Produccin Biolgica de Hidrgeno III - Biofotlisis del agua

Es llevada a cabo por microorganismos fotosintticos oxignicos (cianobacterias y algas unicelulares). Partiendo del agua como donador de electrones en el inicio de la fotosntesis y el flujo de tales electrones a lo largo del diagrama en Z, stos pueden una vez llegan a la ferredoxina, ser reutilizados (fotofosforilacin cclica), empleados para la reduccin de CO2 o para la formacin de H2. La formacin de H2 se debe a la actividad especfica de la hidrogenasa: 2 H+ + 2 e- H2 o, a la actividad de una nitrogenasa, que genera H2 de forma secundaria a la produccin de amoniaco: N2 + 8 H+ + 8 e- 2 NH3 + H2 * La estequiometra de la reaccin depende del tipo de nitrogenasa. En este caso, Mo-nitrogenasa.

Esquema de la biofotlisis indirecta. De Hallenbeck & Benemann (2002).

Sin embargo, la produccin de hidrgeno por este proceso es altamente ineficiente pues necesita que haya una escasa actividad fotoltica del agua por parte del fotosistema II combinada con anaerobiosis, lo que lleva a una degradacin irreversible de los cultivos. Para evitar tales problemas, se ha intentado abordar el proceso desde diversos ngulos: cultivos en ausencia reversible de azufre, mutagnesis dirigida y aleatoria para conseguir hidrogenasas menos sensibles al oxgeno, inhibir el transporte cclico de electrones, estimular la respiracin para reducir el O 2 libre en la clula, Esta es la denominada biofotlisis directa. Existe otro proceso bajo el nombre de biofotlisis denominado biofotlisis indirecta, del que se tratar ms adelante dentro de los Sistemas Complejos.

Produccin Biotecnolgica de Hidrgeno y Uso de Foto Bioreactores

REINHARDT ACUA TORRES
Introduccin En anteriores artculos quedo demostrado que la produccin de biocombustibles a partir de microalgas es la mejor alternativa ecolgica frente a la produccin de combustibles fsiles. A pesar del beneficio ecolgico, siempre existe un porcentaje de emisiones de carbono (CO2) que no se recupera con el secuestro de carbono por parte de las microalgas. El hidrgeno es un gas combustible 100% ecolgico (su combustin produce vapor de agua) que tambin puede ser producido biolgicamente por diversos microrganismos y utilizando distintas vas metablicas. As entonces, la produccin biolgica de hidrgeno se realiza en diferentes bioreactores segn sea el bioproceso metablico realizado y el tipo de microrganismo utilizado. Produccin Biolgica de Hidrgeno (Biohidrgeno) Existen cuatro bioprocesos metablicos por los que puede producirse biolgicamente el hidrgeno:

Biofotlisis del agua (Directa e Indirecta) Fotofermentacin Water-shift reaction biolgica Fermentacin oscura

Tabla 1. Reacciones generales implicadas en la produccin de bio-hidrgeno Proceso Biofotlisis Directa: Fase Luminosa 2H2O + luz 2H2 + O2 Reaccin General Microrganismo Microalgas, Cianobacterias Bacterias Prpuras, Fotofermentacin CH3COOH + 2H2O + luz 4H2CO2+2 (a) 6H 2O + 6CO2 + luz C6H12O6 + 6O2 Biofotlisis Indirecta: Reacciones de la Fase Oscura (a,b,c) En general la reaccin: 12H2O + luz 12H2 + 6O 2 Microrganismos fermentativos, bacterias Water-Shift Reaction Fermentacin Oscura en Dos Fases: H2 + CH4 CO + H2O CO2 + H 2 (a) C6 H12O6 + 2H2O 4H2 +2CH3COOH + 2CO2 (b) 2CH3COOH = 2CH4 + 2CO 2 fotosintticas Microrganismos fermentativos, bacterias (b) C6H12O6 + 2H2O 4H2 +2CH3COOH + 2CO2 (c) 2CH3COOH + 4H2O + luz 8H2 + 4CO2 Microalgas, Cianobacterias Microalgas

metanognicas Fermentacin Oscura de alto rendimiento C6 H12O6 + 6H2O 12H2 + 6CO2 Microrganismos fermentativos

Enzimas Hidrogenasa y Nitrogenasa Todos los bioprocesos metablicos de la biofotlisis estn controlados por enzimas que producen hidrgeno; de cuales existen dos tipos: hidrogenasa y nitrogenasa. Las hidrogenasas existen en la mayora de los microrganismos fotosintticos y se clasifican en dos categoras: 1. Hidrogenasas de captacin o irreversibles 2. Hidrogenasas reversibles.

Produccin de Hidrgeno mediada por la Hidrogenasa Las hidrogenasas de captacin actan nicamente como catalizadores para el consumo de hidrgeno; por eso son irreversibles. Las hidrogenasas reversibles como su nombre lo indica, tienen la capacidad tanto de producir hidrgeno como de consumirlo, en funcin de lascondiciones de reaccin y de iluminacin. La hidrogenasa reversible es la enzima responsable de la produccin de hidrgeno, catalizada por la siguiente reaccin: 2H + + 2Xred 6H2 + 2Xoxd El portador de electrones (X) usualmente es la ferredoxina (Fd) esta sereduce con el agua como donador de electrones por la reaccin fotoqumica de la biofotlisis.

Produccin de Hidrgeno mediada por la Nitrogenasa Las nitrogenasas son responsables de la fijacin del nitrgeno, se distribuyen principalmente entre los procariotas (incluyendo cianobacterias) y no se producen en las clulas eucariotas (bajo las cuales se clasifican microalgas). El nitrgeno molecular se reduce a amoniaco por el consumo de poder reductor (mediado por ferredoxina) y ATP. La reaccin es sustancialmente irreversible yproduce amonaco: N2 + 6H1+ + 6e- 2HN3 12ATP 12 (ADP + Pi) Luego, en una reaccin secundaria la nitrogenasa cataliza la reduccin de protones en la ausencia de nitrgeno 2H+ + 2e- H2

Esquema del mecanismo fotosinttico que genera poder reductor (NADPH) y ATP para la posterior fijacin de CO2 4ATP 4 (ADP + Pi), atmsfera de argn. La nitrogenasa es extremadamente lbil en presencia de oxgeno gaseoso; a diferencia de, la hidrogenasa, que lo produce. Sin embargo, las cianobacterias han desarrollado mecanismos de proteccin de nitrogenasa del gas oxgeno. Otros factores son: el alto suministro de energa ATP dependiente y la reduccin de potencia. Para contrarrestar todas estas deficiencias los microrganismos han desarrollado diferentes mecanismos; el mecanismo ms exitoso es la localizacin de la nitrogenasa en los heterocistos de las cianobacterias filamentosas; durante lafotosntesis oxignica, los compuestos orgnicos producidos por la reduccin del CO2, se transfieren a los heterocistos y se descomponen para proporcionar nitrogenasa con la reduccin de potencia (se genera poder reductor); el ATP es proporcionado por la PSI-dependiente dentro de heterocistos en la fotosntesis anoxignica. Biofotlisis del Agua

Esquema de la Biofotlisis La biofotlisis es la foto disociacin del agua por microrganismos vivos; es decir, la disociacin de agua en hidrgeno y oxgeno utilizando la energa solar y microrganismos fotosintticos(microalgas verdes y cianobacterias); la reaccin global es: H2O + 2H+ > H2 + 1/2(O2) + 2H+; G = 238 kJ/mol. Los microrganismos capturan la energa de la luz a travs de sus clorofilas ypigmentos fotosintticos. Estos ltimos, son los encargados de absorber los fotones (partculas de luz) y generar el poder oxidante (gradiente de protones) capaz de descomponer el agua enprotones (H+) y electrones (e-) y oxgeno gaseoso (O2) en el proceso iluminado de biofotlisis directa. Los electrones producidos generan un gradiente que favorece la reduccin de la ferredoxina (Fd) y de otros intermediarios energticos en la fotosntesis. Ese poder reductor es utilizado parareducir el CO2 hasta la formacin de carbohidratos (almidn en microalgas y glicgeno en cianobacterias) y lpidos (usados para crecimiento celular y como reserva energtica y de sustrato); como parte del metabolismo celular de los microrganismos. A partir de estos sustratos metablicos (metabolitos) los diferentes microrganismos pueden producir hidrgeno (H2) porbiofotlisis indirecta. Los microrganismos generan hidrgeno por dos razones: 1. Para eliminar el exceso de equivalentes reducidos,

2. Como bioproducto de la fijacin del nitrgeno. La produccin de H2 mediante biofotlisis (directa o indirecta) depende de la presencia o ausencia de luz. La biofotlisis directa se lleva a cabo bajo una radiacin luminosa; en tanto que la indirecta, en la oscuridad. Esquema de la Biofotlisis Directa

Biofotlisis Directa En la biofotlisis directa se eleva el nivel energtico de los electrones del agua y enseguida ocurre de manera simultnea, la desintegracin del lquido y la transferencia de electrones a la Fd, producindose de manera continua H2; no obstante, este no es utilizable como fuente de hidrgeno, ya que, sirve como almacn de una parte de la energa proveniente de la luz. Lascianobacterias filamentosas utilizan la enzima nitrogenasa para realizar la biofotlisis directa, mientras que, las microalgas unicelulares utilizan la enzima hidrogenasa reversible para realizar el mismo bioproceso. Se generan 2 moles de H2 por cada mol de O2 liberado, siendo lasmicroalgas unicelulares las mejores productoras de H2 por esta va (Brentner et al., 2010).

Biofotlisis Indirecta Bajo condiciones especiales de oscuridad y ausencia de oxgeno (anoxigenia) la ferredoxina puede ser utilizada por las enzimas hidrogenasa y/o nitrogenasa para reducir protones y generar hidrgeno molecular: 2H+ + 2Fd H2 + 2Fd. La biofotlisis indirecta consiste en la primera etapa de fotosntesis til para la acumulacin de carbohidratos; los cuales son utilizados en unasegunda etapa de fermentacin oscura; en la que, se produce hidrgeno, a partir de estos (carbohidratos). Produccin de Hidrgeno por Biofotlisis Indirecta

Esquema del mecanismo de produccin de bio-hidrgeno de la cianobacteria Cyanothece 51142 por medio de energa solar y CO2 atmosfrico. El CO2 se fija durante el da para sintetizar glucgeno que sirve como una reserva de energa y la fuente de electrones para la produccin de H2 por la noche. Una cepa de un microrganismo marino de fijacin de nitrgeno Cyanothece 51142 ha demostrado ser la forma ms eficiente de produccin de bio-hidrgeno hasta la fecha. Cyanothece 51142 escapaz de producir hidrgeno aerbicamente ya que, controla sus procesos metablicos por un reloj circadiano interno. Fotosintetiza durante el da y almacena carbono (CO2) como glucgeno; pero por la noche, realiza la fijacin de nitrgeno mediante el glucgeno obtenido como fuente de energa y utilizando la nitrogenasa para convertir N2 a NH3 con H2 como subproducto. Aun cuando, el oxgeno est presente, las altas tasas de respiracin de Cyanothece son capaces de crear un ambiente anaerobio dentro de las clulas que permiten a la nitrogenasa poder funcionar. Biotecnolgicamente se ha encontrado que para optimizar la produccin de hidrgeno, las cianobacterias producen ms si se cultivan en presencia de fuentes de carbono adicionales; siendo el glicerol, la ms efectiva; con la enorme ventaja de que tambin es un producto de desecho de la produccin industrial de biodisel. Mecanismos Combinados

Esquema de produccin combinada de hidrgeno Alga: Bacteria Fotosinttica

Mecanismos Combinados de Biofotlisis Como parte de su esquema evolutivo y adaptativo, los micro-organismos generan el H2 y el O2 de manera separada y utilizando diferentes espacios y distintos tiempos. La finalidad es proteger las enzimas hidrogenasa y nitrogenasa de

la accin del oxgeno; sobretodo la enzima hidrogenasa que es sumamente sensible a ese gas. Las cianobacterias y microalgas unicelulares utilizan ciclos de luz-oscuridad para proteger a las hidrogenasas reversibles; mientras que, las cianobacterias filamentosas, dado que son fijadoras de nitrgeno, poseen clulas especializadas (heterocistos) que son impermeables al O2 y que protegen a las nitrogenasas. Teniendo en cuenta que las microalgas son capaces de generar hidrgeno, produciendo cidos orgnicos mientras que, las bacterias fotosintticas, necesitan dichos cidos orgnicos para la sntesis de hidrgeno; entonces, resulta lgico combinar ambos procesos de tal forma que, las microalgas generan hidrgeno y cidos orgnicos o alcoholes de forma anaerobia, en la oscuridad, a partir de la materia orgnica presente ; de forma que, las bacterias fotosintticas puedan emplear dichos compuestos orgnicos, para generar hidrgeno en condiciones de iluminacin anaerobia. En este sentido, se debe implementar un sistema en dos fases. La Tabla 2 muestra un esquema general de las reacciones bioqumicas involucradas en la produccin de H2 mediante estos mecanismos. Tabla 2. Mecanismos de produccin de bio-hidrgeno

Biofotlisis y Bioprocesos A pesar de la alta eficiencia de conversin del sustrato y la elevada pureza del H2 producido (99.5%) mediante biofotlisis (Brentner et al., 2010) es necesario mejorar los rendimientos de productividad de los bioprocesos fotoqumicos, principalmente debido a la baja eficiencia fotoqumica que presentan la mayora de los microrganismos fotosintticos, en relacin a la biofotlisis y la produccin fotoqumica de hidrgeno. El problema se ha resuelto parcialmente diseando fotobioreactores que permitan la adecuada penetracin de la luz y la transferencia de energa entre las clulas y hacia los sistemas fotosintticos relacionados.

Tambin se investiga el uso de cepas mutantes de microalgas y cianobacterias; o el desarrollo de cepas transgnicas, a las cuales, por ingeniera gentica, se les ha inhibido el funcionamiento de los complejos cosechadores de luz con la finalidad de mejorar el rendimiento del quantum fotosinttico. Con ingeniera metablica se han diseado cepas de cianobacterias deficientes de los genes que codifican para la hidrogenasa de respuesta, y con la capacidad aumentada de almacenaje de glicgeno (Brentner et al., 2010; Yu y Takahashi, 2007).

Diagrama propuesto para la generacin de biohidrgeno por fotobioreactores de dos etapas. Adems, la sensibilidad de las hidrogenasas de microalgas al O2, se ha disminuido utilizandofotobioreactores de dos etapas: 1) Etapa 1 Aerbica: en la primera etapa se produce la biomasa y se fotosintetiza (lumnica) 2) Etapa 2 Anaerbica: en la segunda se produce H2; sta se realiza en la oscuridad, al mismo tiempo que se mantiene con privacin de azufre, lo que inhibe la produccin de oxgeno. Diseo del Bioproceso de Biofotlisis Indirecta A nivel conceptual el diseo del bioproceso para la produccin de biohidrgeno debe tomar en cuenta las siguientes operaciones: 1. Crecimiento de las microalgas o de las bacterias fotosintticas 2. Concentracin celular 3. Induccin de la hidrogenasa o la nitrogenasa 4. Control y Regulacin del Fotoperiodo 5. Produccin de Biohidrgeno en Foto Bioreactor 6. Operacin Continua 1. Crecimiento de las microalgas o de las bacterias fotosintticas

El crecimiento de la biomasa (microalgas o bacterias fotosintticas) consiste en cultivar las microalgas o las bacterias fotosintticas en estanques abiertos o lagunas y suministrarles los adecuados y requeridos nutrimientos para que se realice el proceso natural de fotosntesis. Laecuacin cintica de crecimiento de los microrganismos

bacterianos, se rige mediante unareaccin autocataltica (reaccin de primer orden):

3 -1

Donde: X =

concentracin de biomasa, kg/m ; t = tiempo, h; = tasa especfica de crecimiento, h . La tasa especfica de crecimiento puede ser modelada segn el Modelo Conjunto de Primer Orden y Orden Cero(Cintica de Blackman): = KII Donde: = max; cuando I>Is e I<Is, respectivamente. Recordando que la hidrogenasa es inhibida en presencia de oxgeno, el Modelo Hiperblico Rectangular(similar al modelo de Monod y de Michaelis-Menten)

es el que debe aplicarse para cintica enzimtica:

-1 -1

Donde: = tasa especfica de crecimiento,

h ; max = tasa especfica mxima de crecimiento, h ; I = intensidad de la luz, W/m2; KI = coeficiente de saturacin (modelo Monod) para la intensidad de luz, W/m2. Alternativamente se puede aplicar el Modelo de

Bannister:

Donde es un factor de correccin emprico para el modelo. O elModelo de

Aiba:

Donde Ki corresponde a una constante de inhibicin, m2/W. El modelo de Aiba es

el modelo ms utilizado por simplicidad y adecuada descripcin del comportamiento cintico de los microrganismos fotosintticos; corresponde a un modelo tipo Monod, y puede ser fcilmente corregido para incorporar el efecto de inhibicin mostrado por los cultivos frente a altas intensidades de luz. Para efectos de estudio, se ha considerado como ejemplo prctico una cintica de crecimiento tipo Monod, en que el sustrato limitante corresponde a la intensidad de la luz y para el que el coeficiente de saturacin KI y la tasa mxima de crecimiento especfico, puede ser obtenidos grficamente, utilizando los datos reportados por Janssen et al. (2000) que son presentados en la Figura 1.

Figura 1 Tasa de crecimiento especfico () de Chlamydomonas reindhardtii como funcin de iluminacin continua de distintas densidades de flujo de fotones (PFDs) A partir del grfico presentado puede obtenerse: Chlamydomonas reindhardtii, al igual que la mayora de los microrganismos fotosintticos, responde a la luz de acuerdo a la ecuacin: I(d) = Io exp(-eXd) que describe la absorcin de una luz incidente de intensidad I0 a una profundidad d en el reactor. Donde: I(d) = intensidad de la luz absorbida a una profundidad d, W/m2; I0 = intensidad de luz incidente, W/m2; e = coeficiente de extincin, m2/kg; X = concentracin de la biomasa, kg/m3; d = profundidad, m. Estrictamente, esta relacin es vlida slo para luz monocromtica; pero puede ser utilizada para luz policromtica, si se corrige el coeficiente de extincin (al considerar su dependencia con la longitud de onda). Relaciones con la Luz

Cuando la luz pasa a travs de un cultivo denso, la intensidad de luz absorbida decae rpidamente conforme aumenta la profundidad del foto-bioreactor; a nivel de superficie, la intensidad de luz absorbida debera ser igual al de la luz incidente; sin embargo, gracias a su aparato fotosinttico, los microrganismos fotosintticos son capaces de utilizar un mximo de luz incidente(denominado intensidad de saturacin Is), mediante el uso de mecanismos

especializados en susfotosistemas.

Es = Ecuacin de Bush corresponde a una razn corregida

entre la luz aprovechada por el aparato fotosinttico de las microalgas (Is) y la luz incidente (I0). Si la intensidad de luz incidente es mayor que la intensidad de saturacin, la diferencia de energa se pierde como calor y el proceso disminuye la eficiencia. 2. Concentracin Celular Dado el gran volumen de lquido contenido en el cultivo celular y el microscpico tamao de los microrganismos, es necesario concentrar la biomasa (separacin lquido-slido), a fin de evitar el sobredimensionamiento de los equipos en las etapas siguientes del proceso. La concentracin de diseo del bioreactor debe ser ptima, de forma que permita una alta tasa de produccin de biohidrgeno y un tamao adecuado de los equipos (costo operacional versus costo de equipos). Si bien esta concentracin no est especificada en la literatura, de acuerdo a Benneman (1998) debe ser entre 30-45 kg/m3. No obstante, estudios ms recientes apoyan que se pueden obtener concentraciones 50 kg/m3 y mayores (hasta 50 kg/m3), manejando adecuadamente las condiciones de crecimiento y ambientales del cultivo microrganismos.

Fases de Crecimiento de Microalgas Fotosintticas

Microalgas Fotosintticas en Diferentes Fases de Crecimiento

3. Induccin de la Hidrogenasa y la Nitrogenasa Una vez concentrada la biomasa, deben inducirse los mecanismos para que los microrganismos produzcan biohidrgeno por biofotlisis indirecta, mediante la activacin de las enzimas hidrogenasa y nitrogenasa. Induccin de la Hidrogenasa: la induccin de la hidrogenasa pasa por dos etapas; a saber: Etapa Luminosa: de fotosntesis, en donde se acumulan carbohidratos que se utilizarn en; Etapa Oscura: o de fermentacin oscura, en donde el cultivo debe ser sometido a condiciones de anaerobiosis y de oscuridad, que inducen la sntesis y actividad de la hidrogenasa.

Produccin de Hidrgeno mediada por la Hidrogenasa El biohidrgeno es producido por la hidrogenasa en la etapa luminosa, mediante la siguiente reaccin: 2H + + 2Xred 6H2 + 2Xoxd el portador de electrones (X) usualmente es la ferredoxina(Fd); sta se reduce con el agua como donador de electrones por la reaccin fotoqumica de labiofotlisis. Induccin de la Nitrogenasa: la induccin de la nitrogenasa, tambin pasa por dos etapas:Luminosa y Fermentacin Oscura; la diferencia estriba en que la nitrogenasa es extremadamente lbil en presencia de oxgeno gaseoso; a diferencia de la hidrogenasa que lo produce; es por eso que la fermentacin oscura con la nitrogenasa, debe darse en condiciones estrictamente anoxignicas y sin presencia de nitrgeno; esto es, en una atmsfera de argn. Etapa Luminosa: en la etapa luminosa se el nitrgeno molecular se reduce a amoniaco por el consumo de poder reductor (mediado por ferredoxina) y ATP. La reaccin es sustancialmenteirreversible y produce amonaco: N2 + 6H1+ + 6e- 2HN3 12ATP 12 (ADP + Pi)

Produccin de Hidrgeno mediada por la Nitrogenasa Etapa Oscura: en una reaccin secundaria la nitrogenasa cataliza la reduccin de protones en la ausencia de nitrgeno 2H+ + 2e- H2 4ATP 4 (ADP + Pi) Eso es, en una atmsfera de argn. 4. Control y Regulacin del Fotoperiodo

El fotoperiodo es el tiempo de exposicin a los ciclos de luz/oscuridad a los que son sometidos los microrganismos fotosintticos durante su cultivo. El control y regulacin del fotoperiodo es de especial importancia para optimizar la produccin de biohidrgeno ya que, como vimos, la biofotlisis se realiza en dos etapas: una iluminada donde se producen carbohidratos y una oscura donde se genera el hidrgeno. Para optimizar la produccin de biohidrgeno es necesario determinar cual es el fotoperiodo ptimo; el cual vara segn la especie de microrganismo. Por ejemplo, para determinar el fotoperiodo optimo para la produccin de hidrgeno por Chlorella vulgaris; se expuso el cultivo a cuatro patrones de luz diferentes: en la oscuridad durante 72 horas, en la oscuridad durante 24 horas antes de ser expuesto a la luz (intensidad de 120 mole/m2/s) durante 72 horas, expuestos a la luz durante 72 horas, y expuestos a la luz durante 24 horas antes de ser sometida a la oscuridad durante 48 horas. La ltima condicin fue la que mostr la mayorproduccin de hidrgeno total (530 5 ml/l de medio) y una tasa de liberacin de hidrgeno mxima (34,8 ml/h/l). Adems, los cultivos de clulas se inmovilizaron, el medio fue privado de azufre y se purg con N2. El crecimiento durante 72 horas bajo condiciones de luz parcial fue esencial para que la produccin de hidrgeno fuera continua y ms enrgica. La adicin de glucosa al medio azufredeficiente, aumento de la produccin de hidrgeno por 18 veces, bajo condiciones de luz parcial. Como conclusiones: para aumentar la productividad de hidrgeno es necesario:

Determinar el fotoperiodo ptimo; Operar bajo condiciones de luz parcial; Un medio de cultivo lquido azufre-deficiente; Aadir una fuente de carbono alternativa.

5. Produccin de Biohidrgeno en Foto Bioreactor

El dimensionamiento del bioreactor se efecta de acuerdo a las siguientes relaciones:

*

Donde: t =

tiempo de residencia caracterstico para las microalgas, h; t = tiempo de residencia en el foto bioreactor, h; V = volumen del foto bioreactor, m3; V* = volumen del foto bioreactor para la nueva situacin, m3; F = caudal a tratar, m3/h. El tiempo de residencia t determina la tasa especfica de produccin de hidrgeno mediante las siguientes

relaciones:

Donde: t = tiempo de residencia; P = producto (H2);

qp = tasa especfica de produccin de hidrgeno; X = biomasa. La produccin de hidrgeno por biofotlisis indirecta como indica la ecuacin (2) es un compromiso entre la concentracin celular X y la capacidad biosinttica de la misma (qp). El concepto que resume ambos aspectos es el deproductividad; esto es, la cantidad de producto obtenido dividido el tiempo necesario para obtenerlo. La productividad puede ser mejorada aumentando X, qp o ambos; pero un gran aumento de X causa una disminucin de qp; por lo que, es necesario, encontrar una solucin de compromiso para lograr la mxima productividad. La Produccin de Biohidrgeno en Foto Bioreactor debe transitar por los siguientes 4 pasos:

6. Operacin continua Una planta biotecnolgica para producir hidrgeno (basada en el proceso de biofotlisis indirecta) requiere de un modelo de operacin continua como el que se muestra en el diagrama. Eldimensionamiento de los equipos asociados a las principales operaciones; as como, el de cualquier otro equipo, se sustenta en la realizacin de los respectivos balances de masa y energa.En base a estas consideraciones los balances de materia para X, S y

P son:

En estado estacionario las concentraciones dentro del

bioreactor permanecern constantes en el tiempo, lo que significa igualar a cero las ecuaciones. De la primera y teniendo en cuenta que rX = x, resulta: donde D es la velocidad de dilucin. Larelacin F/V se denomina velocidad de dilucin (D) y como se observa tiene como unidad larecproca de tiempo (1/t). As, la velocidad de dilucin es el inverso del tiempo promedio de residencia (t) y es igual al nmero de veces que una cantidad de mezcla de reaccin (X) equivalente al volumen del reactor (V) pasa a travs del recipiente de reaccin por unidad de tiempo. En estado estacionario (EE) las derivadas con respecto al tiempo son iguales a cero y la ecuacin para la concentracin celular tiene la solucin:

Formacin de Producto: En estado estacionario, la 3 ecuacin se reduce a: O bien

a: Donde P representa la concentracin de producto en estado estacionario. Dependiendo de como sea la cintica de formacin del producto ser la forma de la curva P vs. D.

QUE ES LA FOTOLISIS?La fotlisis es la ruptura de enlaces qumicos por causa de energa radiante. Se llama fotlisis o fotolisis, fotodisociacin, o fotodescomposicin a la disociacin de molculas orgnicas complejas por efecto de la luz, y se define como la interaccin de uno o ms fotones con una molcula objetivo. Es el proceso en el que se basa la fotosntesis. QUE ES LA BIOFOTOLISIS?La biofotolisis consiste en la descomposicin del agua en hidrgeno y oxgeno mediante la accin combinada de la luz solar y la capacidad fotosinttica de plantas verdes, ciertas bacterias y algas azules. La investigacin del proceso de biofotolisis ha conocido grandes progresos en la ltima dcada, en cuanto a la caracterizacin bioqumica de las algas que son capaces de hacerlo y las condiciones necesarias para que la produccin de hidrgeno ocurra, pero falta un largo camino que recorrer para la obtencin del alga superproductora y diseo de los adecuados fotobioreactores que permitan alcanzar la realizacin de un proceso tecnolgicamente prctico para que la produccin de hidrgeno a partir de luz, agua, dixido de carbono y algas verdes, se convierta en la mayor fuente biolgica de energa renovable, sin emisin de gases con efecto invernadero ni contaminacin medio ambiental. Biofotlisis del Agua

Esquema de la Biofotlisis La biofotlisis es la foto disociacin del agua por microorganismos vivos; es decir, la disociacin de agua en hidrgeno y oxgeno utilizando la energa solar y microorganismos fotosintticos (microalgas verdes y cianobacterias); la reaccin global es: H2O + 2H+ > H2 + 1/2(O2) + 2H+;G = 238 kJ/mol. Los microrganismos capturan la energa de la luz a travs de sus clorofilas y pigmentos fotosintticos. Estos ltimos, son los encargados de absorber los fotones (partculas de luz) y generar el poder oxidante (gradiente de protones) capaz de descomponer el agua en protones (H+) y electrones (e-) y oxgeno gaseoso (O2) en el proceso iluminado de biofotlisis directa. Los electrones producidos generan un gradiente que favorece la reduccin de la ferredoxina (Fd) y de otros intermediarios energticos en la fotosntesis. Ese poder reductor es utilizado para reducir el CO2 hasta la formacin de carbohidratos (almidn en microalgas y glicgeno en cianobacterias) y lpidos (usados para crecimiento celular y como reserva energtica y de sustrato); como parte del metabolismocelular de los microrganismos. A partir de estos sustratos metablicos (metabolitos) los diferentes microrganismos pueden producir hidrgeno (H2) por biofotlisis indirecta. Los microrganismos generan hidrgeno por dos razones: 1. Para eliminar el exceso de equivalentes reducidos, 2. Como bioproducto de la fijacin del nitrgeno. La produccin de H2 mediante biofotlisis (directa o indirecta) depende de la presencia o ausencia de luz. La biofotlisis directa se lleva a cabo bajo una radiacin luminosa; en tanto que la indirecta, en la oscuridad.

Biofotlisis Directa

Esquema de la Biofotlisis Directa En la biofotlisis directa se eleva el nivel energtico de los electrones del agua y enseguida ocurre de manera simultnea, la desintegracin del lquido y la transferencia de electrones a la Fd, producindose de manera continua H2; no obstante, este no es utilizable como fuente de hidrgeno, ya que, sirve como almacn de una parte de la energa proveniente de la luz. Las cianobacterias filamentosas utilizan la enzimanitrogenasa para realizar la biofotlisis directa, mientras que, las microalgas unicelulares utilizan la enzimahidrogenasa reversible para realizar el mismo bioproceso. Se generan 2 moles de H2 por cada mol de O2 liberado, siendo las microalgas unicelulares las mejores productoras de H2 por esta va (Brentner et al., 2010) Biofotlisis Indirecta

Bajo condiciones especiales de oscuridad y ausencia de oxgeno (anoxigenia) la ferredoxina puede ser utilizada por las enzimas hidrogenasa y/o nitrogenasa para reducir protones y generar hidrgeno molecular: 2H+ + 2Fd- H2 + 2Fd. La biofotlisis indirecta consiste en la primera etapa de fotosntesis til para la acumulacin de carbohidratos; los cuales son utilizados en una segunda etapa de fermentacin oscura; en la que, se produce hidrgeno, a partir de estos (carbohidratos).

Produccin de Hidrgeno por Biofotlisis Indirecta

Esquema del mecanismo de produccin de bio-hidrgeno de la cianobacteria Cyanothece 51142 por medio de energa solar y CO2 atmosfrico. El CO2 se fija durante el da para sintetizar glucgeno que sirve como una reserva de energa y la fuente de electrones para la produccin de H2 por la noche. Una cepa de un microrganismo marino de fijacin de nitrgeno Cyanothece 51142 ha demostrado ser la forma ms eficiente de produccin de bio-hidrgeno hasta la fecha. Cyanothece 51142 es capaz de producir hidrgeno aerbicamente ya que, controla sus procesos metablicos por un reloj circadiano interno. Fotosintetiza durante el da y almacena carbono (CO2) como glucgeno; pero por la noche, realiza la fijacin de nitrgeno mediante el glucgeno obtenido como fuente de energa y utilizando la nitrogenasa para convertir N2 a NH3 con H2 como subproducto. Aun cuando, el oxgeno est presente, las altas tasas de respiracin de Cyanothece son capaces de crear un ambiente anaerobio dentro de las clulas que permiten a la nitrogenasa poder funcionar. Biotecnolgicamente se ha encontrado que para optimizar la produccin de hidrgeno, las cianobacterias producen ms si se cultivan en presencia de fuentes de carbono adicionales; siendo el glicerol, la ms efectiva; con la enorme ventaja de que tambin es un producto de desecho de la produccin industrial de biodisel. DATO: El genoma de Cyanothece 51142, una cianobacteria unicelular en diazotrficas importante del ciclo del nitrgeno del mar