Las bacterias acticas

Introduccin: Resea histrica

La transformacin del etanol en cido actico, por oxidacin, es realizada por diversas bacterias, que fueron llamadas en general Mycodema Aceti y que actualmente se clasifican como pertenecientes a la familia Acetobacteriaceae.

Las principales especies son : Acetobacterium aceti, Acetobac. Pasteurianus, Ac. Xylinum, Bact. Schutzenbachii, Bact. Orleanense, Bact. Curvum. Ms recientemente se incluy a las bacterias capaces de oxidar el etanol a cido actico en el orden Pseudomonadales, el el cual se distinguen dos gneros principales: 1) 2) Acetobacter: incluye microorganismos capaces de oxidar acetato a Acetomonas o Gluconobacter: no son capaces de oxidar los acetatos. anhdrido carbnico y agua.

Se considera que el gnero acetomonas es til para la produccin de vinagre, en tanto que el gnero acetobacter puede echar a perder el vinagre por sobreoxidacin. Las bacterias acticas constituyen un grupo ecolgico que comprende bacterias Gram-negativas (Gram-positivas en cultivos viejos). Las primeras clasificaciones de bacterias acticas se hicieron atendiendo exclusivamente a criterios morfolgicos. Visser`t Hooft (1925) toma en consideracin tambin su fisiologa, y ms tarde Asai (1968) clasifica las bacterias acticas segn su capacidad para metabolizar la glucosa y el cido actico. Frateur (1950) propone un sistema de clasificacin del gnero Acetobacter en cuatro grupos, en base a los caracteres bioqumicos siguientes: produccin de catalasa, oxidacin de acetato y lactato a

carbonato, formacin sern elaboracin de vinagres. Asimismo los mtodos de elaboracin de compuestos cetnicos, produccin de cido glucnico y capacidad para crecer en un medio con alcohol y sales de amonio como nica fuente de Nitrgeno (medio de Hoyer). Pr opuso los siguientes grupos: Acetobacter peroxydans, Acetobacter mesoxydans, Acetobacter oxydans y Acetobacter suboxydans. El nombre de cada grupo alude fundamentalmente a su grado de capacidad para oxidar el etanol a cido actico. Durante largo tiempo se acept que las bacterias acticas mviles, pertenecientes al gnero Acetobacter, tenan flagelos polares monotricos, y dicho gnero estaba incluido por lo tanto en la familia Pseudomonodaceae. Sin embargo, Leifson descubri que 30 cepas de Acetobacter no mostraban este tipo de flagelos, poniendo de manifiesto otro tipo de flagelacin pertrica. Propuso entonces separar Acetobacter en dos gneros: Acetobacter y Acetomonas gnero nov., incluyendo en este ltimo las especies con flagelos polares multitricos y las no flageladas, todas incapaces de oxidar el acetato y el lactato a CO2 y H2O. Segn la clasificacin recogida en el manual de Bergey, en su 8 edicin 1974), las bacterias acticas pertenecen al orden Pseudomonodales, familia Pseudomonodaceae, incluyendo en esta ltima dos gneros distintos al gnero Pseudomonas (sobre todo por su capacidad de crecimiento a pH inferior a 4.5): el gnero Gluconobacter y el gnero Acetobacter, que incluye a su vez tres especies importantes: Acetobacter aceti, Acetobacter pasteurianus y Acetobacter peroxydans. El gnero Acetobacter puede variar en su forma de elipsoide a barra derecha, o ligeramente curva, 0.60.8 m x 1.0-1.4 m. Se encuentran individualmente, en pares o agrupadas en cadenas. Las clulas pueden ser mviles o no. Si son mviles, los flagelos son peritricos o laterales, oxida acetato y lactato a CO2 y H2O. El pH ptimo para el crecimiento es de 5.4-6.3. El gnero Gluconobacter es capaz de producir grandes cantidades de cido glucnico a partir de glucosa, tiene incapacidad de formar pelculas en medios lquidos y pobre crecimiento en sustratos que contienen etanol. Adems, es incapaz de oxidar el acetato. En una serie de trabajos publicados por diversos autores, principalmente Shinwell y Carr (1960), se pone de manifiesto la clara tendencia de las especies de Acetobacter a dar cepas mutantes, originndose especies distintas a las ya existentes. Carr (1968) public un trabajo en el que pone

de manifiesto las observaciones hechas por Shimwell, y afirma que en general, las bacterias acticas no son genticamente estables, aunque unas especies sean ms estables que otras. Pasteur en 1861-1868, estudiando el mtodo denominado de Orlans, demostr que el cido actico proceda de la oxidacin del etanol, y que por oxidacin prolongada el cido actico se transforma en cido carbnico y agua. Sus resultados le llevaron tambin a formular la implicacin de los microorganismos en el proceso de transformacin del alcohol en vinagre, y confirm la existencia de Mycoderma aceti que Persoon haba descrito en 1822. Ms tarde, hacia los aos 1879, Hansen observ que la flora microbiana que converta el alcohol en cido actico no era pura y estaba compuesta por varias especies de bacterias. El gnero de Acetobacter fue propuesto posteriormente por Beijerinck (1899). Los primeros intentos de clasificacin fueron los propuestos por Hansen en 1894; pero el primero en proponer una clasificacin basada en criterios bioqumicos fue Vissert Hooft (1925). Asai (1934, 1935) fue quien formul la propuesta de clasificar las bacterias acticas en dos gneros: Acetobacter y Gluconobacter. Posteriormente, es Frateur (1950) quien tuvo el mrito de formular una clasificacin basndose principalmente en cinco criterios fisiolgicos: catalasa, produccin de cido glucnico a partir de glucosa, oxidacin del cido actico en gas carbnico y agua, oxidacin del lactato en CO 2 y H2O y oxidacin del glicerol en hidroxiacetona. Basndose en estos criterios propuso la subdivisin de Acetobacter en cuatro grupos: peroxydans, oxydans, mesoxydans y suboxydans. Leifson (1954) agrup las bacterias acticas con flagelos peritricos y que oxidan el acetato, en el gnero Acetobacter y las que poseen flagelos polares dentro del gnero Acetomonas. Posteriormente, basndose en los resultados de hibridacin, Gillis y de Ley (1980) propusieron de reagrupar ambos gneros en la misma familia Acetobacteraceae. La novena edicin del manual de Bergey ha recogido esta propuesta.

Estructura: En cuanto a la estructura, la clula bacteriana presenta las caractersticas de los seres procariticos. Est limitada por la membrana citoplasmtica, de composicin lipoproteica y de importancia vital para la clula. Por fuera de la membrana, las bacterias poseen un a pared celular rgida que garantiza su

forma y la protege de la diferencia de presin entre el medio interno y el externo. Son principalmente Gram negativas, pero tambin pueden ser Gram variable y en algunos casos Gram positivo.

Morfologa: Al microscopio ptico las bacterias acticas se presentan como pequeas clulas cilndricas, frecuentemente en parejas cocobacilares, cortas y algo gruesas, alineadas o en cadenas, y a menudo agrupadas en forma de ocho. Constituyen un grupo de morfologa variable poliformo- (elipsoidal, pueden presentarse de manera individual, redondeada, bastones). Su tamao vara entre 0.4 a 1m de ancho y de 0.8 a 4.5 m de longitud.Pueden presentar flagelos polares o peritricos. Algunas de las especies presentan diferentes pigmentos en los cultivos slidos y pueden producir diferentes tipos de polisacridos. No pueden formar endosporas como estructura de supervivencia. El gnero Gluconobacter y el gnero Acetobacter, que incluye a su vez tres especies importantes: Acetobacter aceti, Acetobacter pasteurianus y Acetobacter peroxydans pueden variar en su forma de elipsoide a barra derecha, o ligeramente curva, 0.6-0.8 m x 1.0-1.4 m. que

Metabolismo de las bacterias acticas Una caracterstica importante de las bacterias acticas es la capacidad de oxidar una gran variedad de substratos, y de poder acumular los productos del metabolismo en el medio sin gran toxicidad para las bacterias. La capacidad de oxidacin es debida, en parte, a la gran actividad de las deshidrogenasas que poseen en la membrana celular. Estas deshidrogenasas estn ntimamente interconectadas con la cadena de citocromos (Matsushita et al., 1985). La etanol deshidrogenasa de la membrana fue purificada y caracterizada por Adachi et al., (1978). Segn estos autores esta enzima posee un grupo prosttico formado por la pirroloquinoliquinona (PQQ) y un compuesto citocrmico de tipo c con un mximo de absorbancia 533 nm., lo que le vali el nombre alcoholcitocromo-533-reductasa (Nakayama, 1961,

Matsushita et al. 1999). Esta enzima puede oxidar el etanol a acetaldehido en presencia de varios aceptores de electrones tales como la fenacina metosulfato y el ferricianuro de potasio, pero el etanol no es oxidado en presencia de NAD + o NADP + como aceptores de electrones. La acetaldehido deshidrogenasa tambin tiene la capacidad de oxidar estos mismos aceptores de electrones. La actividad enzimtica de la acetaldehido deshidrogenasa es ptima a un pH de 6.6, mientras que el pH ptimo para la etanol deshidrogenasa se sita a los alrededores de 5. Ambas enzimas poseen una afinidad diferente por el oxgeno, lo que implica que una limitacin del oxgeno disuelto en el medio provoca la acumulacin del acetaldehido en el medio de cultivo. La acumulacin de este metabolito intermedio representa una fuente de toxicidad para las bacterias (Divies, 1973). Las bacterias acticas tambin poseen etanol y acetaldehido deshidrogenasas solubles en el citoplasma dependientes de los aceptores de electrones NAD + y NADPH+ (Divies 1972). La interconexin de estas dos enzimas permite el buen funcionamiento de la oxidacin del etanol en cido actico Las bacterias acticas del gnero Acetobacter oxidan el etanol del medio a cido actico, y cuando el etanol se ha consumido totalmente, oxidan el acetato. El etanol reprime e inhibe las enzimas que oxidan el acetato. El cido actico a concentraciones elevadas inhibe la oxidacin del etanol. Las bacterias del gnero Gluconobacter no pueden oxidar el acetato debido a que el ciclo tricarboxlico no es funcional (Maragoudakis y Strassmann, 1967). Sin embargo las bacterias del gnero Acetobacter poseen todas las enzimas de dicho ciclo y por lo tanto pueden oxidar el acetato. Las bacterias acticas pueden tambin oxidar numerosos azcares, tales como: glucosa, fructosa, L-sorbosa, D-xilosa, as como diferentes alcoholes secundarios, polioles, cidos orgnicos etc.

Fisiologa La resistencia de las bacterias acticas al cido actico sigue siendo un misterio. Los resultados de Entani et al., (1985) apuntan a que la membrana de estas bacterias tiene una composicin rica en cidos grasos saturados por lo que permanece relativamente impermeable al cido actico, el cul se encuentra bajo una forma no disociada en condiciones industriales.

Nuestros recientes resultados han mostrado la formacin de una capa protectora constituida de polisacridos que recubre la pared bacteriana, y que tendra como funcin primera la proteccin de la clula contra las condiciones tan drsticas del medio, como son las condiciones industriales. Se puede pensar tambin que la proteccin de las bacterias contra el cido actico del medio es debida a un sistema membranoso energtico relacionado con el metabolismo del etanol, ya que el cese de la oxigenacin y la ausencia del etanol conducen a la muerte celular (Ebner y Follmann, 1983). La fuerza protnica obtenida por la oxidacin del etanol a acetato podra por medio de un antiport o un symport provocar la expulsin del cido actico que se pueda acumular en el citoplasma hacia el exterior de la bacteria.

Nutricin: Los requisitos nutritivos bsicos para los procesos microbiolgicos son la energa, el carbono, el nitrgeno y las sustancias minerales. Con frecuencia, la fuente de energa y carbono es un compuesto orgnico que se oxida liberando energa y que al mismo tiempo proporciona el carbono estructural para la sntesis de nuevo material celular. Los microorganismos que usan el carbono de este modo son los que se llaman hetertrofos.

Temperatura: El grupo de bacterias acticas se caracteriza por el intervalo tan delimitado de temperatura en que actan. Para temperaturas debajo de 12 a 15 C se desarrolla lentamente y las clulas so cortas pero extraordinariamente anchas. De 15 a 34 C parecen desarrollarse en lo que podramos llamar modo normal, creciendo rpidamente y desplegndose cadenas de clulas de distintos nmeros o elementos. En medios favorables se hinchan, apareciendo las primeras etapas de formacin de la capa mucilaginosa. A temperaturas mayores (de 42 a 45 C) se han observado unos filamentos largos como hebras y transparentes sin tabiques de divisin y con protuberancias irregulares y a veces con ramificaciones. Estas condiciones parecen ser un estado patolgico ocasionado por la alta temperatura, y si se mantiene el cultivo en estas condiciones durante mucho tiempo puede perder su capacidad para actuar normalmente. Sin embargo, si se vuelve

pronto a temperaturas de 15 a 34 C, producir algunas clulas de aspecto y comportamiento normales. Este efecto de la temperatura es importante en la determinacin de las condiciones ptimas para la fermentacin activa en la fabricacin del vinagre. La temperatura exacta depende del microorganismo como del tipo de proceso. En general, a temperaturas bajas la fermentacin es lenta y a temperaturas demasiado elevadas aumentan las prdidas por evaporacin de etanol, cido actico y sustancias voltiles.

Oxgeno: Este grupo de microorganismos necesita del oxgeno como aceptor final de electrones, por lo que tienen un metabolismo aerobio obligado. Son estrictamente aerobias y muy sensibles al SO2. Puesto que la conversin del etanol a cido actico no es ms que un proceso de oxidacin, o bien una des hidrogenacin en la que el oxgeno acta como aceptor de hidrgeno, el xito de la fermentacin depender en gran parte de la presencia de cantidades suficientes de oxgeno.

Potencial de Hidrgeno (Ph) La principal caracterstica de las bacterias acticas es su capacidad para transformar a pH cido (3-4) el alcohol en cido actico. El pH ptimo de crecimiento est entre 5 y 6,5, si bien puede llegar a crecer a pH cercanos a 3.

Reproduccin: La reproduccin de las bacterias se realiza por el proceso de divisin binaria (fisin binaria o biparticin); en este proceso la clula bacteriana madura se divide por la mitad, dando dos clulas hijas iguales. Tras la duplicacin del ADN, que est dirigida por la ADN-polimerasa que se encuentra en los mesosomas, la pared bacteriana crece hasta formar un tabique transversal separador de las dos nuevas bacterias.

Pero adems de este tipo de reproduccin asexual, las bacterias poseen unos mecanismos de reproduccin sexual o parasexual, mediante los cuales se intercambian fragmentos de ADN

Reproduccin asexual La reproduccin asexual es un proceso por el cual algunos seres vivios generan hijos, este tipo de procreacin es rpida ya que requiere solamente de un progenitor, en estas no hay gran adaptacin porque hay muy poca variabilidad gentica y propia de los seres ms simples. La reproduccin asexual tambin se da en organismos pluricelulares. En este tipo de creacin de nuevos seres vivientes podemos dividirlos en dos grandes grupos, como son: la amitosis que se produce en las clulas procariontes (son las primitivas) y la mitosis que se da en clulas eucariontes, esta ltima se da en organismos unicelulares.

Mitosis: Es una divisin celular de la cual se obtienen dos clulas hijas, genticamente idnticas entre s e idnticas a su progenitora. Este proceso mantiene la constancia del nmero cromosmico, por lo tanto si la clula eucarionte que entra en mitosis es diploide (1 par de ADN, es decir, 2 ADN para una misma funcin) se obtendrn dos clulas hijas diploides y si es haploide se obtendrn dos clulas hijas haploides (di = 2; ha = 1) Se plantea que la mitosis es la divisin ecuacional del material hereditario duplicado en el periodo S (momento en que se duplica el material gentico) de la interfase. La actividad mittica se puede observar en tejidos embrionarios, en cicatrizaciones, en regeneraciones de rganos, etc. La mitosis tambin se da en organismos multicelulares, pero es ms frecuente en unicelulares.

Microorganismos Perjudiciales: Algunas especies de acetobacter suelen causar defectos en el vinagre. A. Aceti debido a su potente capacidad de oxidacin, puede convertir el cido

actico en CO2 y H2O. A. Xylinum produce material celulcico conocido como "madre del vinagre" Las anguilas del vinagre, gusanos nematodos (anguillula aceti), pueden ser perjudiciales para el vinagre, especialmente cuando no se han revisado bien los frutos empleados. Tambin pueden proceder del polvo y de los insectos. Atacan la capa bacteriana y originan su hundimiento y en algunos casos estropean el vinagre. Estos organismos rebajan la calidad del vinagre. Son pequeos, de unos 3 mm de longitud, pero se aprecian a simple vista en un recipiente de vidrio colocado delante de una luz fuerte. En la fbrica se encuentran en los bordes de la superficie del lquido. La contaminacin puede evitarse manteniendo una limpieza extremada en toda la instalacin. Una vez que han conseguido penetrar en el vinagre se destruyen por calefaccin a unos 45 C o por pasteurizacin y se eliminan por filtracin con una sustancia absorbente o por sedimentacin. Los aparatos infectados se tratarn con chorros de vapor.

Requerimientos de las bacterias acticas Las bacterias acticas son aerobias necesitan de oxgeno a una temperatura de 27 a 28 grados a un pH mximo de entre 5 a 6 y un mnimo 3 a 3.5. Son auxotrofos para las vitaminas como cido paraminobenzoico, niacina,tiamina y cido pantotenico, necesitan nitrgeno y azufre cuya mejor fuente son los aminocidos como la valina, isoleucina, alaninina, cicteina, histidana, y prolina , requieren adems fosforo para formar sus paredes celulares resistente a los cidos. Aislamiento e identificacin de bacterias acticas

Procedimiento Aislamiento e identificacin de bacterias acticas

Muestra
Frutas cidas: limn, naranja, lima, uva.

Enriquecimiento de la muestra Depositar 20 mL de cerveza en frascos de boca ancha. Sumergir por 15 minutos y en frascos separados uva, manzana, limn y naranja. Retirar los frutos. Cubrir los frascos con gasa o malla para evitar la entrada de insectos. Mantener a temperatura ambiente hasta por 4 das. Observar el crecimiento bacteriano en forma de un velo o pelcula blanquecina sobre la superficie. Realizar una tincin de Gram para determinar la presencia de bacilos coitos Gram negativos.

Aislamiento
Tomar una pequea porcin de la pelcula bacteriana desarrollada en las muestras enriquecidas y sembrarla mediante la tcnica de agotamiento y estra sobre agar Lee. Incubar en aerobiosis a 30 C durante 24 horas. Seleccionar las colonias amarillas. Realizar tincin de Gram. Repicar a viales conteniendo Agar Manitol o un frasco con 25 mL de cerveza.

Identificacin
Catalasa: Positiva para Acetobacter y Gluconobacler. Crecimiento a pH 4.5: Positivo en caldo levadura glucosa pH 4,5. Oxidacin del etanol a CO2: Cultivar en tubos conteniendo Agar Lee. A las 24 horas el medio de cultivo las colonias que produjeron cido actico se observarn de color amarillo. A las 48 o 72 horas el medio de cultivo y las colonias que oxidan el etanol a CO2 retoman al color inicial del medio de cultivo. Conservacin de bacterias acticas Los tres objetivos que hay que alcanzar para conservar correctamente las cepas microbianas en los laboratorios de microbiologa son: que el cultivo a

conservar sea puro, evitando que se produzcan contaminaciones durante el proceso de conservacin; que durante el tiempo de conservacin sobrevivan al menos el 70-80% de las clulas, y por ltimo, que estas clulas permanezcan genticamente estables. Conservacin por congelacin. Se congelan las clulas en suspensin en un lquido con un agente crioprotector y se guardan a temperaturas inferiores a cero grados centgrados, con lo que el agua se congela. De esta forma, al no disponer las clulas de agua en forma lquida, no hay crecimiento. Cuando se quiere trabajar con las clulas as conservadas, se recuperan subiendo la temperatura. Este es el mejor mtodo de conservacin desde todos los puntos de vista, pero tiene el inconveniente de requerir aparatos especiales, y adems existe el peligro de que algn fallo del sistema produzca una subida no deseada de la temperatura durante el almacenamiento. Los cuatro factores que influyen en la viabilidad y estabilidad de las clulas conservadas por este mtodo son los siguientes: A.- Edad de las clulas: En la mayora de los casos conviene utilizar clulas maduras del inicio de la fase estacionaria de la curva de crecimiento, pero cuando se trate de organismos que presenten en su ciclo vital algn estado que les prepare para la resistencia a condiciones adversas, es preferible alcanzar este estado. Esto sucede en el caso de microorganismos que esporulan, en algunos pleomrficos e incluso en algunos ms sencillos. B.- Velocidad en la congelacin y descongelacin: Aunque hay programas de congelacin bien estandarizados para determinados casos o circunstancias, en general es mejor que las variaciones de la temperatura sean rpidas, tanto para la congelacin como para la descongelacin, por lo que para descongelar conviene poner las clulas a 37C. C.- Temperatura de almacenamiento: Debe ser lo ms baja posible. Lo mejor es guardar tubos cerrados o sellados, que contengan las clulas microbianas, sumergidos en nitrgeno lquido, que tiene una temperatura de 195C, o bien en la fase gaseosa del nitrgeno lquido, con una temperatura de 140C.

El dao que se puede producir en las clulas es debido a que a estas temperaturas hay frecuentes congelaciones y descongelaciones. Si se aade un crioprotector no inico, como por ejemplo el glicerol, se reduce la cantidad de hielo que se produce y se evita el aumento de la concentracin inica. Para la conservacin en armarios congeladores, las clulas se almacenan en criotubos (tubos de plstico esterilizables resistentes a la congelacin que cierran hermticamente), preparando lotes de varios tubos para cada cepa a conservar y utilizando en su totalidad un tubo para cada ocasin. De esta manera se evita que las cepas se congelen y se descongelen varias veces. Esto tambin se puede evitar empleando tubos con criobolas (bolas de tipo abalorio que se impregnan con la solucin celular a congelar), ya que para tomar una muestra basta con emplear una o varias bolitas sin necesidad de descongelar el resto. Este mtodo no se debe emplear para la conservacin de microorganismos anaerobios Empleo de agentes crioprotectores Estas sustancias protegen del dao que se pueda producir en las clulas microbianas en el momento de la congelacin. Existen muchos compuestos que se pueden utilizar como crioprotectores, pero el que se utiliza con ms frecuencia es el glicerol, a una concentracin del 15 al 20%. Tambin se pueden utilizar el dimetilsulfxido, la leche descremada y carbohidratos como glucosa, lactosa, sacarosa, inositol, etc. En su eleccin influye el tipo de microorganismo que se quiera conservar.

Acetobacterias fijadoras de nitrgeno Entre las Acetobacterias existen especies fijadoras y no fijadoras, pero de todas ellas se tiene muy poco conocimiento de su ecologa. As, no se sabe qu papel desempean cuando se desarrollan en las superficies de las plantas (epfitas) o en su interior (endfitas). De las bacterias que han sido ms estudiadas desde este enfoque se tiene a la fijadora gluconacetobacter diazotrophicus. Un indicio de su probable papel en la naturaleza lo han dado algunos experimentos de inoculacin en caa de azcar. En dichos experimentos se ha observado que las actividades de fijacin de nitrgeno y de produccin bacteriana de una fitohormona podran tener un efecto de incremento de biomasa de la planta.

En concordancia, se ha demostrado que al menos en ciertos cultivares de caa de azcar la inoculacin de ciertos genotipos de G. diazotrophicus. Causa el aumento de biomasa de la planta. Tambin en experimentos de inoculacin de esta bacteria en caa de azcar se ha observado que una vez en el interior de la planta, la bacteria coloniza conductos del xilema de tallo y hojas y probablemente floema del tallo. Aunque no se ha demostrado cmo G. diazotrophicus coloniza distintos tejidos de la planta, la colonizacin de xilema sugiere que el mismo pudiera constituir una va de movilizacin de la bacteria. La colonizacin y el establecimiento de G. diazotrophicus en la caa de azcar son influidos por la concentracin de nitrgeno mineral biodisponible tanto en sustrato artificial como en suelo (Cajica Espinosa, sin publicar). La diversidad gentica de las cepas de G. diazotrophicus asociadas a caa de azcar es limitada si se compara con la de otros organismos. CaballeroMellado y Martnez-Romero (1994) sugieren que esta baja diversidad se relaciona con el hecho de que G. diazotrophicus es una bacteria endfita. Este organismo mantiene una tasa baja de intercambio gentico a nivel genmico global, sin embargo an no se han realizado estudios para conocer cmo se comportan a este respecto regiones limitadas de su genoma. En la familia de las acetobacterias hasta la fecha actual, slo se han detectado fijadores de nitrgeno en un gnero. Estos fijadores son las especies Gluconacetobacter diazotrophicus (anteriormente Acetobacter diazotrophicus), G. azotocaptans y G. johannae. Estos organismos se encuentran en un grupo que est estrechamente relacionado (figura 1) y que incluye a las especies no fijadoras de nitrgeno G. liquefaciens y G. sacchari. G. diazotrophicus se ha encontrado asociado endofticamente a plantas pertenecientes a distintas familias tales como Poaceae, Rubiaceae, Bromeliaceae y aparentemente en Rosaceae (Len Burgoa, sin publicar) y una especie de la familia Malpighiaceae (Santoyo Pez, sin publicar). La distincin de las distintas acetobacterias del grupo cercano a G. diazotrophicus de manera clara y rpida se ha hecho posible utilizando tcnicas que utilizan las variaciones en secuencia nucleotdica de genes ribosomales. Aparentemente, ciertas cepas de G. diazotrophicus forman asociaciones especficas con algunas especies vegetales (Fuentes Ramrez y col., sin publicar), aunque otras se encuentran en cualquiera de los hospederos estudiados. Actualmente estamos desarrollando estudios sobre la diversidad de las acetobacterias fijadoras de nitrgeno y su presencia en distintas plantas hospederas y en diversos ambientes. Asimismo, estamos tratando de determinar si en las acetobacterias diaztrofas se han

presentado eventos de recombinacin en regiones particulares, tales como las que codifican para las enzimas que llevan a cabo la fijacin de nitrgeno.