AUTARQUIA ASSOCIADA UNIVERSIDADE DE SO PAULO

DESENVOLVIMENTO

DE METODOLOGIA

PARA

DETERMINAO DE ALGUNS PESTICIDAS EM GUAS EMPREGANDO MICROEXTRAO SLIDA (SPME) EM FASE

EMY KOMATSU

Dissertao apresentada como parte dos requisitos para obteno do Grau de Mestre em Cincias na rea de Tecnologia Nuclear - Materiais. Orientador: Dr. Jorge Moreira Vaz

So Paulo 2004

93

INSTITUTO DE PESQUISAS ENERGTICAS E NUCLEARES Autarqua associada Universidade de So Paulo

DESENVOLVIMENTO DE METODOLOGIA PARA DETERMINAO DE ALGUNS PESTICIDAS EM GUAS EMPREGANDO MICROEXTRAO EM FASE SLIDA (SPME)

EMY KOMATSU

L,.

V F? n \

Dissertao apresentada como parte dos requisitos para obteno do Grau de Mestre em Cincias na rea de Tecnologia Nuclear - Materiais.

Orientador: Dr. Jorge Moreira Vaz

SO PAULO 2004

ccOTssAo wam. D EMERSA MuaffvR/sp-iPEi:

Verso revisada peio autor

(Dedico esse tra6aOio para a pessoa que sempre acreditou em mim, me incentivou e ajudou em tudo, sempre, traSaCho... tomando possveCesse

(Para o Marcos

Lemes,

com muito amor e carinho...

(Dedico esse traaClio para a pessoa que antes de tudo, acreditou em mim...

(para o Jorge

Vaz,

com carinho...

AGRADECIMENTOS

Aos amigos Anglica, Carla, Cleide, Cristina, Elias, Luiz, Maria, Marta, Patrcia Ricardo e Srgio, sempre presentes.

Aos amigos Alexandre, Andrea, Cristina, Heliara, Jos Carlos, Regiane e Silvana pelo companheirismo nessa etapa.

s minhas amigas Adriana e Cristiane pelo incentivo, amizade e carinho.

Deise pela amizade.

minha me Kazuko e irmo Wilson; Elzira e Jos pelo apoio e compreenso.

Ao departamento CQMA pela utilizao da infra-estrutura na realizao deste trabalho.

SABESP pelas amostras concedidas.

Ao CNPq pela bolsa concedida.

DESENVOLVSWIENTO DE METODOLOGA PARA DETERMINAO DE ALGUNS PESTICIDAS EM GUAS EMPREGANDO MICROEXTRAO EM FASE SLIDA fSPME

Emy Komatsu

RESUMO

A utilizao dos pesticidas em escala mundial possibilita sua deteco em vrios compartimentos ambientais. Como conseqncia, muitos deles podem ser encontrados em baixas concentraes necessitando que metodologias

analticas, com alta sensibilidade e confiabilidade, sejam desenvolvidas para aplicao nas mais diversas matrizes. Neste determinao de trabalho algumas foi desenvolvida de metodologia em para guas extrao e

classes

pesticidas

empregando

microextrao em fase slida (SPME), associada cromatografia a gs acoplada a espectrometria de massas (GC/MS). A metodologia foi aplicada a pesticidas pertencentes s classes das dinitroaniiinas, triazinas, organodorados e piretrides em amostras de guas. Estes pesticidas foram escolhidos devido a seu elevado consumo mundial, potencial xenobitico e ubiqidade. Foram otimizadas as condies cromatogrficas e do processo de microextrao em fase slida (SPME). As melhores condies para extrao com SPME foram: fibra de poliacrilato e extrao direta por 30 minutos. Nestas condies a recuperao obtida com a metodologia proposta variou de 94% a 108% e a sensibilidade do mtodo, calculada pelo limite de deteco, variou de 0,004 a 0,1 pg L'\ Os valores obtidos para recuperao em amostras reais, com spike em trs nveis de concentrao, apresentaram boa concordncia com os valores esperados.

DEVELOPMENT OF METHODOLOGY FOR DETERMINATION OF SOME PESTICIDES IN WATERS USING MICROEXTRACTION IN SOLID PHASE (SPME)

Emy Komatsu

ABSTRACT The widespread global use of pesticides leads to their distribution in several environmental compartments. Since most pesticides can be found at very low concentrations in the environmental samples, highly sensitive and reliable analytical methodologies are necessary for their determination. In this work a methodology was developed for extraction and

determination of some pesticides classes in water samples using solid phase microextraction (SPME) coupled with gas chromatography and mass spectrometry (GC/MS). The developed methodology was applied for dinitroaniline, triazine, organochlorine and pyrethroides. The choice of these pesticides was based mainly on their extensive global use, xenobiotic potential and ubiquity. During method development the chromatographic and SPME conditions were optimized. Best results were obtained using polyacrilate fiber for direct SPME extractions for 30 minutes. Under these conditions the sample recovery of the proposed method ranges from 94% to 108% and the sensitivity of the method as determined by the detection limite (DL) of the system ranged from 0.004 to 0.1 pg L'\ Results

obtained with spiked samples at three concentration levels showed acceptable agreement with the expected values.

SUIMRIO Pgina NDICE DE FIGURAS NDICE DE TABELAS LISTA DE ABREVIATURAS. 1. INTRODUO 1.1. Pesticidas 1.1.1. Trifluralina 1.1.2. Simazina 1.1.3. Atrazina 1.1.4. Pentaclorofenol 1.1.5. Bifentrina 1.1.6. Permetrina 1.2. Microextrao em fase slida (SPME) 1.2.1. Introduo 1.2.2. Recol)rimentos polimricos 1.2.3. Aspectos tericos da SPME... 1.2.4. Otimizao das condizes de extrao 1.3. S e p s i ^ o e anlise 1.3.1. Crtxnatografia a gs 1.3.2. Espectrometria de massas 2. OBJETIVOS 2.1. O l i v o s Gerais 2.2. Objetivos Especficos PARTE EXPERIMENTAL 3.1. Reagentes e Solventes 3.2. Otimizao das condies cromatogrficas 3.2.1. Ajuste das condies cromatogrficas 3.2.2. Ajuste das condies do espectrmetro de massas 3.3. SPME 3.3.1. Procedirronto 3.3.2. Fibras utilizadas 3.3.3. Otimi^^o das condies de extrao 3.3.3.1. Escolha do tipo de fibra e modo de extrao 3.3.3.2. Tempo de extrao 3.3.3-3. Velocidade de agitao 3.3.3.4. Efeito da X)ncTtra3 salina 3.3.3.5. Efeito do pH 3.3.4. Curvas analticas e limite de deteco 3.3.5. Efeito carTyover 3.3.6. Recuperao do mtodo 3.3.7. Aplicao em amostras ............ ... i ...v vi .... 1 2 4 5 6 7 8 9 12 12 14 16 19 19 19 20 22 22 22 23 23 24 24 24 25 25 25 26 26 27 27 27 28 28 29 29 29

3.

11

4.

RESULTADOS E DISCUSSO 4.1. Otimizao das cxMTdies cromatogrficas 4.1.1. Ajuste das condies axMnatogrficas 4.1.2. Ajuste das condies do e^)ectrmetro de massas 4.1.3. Condies otimizadas para o G C ^ S 4.2. SPME 4.2.1. Otimizao das condies de extrao 4.2.1-1. Escolha do tipo de fibra e modo de extrao 4.2.1.2. Tempo de extrao 4.2.1.3. Velocidade de ^ i t a ^ o 4.2.1.4. Efeito da concentrao salina 4.2.1-5. Efeito do pH 4.2.2. Curvas analticas e limites de deteco 4.2.3. Efeito carr^ver 4.2.4. Recuperao do mtodo 4.2.5. /^licao em arrostras CONCLUSES CONSIDERAES FINAIS SUGESTES PARA TRABALHOS FUTUROS .

30 30 30 33 36 36 36 36 37 38 39 40 41 43 44 45 48 49 50 .....51 53

5. 6. 7.

APNDICE REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

NDICE DE FIGURAS FIGURA 1 FIGURA 2 FIGURA 3 FIGURA 4 FIGURA 5 . Frmula estrutural e espectro de massas da trifluraiina . Fmnula estrutural e espectro de massas da simazina . Frmula estrutural e espectro de massas da atrazina . Frmula estrutura e especfr^o de massas do p^itadorofenol 4 5 6 7

. Frmula estrutural da forma geomtrica ds nas formas pticas 1R e 1S da bifentrina e espectro de massas, obtidos neste trabalho 8 . Frmula estrutural e espectro de massas da 1 R-cis-Permetrina 9

FIGURA 6 FIGURA 7 FIGURA 8

. Frmula estrutural e especio de massas da 1 R-frans-PermetrinalO . FilHa: a) esquema dos componentes da fibra (Werdnski, 1999); b) fit)ra rosqueada ao emboto; c) fibra adaptada ao holder 13 - Modos de extrao: a) modo direto e b) modo headspace, a parte dnza representa o recdbrimento polimioo da fit>ra (Pav^iszyn, 1997) 14 . Comparao entre os modos de extrao: direto e hesdspace (HS) axn as diferentes fibras avaliadas. Resposta normalizada para 1 pg L'^ para cada pestdda em gua dekxiizada, extrados sc* agitao constante de 900 rpm e temp^atura a b l e n t e (25" C) ...37

FIGURA 9

FIGURA 10

FIGURA 11 . Perfil de extrao dos pestiddas com adio dos pesticidas em gua deionizada, extrados com imerso direta utilizarKJo ftra de P A sob agitao constante de ^K) rpm e temp ^atura ambiente (25 C). Trifluralina, 0,13 pg Simazina, 2,14 pg L"'; Atrazina, 1,03 pg Pentadorofenol, 0.10 pg L^; Bifentrina, 0,09 pg L'^ ds-Permetrina 0,10 pg rans-Permetrina, 0.10 pg L'^ 38 FIGURA 12 . Influnda da veioddacte de agitao na extrao, com adio dos pestiddas em gua deionizada, extrados ckirante 30 minutos com fibra de PA e temperatura ambiente (25" C). Trifluralina, 0,13 pg L SiTiazina, 2,18 pg L ' ; Atrazina, 1,03 Pentadorofenol, 5,07 pg L''; Bifentrina, 0.09 pg L'^ ds-Permetrina. 0,10 pg L''; frans-Permetrina 0,10 pg L"^ 39 FIGURA 13 . Efeito da concentrao salina na exb-ao com adio dos pestiddas em gua deioni^^da. extrados (ktrante 30 minutos com bra de P A sob agitao constante de 900 rpm e temperatura ambiente (25" C). Trifluralina 0,13 pg L ' ; Simazina, 2,18 pg L"'; Mrazina, 1,03 ^ Pentadorof^d, 5,07 pg Bifentina, 0,09 pg L d s - P e r m e t r i n a , 0,10 pg L'^ rans-Permetrina 0,10 pg L'^ 40

IV

FIGURA 14 . Efeito do pH na extrao com adio dos pestiddas em gua dei(iizada, extrados durante 30 minutos com fit)ra de P A sob agiteio constaite de 9CK) rpm, concentrao salina de 20% mA^ de Na2S04 e temperatura ambiente (25" C). Trifluralina, 0.13 pg Simazina, 2,18 pg Atrazina, 1.03 L''; Pentadorofenol, 5,07 pg L'\ Bifentrina, 0.09 pg ds-Permetrina, 0,10 pg frars-Permetrina 0,10 pg L"' 41 FIGURA 15 . Cromatograma obtido no modo SIM com a metodologia proposta para o nvel 1 de recuperao (TABELA 11). I d ^ ^ c a o ctas picos: 1 - Trifluralina; 2 - Simazina; 3 - Atraana; 4 - Pent^orofend; 5 - Bifentrina; 6 - ds-Permetrina; 7 - frans-Permetrina. Demais picos rro fcram identificados 42 FIGURAIS . Efeito carryover na desero para extrao com adio dos pestiddas em gua deionizaja, extrados ckjrauite 30 minutos com fit)ra de P A sob s^itao constante de 9(X) rpm, concentrao salina de 2 0 % m/v de Na2S04 e temperatura ambiente (25" C). Onde a concentrao para N3 foi 0,5 pg L ' e para N5 foi 2 pg L ^ para cada pestidda 44

FIGURA 17 a) Cromatograma obtido no rrKxlo SIM para amosti^ coletada em Canania. b) Cromatograma obtido no modo SIM para amostra coletada em Canania com adio de 0,1 pg L"^ de cada pestidda. Identificao dos picos: 1 - Trifluralina; 2 - Simazina; 3 - Atrazina; 4 - PentKdorofenol; 5 - Bifentrina; 6 - ds-POTTietrina. Demais picos no ftjram identificados 46

NDICE DE TABELAS

TABELAI

. Caractersticas gerais dos compostos estudados (Anvisa, 2(K)4, Tomiin. 1994, WHO, 2004) 11 Tipos de fibras comercializadas pela Supelco 15

TABELA 2 TABELA 3

. Fragmentos de massa utilizados para quantificao no modo SIM 25

TABELA 4 TABELA 5 TABELA 6 TABELA 7

. Descrio das fibras utilizadas no trabalho . Concentraes utilizadas nas curvas analticas . Condies cromatogrficas utilizadas

26 28 30

. Resoluo dos compostos simazina/atrazina e cfs-permetiina / frans-permetrina, reas dos picos dos ccnripostos trifluralina e simazina e tempo total e anlise 31 . Condies utilizadas no espectimeti^o de massas 34

TABELA 8 TABELA 9

. reas dos picos dos compostos bifluralina e simazina e tenso do detector 35

TABELA 10 . Coeficientes de oxrelao linear e limites de deteco obtidos para a metodologia proposta 43 T/\BELA 11 . Recuperao dos nveis 1, 2 e 3 com a adio dos pestiddas em gua deionizada 45 TABELA 12 . Recuperao em amosti-a de gua bmta, com adio de 0,1 pg L'^ dos pestiddas estuda(k>s 47 TABELA 13 . Valores de n e utilizando o modo SIM 52

VI

LSST DE ASREV5TURAS

CAR/PDMS CAS RN CW/DVB CW/TPR - HPLC DDT

DL50

Carboxen/Poly(dimethylsHoxane) Caroxen/Polidimeilsiloxano

Number

Chemical Abstracts Service Registry CarbowaxIDivinylbenzene Carbowax/Templated

- Carowax/Oivinilbenzeno

Resin

1,1,1-tricloro-2,2-bis(p-clorofenil) etano - didoro-difeniltridoroetano dose letal a 50% Electron capture detectoreletrons Detector de captura de

ECD El FD FID FPD GC/MS HPLC lARC IB AM A lUPAC LLE m/z NPD PA PAHs PCBs PDMS PDMS/DVB - HPLC

Electron impact - Ionizao por impacto de eletrons Fluorescence detector^ Detector de fluorescncia Detector de ionizao por Detector fotomtrico de

Flame ionization detectorchama Flame photometric detectorchama

Gas chromatography/mass spectrometry - Cromatografia a gs/espectrometria de massas High Performance Liquid Chromatography Cromatografia a lquido de alto desempenho The International Agency for Research on Cancer Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovveis International Union of Pure and Applied Chemistry

Liquid-liquid extraction - Extrao lquido-lquido Massa/carga Nitrogen phosphorus detectorfsforo Polyacrilate - Poliacrilato Polycyclic aromatics hydrocarbons - Hidrocarbonetos policclicos aromticos Polychlorinated biphenyls - Bifenilas policloradas - Polidimetilsiloxano Divinylbenzene Detector de nitrognio

Poly(dimethylsiloxane) Poly(dimethylsiloxane) Polidimetilsiloxano

cc5i ^so rniom. DE mmm

MLICLPAR/SP-IPEM

vil

PTFE SIM SPE SPME

Politetrafluoroetileno Selected ion monitoring - monitorando o ion selecionado Solid phase extraction - Extrao em fase slida Solid phase microextraction - Microextrao em fase slida

TIC UV VOCs WHO

Total ion chromatogram - Cromatograma do ion total L//frawo/ei-Ultravioleta Volatile organic compounds - Compostos orgnicos volteis World Health Organization

1. INTRODUO A gua um meio importante sendo utilizada em diversos processos biolgicos, in^igao de plantaes, como veculo na navegao, como auxiliar em processos para obteno de energia eltrica, refrigerao de mquinas, limpeza de ruas, entre outros. Na gua so encontrados diversos elementos e compostos, slidos, lquidos ou gasosos em diferentes propores, provenientes do ar atravs de condensao e chuva, dos solos e rochas por onde circula ou armazenada e tambm do contato com as atividades humanas (Branco, 1991). A gua classificada como gua natural (Branco, 1991) ou gua de descarte. A primeira dividida em trs formas: gua subterrnea, gua de superfcie e gua potvel. A principal fonte da gua subterrnea a percolao da chuva atravs do solo. A composio da gua subterrnea pode variar dependendo da composio geolgica de rochas e solos. As guas de superfcie so constitudas pelos rios e lagos. A gua potvel pode ser obtida atravs da gua subterrnea ou pelas guas superficiais. A gua de descarte aquela cuja composio foi alterada pela atividade humana, podendo ser uma fonte de contaminao s guas naturais (Dean, 1998). A contaminao nos compartimentos ambientais geralmente causada por diversas atividades tais como: agricultura (ar pesticidas na forma de

aerossis; gua - derramamentos de pesticidas, carreamento pelas chuvas, derramamentos de combustveis; solo presena de pesticidas orgnicos

persistentes, como DDT e lindano, derramamentos de combustveis), gerao de energia (ar - PAHs provenientes do carvo; gua - PAHs provenientes de cinzas; solo - cinzas e p de carvo); indstrias metalrgicas (ar - VOCs; gua solventes provenientes da limpeza de metais; solo qumicas e eletrnicas (ar compostos qumicos diversos -

solventes); indstrias -

VOCs e outros compostos volteis; gua presentes em efluentes, solo -

materiais eletrnicos

particulados de chamins, pequenos pedaos de componentes

danificados); descartes ilegais e transportes de outras fontes (Dean, 1998). Dentre os principais tipos de contaminao os poluentes orgnicos tm maior destaque devido sua complexidade e diversidade. Os Estados Unidos da Amrica e a Comunidade Europia possuem uma lista dos compostos mais preocupantes que so monitorados freqentemente (Dean, 1998). No Brasil os

padres de potabilidade de gua so estabelecidos atravs da Portaria n 518, do Ministrio da Sade de 25/03/04 (Sade, 2004). Entre diversas espcies qumicas encontradas na gua potvel (e nos outros compartimentos ambientais), os pesticidas ocupam uma posio nica dentro da classe de poluentes orgnicos, sendo um caso de estudo ambiental, uma vez que eles so usados deliberadamente para o controle de pragas. Por causa de seu uso difundido, os pesticidas podem ser carreados para guas superficiais e guas subterrneas, podendo estar presentes na gua potvel (Younes, 2000).

1.1.Pesticidas Segundo a EPA um pesticida uma substncia ou mistura de substncias com capacidade de prevenir, destruir, repelir ou atenuar qualquer peste. Os pesticidas podem ser classificados de acordo com o tipo de peste algicidas, fungicidas, herbicidas, inseticidas, acaricidas, moluscidas, nematicidas, ovicidas, entre outros. Alm disso podem ser includas substncias desfolhantes, dessecantes e reguladoras do aescimento de insetos e plantas (EPA, 2004). Muito utilizados na agricultura, os pesticidas tambm so usados em campanhas de sade pblica e podem ser classificados de acordo com sua estrutura qumica; assim dentro da classe dos inseticidas organossintticos existem os benzoiluricos, piretrides, organodorados, organofosforados,

carbamatos, alm dos inseticidas de origem vegetal como a nicotina, estricnina e as piretrinas. Existem tambm fungicidas do tipo ditiocarbamantos,

organofosforados, imidaziicos, triazicos e succinimdicos, e herbicidas como os benzonitrlicos, uricos, dinitrobenzenamnicos, tiocarbamatos, triaznicos e

carbanlicos (Koh, 1996, Larini, 1999, Younes, 2000). Com a descoberta das propriedades inseticidas do DDT, o controle de pragas marcado por uma mudana na utilizao de pesticidas que antes utilizavam somente compostos inorgnicos e extratos vegetais (Larini, 1999). Muito utilizados principalmente aps a II Guerra Mundial, os pesticidas foram aplicados visando o aumento de produtividade e a diminuio da mo-deobra nas lavouras (Barnard, 1997, Ecobichon, 2001). Os primeiros pesticidas sintticos foram utilizados em 1940 trazendo grandes benefcios na produo de alimentos. Entretanto em 1962, Rachel Carson relata em seu livro Silent Spring

(Primavera Silenciosa), a persistncia e os danos ambientais causados pela utilizao dos pesticidas, levantando questes sobre os riscos e beneficios do seu uso (Werf, 1996). Os principais inseticidas utilizados no Brasil em 1936 eram compostos de origem inorgnica como os compostos de arsnio e chumbo e de extratos vegetais como a nicotina e o piretro. O DDT foi o primeiro composto orgnico utilizado na agricultura brasileira em 1943, sendo ainda utilizado como inseticida e carrapaticida em bovinos. Entretanto seu alto poder residual foi determinante para a restrio de sua utilizao apenas nas campanhas contra malria e foi proibido em diversos pases (Larini, 1999). Quando utilizados de forma correta os pesticidas aumentam a

produo em 40%, porm sua m utilizao pode acarretar em danos ambientais e pode trazer srias conseqncias sade humana (Richardson, 1998) tais como: problemas respiratrios, dermatites, irrigaes na garganta,

neurotoxicidade e efeitos carcinognicos, teratognicos e mutagnicos (Barnard, 1997). Com o uso deliberado (Belfroid, 1998, Kolpin, 2000) de pesticidas, estes e seus metablitos (originrios de processos fsicos, qumicos e biolgicos de degradao) podem ser encontrados, por contaminao de fontes pontuais ou difusas, em guas de superfcie, guas subterrneas e gua potvel (Kodama, 2001, Uri, 1997, Werf, 1996). Exemplos de fontes pontuais de contaminao de pesticidas so os efluentes industriais e a aplicao direta em guas como no controle de ervas-daninhas em rios. Como fontes difusas podem ser citadas as chuvas e disperso por aerossol durante a aplicao nas culturas agrcolas. Embora proibidos, os pesticidas orgnicos persistentes ainda esto presentes no meio ambiente e na gua potvel (Biziuk, 1996, Dean, 1998, Younes, 2000). Neste trabalho so estudados os pesticidas trifluralina, simazina, atrazina, pentaclorofenol, bifentrina e permetrina (ismeros c/s e trans). A escolha destes pesticidas se deve a sua grande utilizao tanto em escala mundial quanto nacional, seu elevado potencial txico e pela ubiqidade apresentada em alguns estudos (Hoff, 1999, Levitan, 2000).

cofsssAo maomi De mm

uucm-mpw

1.1.1. Trifluralina A trifluralina um herbicida do grupo qumico das dinifroaniiinas e segundo a lUPAC possui nomenclatura a,a,a-triflu(xo-2,6-din!tro-A/,A/-dipropil-p-

toluidina. Sua nomenclatura referente ao CAS nmero 1582-09-8 2,6-dinitroA/,/\/-dipropil-4-{trifluorometil)benzenamida. Sua frmula estrutural e espectro de massas (NIST, 1993) so apresentados na FIGURA 1. um composto estvel em altas temperaturas e decompe-se sob luz ultra-violeta (TomIin, 1994).

3ie 2S4
O)

50-43 F4-F F 248 ^ 70 93lfB 100 131 172 1 ^ ^ 232 300 m/z 290 335

-o

FIGURA 1. Frmula esbxitural e espectro de massas da trifluralina

Segundo a lARC, a bifluralina (grau tcnico) dassificada cxtmo um pestidda do grupo III - no dassificado como cardnognico (VWO, 2004)Pestiddas pertencentes a essa dasse so pouco absorvidos pela via oral e drmica em mamferos. Uma grande parte da trifluralina administrada pela via oral, em ratos, excretada nas fezes. Aps a absoro oral, a trifluralina depositada prindpalmente no fgado, rins, bao e pulmes, sendo excretada em 70% atravs da urina. So compostos pouco txicos para mamferos, em termos de efeitos agudos, a toxiddade oral em ratos machos de DL50 > 5000 mg kg\

Entretanto, esses compostos podem conter impurezas nas suas formulaes como as Nitrosaminas (N,N-dealquilnitrosaminas), que so considerados agentes genotxicos na dassificao de compostos qumicos cardnogniojs. A trifluralina pode conter at 150 mg L'^ de N-nitroso-N-propilamina, entretanto a ANVISA limita o valor mximo de 0,5 mg L"' de N-nitrosaminas nas formulaes de trifluralina (Anvisa, 2004, Larini, 1999). A trifluralina um herbidda seletivo que atua penetrando na muda da planta, afrapalhando a diviso celular inibindo o desenvolvimento da raiz. No

Brasil, a trifluralina aplicada incorporada ao solo antes do plantio nas culturas de algodo, alho, amendoim, arroz, berinjela, cana-de-acar, cetx)la, cenoura, dtros, couve, couveflor, feijo, feijo-vagem, girassol, mamona, milho, pimento, quiabo, repolho, rosa, soja e tomate. Tambm aplicada em situaes de premergnda das plantas infestantes, no pr-plantio de eucalipto, pinus e

seringueira ou no ps-plantio para evitar vegetaes indesejadas (Anvisa, 2004, Tomiin. 1994).

1.1.2. Simazina A simazina um herbidda do grupo qumico das triazinas e segundo a lUPAC possui nomenclatura de 6-doro-A/^,A/^-dietil-1,3,5-triazina-2,4-diamina. Sua nomendatura referente ao CAS nmero 122-34-9 6-cloro-/V,A/'-dietil-1,3,5triazina-2,4-diamina. Sua frmula estrutural e espectro de massas (NIST, 1993) so apresentados na FIGURA 2. No solo, a atividade microbiana responsvel pela degrajao de grande parte de simazina. A lixiviao limitada bela baixa solubilidade da simazina em gua (Tomiin, 1994).

>

44

NH
186 68 173 156

5 ^ 50
-o c

28 29

Ntf N
96 104 123 138

71

145

m/z FIGURA 2. Frmula estrutiral e espectro de massas da simazina

Segundo a lARC, a simazina dassificada como um pestidda do grupo III - no dassificado como cardnognico (WHO, 2004). Os herbiddas triaznicos apresentam baixa toxicidade aguda, a DL50 de simazina em ratos > 5000 mg kg'^ para via oral. Em relao toxiddade da simazina o fgado o rgo alvo durante as exposies prolongadas (Larini, 1999). A simazina um herbidda seletivo sistmico absorvido pela raiz. No Brasil, a simazina utilizada em situaes de pr e ps-emergnda nas culturas

de abacaxi, banana, cacau, caf, cana-de-acar, dtros, ma. milho, pinus. seringueira, sisal e uva (Anvisa, 2004, Tomiin, 1994).

1.1.3. Alrazina A atrazina um herbidda do grupo qumico das triazinas e segundo a lUPAC possui a seguinte nomendatura: 6-doro-A/^-etil-Ar *HSopropill -1,3,5-triazina2,4-diamina Sua nomendatura r e f ^ e n t e ao CAS nmero 1912-24-9 6-doro-/Vetil-A/'-(1-metiletil)-1,3,5-triazina-2,4-diamina. (Tomiin, 1994). Sua frmula

estrutural e esfectro de massas (NIST, 1993) so apresentados na FIGURA 3.

sa
O)

43

MirN

so68 27
as

a
2D0 215

1/

93 100

122132

173 158 200

M/Z

FIGURA 3. Frmula estrutural e espectro de massas da atrazina

Segundo a lARC, atraana dassificada como um pesticida do grupo IIB - possvel cardnognico para o homem (WHO, 2004). Os herbiddas 1,3,5-triaznicos so absorvidos peia via respiratria, pelo trato gastrointestinal e pela via drmica. Em ratos, aps adminstrao oral em doses de 30 mg k g " \ a atrazina excretada em grandes propores nas primeiras 72 horas, atravs da urina e fezes. A absoro drmica da atrazina representa cerca de 16% da aplicao direta sobre a pele humana. Mesmo apresentado baixa toxiddade aguda a atrazina apresenta atividade mutagnica (Larini, 1999). A atrazina um herbidda seletivo sistmico absorvido pela raiz e pelas folhas, que atua inibindo a fotossntese e interferindo em outros processos enzimticos. No Brasil, a atrazina aplicada em situaes de pr e psemergnda das plantas infestantes nas culturas de cana-de-acar, milho, abacaxi, pinus, seringueira e sisal (Anvisa, 2004, Tomiin, 1994).

1.1.4. Pentaclorofenol O pentaclorofenol um biocida utilizado como inseticida, fungicida e fierbicida do grupo qumico dos organodorados. Tambm conheddo como PCP, pentadorofenol a nomenclatura segundo a lUPAC e tamt>m refere-se ao CAS nmero 87-86-5 (Tomlin, 1994). Sua frmula estrutural e espectro de massas {NIST, 1993) so apresentados na FIGURA 4.
Cl Cl
< D

266 OH Cl 2ill

X.

165
O X)

50

95 130 46 87 107 100

c i ' Y Ci 202 230

1/

118 203 miz

liUx

FIGURA 4. Frmula estrutural e espectro de massas do pentadorofenol Segundo a lARC, o pentadorofenol dassificado como um composto do grupo IIB - possvel cardnognico ao homem (WHO, 2004). O pentadorofenol irritante para a pele, mucosas e trato respiratrio. As intoxicaes ocorrem por inalao de seus vapores e de suas partculas, durante sua produo,

formulao, manipulao e aplicao. Devido sua lipossolubilidade fadimente absorvido pela via drmica e pelo trato gastrointestinal quando ingerido addental ou intendonalmente. Aps a absoro, o pentadorofenol distribudo pelo organismo concentrando-se especialmente no fgado, rins, corao, crebro, e nos teddos gordurosos. No homem, o pentadorofenol excretado na urina em concentraes propordonais quantidade ingerida. A toxiddade aguda do pentadorofenol em ratos machos atravs de via oral de DL50 145 mg kg \Larini, 1999). O pentadorofenol utilizado no conti-ole de fungos evitando o

apodredmento de madeiras, no controle de cupins e como herbidda. No Brasil, utilizado exclusivamente para tratamento de madeiras destinadas para

dormentes, postes, moures para cercas rurais, esteios e vigas, com a finalidade de registo-o no IBAMA (Anvisa, 2004, Larini, 1999, Tomlin, 1994).

1.1.5. Bifentrina A bifentrina um insetidda e acaridda p^ent^nte ao gn^K qumico dos piretrides. Possui dois ismeros cuja nomendatura segundo a lUPAC so 2-metilbifenil-3-ilmetil{Z)-(1 RS,3RS)-3-(-2-cloro-3,3,3-trifluoroprop-1 -enil)-2,2dimetiiddoprc^noc^t)0)d!ato e 2-metilt)ifenil-3-ilrnetil(Z)-(1f?S}-crs-3-{-2-doroSua nomendatura

3,3,3-trf]uorc^op-1-eni)-2,2-dimetilddoproFnocartxdlato.

referente ao CAS nmero 82657-04-3 (2-fnetil[1,r-bifenill-3-i!)metil 3-{2-cloro3,3,3-trifluoro-1-jxDfiil)-2,2-dimetilddc^ropanocartx>xilato (Tomlin, 1994). Segundo a WHO, a bifentrina (grau tcnico) dassificja como um pestidda do grupo 11. A bifentrina um piretride que possui estruturas semelharrtes s piretrinas que so insetiddas de origem vegetai presentes nas ores de crisntemo. praticamente insolvel em gua, muito solvel em solventes orgnicos e pouco p^sistente no meio ambiente sendo dassificada como no persistaite. Devido sua estrutura qumica ocxn anel dd(^ropano existem ismeros geomtricos (cfs e trans) e pticx)s (1R e I S ) . A frmula estrutural do ismero ds da bifentrina e suas formas I R e 1S e seu espectro de massas (NIST, 1993) so apresentados na FIGURA 5, o padro de bifentrina utilizado neste b^abalho foi obtido do Incute of Industria Organic Chemi^ry

Analytical Department - Reference Material N IPO 053

CH,

Cl
CP,

50
"D

t
165 115 100 141 ISO m/z

65

77

91

11

FIGURA 5. Frmula estruturai da forma gecwnbica d s nas formas pticas 1R e 1S da bifentrina e especb^o de massas, obtidos neste ti-abalho

As principais vias de absoro no homem so a oral, gstrica, drmica e inalatria, sendo absorvidos rapidamente pelo trato gastrintestinal. A bifentrina menos txica atravs de via drmica apresentando uma DL50 > 2000 mg kg"' para coelhos, do que atravs da via oral com uma DL50 > 56 mg kg"' para ratazanas (Larini, 1999, WHO, 2004). A bifentrina um pesticida que atua no estmago dos insetos. No Brasil o pesticida aplicado nas partes areas das culturas de algodo, dtros, couve, crisantemo, feijo, fumo, melo, pepino e tomate. Tambm nebulizado no solo, em volumes pequenos, no controle de formigas cortadeiras; pulverizado em gros armazenados (arroz, milho e trigo) e aplicado ao solo durante o plantio de cana-de acar (Anvisa, 2004, Tomlin, 1994).

1.1.6. Permetrina A permetrina um insetidda pertencente ao grupo qumico dos piretrides. Sua nomenclatura segundo a lUPAC 3-fenoxibenzil (Tomlin,

(1 RS,3RS, 1 RS,3Sf?)-3-(2-didorovinil)-2,2-dimetilddoproanocartx)xilato

1994). A nomendatura da cs-Permetrina, referente ao nmero CAS 54774-45-7, (1R-c/s)-(2,2-didoroetenil)-2,2-ddo dimetilddopropanocartKJxiico

(3-fenoxifenii) metil ster. A nomedatura da trans-Permetrina, referente ao nmero CAS 51877-74-8, (1R-rans)-3-<2,2-didoroetenil)-2,2-ddo

dimetilcidopropanocartxjxlico (3-fenoxifenil) metil ster. As frmulas estruturais e espectro de massas (NIST, 1993) dos ismeros da permetrina so apresentados na FIGURA 6 e FIGURA 7. 10

I
>
= -O

Cl

50-

0 5

1 G 3
77 91 127

i 4

I
jiiiv-4>i-

*
100

103

68
200

255

m/z

FIGURA 6. Frmula estrutural e espectro de massas da 1R-cfSPermetrina

C O W S S O m\Om D E BJRaA NUaEAR/SP-iPEN

10

C O

:>

Cl Cl

181

u 50"O

163 51 SO 77 91 115 100 127 153 150 m/z

FIGURA 7. Frmula estrutural e espectro de massas da 1R-fransPermetrina

Segundo a lARC, a permetrina dassificada como um pesticida do grupo III - no dassificado como cardnognico (WHO, 2CX)4). Em relao exposio, a toxiddade depende de fatores como a proporo dos ismeros; para valores na proporo de 40:60 dos ismeros c/sArans atravs da via oral a DL50 em ratazanas de 4 3 0 ^ 0 0 0 mg k g ' e para ratos 540-2690 mg k g V Para a via drmica a toxiddade aguda apresenta DL50 > 4000 mg k g ' para ratazanas e > 2000mg k g ' para coelhos (Tomlin, 1994). A permetrina encontrada na proporo de 3:2:3:2 para seus ismeros [1R, trans], [1R, c/s], [ I S , trans] e [1S, c/s], sendo que o ismero [1R, c/s] possui maior caraderstica insetidda seguida pelo ismero [1R, trans] (WHO, 2004). A permetrina um pesticida que atua no estmago dos insetos tendo um efeito repelente. No Brasil o pestidda aplicado nas partes areas das culturas de algodo, arroz, caf, couve, couve-flor, fumo, milfio, repolho, soja, tomate e trigo. Tambm aplicado na desinfeco de armazns de fumo, em gros armazenados (arroz, milho a granel e trigo) e no confrole de formigas (Anvisa, 2004, Tomlin, 1994).

Na Tat)ela 1 so apresentadas algumas das caracteristicas gerais dos pestiddas estudados neste trabalfio.

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TABELA 1. Caractersticas gerais dos compostos estudados (Anvisa, 2004, Tomlin, 1994, WHO, 2004)
SOLUBILIDADE

PESTICIDA
Trifluralina

F R M U L A
CsHieFaNjG,

GRUPO

USO"'

CLASSE"
III

LOGKO.
4,69 2,1 (25C)

PM
335,3

P K A

0,22

1,7

Simazina

CyHijCINs

III

6,2

201.7

Atrazina

C 6 H 1 4 C I N 5

III

33

2,3 3,56 (pH=6,5)

215,7

1,7

Pentaclorofenol

CeCIsNaO

H;I;F

80

266,3

4,71

Bifentrina

C 2 3 H 2 2 C I F 3 O 2

i;A

II

0,1

>6

422.9

Permetrina

C 2 1 H 2 0 C I 2 O 3

III

0,2

6,5

391,3

D = dinitroanilina; T = triazina; O = organoclorado; P = piretride A = Acaricida; F = Fungicida; H = Herbidda; I = inseticida Classe I - Produtos Extremamente Txicos (faixa vermelha); Classe II - Produtos Altamente Txicos (faixa amarela); Classe III - Produtos Medianamente Txicos (faixa azul); Classe IV - Produtos Pouco Txicos (faixa verde) ' em gua a 20 C

Tendo em vista a preocupao com a sade humana e o equilbrio ecolgico aqutico existe a necessidade de se desenvolver mtodos alternativos para avaliar a qualidade das guas em relao aos contaminantes orgnicos em nveis ambientais. De acordo com a Legislao Nacional, segundo a Portaria 518 do Ministrio da Sade (Sade, 2004) os valores permitidos em gua potvel para os pesticidas estudados so: trifluralina 20 pg L'\ simazina 2 pg L'\ atrazina 2 pg L"\ pentaclorofenol 9 pg L'' e permetrina 20 pg L'\ Entretanto, na Europa os valores so bem mais restritos: 0,1 pg L"' para cada pesticida sendo que a soma de todos os pesticidas no deve ultrapassar 0,5 pg L"' (Balinova, 1996, Dean, 1998). A bifentrina no foi citada na Portaria do Ministrio da Sade e segundo a Organizao Mundial da Sade, o pesticida ser monitorado para avaliao toxicolgica at 2009 (WHO, 2004). A anlise de pesticidas em matrizes aquosas geralmente ocorre em duas etapas: a extrao e pr-concentrao e a

quantificao. A s tcnicas mais utilizadas como etapas de extrao e prconcentrao so a extrao lquido-lquido (LLE) e a extrao em fase slida

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(SPE). A cromatografia a gs e a cromatografia a liquido de alto desempenho (HPLC) so as tcnicas mais utilizadas na etapa de quantificao de amostras ambientais em matrizes aquosas (Balinova, 1996, Biziuk, 1996, Dean, 1998, Dean, 1996, Hoff, 1999, Tekel, 1996, Vreuis, 1999). Neste trabalho utilizaram-se uma tcnica de extrao alternativa, a microextrao em fase slida (SPME) e a cromatografia a gs acoplada ao espectrmetro de massas, visando conseguir valores prximos aos recomendados. A SPME (Alpendurada, 2000, Lord, 2000, Pawliszyn, 1997, Pawliszyn, 1995, Pealver, 1999) difere das outras tcnicas de extrao para amostras aquosas, pelo menor tempo de anlise e a no utilizao de solventes, minimizando a gerao de descartes e a exposio ocupacional. Em relao s outras, uma tcnica simples, rpida e de fcil manuseio, alm da vantagem da utilizao de pequena quantidade de amostra, podendo ser aplicada em diversas reas tais como: farmacutica (Krog, 1995, Moeder, 2000), ambiental (Aguilar, 1998, Bartk, 1997, Beltran, 2000, Berrada, 2000, Bouaid, 2001, Dugay, 1998, Eisert, 1996, Eisert, 1994, Eisert, 1996, Frias, 2003, Krutz, 2003, Lambropoulou, 2000, Natangelo, 1999, Rogers, 1998), alimentcia (Fernndez, 2001, Kataoka, 2000), aromas (Augusto, 2000), forense e toxicolgica (Langenfeld, 1996, limites

Pawliszyn, 1999, Wercinski, 1999). Entretanto, embora seja uma tcnica verstil, as condies de extrao devem ser otimizadas para cada tipo de amostra e analito. Neste caso os principais parmetros a serem avaliados so: modo de extrao {headspace ou imerso direta na amostra lquida); tipo de fibra; pH;

velocidade de agitao; concentrao inica; temperatura e volume da amostra.

1.2.Microextrao em fase slida (SPME) 1.2.1. Introduo A SPME um processo que basicamente se divide em duas partes: na primeira ocorre a adsoro do analito de interesse na superfcie de um fio de fibra de slica fundida, e na segunda, ocorre a desero desses analitos sob alta temperatura no injetor de um cromatgrafo a gs. A SPME consiste em um fio de fibra de slica fundida recoberto com uma camada polimrica adaptada a um suporte similar a uma seringa. Nessa

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camada polimrica ocorre o fenmeno de adsoro e/ou absoro dos analitos presentes nas amostras que podem ser de diferentes matrizes (aquosas ou gasosas). Na etapa de adsoro a fibra exposta diretamente na amostra lquida ou gasosa. A amostra armazenada em um vial com tampa contendo um septo de silicone/PTFE, ento o dispositivo da SPME introduzido furando o septo. A fibra exposta na amostra empurrando-se o mt>olo para baixo e "travando-o" na metade da guia em "Z". Aps o tempo de extrao a fibra retrada puxando o embolo para d m a nesse suporte {holder), como forma de proteo at que seja exposta novamente na etapa de descwo. Um esquema do primeiro dispositivo comerdai fabricado pela SUPELCO est representado na FIGURA 8.

parafuso colorido mola sapto cilindro trava de reteno guia -Z visor

guia ajustvel

fio de slica fundida

recobrnento poiimrico

FIGURA 8 Fibra; a) esquema dos componentes da fibra (W^-cinski, 1999); b) fitwa rosqueada ao mbolo; c) filxa adaptada ao hokler

Quando a cromatografa a gs utilizada para a sqDarao e quantificao dos analitos, a etapa de desero trmica realizada no prprio injetor do cromatgrafo. A desoro no HPLC realizada atravs de uma interface montada no lugar do loop de injeo onde o solvente carregar os

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analitos at a coluna para a separao e s ^ i n t e quantificao {Pawliszyn, 1997, Pawliszyn, 1999, Wercinski, 1999). H dois tipos de amosta^em, o modo direto, onde a fit)ra exposta i n s u d a diretamente na amosti-a lquida e o modo headsf^:e, onde a fibra

inserida na fase gasosa da amosti^. Um esquema representando os dois tipos de injeo s ^ apresentados na FIGURA 9. As setas indicam a migrao dos analitos da amostra pa-a o recx)bnmento poiimrico da fit>ra, no caso do headspace os analitos entram em equilibrio com a fase gasosa antes de serem adsovidos e/ou at)sorvidos no r e c d 3 r m e n t o poiimrico da fitira.

fibra

fasea quosa

FIGURA 9. Modos de exb-ao: a) modo direto e b) modo headspace; a parte dnza re|xesenta o recobrimento poiimrico da fibra (Pawliszyn, 1997)

1.2.2. Recobrmefit< polimrcos Com^dalmente ewstem fibras fatxicadas com dif^entes tipos de fases polimrcas. A identifica^ visualizada pela colorao do parafuso que pode ser observada atiavs do viso* do dispositivo da SPME. As fibras agem por dois tipos cte mecanismos - adsoro e absoro. As filxas a d s t ^ ^ e s so constitudas de material poroso e possuem alta rea superfidal, tm capacidade de adsoro limitada e agem por meio de interao fsica ab-avs das foras de

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Van der Walls. J as fibras absorventes so constitudas por material que contm fase lquida formando um filme, possuem capacidade de absoro que depende da espessura do filme e a extrao ocorre por meio de partio. Semelhante s colunas cromatogrficas onde o princpio "semelhante dissolve semelhante" aplicado, a fibra escolhida baseada na seletividade para certos analitos de interesse e suas faixas de volatilidade. Assim sendo fibras apolares como a PDMS, retm hidrocarbonetos muito bem, ao contrrio das fibras polares como a PA e Carbowax, que extraem compostos polares como fenis e cidos

carboxlicos. A afinidade da fibra um ponto crucial para a extrao, pois tanto a fibra como a matriz, iro competir pelos analitos. Citando como exemplo a extrao de compostos polares de uma matriz aquosa, a fibra deve ter alta polaridade a fim de ter uma afinidade maior aos analitos do que a gua. Na Tabela 2 so apresentadas alguns tipos de fibras comercializadas (Wercinski, 1999).

TABELA 2. Tipos de fibras comercializadas pela Supelco

Fibra Slica fundida PDMS - 7 Mm PDMS - 30 pm PDMS-100 pm PA - 85 pm PDMS-DVB - 65 pm CW-DVB-65 pm Carboxen-PDMS - 85 pm DVB/Carboxen-PDMS - 55 pm/30 pm CW-TPRHPLC-60 pm PDMS-DVB HPLC - 50 pm

Mecanismo Adsoro Absoro Absoro Absoro Absoro Adsoro Adsoro Adsoro Adsoro Adsoro Adsoro

Polaridade

Apolar Apolar Apolar Polar Bipolar Polar Bipolar Bipolar Polar Bipolar

A forma pela qual o recobrimento ligado slica fundida, na fibra, determina sua estabilidade. Existem recobrimentos ligados s fibras com trs tipos de ligaes: no ligadas quimicamente; ligadas quimicamente e com ligaes cruzadas. As fibras com fases no ligadas so apenas filmes que

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recobrem a fibra, so estabilizadas, mas no contm qualquer agente que faa ligaes cruzadas entre si e com a fibra; essas fases no so muito resistentes a solventes, principalmente clorados, e tendem a inchar, porm podem resistir em alguns solventes polares como metanol e acetonitrila. Essas fases tambm possuem menor estabilidade trmica do que as fibras ligadas qumicamente. As fibras com fases com ligaes cruzadas possuem agentes que fazem ligaes cruzadas entre si, contendo agentes ligantes como os grupos vinil. Essa uma fase mais estvel, porm o recobrimento ainda no est ligado fibra de slica fundida. So mais resistentes a solventes do que as fibras com fases no ligadas e possuem melhor estabilidade trmica. As fibras com fases ligadas contm agentes que tm ligaes cruzadas como as fibras de ligaes cruzadas, porm a diferena que as ligaes esto cruzadas entre si e com a fibra de slica fundida. Uma vez que o recobrimento est diretamente ligado com a fibra, elas so mais resistentes a maior parte dos solventes orgnicos e possuem boa estabilidade trmica, podendo at ser enxaguadas com solvente produzindo um inchamento mnimo (Wercinski, 1999). orgnico

1.2.3. Aspectos tericos da SPME Dependo do modo de extrao empregando a SPME, podem existir trs formas de equilbrio formado entre as trs fases: a) a fibra e a fase aquosa; b) o headspace e a fase aquosa e c) a fibra e a fase gasosa. O analito extrado pela fibra o resultado desse equilbrio entre as fases contidas dentro do vial. Segundo Pawliszyn (Pawliszyn, 1997), no modo headspace, a

quantidade de analito (TI), extrada no filme poiimrico da fibra, pode ser expressa pela seguinte equao: r VV K (Equao 1)

onde: TI = quantidade de analito no filme poiimrico Co = concentrao inicial do analito na fase aquosa Vi = volume do filme poiimrico Viiq = volume da fase aquosa VHS = volume da fase gasosa

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= ki k2

ki = coeficiente de partio do analito entre o filme poiimrico e a fase gasosa k2 = coeficiente de partio do analito entre a fase gasosa e a fase aquosa kl = C 1 / C 3
k2 = C3 /C2

Cl = concentrao do analito no filme poiimrico C2 = concentrao do analito na fase aquosa C3 = concentrao do analito na fase gasosa Dl = coeficiente de difuso do analito no filme poiimrico D2 = coeficiente de difuso do analito na fase aquosa D3 = coeficiente de difuso do analito na fase gasosa A concentrao de analito no headspace (C3) depende de seu

potencial qumico (p), que no estado de equilbrio deve ser o mesmo em todas as fases. Desta forma, de acordo com a lei de Henry, tem-se a relao direta entre o potencial qumico (que depende da presso parcial do analito) e a sua

concentrao em cada uma das fases componentes do sistema conforme as equaes, segundo Pawliszyn:
ki = C 1 / C 3 = R T / K F e k2 = C3 /C2 = K H / R T

onde: KF = constante de Henry do analito no filme poiimrico KH = constante de Henry do analito na fase aquosa R = constante dos Gases Quando k2 for relativamente pequeno e o volume do headspace for menor que o volume da fase aquosa (VHS < VNQ), a quantidade de analito extrada pelo filme poiimrico (r|) causar pouca diminuio de sua concentrao na fase gasosa (C3). Quando o equilbrio qumico entre a fase gasosa e a aquosa atingido e a SPME inserida no headspace inicia-se o processo de extrao pelo filme poiimrico. Desconsiderando-se a composio qumica do filme poiimrico a extrao depende, principalmente, dos seguintes fatores: a) Coeficientes de difuso (Di, D3 e D2) entre cada fase, ocorrendo tanto na direo axial quanto na direo radial;

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b) Espessura do filme poiimrico; c) Espessura da fase gasosa e d) Espessura da fase liquida No caso do HD-SPME um parmetro muito importante a ser avaliado a relao VnsA/nq, onde com a utilizao de pequenos VHS (volume da fase gasosa) em conjunto com filmes polimricos com maior espessura aumenta-se a quantidade de analito (TI) que pode ser extrada pela fibra. No modo direto, a quantidade de analito (TI), no filme poiimrico da fibra pode ser expressa pela seguinte equao: r VV K (Equao 2) KV,+V,^ Uma vez que no existe o volume do headspace, os parmetros

relacionados com os equilibrios que envolvem a fase gasosa podem ser eliminados, na prtica isso representa que o v/a/ totalmente preenchido pela amostra no modo direto de extrao. Tanto no modo headspace como no modo direto de extrao, a

dinmica de extrao segue a 2^. Lei de Fick (Pawliszyn, 1997), com os perfis de extrao variando com as condies hidrodinmicas - utilizando ou no agitao. No modo direto a agitao afeta diretamente a extrao. A quantidade extrada pelo filme poiimrico (ri), que recobre a fibra do sistema SPME, depende do coeficiente de partio (K nas equaes 1 e 2) dos analitos entre o filme poiimrico e a fase gasosa ou lquida, tanto no modo headspace quanto no modo direto. O coeficiente de partio um parmetro intrnseco para cada tipo de filme poiimrico e descreve aproximadamente o grau de seletividade para do analito, aumentando a sensibilidade em relao aos outros

extrao

componentes da amostra. A capacidade de extrao dos analitos depende da espessura do filme poiimrico que afetar diretamente na sensibilidade da extrao. Entretanto o aumento da espessura do filme (volume) acarretar no aumento do tempo de extrao, pois o processo controlado pelo coeficiente de difuso (Di) do analito no filme poiimrico (Wercinski, 1999).

19

1.2.4. Otimizao das condies de extrao A otimizao do processo de microextrao em fase slida, alm de incluir a escolha do tipo de recobrimento e a espessura de filme mais adequada, depende do ajuste das condies experimentais que afetam o transporte de massa durante o processo de microextrao. Dentre os parmetros mais significativos que aumentam a sensibilidade da SPME esto: temperatura, tipos de agitao (ultra-som ou magntica), velocidade de agitao ou potncia de sonicao, volume de amostra,

concentrao salina (efeito "salting out'),

pH do meio (no caso de espcies

ionizveis) e tempo de extrao. O controle desses parmetros extremamente importante para que o processo de SPME possa ser repetitivo garantindo assim a aplicao prtica (Pawliszyn, 1997). Embora a microextrao em fase slida seja um processo

fundamentado no equilbrio entre fases, no preciso obter a extrao exaustiva dos analitos, a extrao pode ser empregada sem que o estado de equilbrio tenha sido alcanado, bastando para tanto padronizar as condies

experimentais.

1.3.Separao e anlise As tcnicas comuns mais utilizadas para separao de um analito de outros compostos, em amostras ambientais, so a cromatografia a gs (GC) (Dean, 1998, Dean, 1996, Hoff, 1999) e a cromatografia a lquido de alto desempenho (HPLC) (Balinova, 1996, Biziuk, 1996, Dean, 1998, Hogendoorn, 2000, Tomlin, 1994). A determinao quantitativa ou qualitativa ocorre atravs de detectores especficos: FID, ECD, NPD, FPD e MS utilizados acoplados ao GC e UV e FD acoplados ao HPLC (Dean, 1998, Tadeo, 2000, Tekel, 1996).

1.3.1. Cromatografia a gs A tcnica de cromatografia se baseia na separao da amostra por partio entre duas fases. As fases so denominadas, mvel e estacionria. A fase mvel percola atravs da fase estacionria que possui grande rea superficial. A diferena entre as duas tcnicas basicamente est na partio da

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amostra, na cromatografa a gs o analito particionado entre uma fase mvel, constituda por um gs, e a fase estacionria que pode ser slida ou lquida. Na cromatografa a lquido, o analito particionado entre uma fase mvel constituda por um lquido e a fase estacionria que pode ser slida ou lquida. O principio o mesmo para as duas tcnicas: o analito separado pela afinidade relativa com a fase estacionria - quanto maior a afinidade mais os analitos so retidos pela fase estacionria. Tanto para a cromatografia a gs como para a cromatografia a lquido, para realizar as anlises preciso um sistema que realize a deteco do analito desejado. Entre os detectores utilizados em cromatografia a lquido, o iJV o mais utilizado, medindo as variaes na absorbncia da luz na regio de 190 a 350 nm. J os detectores FD medem as mudanas de fluorescncia em comprimentos de onda selecionados (Cila, 1998). Dentre os detectores utilizados em cromatografia a gs existem os detectores seletivos (ECD, NPD e FPD), que possuem alta sensibilidade a determinados elementos e os detectores universais (FID e MS) que podem ser, a princpio, utilizados para qualquer composto. Embora o detector ECD seja o mais recomendado para anlise de pentaclorofenol e o NPD, o mais recomendado para a anlise dos herbicidas simazina e atrazina, neste trabalho foi utilizada a cromatografia a gs acoplada ao espectrmetro de massas.

1.3.2. Espectrometria de massas A espectrometria de massas baseia-se no fato de que um grupo caracterstico de ons de diferentes massa/carga (m/z), formado quando uma molcula ionizada sob vcuo. Obtm-se ento um espectro de massas atravs da separao desses ons sendo registrada num grfico, com a abundncia relativa versus a m/z. Um espectrmetro de massas tem os seguintes

componentes: uma fonte de ons, um analisador de ons, um detector e um sistema de vcuo. Aps o processo de separao realizado pela coluna cromatogrfica do GC, as molculas da amostra so ionizadas na cmara de ionizao, onde so separadas no quadrupolo, pelos diferentes tipos de massa/carga interagindo com

21

OS campos eltricos do espectrmetro de massas. Entre os tipos de ionizao os mais utilizados so a Ionizao por Impacto de Eltrons (El) e a Ionizao Qumica (Cl). Na tcnica mais comum, ionizao por impacto de eltrons, as molculas so bombardeadas com eltrons emitidos por um filamento de Rnio atravs da cmara de ionizao; um ion formado sendo que os eltrons interagem com as molculas do gs de arraste do cromatgrafo (He), formando uma energia capaz de levar a molcula a um estado excitado com quantidade suficiente de energia, que resulta em fragmentos eletricamente carregados. Os fragmentos formados, de carga positiva, so levados por campos eltricos da fonte de ons at os analisadores de massa, sendo o quadrupolo mais utilizado. Os ons so separados de acordo com sua massa/carga, passando no centro das quatro barras cilndricas paralelas no qual aplicada uma voltagem. Cada on normalmente carrega somente uma carga eltrica. Os nveis geralmente so em torno de 10"'' a 10'' A, ento os ons formados so levados a uma eletromultiplicadora. Aps a eletromultiplicadora, os ons passam por um amplificador eletrnico ou electrmetro. Todo o sistema mantido a vcuo, em torno de 1,3 X 10'^ Pa (10'^ torr), para garantir a performance e um alto vcuo. O espectrmetro de massas foi escolhido por ser um detector universal, podendo ser utilizado tanto no modo qualitativo utilizando o full-scan, obtendo-se assim o cromatograma do on total (TIC);'como para quantificar os fragmentos escolhidos pela relao m/z (massa/carga), obtidos no cromatograma no modo SIM {selected ion monitoring) (Karasek, 1998, Message, 1984). A tcnica de GC/MS uma ferramenta muito importante na anlise de elementos em nveis traos, chegando a limites de deteco em nveis de picogramas (10"'^ g), servindo perfeitamente como tcnica de separao e anlise com a utilizao da SPME, que uma tcnica de extrao rpida e fcil e tem a principal vantagem de no utilizar solventes na extrao, sendo favorvel seu acoplamento a espectrometra de massas, diminuindo as interferncias dos solventes.

22

2.

OBJETIVOS

2.1. Objetivos Gerais Desenvolver mtodo analtico multiresduo para determinao dos pesticidas trifluralina, simazina, atrazina, pentaclorofenol, bifentrina e permetrina pertencentes s diferentes classes como: dinitroaniiinas; organodorados, triazinas; piretrides e

utilizando microextrao em fase slida (SPME) e cromatografa

a gs acoplada a espectrometra de massas (GC/MS).

2.2. Objetivos Especficos Otimizar as condies de extrao da SPME, avaliando parmetros como: escolha da fibra, modo de extrao, tempo de extrao, velocidade de extrao, efeito da concentrao salina, efeito do pH e avaliar o efeito carryover, aplicando o mtodo proposto em amostras de gua natural.

23

3.

PARTE EXPERIMENTAL

3 .1. Reagentes e Solventes Os padres analticos foram obtidos do Institute of Organic Ctiemistry: Industrial

trifluralina se apresenta na forma slida de colorao amarela com

99,5% de pureza; simazina, slido branco com 99,2% de pureza; atrazina, slido branco com 98,7% de pureza; e bifentrina, slido branco com 99,5% de pureza; o padro de pentaclorofenol obtido da Supelco se apresenta na forma slida de colorao branca com 99,6%; a c/s-permetrina obtida do Laboratory Government of the

Chemist se apresenta na forma de um slido branco e a fransem soluo de cicloexano, a

permetrina foi adquirida da Riedel-de-Haen 10,1 mg l'\

Solues estoque na concentrao de 1000 mg L'' foram preparadas

dissolvendo-se os padres em acetonitrila (grau HPLC, J. T. Baker) em bales volumtricos de 5mL sendo armazenadas a 4 C. Essas solues foram utilizadas para preparar solues padro diludas e para o spike em gua. A gua deionizada foi obtida por um sistema Milli-Q (Barnstead). O sulfato de sdio

(anidro, P.A.), tratado a 600 C durante 12 horas em mufla, hidrxido de sdio (pastilhas, P.A.) e cido clordrico (37%) foram adquiridos da Merck. Devido alta sensibilidade da tcnica SPME-GC/MS, o trabalho exigiu um procedimento rgido de limpeza de vidrarias e seringas. A lavagem das vidrarias e dos vials foi efetuada utilizando soluo sulfocrmica, devidamente encaminhada para um laboratrio de tratamento. Alm desse procedimento foi necessrio efetuar as lavagens

semanalmente, para evitar as contaminaes que apareceram no ambiente e proveniente dos prprios padres estudados. Apesar do uso constante de capelas, as vidrarias eram armazenadas submersas em metanol em frasco fechado, no caso dos vials e os bales volumtricos foram secos com N2 (g) e guardados fechados para evitar as contaminaes presentes no prprio ar do ambiente do laboratrio. As micro-seringas foram lavadas, com soluo de cido frmico em gua deionizada a 10% com auxlio de ultra-som e secadas com N2 (g), a cada preparo de novas solues padro e solues intermedirias para o estudo da otimizao das condies de extrao, construo de curvas analticas, no estudo de recuperao e aplicao do mtodo em amostras.

cowsso m]om DF. mmA jjaEAR/sp-PEM

24

3.2. Otimizao das condies cromatogrTicas A determinao dos pesticidas foi realizada em um cromatgrafo a gs acoplado a um espectrmetro de massas (GC/MS), Shimadzu - modelo GCMSQP5000 equipado com injetor tipo "split/splitiess". efetuada atravs do software utilizou-se coluna capilar de Class slica A aquisio dos dados,

5000, verso 2.10. No cromatgrafo fundida com fase estacionria de

(5% fenil)-metilpolisiloxano - DB-5MS com 30 m de comprimento x 0,25 mm de dimetro interno x 0,25 pm de espessura do filme {J&W Scientific), e como gs de arraste. Hlio ultra-puro (99,999%). O espectrmetro de massas com fonte de ionizao por impacto de eltrons (El - 70 eV) e analisador de massas - quadrupolo, foi operado nos modos scan e SIM {selected Ion monitoring).

3.2.1. Ajuste das condies cromatogrficas Para otimizar as condies do cromatgrafo a gs e do espectrmetro de massas preparou-se uma soluo mista com todos os padres em acetonitrila com concentrao de 25 mg L"\ denominada de soluo mix 25 mg L'\ injetou-se 1 pL desta soluo no modo scan. Foram efetuados 19 experimentos, com a injeo de uma mistura dos pesticidas na concentrao de 25 mg L'\ onde foram avaliadas diferentes onde

condies de temperatura, de rampa, fluxo, temperatura de injetor, temperatura de interface e tempo de corrida.

3.2.2. Ajuste das condies do espectrmetro de massas Para o ajuste das condies do espectrmetro de massas foram efetuados 12 experimentos, com a injeo, de 1 pL, de uma mistura dos pesticidas na concentrao de 25 mg L"\ onde foram avaliados diferentes

condies de tenso da eletromultiplicadora e tempos de scan. Para o estudo no modo SIM, os fragmentos de massa utilizados em cada mtodo esto relacionados na Tabela 3, apresentada a seguir.

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TABELA 3. Fragmentos de massa utilizados para quantificao no modo SIM Analito Trifluralina Simazina Atrazina Pentaclorofenol Bifentrina
c/s-Permetrina frans -Permetrina

Massas selecionadas (m/z) 306* - 264 - 307 201*-203-186 200*-215-217 266* - 264 - 268 181*-182-165 183*-184-163 183*-184-163

* fragmentos utilizados para quantificao; demais utilizados para confimao

3.3. SPME 3.3.1. Procedimento As solues foram preparadas a partir da adio de alquotas de solues com concentraes conhecidas dos pesticidas em gua deionizada, onde o pH foi ajustado para 3,00 com cido clordrico 5 mol L'' e hidrxido de sdio 5 mol L'' e a concentrao inica foi ajustada com soluo de sulfato de sdio a 20% (m/v). Foi utilizado um volume de 4.500 pL de gua deionizada em vial mbar de 4 mL (com capacidade de 4,7 mL), com agitao constante de 900 rpm, fechado com um septo de silicone/PTFE. A fibra, previamente condicionada no injetor do cromatgrafo, foi exposta na fase aquosa por 30 minutos a temperatura ambiente (-25 C) onde ocorreu a adsoro dos analitos na fibra. Aps a extrao a fibra foi inserida diretamente no injetor do cromatgrafo onde ocorreu a desoro dos analitos a 260 C, durante 5 minutos.

3.3.2. Fibras utilizadas Foram utilizados quatro tipos de fibra, com diferentes recobrimentos polimricos: PDMS, (polidimetilsiloxano), CAR/PDMS {carboxenl

polidimetilsiloxano), CW/DVB, (carowax/divinilbenzeno) e PA (poliacrilato), todas da Supelco. As descries das fibras esto na Tabela 4. Antes do uso, as fibras foram condicionadas no injetor do cromatgrafo de acordo com tempo e

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temperatura recomendados pelo fabricante. O condicionamento foi realizado, com a vlvula de spiit aberta, para reduzir contaminao da coluna com o

sangramento da fibra e para remover contaminantes que possam causar ruidos na linha base ou a oconrncia de artefatos.

TABELA 4. Descrio das fibras utilizadas no trabalho

Tipo de recobrimento da fibra

Estabilidade do recobrimento

Temperatura mxima ("C)

Temperatura de concidionamento (C)

Polaridade

PDMS 100pm CAR/PDMS 75pm CW/DVB 65pm PA 85pm

Nao ligada Ligaes cruzadas Ligaes cruzadas Ligaes cruzadas

280 340 260

250 280 250

Apolar Bipolar Polar

320

300

Polar

3.3.3. Otimizao das condies de extrao Para serem obtidas as melhores condies de extrao, que afetam diretamente na sensibilidade do mtodo, foram avaliados os seguintes

parmetros: tipo de fibra, modo de extrao, tempo de extrao, agitao, efeito da concentrao salina e efeito do pH.

3.3.3.1. Escolha do tipo de fibra e modo de extrao Para a escolha do melhor tipo de fibra foram efetuados ensaios no modo sean, com as fibras PDMS, CAR/PDMS, CW/DVB e PA em solues onde foi adicionado uma quantidade conhecida dos pesticidas em gua deionizada. Foram realizadas extraes no modo direto e no modo headspace

utilizando as quatro fibras, em solues com o spike dos pesticidas, sob agitao constante (aproximadamente 900 rpm), temperatura ambiente e tempo de extrao de 15 minutos. No modo direto, a fibra foi inserida na fase lquida da amostra (4 mL), prximo parede do vial para evitar a regio central onde

27

formado um vrtice devido agitao. Para o modo headspace

o volume foi

reduzido metade e a fibra foi inserida na fase gasosa da amostra, na regio central do vial.

3.3.3.2. Tempo de extrao Uma vez definidos o tipo de fibra e o modo de extrao, determinou-se o tempo de extrao entre os analitos na fase aquosa e a fibra. Para este estudo foi utilizada uma soluo aquosa contendo os pesticidas em gua deionizada, extrados com tempos entre 5 e 90 minutos, sob agitao constante.

3.3.3.3. Velocidade de agitao A quantidade de analito extrado depende da velocidade no qual o processo de SPME alcana o equilbrio atravs da razo de transferncia de massa da fase aquosa para a fibra. Usualmente essa transferncia de massa pode ser melhorada atravs da agitao (Lambropoulou, 2000). A extrao tornase eficiente utilizando-se a agitao e utilizada para facilitar o transporte de massa entre a fase aquosa e a fibra (Pawliszyn, 1997). A melhor velocidade de agitao foi determinada utilizando uma soluo aquosa dos pesticidas

analisados em gua deionizada com a fibra de PA, imerso direta na fase lquida da amostra por 30 minutos, com velocidade de agitao entre 150 e 900 rpm.

3.3.3.4. Efeito da concentrao salina A sensibilidade do mtodo de extrao freqentemente aumenta na presena de sal na soluo; aumentando a concentrao inica da fase aquosa, os analitos so conduzidos da soluo para a fibra devido ao efeito salting out. Para a determinao da concentrao salina ideal utilizaram-se concentraes de 0%, 1 % , 5% 10%, 15% e 20% de Na2S04em soluo aquosa dos pesticidas em gua deionizada, sob agitao constante e extrao com fibra de PA, durante 30 minutos no modo direto.

28

3.3.3.5. Efeito do pH Para compostos com grupamentos cidos ou bsicos, o mtodo de extrao para amostras aquosas no modo direto pode ser um fator complicador devido alta afinidade do analito com a matriz. Para avaliar essa situao estudou-se a influncia do pH da matriz (Pawliszyn, 1997) no processo de SPVIE. A determinao do pH ideal foi realizada utilizando pH de 2 a 7 em soluo aquosa dos pesticidas em gua deionizada, utilizando a fibra de PA (85 pm), durante 30 minutos no modo direto, com 900 rpm de agitao em temperatura ambiente.

3.3.4. Curvas analticas e limite de deteco Com o mtodo analtico definido, foram injetadas diferentes faixas de concentraes divididas entre os nveis 1 a 6 (N1 SPME a N6 SPME), para os pesticidas estudados e determinados os limites de deteco (Karasek, 1998) para os compostos. O procedimento utilizando a SPME foi efetuado em triplicata para as curvas analticas e para a determinao dos limites de deteco. As concentraes utilizadas para a construo das curvas analticas so apresentadas na Tabela 5.

TABELA 5. Concentraes utilizadas nas curvas analticas

Concentrao em pg L"' Compostos NI SPME 0,17 0,30 0,29 0,13 0,12 0,12 0,13 N2 SPME 0,34 0,60 0,59 0,25 0,25 0,25 0.27 N3 SPME 0,69 1,20 1,17 0,51 0,49 0,49 0,54 N4 SPME 1,38 2,40 2,35 1,01 0,98 0,98 1,08 N5 SPME 2,87 5,00 4,89 2,11 2,04 2,04 2,24 N6 SPME 5,16 9,00 8,80 3,80 3,68 3,68 4,04

Trifluralina Simazina Atrazina Pentaclorofenol Bifentrina c/s-Permetrina frans-Permetrina

29

3.3.5. Efeito

carryover

Na tcnica de SPME, uma quantidade significativa dos analitos freqentemente permanece adsorvida na fibra mesmo aps a desoro no injetor do cromatgrafo a gs. Esse problema toma-se mais grave ao efetuarem-se anlises de compostos de baixa volatilidade ou compostos com alta afinidade pela fibra (Pawliszyn, 1997). Para este estudo foram utilizados pontos intermedirios da curva de referncia, os nveis 3 e 5 (N3 SPME e N5 SPME). A extrao foi efetuada com a metodologia otimizada, sendo que a desoro total foi avaliada por meio de injees seqenciais e consecutivas para uma nica etapa de extrao. Essas injees, chamadas de carryover, indicam a porcentagem de massa ainda

adsorvida na fibra, representada pela rea obtida pelo cromatograma. O efeito carryover representa a desoro incompleta da fibra e tambm conhecido como "efeito memria" (Wercinski, 1999).

3.3.6. Recuperao do mtodo Foram utilizados trs nveis de concentrao para o estudo de

recuperao do mtodo analtico proposto. O nvel 1 (NI recuperao) representa o dobro da concentrao do limite de deteco para a trifluralina e simazina, para a atrazina representa uma vez e meia o LD, para a bifentrina, c/s-permetrina, frans-permetrina e o pentaclorofenol so os prprios valores do LD. O nvel 2 (N2 recuperao) exatamente o triplo do valor do N I recuperao e o nvel 3 (N3 recuperao), representa um aumento de nove vezes o nvel 1, os nveis so apresentados na Tabela 1 1 . 0 estudo foi realizado injetando-se a amostra cinco vezes em dias diferentes.

3.3.7. Aplicao em amostras O mtodo foi aplicado em uma amostra de gua bruta coletada no municpio de Canania, no Rio Itapitangui, dassificada como corpo d agua de Classe 2 e realizou-se tambm spike dos pesticidas estudados nessa amostra.

30

4.

RESULTADOS E DISCUSSO

4.1. Otimizao das condies cromatogrficas 4.1.1. Ajuste das condies cromatogrficas Foram efetuados 19 experimentos, com a injeo da mistura dos padres, onde avaliaram-se diferentes condies de temperatura, rampa,

temperatura do injetor, temperatura da interface, fluxo e tempo de corrida; os resultados so apresentados na Tabela 6.

TABELA 6. Condies cromatogrficas utilizadas

Experimento

ti(C)

CC/min)

r2 CC/min)

injetor (C)

Interface (C)

Fluxo (mUmin)

Tempo de corrida (min)

1 2 3 4 6 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18

40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40

40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40

70 110 150 70 70 70 70 70 70 70 70 70 70 70 70 70 70 70 70

30 30 30 40 20 10 5 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10

310 310 310 310 310 310 310 275 295 325 325 325 325 325 325 325 325 325 325

250 250 250 250 250 250 250 250 250 250 190 310 250 250 250 250 250 250 250

240 240 240 240 240 240 240 240 240 240 240 240 200 280 320 320 320 320 320

1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0,8 1,2 2 1

15,25 14,92 14,58 13,25 31,25 31,25 55,25 27,75 29,75 32,75 32,75 32,75 32,75 32,75 32,75 32,75 32,75 32,75 32,75

40 19 40 TENSO DO DETECTOR = 1,6 KV;

Scan = 0,5 S; Range = 45 - 450; Threshold = 1000; Split = 1:30;

VOLUME DE INJEO = 1 |jL; PADRO INJETADO = MIX 25 MG

31

Os

critrios

para

escolha

das

melhores

condies,

para

cromatgrafo a gs como para o espectrmetro de massas, foram o estudo da resoluo de picos, que se apresentaram muito prximos devido s co-eluies, dos compostos simazina, atrazina, c/s-permetrina e frans-permetrina; e a

avaliao da intensidade dos picos, que apresentaram menor sensibilidade para a trifluralina e simazina atravs das reas dos mesmos. Na Tabela 7 apresenta-se os valores calculados para a resoluo (Karasek, 1998) dos compostos simazina/atrazina e c/s-permetrina/frans-

permetrina e as reas dos picos dos compostos trifluralina e simazina estudados para avaliar as condies do cromatgrafo a gs.

TABE1_A 7. Resoluo dos compostos simazina/atrazina e c/s-permetrina/franspermetrina, reas dos picos dos compostos trifluralina e simazina e tempo total de anlise.

Compostos Experimentos 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19

SMZ/ATZ

cis/transPER

TFL reas 674.576 736.939 745.424 279.881 823.135 665.527 634.033 574.211 976.257 703.549 299.674 350.874 238.365 616.957 1.194.235 404.105 555.978 1.167.671 1.258.974

SMZ

Tempo corrida (min) 15,25 14,92 14,58 13,25 31,25 31,25 55.25 27,75 29,75 32,75 32,75 32,75 32,75 32,75 32.75 32,75 32.75 32,75 32.75

resoluo co-eluio co-eluio co-eluio co-eluio 0,552 0,962 1,349 0,967 1.040 1,029 0.979 0.953 0.937 0,958 0,995 0,890 1.074 co-eluio 1,005 0,976 0,947 1,008 0,960 1.128 1,034 2,302 1,326 0,833 1,298 1,281 1,260 1,320 1,267 1,183 1,200 1,292 1,250 1,230

co-eluio co-eluio co-eluio co-eluio 1.306.267 1.066.541 1.157.040 1.087.424 1.570.288 1.319.597 567.481 808.961 476.969 1.003.690 1.644.426 917.235 1.287470 2.273.388 1.725.245

32

mtodo

consiste

em

temperaturas

com

duas

rampas.

temperatura 1 foi fixada em 40 C. Para a escolha da temperatura 2 foram comparados os experimentos 1 a 3; embora a resoluo dos picos de simazina e atrazina e a rea da trifluralina representados no experimento 3, tenham apresentado um valor maior do que o experimento 1, o mesmo foi escolhido por apresentar melhor separao dos picos de c/s-permetrina e frans-permetrina, visto que os componentes simazina e atrazina sofreram co-eluio. Para escolha do melhor valor para a rampa 2, foram comparados os valores dos experimentos 1 e de 3 a 7. Apesar do experimento 7 ter apresentado os maiores valores de resoluo tanto para simazina/atrazina como para

c/s/rans-permetrina, o tempo total de corrida apresentou-se muito extenso portanto o experimento 6 foi escolhido como o melhor. Em relao aos experimentos 8 a 10, verificou-se que o primeiro apresentou o maior valor de resoluo para c/s/frans-permetrina, mas tambm menor valor de rea para a trifluralina. Observou-se tambm que o experimento 9 apresentou o maior valor de rea para a trifluralina, porm, como as resolues da simazina/atrazina nos experimentos 9 e 10 apresentaram valores prximos e no experimento 10 o valor de resoluo da c/s/frans-permetrina foi maior, optouse pela escolha do experimento 10. Para a avaliao da melhor temperatura do injetor foram comparados os resultados das injees dos experimentos 10 a 12. O experimento 10 foi novamente escolhido por apresentar os maiores valores de resoluo para simazina/atrazina e c/s/frans-permetrina assim como as maiores reas para trifluralina e simazina. Os experimentos 13 a 15 foram efetuados para avaliar a melhor temperatura da interface. O experimento 15 foi o que apresentou os melhores valores de rea para trifluralina e simazina e maior valor de resoluo para a simazina/atrazina. A avaliao da influencia do fluxo da coluna foi realizada atravs dos experimentos 15 a 18. O experimento 15 foi o que apresentou melhores resultados com maiores valores de rea para trifluralina e simazina, uma vez que a rea maior da simazina apresentada no experimento 18 se deve ao fato de existir uma co-eluio da simazina com a atrazina. Tambm foi observado que os

33

valores de resoluo da simazina/atrazina e c/s/rans-permetrina so maiores no experimento 17, entretanto a rea da trifluralina praticamente a metade do valor de rea da trifluralina no experimento 15. Efetuou-se ento um novo experimento, de nmero 19, com todos os parmetros definidos anteriormente. Comparou-se este novo experimento com o experimento 10 onde a nica diferena foi a temperatura da interface. Observouse que apesar do valor de rea da trifluralina no experimento 19 ser quase o dobro do valor apresentado no experimento 10, este apresentou melhor valor de rea para a simazina e maiores valores de resoluo para simazina/atrazina e c/s/rans-permetri na. Fixadas as condies para o cromatgrafo a gs, foram estudados diferentes tenses e tempos de sean para avallar o melhor mtodo de anlise a ser utilizado para os compostos estudados.

4.1.2. Ajuste das condies do espectrmetro de massas Para o ajuste das condies do espectrmetro de massas efetuaramse 12 experimentos, mostrados na Tabela 8, nos quais foram avaliadas diferentes condies de tenso do detector e tempos de sean. Na Tabela 9 so apresentados os valores das reas dos picos dos compostos trifluralina e simazina estudados utilizando diferentes valores de tenso e tempo de sean para avaliar as condies do espectrmetro de massas. Foram testados os valores de tenso 1,3; 1,6 e 1,9 kV e os tempos de sean 0,1; 0,5 e 1,0 s. De acordo com os resultados das reas da trifluralina, listados na Tabela 9, observa-se que as reas aumentam de acordo com o aumento de tenso do detector, caracterizando um aumento na sensibilidade do equipamento. Apesar da tenso do detector mais elevada, 1,9 kV, apresentar maior sensibilidade os cromatogramas obtidos mostram uma elevao na linha base. Em relao aos tempos de sean, observou-se que diminuindo o tempo h um aumento no sinal/rudo na linha base. Ao contrrio, a sensibilidade diminui com o aumento do tempo de sean, e a linha base torna-se mais retilnea.

34

TABELA 8. Condies utilizadas no espectrmetro de massas

Experimento

ti(C)

ri (C/min)

(C/min)

t3(C)

Injetor CO

Interface CC)

Tenso

scan (s)

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40

40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40

70 70 70 70 70 70 70 70 70 70 70 70

10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10

325 325 325 325 325 325 325 325 325 325 325 325

250 250 250 250 250 250 250 250 250 250 250 250

240 240 240 240 240 240 240 240 240 240 240 240

1,3 1,3 1,3 1,6 1,6 1,6 1,9 1,9 1,9 1,6 1,6 1,6

0,1 0,5 1 0,1 0,5 1 0,1 0,5 1 0,5 0,5 0,5

Range = 45 - 450; exceto experimento 11 = 30 - 450; experimento 12 = 42 - 450; Split = 1:30; Fluxo = 1 mL min"'; Volume de injeo = 1 pL; Padro injetado = mix 25 mg L''; Threshold = 1000; exceto experimento 10 = 500; Tempo de corrida = 32,75 min

Comparando-se os experimentos 1 a 9 verifica-se que onde foi utilizada a tenso de 1,3 kV os valores de rea obtidos foram muito baixos para a trifluralina e simazina, ao contrrio dos experimentos onde a tenso 1,9 kV foi utilizada, que apresentaram valores altos com um aumento na linha base, sendo portanto, descartados. Tambm foram descartados os experimentos com tempo de scan de 0,1 e 1,0 s, pelo aumento de rudo de fundo e perda de sensibilidade, respectivamente, optando-se pelo tempo intennedirio de 0,5 s. O experimento 5 foi repetido variando-se outras condies. No

experimento 10 diminui-se o valor de threshold de 1000 para 500, que resultou em um valor de rea menor para a simazina, sendo aproximadamente a metade da rea do experimento 5. No experimento 11 o valor de threshold foi retomado para 1000 e aumentou-se o range de massa para 30-450 m/z.

3S

TABELA 9. reas dos picos dos compostos trifluralina e simazina e tenso do detector

TFL Experimentos reas

SMZ

sean (s)

Tenso do Detector (kV)

1 2 3 4 5 6 7
a

27.998 22.145 25.060 928.774 510.767 277.287 3.204.473 2.215.439 2.453.155 622.043 1.276.187 448.523

99.798 89.532 110.960 1.699.343 1.154.129 703.441 5.605.855 3.413.690 3.908.946 791.139 1.891.720 1.048.290

0,1 0,5 1,0 0,1 0,5 1,0 0,1 0,5 1,0 0,5 0,5 0,5 1.6 1,9 1.6 13

9 10 11 12

Finalmente a melhor condio foi estabelecida no experimento 12, com o valor do threshold de 1000 e o range de 42-450 m/z, uma vez que com um range maior, os espectros continham fragmentos do solvente (acetonitrila), os quais no so interessantes ao mtodo. De acordo com o estudo realizado utilizando diferentes condies de anlise, os melhores resultados em relao separao dos componentes foi o experimento 19 para as variveis cromatogrficas e o experimento 12, para o desempenho do espectrmetro de massas. Otimizadas as condies de anlise, o experimento 12 foi escolhido como o melhor mtodo e a partir deste, foi desenvolvido o mtodo cromatogrfico para separao dos componentes e para a determinao das faixas lineares dos compostos estudados.

36

4.1.3. Condies otimizadas para o GC/MS As determinaes foram efetuadas utilizando-se um GC-MS com injetor tipo split/splitess a 260 C. A temperatura da interface foi de 240 C e foi utilizado hlio como gs de arraste com fluxo de 0,8 mL min"'. O tempo de splitiess foi de 5 minutos. O forno foi utilizado na temperatura inicial de 40 C, durante 5 minutos, programado para 70 C em uma razo de 40 C/min e de 70 C a 325 C na razo de 10 C/min, mantendo a temperatura de 325 C por 5 minutos. A aquisio do sinal foi efetuada tanto nos modos full sean e SIM empregando-se impacto eletrnico. A tenso da eletromultiplicadora empregada no modo full sean foi de 1,6 kV e de 2,50 kV no modo SIM.

4.2. SPME 4,2.1. Otimizao das condies de extrao 4.2.1.1= Escolha d o tipo de fibra e m o d o de extrao Na FIGURA 10 so apresentados os comportamentos dos diferentes tipos de fibra, com as extraes no modo direto e no modo headspace em relao rea dos analitos estudados. A fibra que apresentou o melhor desempenho foi a de PA, 85 pm, no modo direto, onde foram obtidas as melhores respostas para pentaclorofenol e atrazina, alm de boas respostas para bifentrina e c/s-permetrina.

COWSSQ NAClOf^L D UQA NUCLAR/SP-fPEM'

37

35000

m TrflufEdina
30000

eSnnazina Atrazina ^ PITAK:orofianol e Bifentrina @ cts-Permetna

25000

20000

<

15000

5000

CNieto I

HS

CARIPDMS

FIGURA 10. Comparao entre os modos de extrao: dineto e headspace (HS) com as diferentes abras avaliadas. Re^xssta nonnalizada para 1 pg L'^ para cada pestdda em gua (teionizada. extrados sob agitao constante de 9(X) rpm e temperatura ambiente (25 C)

4.2.1.2. T e n ^ de extrao Com a definio do tipo de fibra e o modo de extrao avaliou-se o tempo de extrao no intervalo de 5 a 9Q minutos, sob c i t a o constante. Os resultados ot)tidos apresentados na FIGURA 11. Apesar dos bons resultados

em relao s reas obtidas ctos analitos, mesmo aps 90 minutos o equilbrio no foi alcanado. Entretanto, para ailise cte rotina o equilbrio no necessrio desde que as condies de exb-ao s ^ m mantidas; portanto, para os estuctos posteriores foi escolhido o tempo de 30 minutos.

38

a o A

Bifentrina cs-Permetrna trans-Permetrina Trifluralina

IB

<

S.

Pentaclorofenol Simazina Atrazina

40 Tempo de extrao

60 (min)

100

FIGURA 11. Perfil de extrao dos pesticidas com adio dos pesticidas em gua deionizada, extrados com imerso direta utilizando fibra de PA, sob agitao constante de 900 rpm e temperatura ambiente (25 C). Trifluralina, 0,13 pg L"''; Simazina, 2,14 pg L'''; Atrazina, 1,03 pg Pentaclorofenol, 0,10 pg Bifentrina, 0,09 pg L'^ c/s-Permetrina 0,10 pg L'^ frans-Permetrina, 0,10 pg L'^

4.2.1.3. Velocidade de agitao A influncia da velocidade de agitao foi determinada empregando-se a fibra de PA no modo direto com tempo de extrao em 30 minutos. Os resultados obtidos so apresentados na FIGURA 12. Pode ser observado que a quantidade extrada de simazina e atrazina no depende da velocidade de agitao. J para a trifluralina e o pentaclorofenol a velocidade de agitao de 900rpm parece ser a melhor, com diferena acentuada para o pentaclorofenol. Somente para a bifentrina, c/s-permetrina e frans-permetrina a melhor velocidade de agitao foi a de 750 rpm, embora com pouca diferena com relao de 900 rpm. Portanto, de acordo com a melhor resposta em relao s reas obtidas nos cromatogramas, a velocidade de agitao de 900 rpm foi escolhida para as extraes dos analitos.

39

a
-

O O A

B
B o A Bifentrina cis-Permetrina trans-PermetrIna Trifluralina

O O A V A

Z
A

N.
-

50000-

O >

Pentaclorofenol Simazina Atrazina

*
T

%
1

O
' 1 '

E O
' 1 ' 1

100

'r
200

300

400

500

600

700 (rpm)

800

>1'1 900 1000

Velocidade de Agitao

FIGURA 12. Influncia da velocidade de agitao na extrao, com adio dos pesticidas em gua deionizada, extrados durante 30 minutos com fibra de PA e temperatura ambiente (25 C). Trifluralina, 0,13 pg L"^ Simazina, 2,18 pg L"''; Atrazina, 1,03 pg L"\ Pentaclorofenol, 5,07 pg L'^ Bifentrina, 0,09 pg L'^ c/s-Permetrina, 0,10 pg L"^ frans-Permetrina 0,10 pg L"^

4.2.1.4.Efelto da concentrao salina A influncia da concentrao inica foi detenninada empregando-se a fibra de PA no modo direto com tempo de extrao em 30 minutos e velocidade de agitao de 900 rpm. Os resultados obtidos so apresentados na FIGURA 13. Dos compostos analisados a trifluralina apresentou um comportamento totalmente oposto aos demais; tendo-se obtido o maior valor de rea sem a adio de sulfato de sdio. J os piretrides apresentaram um comportamento peculiar para o perfil de extrao com a presena de um mnimo ao redor de 5% de sal. Os perfis de extrao para atrazina e simazina foram pouco afetados com a variao da concentrao salina, enquanto que o perfil do pentaclorofenol aumentou com o aumento da concentrao salina. Para os estudos seguintes foi adotada a concentrao de 20% m/v de Na2S04.

40

1000000-

800000a

B O A V Bifentrina cis-Permetrina trans-Permetrina Trifluralina

600000-

O
B

400000-

O I I

A V

80000006000000400000020000000Q

O O 9 Pentaclorofenol Simazina Atrazina

6 10 15 Concentrao Na^SO^ (%m/v)

9
20

FIGURA 13. Efeito da concentrao salina na extrao com adio dos pesticidas em gua deionizada, extrados durante 30 minutos com fibra de PA, sob agitao constante de 900 rpm e temperatura ambiente (25 C). Trifluralina 0,13 pg L"''; Simazina, 2,18 pg L'^ Atrazina, 1,03 pg L''"; Pentaclorofenol, 5,07 pg L'^ Bifentrina, 0,09 pg L"''; c/s-Permetrina, 0,10 pg L'^ frans-Permetrina 0,10 pg L"^

4.2.1.5. Efeito do pH A influncia do pH foi determinada empregando-se a fibra de PA no modo direto com tempo de extrao em 30 minutos, velocidade de agitao de 900rpm e concentrao salina de 20% m/v de Na2S04. Os resultados obtidos so apresentados na FIGURA 14. Pode ser observado que o pentaclorofenol, por possuir grupamentos protonaveis, foi o pesticida mais influenciado pela variao do pH. Os outros compostos apresentaram uma variao mnima entre os diferentes valores de pH. Embora o melhor valor de rea tenha sido com o pH=2 para o pentaclorofenol e o pH=4 tenha sido um pouco melhor do que o pH=3 para os pesticidas trifluralina, bifentrina, c/s-permetrina e frans-permetrina, o pH=3 foi escolhido para ser utilizado no mtodo analtico por apresentar um valor de rea melhor que o pH=4 (20% menor que a rea do pH=2) para o pentaclorofenol, uma vez que o pH=2 pode, a longo prazo, ser prejudicial fibra de PA.

41

210000001800000015000000120000009000000600000020000030000000B Pentaclorofenol a

S O O O O O o

B 0 O A
B O

300000-

#
A V
e O

Bfentna cis-Permetrina trans-Pernnetrina Trifluralina Atrazina Simazina

5
RH O I

5 1

5 R H
o '

6
o 1

FIGURA 14. Efeito do pH na extrao com adio dos pesticidas em gua deionizada, extrados durante 30 minutos com fibra de PA, sob agitao constante de 900 rpm, concentrao salina de 2 0 % m/v de Na2S04 e temperatura ambiente (25 C). Trifluralina, 0,13 pg L"^ Simazina, 2,18 pg L''; Atrazina, 1,03 pg L"''; Pentaclorofenol, 5,07 pg L"^ Bifentrina, 0,09 pg L"''; c/s-Permetrina, 0,10 pg L"^ frans-Permetrina 0,10 pg L"^

Portando o mtodo analtico proposto foi definido com as seguintes condies: fibra de PA de 85 pm; volume de amostra 4 mL; extrao no modo direto; tempo de extrao de 30 minutos; velocidade de agitao 900 rpm; concentrao inica 20% m/v de Na2S04 e pH=3,00.

4.2.2.Curvas analticas e limites de deteco Na FIGURA 15, apresentado o cromatograma reconstrudo, no modo SIM, para os compostos estudados obtido pela metodologia SPME proposta para uma concentrao prxima ao limite de deteco (LD). Na Tabela 10 so apresentados os resultados obtidos para as curvas analticas (inclinao e interseco), o coeficiente de congelao linear (r^) e o limite de deteco determinado para a relao S/N=3. As curvas apresentaram um bom

comportamento linear nas faixas de concentrao avaliadas e os limites de deteco obtidos apresentaram melhores valores dos que os recomendados por organismos mundiais (0,1 pg L'^) (Dean, 1998). Em princpio, este trabalho foi

42

realizado com a meta de atingir os valores estabelecidos pela Portaria n 518 do Ministrio da Sade, entretanto o mtodo desenvolvido apresentou uma

sensibilidade muito maior que esses limites, sendo escolhido ento o valor estabelecido pela Comunidade Europia, como valor de referncia.

6,00E-^04

5,OOE+04

4,00E+O4 a 5 3,00E+04

2,OOE+04

1,0OE+O4

0,OOE+00 13,5 15,5 17,5 19,5 T e m p o (min) 21,5 23,5

FIGURA 15. Cromatograma obtido no modo SIM com a metodologia proposta para o nvel 1 de recuperao (TABELA 11). Identificao dos picos: 1 - Trifluralina; 2 - Simazina; 3 - Atrazina; 4 - Pentaclorofenol; 5 - Bifentrina; 6 - c/s-Permetrina; 7 - fz-ans-Permetrina. Demais picos no foram identificados

COT^SO

i^^Domi D tm&A

mojM/spm,

43

TABELA 10. Coeficientes de correlao linear e limites de deteco obtidos para a metodologia proposta

Pesticida

Inclinao

Interseco

Correlao

L D (pg L'^)

Trifluralina

4,68 x l O ^

3,59 x 10^

0,9979

0,006

Simazina

1,95 x l O ' '

1,23 X 10"

0,9932

0,10

Atrazina

7,12 x l O "

2 , 5 9 X 10"

0,9977 0,9929

0,04

Pentaclorofenol

1,12 x l O ^

1,37 X 10=

0,004

Bifentrina c /s -Permetrina

4,93 x l O ^ 4,05 x l O ^

4 , 4 9 X 10"

0,9914

0,005 0,010

3,28 X 10"

0,9959

frans -Permetrina

3,55 x l O ^

3,75 X 10"

0,9964

0,010

4.2.3. Efeito

carryover

Por ser uma tcnica de adsoro, a SPME pode estar sujeita aos chamados "efeitos de memria" ou carryover que so caracterizados pela

desoro incompleta dos analitos adsorvidos na fibra, que pode ser mais acentuada para compostos com alta afinidade pelo recobrimento da fibra. Os resultados obtidos para o efeito carryover, em duas concentraes diferentes, para a metodologia proposta so apresentados na FIGURA 16. Como pode ser observado foram necessrios cerca de nove ciclos de desoro para que os analitos fossem completamente extrados da fibra. Dessa forma para eliminar o efeito carryover, foi necessrio deixar a fibra inserida no injetor durante toda a corrida cromatogrfica para a remoo total dos analitos adsorvidos.


24-0

TRAIRAAIA OSIMAZBIA Atrazma X PENTACLOFDFENOL

19,0

144)

Bifentrina cis-PenneIria +trans-T'ci iivliina

t
E

9j0 4j0 O N3 1 X A O NS N3 2

+ +

-1^0

o
N5 N3 3 N5 N3 4 N5

I
N5 6 N3 7

i
N3 8

i
N5

i
N3 9

i
N5

NSJNS
S Canyover

N5

FIGURA 16. Efeito carryover na desoro para extrao com adio dos pestiddas em gua deioni^da, extrados durante 30 minutos com fitx^a de P A sob a g i t a ^ constante de 9(X3 rpm, concentrao salina de 2 0 % mA^ de Na2S04 e temperatura ambiente (25" C). Onde a concentrao para N3 foi 0,5 pg L ^ e para N5 foi 2 pg L'^ para cada pestidda

4.2.4. Recuperao do mtodo Os valores ot>tidos para o estudo de recup^ao, em gua deionizada, com o mtodo proposto so apresentados na Tat>ela 11 e foram determinados em trs nveis de c o r x n t r a ^ . Como pode ^ obs^vado o valor obtido para as

recuperaes encontram-se na faixa de 94% a 108%, comprovando o txim desempenho do mtodo (^oposto, mesmo em concentraes muito prximas ao limite de deteco.

45

TABELA 11. Recuperao dos nveis 1, 2 e 3 com a adio dos pesticidas em gua deionizada

Nvel 1 Pesticida Cone. % Rec^) (pg L-^) Trifluralina 0,020 98 1 3 Cone.

Nvel 2 Cone. % Rec^) (pg L-^) 0,060 97 8

Nvel 3

% Rec"^ (pg L-^) 0,180 96 9

Simazina

0,400

101 1 2

1,200

1009

3,600

98 8

Atrazina

0,080

107 1 7

0,240

104 1 3

0,720

97 7

Pentaclorofenol

0,004

103 10

0.012

97 9

0.036

95 1 5

Bifentrina

0,010

100 2 4

0,030

93 1 6

0,090

106 2 2

Cfs-Permetrna

0,010

94 1 6

0,030

98 6

0,090

95 1 7

trans-Permetrina

0,010

100 1 1

0,030

100 9

0,090

108 2 2

a) Resultados para 3 determinaes, (mdia desvio padro)

4.2.5. Aplicao em amostras O mtodo proposto neste trabalho foi aplicado em uma amostra de gua bruta coletada em Canania. Na FIGURA 17 a) apresentado o

cromatograma reconstrudo no modo SIM obtido para esta amostra. Apesar de ser uma regio com intensa atividade agrcola, sendo a banana o produto mais comum, no foi detectado a presena dos pesticidas estudados. Para verificar a eficcia do mtodo proposto realizou-se um estudo onde foi adicionada a concentrao de 0,1 pg L"^ para cada pesticida,

recomendado pela Comunidade Europia como o mximo permitido para gua potvel, na mesma amostra de gua bruta, coletada em Canania. Na FIGURA 17b) apresentado o cromatograma reconstrudo no modo SIM obtido para o estudo. Os resultados para recuperao obtidos para a mdia de trs

determinaes efetuadas em dias diferentes so apresentados na Tabela 12.

46

a)

13,S

15,5

17,5

19,5 Tempo de Reteno (min)

21,5

23,5

FIGURA 17a) Cromatograma obtido no modo SIM para amostra coletada em Canania. b) Cromatograma obtido no modo SIM para amostra coletada em Canania com adio de 0,1 pg L'^ de cada pesticida. Identificao dos picos: 1 - Trifluralina; 2 - Simazina; 3 - Atrazina; 4 - Pentaclorofenol; 5 - Bifentrina; 6 - c/s-Permetrina. Demais picos no foram identificados

47

TABELA 12. Recuperao em amostra de gua bruta, com adio de 0,1 pg L"^ dos pesticidas estudados

Pesticida Trifluralina Simazina Atrazina Pentaclorofenol Bifentrina c/s-Permetrina

% Recuperao* 10613 11010 10320 13218 988 9315

* resultados para 3 determinaes, (mdia desvio padro)

48

5.

CONCLUSES O mtodo analtico desenvolvido nesse estudo, utilizando SPME-

GC/MS para a determinao dos pesticidas trifluralina, simazina, atrazina, pentaclorofenol, bifentrina, c/s-permetrina e frans-permetrina mostrou ser simples, rpido e sensvel. Dentre suas principais vantagens pode ser destacada a pequena quantidade de amostra necessria para as determinaes (4 mL), o que pode ser til para amostras onde o volume limitado. O mtodo proposto apresentou boa recuperao e reprodutibilidade, dentro dos intervalos recomendados por diferentes critrios de validao, mesmo em concentraes muito prximas ao limite de deteco. Por outro lado os valores encontrados para os limites de deteco foram, no geral cerca de uma ordem de grandeza inferior aos sugeridos (0,1 pg L'^) por organismos de regulao mundial para determinao de pesticidas em gua potvel. Umas das vantagens do mtodo desenvolvido a extrao simultnea dos pesticidas estudados, sem a necessidade de etapas de clean-up ou

derivatizao da amostra. A identificao e quantificao em concentraes baixas, para esses diferentes tipos de compostos, foram possveis devido utilizao do espectrmetro de massas acoplado ao cromatgrafo a gs, que possui alta sensibilidade. Quando comparado extrao lquido-lquido (LLE) e extrao em fase slida (SPE) possui a vantagem da utilizao de pequenas quantidades de amostra e a no utilizao de solventes, sendo uma tcnica de extrao simples e rpida. Alm disso, a microextrao em fase slida possui a vantagem de no necessitar de etapas de filtrao, secagem e concentrao, pois uma tcnica concentradora.

49

6.

CONSIDERAES FINAIS Devido alta sensibilidade da metodologia proposta, torna-se

necessria a utilizao de um laboratrio extremamente limpo para evitar problemas de contaminao do ambiente onde so realizados a preparao de padres e amostragem.

50

7. SUGESTES PARA TRABALHOS FUTUROS Aplicar o mtodo a mais amostras de gua potvel e gua bruta, avaliando a interferncia de amostras com altos ndices de contaminao.

Avaliar a aplicabilidade da amostragem em campo, com a etapa de adsoro sendo realizada com volume conhecido da amostra em v/a/s ou diretamente em rios desde que seja conhecida a vazo dos mesmos.

Aplicar o mtodo em trabalhos de rotina com a utilizao de amostrador automtico.

Verificar a validade da metodologia proposta para matrizes mais complexas tais como; solo, sedimento, ar, alimentos, resduos, medicamentos e amostras biolgicas.

51

APNDICE

CLCULO DO COEFICIENTE DE PARTIO A quantidade de analito extrada (-n), representa a massa do analito

adsorvida na superfcie do recobrimento da fibra; dada pela seguinte expresso: Ti=Ti'"f[1-exp(-ast)] onde, TI a massa adsorvida (pg), t o tempo de adsoro, AS a relao com transferncia de massa obtida atravs do grfico TI x t. A constante de distribuio (Kfe) define a sensibilidade do mtodo que proporcional ao nmero de mols do analito extrado da amostra (ri); dada pela seguinte expresso: K -

onde TI a massa adsorvida (pg), Co a concentrao inicial (pg mL"^), VF o volume da fibra (mL) e VS o volume da soluo (mL). A constante de distribuio foi calculada com as seguintes condies de extrao: os analitos foram extrados no modo direto com fibra de PA em 4,5 mL de soluo contendo as seguintes concentraes dos pesticidas

trifluralina, 129,0 pg mL"\ simazina, 2144,0 pg mL'^ atrazina, 1032,0 pg mL"\ pentaclorofenol, 97,4 pg mL'^ bifentrina, 89,0 pg mL'''; c/s-permetrina,

100,6 pg mL'^; frans-permetrina, 101,6 pg mL'^; sob temperatura ambiente (25 C) e agitao constante de 900 rpm. Os valores da massa do analito adsorvida (ri) e das constantes de distribuio (Kfe) determinadas para a fibra de PA, encontrados para cada um dos pesticidas estudados, utilizando o modo SIM so apresentados na Tabela 13.

52

TABELA 13. Valores de r] e Kfs utilizando o modo SIM

sm Composto m/z n (pg) Trifluralina Simazina Atrazina Pentaclorofenol Bifentrina cis-Permetrina trans-Permetrina 306 201 215 266 181 183 183 363 132 221 283 147 255 372
KFS

1,44x10^ 1,20 x l O ^ 4,33x10^ 1,58 x IO'' 5,05x10^ 1,12x 10" 3,91 x 10"

A constante de distribuio, Kfs, representa a afinidade do recobrimento da fibra por um determinado analito. Quanto maior for o coeficiente de distribuio do analito, maior a afinidade deste com a fibra e conseqentemente maior quantidade de analito extrado pela mesma. Os recobrimentos utilizados nas fibras possuem alta afinidade com compostos orgnicos, razo pela qual os valores das constantes de distribuio so altos, onde a capacidade

concentradora da SPME induz a alta sensibilidade (Wercinski, 1999). A alta sensibilidade da SPME pode ser comprovada pela constante de distribuio justamente nos casos do pentaclorofenol, trifluralina, c/s e franspermetrina e bifentrina; onde as altas afinidades foram observadas nos estudos de carryover.

53

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

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