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Glucide

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DOSAGE DU GLUCOSE EN SOLUTION PAR SPECTROPHOTOMETRIE

1. Prsenter le but et le principe de la raction. (Vous prsenterez notamment les formules semi-dveloppes des acides picrique et picramique, sachant que le groupement nitro est NO2.) But : Dterminer la concentration dune solution de glucose inconnue en utilisant les proprits rductrices des oses au moyen dun dosage colorimtrique utilisant lacide picrique. Principe : Lacide picrique est rduit en acide picramique par le groupement rducteur du glucose. Lacide picramique est orange et, dans les conditions opratoires utilises, lintensit de cette coloration orange sera proportionnelle la quantit de glucose en solution, ce qui permettra la ralisation dun dosage colorimtrique 570 nm (suit la loi de Beer-Lambert). 2. Indiquer, dans un tableau, la masse de glucose (en mg) prsente dans chaque tube de la gamme (tubes 1 6) et labsorbance de chacun de ces tubes mesure 570 nm. Rappel du tableau colorimtrique
Tube Solution de glucose 2 (mL) Solution X (mL) Eau dminralise (mL) Ractif lacide picrique (mL) 1 0 0 2 1 2 0,4 0 1,6 1 3 0,8 0 1,2 1 4 1,2 0 0,8 1 5 1,6 0 0,4 1 6 2 0 0 1 X 0 2 0 1

Calcul de la masse de glucose (cas du tube 2) On connat : o V = 0,4 mL = 0,4.10-3 L o = une concentration proche de 2 g.L-1 Do :
m donc m x V 2 x 0,4.10-3 8.10-4 g 0,8 mg V
Tube Solution de glucose 2 (mL) Masse de glucose1 par tube (mg) Absorbances2
1

1 0 0 0,000

2 0,4 0,82 0,001

3 0,8 1,63 0,02

4 1,2 2,45 0,037

5 1,6 3,26 0,057

6 2 4,08 0,078

Les masses de glucose sont approximatives et devaient tenir compte de la masse de glucose rellement pese 2 Valeurs donnes par le spectrophotomtre

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Attention, lors de la lecture spectrophotomtrique, certaines prcautions doivent tre prises : Sassurer que la cuve est propre et ne bloque pas le passage du faisceau lumineux Sassurer que la solution est homogne et ne prsente pas de prcipit Rincer la cuve entre le passage de deux solutions uniquement si les concentrations ne sont pas croissantes Fermer la porte du spectrophotomtre lors de la lecture Noter la valeur exacte sachant que lappareil naffiche pas le premier chiffre sil sagit dun zro (exemple : 0,076 sera affich .076) 3. Sur une feuille de papier millimtre (fournie en TP), tracer la droite A = f (quantit de glucose par tube en mg) Le trac pouvait tre ralis sur du papier millimtr ou lordinateur (logiciel : Excel, regresim, )

Exemple : Droite dtalonnage A570 nm = f (masse de glucose)

0,09 0,08 0,07
Absorbance (570 nm)

Droite moyenne

0,06 0,05 0,04 0,03 0,02 0,01 0 0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5 Masse de glucose (mg)

Dans ce cas, il ne fallait pas tenir compte du point 0 et tracer la droite daprs les autres points. Il nest dailleurs par rare dune droite dtalonnage ne passa pas par zro. 4. Reporter labsorbance obtenue avec la solution X sur la courbe dtalonnage et estimer la quantit de glucose prsente dans le tube puis la concentration de la solution X. Si labsorbance observe pour le tube X tait de 0,04, alors la masse de glucose prsente dans ce tube tait de 2,45 mg

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0,09 0,08 0,07

Absorbance (570 nm)

Droite moyenne

0,06 0,05 0,04 0,03 0,02 0,01 0 0 0,5 1 1,5 2

A = 0,04

mglucose = 2,45 mg
2,5 3 3,5 4 4,5

Masse de glucose (mg)

Pour calculer la concentration en glucose de la solution X, il suffisait de rapporter cette masse au volume de solution X dpos dans le tube X puisquil sagissait l de la seule source de glucose du tube.

Calcul : On connat : o V = 2 mL = 2.10-3 L o m = 2,45 mg = 2,45.10-3 g (lecture graphique) Do :

2,45.10-3 m 1,25 g.L-1 V 2.10-3 Vous deviez trouver une concentration proche 1 g.L-1.