PRCTICA 2.

EXTRACCIN DE CIDO OLEANLICO A PARTIR DE CLAVOS

Laboratorio de Productos Naturales.

Instituto Politcnico Nacional Unidad Profesional Interdisciplinaria de Ingeniera Campus Guanajuato Productos Naturales Prctica 2: Extraccin de cido oleanlico a partir de clavos 7FM1 Integrantes:
Caudillo Rivera Sandra Karina Mosqueda Moreno Mariana Karina Snchez Aguilar Laura Anglica Vera Ypez Mara de la Luz

03/octubre/2013

PRCTICA 2. EXTRACCIN DE CIDO OLEANLICO A PARTIR DE CLAVOS

Laboratorio de Productos Naturales.

Aislamiento de Capsaicina
Objetivo general.
o Extraccin de cido oleanlico a partir de clavos de olor.

Objetivos especficos.
o o Obtener cido oleanlico a partir de clavos de olor, mediante un mtodo de extraccin con reflujo. Realizar cromatografa en capa fina para verificar la extraccin de cido oleanlico

Marco Terico.
Las plantas son una invaluable fuente de un amplio rango de metabolitos secundarios, los cuales son empleados como frmacos, agroqumicos, saborizantes, aromas, pigmentos, pesticidas y aditivos para alimentos. Los productos naturales y sus derivados representan ms del 50 % del total de los medicamentos de uso clnico en el mundo, y las plantas superiores contribuyen con no menos del 25 % del total. [3] Estos terpenos pueden ser clasificados como metabolitos primarios necesarios para las funciones celulares y el mantenimiento, y como metabolitos secundarios, los cuales no estn involucrados en el crecimiento y desarrollo. [3] Los triterpenos contienen 30 carbonos en su estructura, y son biosintticamente derivados del escualeno, e incluyen esteroides, saponinas, glicsidos cardiotnicos, entre otros. Slo unos pocos triterpenos son distribuidos ampliamente entre las plantas, los cuales incluyen a las amirinas, el cido oleanlico y el cido urslico. [3] Uno de los metabolitos secundarios sintetizados y de gran importancia es el cido oleanlico es un triterpeno ampliamente distribuido en la naturaleza, el cual ha sido aislado de numerosas especies de plantas y ha sido identificado como el principal constituyente bioactivo de plantas usadas en medicina tradicional, tales como se muestran a continuacin: [1] Tala 1. Plantas medicinales. [1] Nombre de la Planta Oleadra neriifolia Beta vulgaris Swertia japoica Panax giseng Gonoderma lucidum Aplicacin Medica Antiinflamatorio Hepatoproteccin

Anticancergeno

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Adems de ser usado en formulaciones farmacuticas, el cido oleanlico tambin es empleado en la preparacin de suplementos alimenticios y formulaciones cosmticas, por lo que este triterpeno es de alto valor comercial. [2] Dicho cido se encuentra altamente asociado a numerosos beneficios para la salud ya que presenta una potente accin antioxidante in vivo y otras propiedades farmacolgicas que lo constituyen en un producto de inters, ayuda en el tratamento de esclerosis mltiple. [2]

Figura 1. Estructura de cido oleanlico. [3] La produccin actual de esta sustancia se basa en la extraccin con solventes orgnicos desde plantas medicinales y su valor en el mercado oscila entre 300 y 400 dlares por gramo el cual es alto, como consecuencia de las bajas concentraciones en las plantas de las que se extrae. [3]

Materiales y Reactivos.
Material 1 anillo metlico 1 Capilares 1 Matraz Erlenmeyer (125 mL) 1 Matraz de extraccin (250 mL) 1 Matraz redondo (500 mL) 1 Papel filtro 1 Vidrio de reloj 1 Parrilla de calentamiento 3 Perlas de ebullicin 2 pinzas de tres dedos 1 probeta (25 mL) 1 Rotavapor 1 Vaso deprecipitado (100 mL) Reactivos Etanol (50 mL) cido Sulfrico al 5% (25 mL) Diclorometano (100 mL) Oleum (10 mL) Hexano (10 mL) Acetato de etilo (10 mL) Hidrxido de sodio (10 g) Sulfato sdico anhdro (10 g)

PRCTICA 2. EXTRACCIN DE CIDO OLEANLICO A PARTIR DE CLAVOS Metodologa.

Laboratorio de Productos Naturales.

Pesar 10 g de clavos de olor.

Montar el equipo de reflujo.

Medir 50 mL de metanol en una probeta.

Filtrar la mezcla y llevar a rotavapor eliminando el 90% del volumen.

Comenzar el reflujo durate 60 min a 300 C hasta ebullicin.

Colocar los clavos y las perlas de ebullicin en el matraz bola y aadir el metanol antes medido.

Aadir 20 mL de diclorometano ms 20 mL de agua destilada, agitar hasta soluilizar la muestra.

Adicionar 5 mL de H2SO4 para acidificar .

Pasar la muestra al embudo de separacin. Repetir una ves ms la adicin de agua (20 mL) y separar fases.

Revelar la placa con oleum.

Realizar una cromatografa en capa fina utilizando como eluyente hexano:acetato (1:1).

La fase orgnica se guarda hasta saber si se obtuvo lo esperado.

Resultados y Discusin.
Resultados.

Se pes en la balanza analtica 7.8947g de clavos (clavos de olor o girofl), los clavos se colocaron en un matraz bola junto las perlas de ebullicin, posteriormente se adicion en el matraz 50mL de metanol.

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El matraz bola se coloc en el equipo montado de reflujo durante una hora a 300C, temperatura en la parrilla la cual estuvo variando durante la hora hasta quedar finalmente a 150C.

Imagen 1: Matraz bola con clavos, perlas de ebullicin y metanol, (de izquierda a derecha respectivamente) antes de poner a reflujo y finalizando el reflujo.

Al finalizar la hora se apago el sistema de reflujo, para poder retirar el matraz bola del equipo cuidando de no derramar la muestra, la mezcla obtenida despus del tiempo de reflujo era de color amarillo opaco, aspecto pastoso de consistencia poco viscosa, en la cual poda observarse los clavos en el fondo del matraz bola; la muestra se llevo a filtracin empleando un embudo de cristal y papel filtro, con la finalidad de obtener la parte liquida (la cual era de aspecto amarillo, liquido) y desechar el material solido (clavos de olor). La solucin filtrada se puso nuevamente en el matraz bola y se llevo al rotaevaporador para eliminar el metanol contenido en la solucin, la solucin se retiro del rotaevaporador hasta que la solucin disminuyo su volumen en un 90%. Al retirar el matraz bola del rotaevaporador se observ en las paredes del recipiente un precipitado color blanco ligero, el cual pudiera ser el aceite extrado de los clavos (el extracto es poco por lo cual es posible visualizar el precipitado). La mezcla de aspecto amarillo se guardo en un recipiente de vidrio transparente y se dejo en refrigeracin por 2 semanas (vase imagen 2).

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Imagen 2: Muestra extrada almacenada para su refrigeracin.

Dos semanas despus se saco la mezcla de la refrigeracin para continuar la sesin, la cual se presentaba completamente seca, pegada en el fondo del recipiente transparente; por lo cual fue necesario adicionar 20mL de diclorometano y 20 mL de agua destilada, se agito con movimientos circulares hasta observar una mezcla homognea solubilizada, una vez obtenido esto se agreg 5mL de acido sulfrico para acidificar la mezcla cambiando su pH, la nueva mezcla se paso a un embudo de decantacin como se muestra en la imagen 3 (vase imagen 3), se espero a que se separaran las fases, una vez separadas la faces (2 fases, orgnica y acuosa) se extrajo la fase orgnica que se encontraba en la parte inferior del embudo, de aspecto turbio blanco-amarillo.

Fase acuosa Fase orgnica

Imagen 3: mezcla contenida en el embudo de separacin, donde se separaron las fases orgnica (parte inferior del embudo) y fase acuosa (fase superior).

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El embudo se limpio nuevamente y se vaci la fase orgnica extrada anteriormente, a la cual se le adiciono 20mL de agua destilada. Se agit el embudo cerrado con movimientos circulares y nuevamente la mezcla se dejo en reposo para la separacin de fases, una vez separadas las fases orgnica y acuosa, se decanto la fase orgnica en un matraz, la cual era amarilla transparente de aspecto liquido; se decanto la fase acuosa en un matraz diferente a la cual se le denomino 2da fase acuosa de aspecto patoso amarillo. Con esto se obtienen 3 muestra diferentes, (vase imagen 4), fase acuosa 1, fase acuosa 2 y fase orgnica.

Imagen 4: Muestras obtenidas, de derecha a izquierda respectivamente: fase orgnica, segunda fase acuosa y primera fase acuosa.

Para corroborar que se logro extraer AO se realiz una cromatografa en placa, de las tres muestras obtenidas, en la placa se colocaron las muestras acomodadas de igual forma como se observan los recipientes en la imagen 4 (vase imagen 4), la muestra se eluy con hexano: acetato de etilo (6:4) y se rebel con leum y calor (vase imagen 5). Como se observa en la placa el AO se obtuvo en la fase orgnica como se esperaba (vase imagen 6).

Imagen 5: parte de la revelacin de la placa, usando como eluyente una muestra de hexano: acetato de etilo (6:4).

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Imagen 6: Placa rebelada, de izquierda a derecha respectivamente: fase acuosa 1, fase acuosa 2 y fase orgnica (donde se presenta el AO).

Sin embargo para corroborar si realmente haba presencia del cido oleanlico se calcul el Rf de la placa de la imagen 6 de acuerdo a la siguiente frmula:

Sustituyendo los valores, queda de la siguiente forma:

Discusin

El acido oleanlico que se extrajo es un cido triterpnico que se encuentra de forma natural en los clavos de olor utilizados en la prctica. La materia prima o sea los clavos es muy barata y de muy fcil obtencin, porque presenta muy bajo porcentaje de humedad igual o menor al 15%. El solvente utilizado fue metanol por la facilidad que tiene por recuperarse, adems de que es polar y esto en gran medida ayuda a llevarse a cabo la extraccin del acido oleanlico. La filtracin se lleva a cabo para dejar de lado la materia inerte pues el extracto ya se encuentra en el solvente utilizado. Para eliminar el mayor porcentaje del metanol en nuestro extracto, la disolucin se

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somete al rotaevaporador. Fue necesario dejar reposar por un determinado tiempo la solucin, dicha solucin se seco y fue necesario agregar una disolucin diclorometano-agua, para que se solubilizara completamente. El acido sulfrico agregado provoca una reaccin de acidificacin debido a que este componente posee un punto de ebullicin mucho ms bajo que los componentes de la disolucin contenida con el extracto, esta reaccin permite que la separacin del extracto se haga de forma rpida en la imagen 3 se puede observar este fenmeno, en el embudo de decantacin se forman dos fases. La fase orgnica es la recuperada debido a que tiene nuestro componente de inters que es el acido oleanlico. Una vez que se recupero la fase orgnica se le agreg como solvente agua esto porque el agua es muy polar y lo que se quiere obtener es la extraccin de nuestro acido oleanlico puro. La cromatografa en placa se aplic para comprobar la presencia del cido oleanlico. En el punto de la fase orgnica si hubo presencia del cido antes mencionado y se puede comprobar con el valor de Rf que en nuestro caso experimental es igual a 0.65 y nuestra bibliografa marca que un estudio hecho el valor de Rf= .55. comparando estos dos valores nos damos cuenta que en nuestro experimento pudo haber algunas variantes como por ejemplo el tipo de solventes utilizados en la extraccin, la cantidad de clavos de olor utilizados, los lavados que se hicieron con agua, el eluyente utilizado en la cromatografa, entre muchas otras.

Conclusin.
Fue posible obtener cido oleanlico a partir de clavos de olor, comprobando esto mediante una cromatografa en placa fina, calculando el factor de retencin, una vez revelada la placa con leum. Adems se pudo realizar todo el procedimiento que conlleva dicha extraccin, desde la preparacin de los clavos y su extraccin empleando disolventes, hasta su purificacin a travs de la separacin de la fase orgnica y acuosa. Se comprob la presencia de cido oleanlico, con la aparicin de bandas color violeta en la placa fina , como est indicado en bibliografa.

Bibliografa.
[1] Compuestos Qumicos. cido oleanlico. Disponible e URL: http://kitmygen.com/Maslinic-Acid-Oleanolic-Acid Consultado el 30 de septiembre de 2013.

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[2] Cluster Alimentos. Proceso de Extraccin de cido oleanlico. Tecnologco de Monterrey. Disponible en URL: http://ott.mty.itesm.mx/docs/alimentos/Oleanolico.pdf Consultado el 01 de octubre de 2013. [3] Ortiz, J. (). Evaluacin de la Produccin de cido Oleanlico y Otros Metabolitos Secundario s a Partir de Cultivos de Clulas en Suspensin de Calendula officinalis.

http://itzamna.bnct.ipn.mx/dspace/bitstream/123456789/21/1/938_2006_ESM_DOCTORADO_arr ieta_valencia_jesus.pdf
http://ip.com/patfam/es/45558961

http://www.seiserre.com.ar/especias/clavo-olor.htm http://farmacia.udea.edu.co/~ff/saponinas2001.pdf

http://sisbib.unmsm.edu.pe/bibvirtualdata/libros/Quimica/pigmentos/archivos%20PDF/extraccion_quinonas.pdf

http://digibug.ugr.es/bitstream/10481/27980/1/ES2375867B1.pdf

http://tumi.lamolina.edu.pe/resumen/anales/1999_94.pdf

http://itzamna.bnct.ipn.mx/dspace/bitstream/123456789/21/1/938_2006_ESM_DOCTORADO_arrieta_valencia_jesu s.pdf

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