

7. Debe tener un estabilizador para corregir las variaciones

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• Un lente colimador que hace paralela la radiación procedente de la

• Una red de difracción o un prisma para dispersar la radiación

• Otro lente colimador para reformar las imágenes de la rendija de

• Una rendija de salida para aislar la banda espectral deseada,

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La salida espectral de cualquier monocromador usado con una fuente

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4. Este puede aumentarse, aumentando el ancho de la rendija de

7. Sin embargo, los anchos de rendijas excesivamente pequeños

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La pureza la determina principalmente la cantidad de radiación

Se requiere un poder de dispersión grande y un alto poder resolutivo

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Actualmente son los dispositivos más utilizados en los

Una rejilla o red de difracción consiste en una superficie

La distancia entre las estrías debe ser similar al orden de

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La pureza de la radiación que sale del monocromador es función de la

La anchura de banda espectral corresponde al intervalo de

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• Fotónicos (detectores de fotones):