Cromatografa liquida de alta resolucin

Integrantes Rodrigo Lpez R. Hctor Zamudio B Daniela Suart O. Curso: 383

ndice

Introduccin

Cromatografa liquida de alta resolucin (HPLC)

La cromatografa liquida de alta resolucin es una tcnica utilizada para separar componentes de una muestra llevando a cabo una variedad de interacciones qumicas entre el analito y la columna cromatogrfica. En esta, un lquido (fase mvil) circula en ntimo contacto con un slido u otro lquido inmiscible (fase estacionaria); al introducir una mezcla de substancias (analitos) en la corriente de fase mvil, cada analito avanzara a lo largo del sistema con una velocidad diferente que depender de su afinidad por cada una de las fases. Esto supone que despus de terminado el recorrido de la muestra por la columna, cada una de las substancias introducidas en el sistema eluir con un tiempo diferente, es decir, estarn separadas.

Tipos de cromatografa liquida

Existen dos tipos de clasificacin para la cromatografa lquida, pero la forma ms habitual de clasificacin es la realizada en base a la naturaleza de la fase estacionaria, ya que es esta la que impone el mecanismo de separacin entre ellas encontramos:

Cromatografa de adsorcin Cromatografa de reparto o particin Cromatografa de intercambio inico Cromatografa de exclusin molecular

La otra clasificacin que existe, es atendiendo a la polaridad de la fase estacionaria entre ellas:

Cromatografa de Fase normal Cromatografa de Fase reversa

Cromatografa de adsorcin

Este tipo de cromatografa se caracteriza por utilizar una fase estacionaria slida (adsorbente) de carcter polar y una fase mvil lquida (eluyente) apolar. La fase estacionaria la constituye un slido poroso finamente granulado, siendo el proceso de adsorcin debido a las atracciones intermoleculares entro los componentes de la muestra y el adsorbente. El adsorbente ms utilizado es el gel de slice, tambin se utiliza la almina activada.

Los centros activos situados sobre la superficie del slido interaccionan con los grupos funcionales polares de compuestos a separar. Esta separacin se como consecuencia de la distinta intensidad de esas interacciones para los diferentes compuestos.

Cromatografa de reparto o particin

La cromatografa de reparto se caracteriza por emplear una fase estacionaria lquida, anclada a un soporte slido y una fase mvil lquida. La separacin se basa en las diferencias de solubilidad de los componentes de la mezcla en las fases estacionaria y mvil. El soporte slido por lo general es gel de slice, sobre cuya superficie se ha anclado una fase lquida con la incorporacin de una cadena hidrocarbonada larga, mediante la transformacin de los grupos silanol (Si-OH) de la gel de slice en grupos siloxano (Si-OSi-R), lo que proporciona una fase lquida estacionaria trmicamente estable y difcil de hidrolizar en condiciones normales.

Se basa en un reparto del soluto entre la fase mvil y la fase estacionaria.

Cromatografa de intercambio inico

La cromatografa de intercambio inico se da cuando la fase estacionaria presenta en su superficie grupos ionizados capaces de retener selectivamente a iones de signo contrario que circulan en la fase mvil. Esta cromatografa se subdivide en dos; en cromatografa de intercambio catinico y cromatografa de intercambio aninico.

1. Cromatografa de intercambio catinicos Si nos interesa separar analitos catinicos deberemos utilizar una fase estacionaria que contenga sitios activos negativos, los cuales debern encontrarse unidos a algn catin que mantenga la electroneutralidad. Este catin deber ser desplazado por nuestro analito para establecer el equilibrio y unirse al sitio aninico de la fase estacionaria.

2. Cromatografa de intercambio aninico Si se desea separar aniones se debe utilizar fases estacionarias con cargas fijas positivas que se encontrarn unidas a algn anin encargado de mantener la electroneutralidad. Este anin deber ser desplazado por nuestro analito para establecer el equilibrio y unirse al sitio catinico de la fase estacionaria.

Las partculas cargadas positivamente se unen a la matriz slida cargada negativamente y son retenidas. Las partculas cargadas negativamente son rechazadas por la matriz por lo que son eluidas.

Cromatografa de exclusin molecular

En esta cromatografa, la fase estacionaria consiste en largos polmeros entrecruzados que forman una red tridimensional porosa. El tamao de los poros es tal que algunas molculas (las demasiado grandes) no podrn ingresar a esos poros, en tanto otras molculas (las suficientemente pequeas) podrn pasar a travs de ellos. Los poros quedan conectados formando una malla o red, lo cual determina una serie de caminos a ser recorridos por las molculas que acceden al interior de esta. Las molculas eluyen en este tipo de cromatografa por orden decreciente de tamao molecular.

Las partculas de menor masa molecular entran con facilidad y las partculas de mayor masa molecular son eluidas.

Cromatografa de fase normal

La fase estacionaria est constituida por un lquido de carcter polar. Como fase mvil se emplean mezclas de disolventes apolares (hexano, pentano), con disolventes polares (cloroformo, diclorometano, T.H.F., etanol, metanol o acetonitrilo). El compuesto polar se asocia y es retenido por la fase estacionaria. La fuerza de absorcin aumenta a medida que aumenta la polaridad del compuesto y la interaccin entre el compuesto polar y la fase estacionaria polar aumenta el tiempo de retencin. La utilizacin de disolventes ms polares en la fase mvil disminuye el tiempo de retencin de los compuestos mientras que los disolventes ms hidrofbicos tienden a aumentar el tiempo de retencin.

En este tipo de cromatografa el orden de elucin est gobernado por interacciones de tipo polar: los solutos ms polares quedan ms retenidos.

Cromatografa en fase reversa

En cromatografa en fase reversa la fase estacionaria est constituida por un lquido de carcter apolar. Como fase mvil se emplean mezclas de agua con disolventes polares miscibles, como metanol o acetonitrilo siendo la fase mvil ms polar que la fase estacionaria. Esta tcnica se emplea para la separacin de mezclas de compuestos de polaridad baja, que se retienen muy poco en una cromatografa slido-lquido, y para la separacin de compuestos de una misma serie homloga. La retencin se explica en base a una adsorcin preferencial del disolvente menos polar de la fase mvil a la superficie de las cadenas apolares que constituyen la fase estacionaria, de manera que se establece un mecanismo complejo que supone una combinacin de equilibrios de solubilidad de la mezcla que se cromatografa entre la fase lquida adsorbida a la fase estacionaria y la fase mvil.La separacin ocurre como consecuencia de las diferencias en la superficie apolar de los componentes de la muestra, los compuestos menos polares sern ms solubles en la fase estacionaria que los ms polares. Por tanto, al contrario que en la fase normal, los compuestos ms polares estarn menos retenidos que los menos polares.

Ventajas y desventajas de la cromatografa de alta resolucin

Ventajas:

Una de las ventajas ms importantes es la diversidad de sus aplicaciones tanto para compuestos orgnicos como para compuestos inorgnicos, las nicas muestras no susceptibles de poderse analizar con facilidad son las gaseosas. Es un proceso que toma slo pocos minutos, esto se debe a que utiliza la gravedad en lugar de una bomba de alta velocidad para forzar compuestos a travs de un tubo densamente empaquetado. Los resultados obtenidos son de una alta resolucin y son fciles de leer, y las pruebas se reproducen con facilidad a travs del proceso automatizado. Desventajas:

Es difcil de detectar coelucin (dos compuestos que escapan de la tubera a la vez), lo que puede dar a la categorizacin de compuesto incorrecto. El equipo de HPLC posee un alto costo. Su funcionamiento puede ser complejo y requiere un tcnico entrenado para operar. Debido a la velocidad del proceso, el equipo tiene una baja sensibilidad a algunos compuestos.

Instrumentacin

El notorio avance de la cromatografa liquida moderna ha experimentado en los ltimos aos, en especial a lo referente al desarrollo de nuevas fases estacionarias, a permitido al analista acceder a un nivel instrumental de alta precisin, compuestos por bombas que permiten entregar caudales muy estables, detectores con celdas intercambiables en las cuales el volumen puede escogerse, vlvulas accionadas por procesadores que permiten direccionar la fase mvil, integradores verstiles, conectados a una computadora que puede permitir el control global de uno o ms equipos cromatograficos adems de la libre manipulacin y almacenamiento de datos. Este es un esquema del conjunto de aparatos necesarios:

Los componentes de la cromatografa liquida de alta resolucin son: Disolventes Bomba Puerto inyeccin Columna Detector Sistema adquisicin de datos

Disolvente: Antes de escoger el disolvente estos se deben almacenar en reservorios o frascos de laboratorio con caractersticas especificas. Debe ser un frasco de muy buena calidad (vidrio o polmero resistente) de material inerte, puede ser transparente o de color mbar, con una tapa adecuada para prevenir el ingreso de partculas ambientales al sistema. Es necesario que estos reservorios vayan acompaados de desgasificadores para eliminar los gases del disolvente, pues producen burbujas en la columna interfiriendo en los resultados. Para una buena eleccin de la fase mvil o disolvente, hay que tener en cuenta que la interaccin con la fase estacionaria debe ser ptima y la separacin debe ser lo ms rpida posible. Los parmetros que determinan el tipo de disolvente a utilizar son: Viscosidad. Transparencia al UV. Punto de ebullicin. ndice de refraccin. Inercia frente a la muestra. Resistencia a la corrosin. Toxicidad. Precio. Mantenimiento.

Bomba: Las bombas de HPLC impulsan la fase mvil proveniente del reservorio de solvente hacia el inyector, y desde all hacia la columna. Su caudal de trabajo puede ser muy variable dependiendo de la escala de trabajo escogida. Existen bombas capaces de entregar caudales pequeos (microlitros/mintuo) para la cromatografa analtica convencionales. Bsicamente se utilizan tres tipos de bombas: Bombas recprocas. Bombas de jeringa o de desplazamiento. Bombas neumticas o de presin constante.

Bomba reciproca: Las bombas recprocas, que se utilizan en aproximadamente el 90% de los sistemas de HPLC comercializados, consisten en una pequea cmara en la que el disolvente es propulsado por el movimiento de vaivn de un pistn accionado por un motor. Dos vlvulas con cierre de bola, que se abren y cierran alternativamente, controlan el flujo del disolvente hacia dentro y hacia afuera de un cilindro. La presencia de dobles y triples cabezas de bomba constante en idnticas unidades de cmara de pistn que operan a 180 o 120 grados fuera de fase, permiten un bombeo significativamente suave porque se llena una bomba mientras la otra est en el ciclo de expulsin. En la actualidad la mayor parte de los equipos cromatograficos utilizan bombas con pistones de tipo reciprocantes. Existen varios tipos de bombas reciprocantes: de un solo pistn, dos pistones, 3 pistones, bomba tndem y bomba pistn y diafragma.

Bomba de jeringa o desplazamiento: A diferencia de la bomba reciproca, la bomba jeringa es un dispositivo de desplazamiento continuo, es decir, el solvente contenido en un cilindro es impulsado hacia el inyector por medio de un movimiento continuo y hacia adelante del pistn. La principal ventaja de estas bombas es la total ausencia de pulsos ya que la cmara no necesita ser recargada, mientras que la principal desventaja est dada por el caudal y/o el tiempo necesario para recargar esa cmara cuando se vaca, este tipo de bomba

no es compatible con los sistemas convencionales, con caudales de 1 o ms ml/min, pero es ideal para aquellos en los cuales su rango de trabajo se limita a L/min.

Bomba neumtica o de presin constante: La bomba neumtica o de presin constante es una de las ms econmicas dentro del mercado lo cual proporciona un excelente ventaja, adems la ausencia de pulsaciones en su flujo la hace aun ms eficiente. Sin embargo una de las principales desventaja que presenta esta bomba es que no permite trabajar en modo gradiente por lo cual el caudal depende la viscosidad y contrapresin de la columna, adems es muy ruidosa y tiene una limitada capacidad y presin de salida.

Inyectores

El inyector es el dispositivo que permite introducir la muestra en solucin sin interrumpir el caudal de solvente a travs del sistema. El mtodo de introduccin de la muestra es de gran importancia ya que un mal sistema de inyeccin puede dar lugar a ensanchamientos de la banda cromatogrfica que deterioren la eficacia del sistema cromatografico. Un inyector debe reunir las siguientes caractersticas: Debe ser fcil de operar. Debe ser inerte al ataque qumico. Capaz de soportar altas presiones. Debe ser preciso en cuanto a la cantidad de muestra introducida al sistema. No debe provocar diluciones importantes de la solucin inyectada.

Existen dos tipos de inyectores manuales: los de jeringa y los de vlvula. Inyectores de jeringa: En este tipo de inyectores, la introduccin de la muestra se realiza por medio de una jeringa cuya aguja entra en el sistema cromatografico a travs de una membrana (septum) lo que permite depositar la muestra en la cabeza de la columna. las ventajas de este tipo de inyector, radican en su facilidad de construccin y en que permiten sacar todo el partido a la eficacia que ofrece la columna; sin embargo, son inyectores que presentan una gran falta de reproducibilidad y tienen una presin de trabajo limitada.

Inyectores de vlvula: Este sistema de inyeccin consiste en una vlvula de seis vas, dos de las cuales estn conectadas entre si por medio de una espira. Esta espira es un tubo de volumen conocido cuyo objetivo es contener la muestra antes de efectuarse la inyeccin. la introduccin de la muestra en la columna se lleva a cabo en 2 etapas: la primera se realiza a presin atmosfrica, y consiste en cargar la muestra en la espira con ayuda de una jeringa, en la segunda, mediante un giro de vlvula, se hace pasar el eluyente a travs de la espira hacia la columna.

Columna
La columna es el elemento fundamental de un cromatografo, puesto que es en ella donde ocurre la separacin, por lo tanto, resulta esencial una correcta eleccin de la columna adecuada para cada separacin, ya que con una columna no adecuada o de mala calidad nunca se obtendrn buenos resultados. Las columnas ms utilizadas en cromatografa de lquidos son las de relleno; estas columnas consisten en un tubo, generalmente de acero, relleno de una fase estacionaria adecuada al tipo de separacin que se pretende llevar a cabo. El dimetro interno vara entre 2 a 60 mm dependiendo de su utilizacin. Hoy en dia se encuentran en el mercado columnas de pequeos dimetros comprendidos entre 0,5 y 2 mm y longitudes entre 25 y 100 cms. Este tipo de columnas permite reducir el consumo de solventes.

Las caractersticas de la columna que influyen sobre su capacidad de separacin son: o o o o Dimetro interno Longitud Relleno Tamao de partcula del relleno

Detectores

El detector es la parte del equipo cromatografico que permite ver y ubicar en tiempo y espacio la posicin de cada componente de una muestra a la salida de la columna cromatogrfica. Los detectores deben reunir ciertas caractersticas: Tener un amplio rango dinmico de respuesta Poseer una respuesta lineal No contribuir al ensanchamiento de banda Responder a todos los solutos Tener la sensibilidad apropiada No afectarse por cambios de temperatura Poseer una buena relacin seal/ruido No destruir la muestra Tener una constante de tiempo baja

Los detectores comnmente utilizados son: Detector ndice de refraccin: Este detector mide la diferencia de ndice de refraccin entre el solvente puro y el solvente que contiene la muestra. Es un detector universal y no destructivo. Es un detector muy poco sensible lo que limita su campo de aplicacin y es muy afectado por cambios de temperatura. No puede utilizarse con programacin de solventes porque el cambio de la composicin de la fase mvil se acompaa del cambio de su ndice de refraccin. Existen 3 tipos de diferentes detectores de de ndice de refraccin: fresnel, deflexin y interferometrico.

Detector UV: Es el detector mas empleado en HPLC. Posee buena sensibilidad y rango lineal y permite detectar analitos en el orden de nanogramos. No es destructivo y puede emplearse con gradientes de solventes, con la nica limitacin de que estos sean transparentes en la longitud de onda de trabajo. Es un detector muy poco sensible a los cambios de caudal y temperatura. La concetracion de analito en la muestra se determina por la aplicacin de ley de Beer. Existen dos tipos de detectores UV: los de longitud de onda fija y los de longitud de onda variable.

Detector de fluorescencia: Este detector se utiliza para el anlisis de sustancias que presentan fluorescencia natural o conferida por derivatizacion con un reactivo fluoregenico. Su alta sensibilidad y selectividad lo convierte en un detector adecuado para el anlisis de trazas. El fenmeno de fluorescencia tiene lugar cuando compuestos que poseen determinados grupos funcionales especficos, se excitan con la energa de ciertas longitudes de onda y emiten radiacin de mayor longitud de onda que la absorbida. Los detectores de fluorescencia representa el tercer tipo de detectores ms comnmente utilizados en cromatografa liquida moderna.

Detector electroqumico: Este tipo de detectores esta basado en la oxidacin del analito eluido mediante un electrodo adecuado, registrndose la intensidad de corriente, mantenida mediante la electrolisis de los analitos, a lo largo del cromatograma. La deteccin de compuestos electrooxidables y electroreducibles ocurre en la superfice de un electrodo interpuesto en el paso del eluido de la columna. Este detector emplea tres electrodos: el electrodo de trabajo, electrodo de referencia y el auxiliar. La reaccin redox es inducida en el electrodo de trabajo, mientras el electrodo auxiliar provee la carga de neutralizacin complementaria, el electrodo de referencia produce un potencial fijo y establece contra el cual se mide el potencial del electrodo de trabajo, y un potenciostato provee una diferencia de potencial. Un amplificador de corriente finalmente produce la seal de salida.

Sistema adquisicin de datos

El resultado del anlisis cromatografico no es solo la obtencin de fracciones separadas de los componentes de una muestra si no tambin la de un grafico o cromatograma, de cuya interpretacin puede extraerse conclusiones tanto cuantitativamente como cualitativamente. Todo este sistema de adquisicin de dato. Bsicamente es una computadora de uso muy especfico que con un software apropiado permite el registro grafico del cromatograma, manipulacin de datos, almacenamiento de ensayos, clculos apropiados, generacin de reportes entre otras funciones ms.

Sistema de mezcla de fase mvil

En cromatografa de liquidos, se puede trabajar en dos modalidades: isocrtico, cuando la fase mvil mantiene la misma composicin durante la elucin, y en gradiente, cuando la composicin de la fase mvil cambia segn una funcin dependiente del tiempo. para trabajar en modo gradiente, es necesario que el equipo cromatografico tenga un dispositivo capaz de realizar mezclas de disolventes con un control preciso de reducible. Los dos principales mtodos de mezclados de los componentes de la fase mvil se conocen como mezclado de alta presin y mezclado de baja presin. Mezclado o gradiente de alta presin: utilizan una bomba de alta presin para cada solvente. Cada bomba es manipulada por un programador, y el solvente entregado se mezcla a alta presin en una cmara de bajo volumen y dirigido hacia el sistema. El principal inconveniente de este sistema reside en el costo, ya que cada solvente necesita su bomba impulsora, por otra parte, las bombas deben ser exactas y precisas para que el gradiente mantenga su calidad en toda su extensin, en especial en caudales bajos.

Mezclado o gradiente de baja presin: estos emplean, en general solo una bomba y vlvulas que entregan cada solvente en una cmara de mezclado de pequeo volumen. El sistema permite mezclar 2 a 4 solventes individuales, regulando el ciclo de apertura a cada vlvula individual. La ventaja principal de los sistemas de baja presin est dada por el costo y por la precisin lograda en los extremos del gradiente, ya que todo el caudal es entregado por el mismo dispositivo. Cabe destacar que este sistema requiere la desgasificacin continua para cada solvente individual, esto se debe a que la solubilidad de los gases en los solventes individuales es en general diferente de su solubilidad en la mezcla deseada.

Aplicaciones de cromatografa liquida alta resolucin

La cromatografa liquida de alta resolucin a pesar de ser una tcnica relativamente nueva, presenta numerosas aplicaciones en la actualidad. En la mayora de los casos, estas consisten en determinaciones de sustancias que por el anlisis de otras tcnicas resulta prcticamente difcil. Existe una gran variedad de compuestos y sustancias que pueden ser analizados por este mtodo con un objetivo especfico, dentro de esta variedad cabe destacar los siguientes compuestos: Compuestos inicos: Aminocidos, sales inorgnicas, cidos orgnicos, etc. Compuesto de alto peso molecular: Polmeros, hidrocarburos polinucleares, productos naturales, etc. Compuestos no voltiles: Vitaminas, pesticidas, esteroides, plastificantes, drogas y una parte muy grande de otros productos farmacuticos.

Existen adems de estos una gran variedad de compuestos que se pueden analizar por medio de este mtodo. La cromatografa liquida de alta eficacia tambin se utiliza en distintas reas o campos: 1. Medicina clnica: La medicina clnica es una rama de la medicina que estudia las enfermedades mediante la exploracin directa con el paciente y proporciona tratamientos segn corresponda. La cromatografa liquida cumple un rol importante dentro de este campo ya que se utiliza para la purificacin y caracterizacin de enzimas y protenas, cidos biliares, metabolitos de drogas, extractos de orina y estrgenos. 2. Qumica Forense: La qumica forense es la rama de la qumica que estudia las interacciones entre compuestos de naturaleza orgnica e inorgnica existentes en la escena del crimen. La cromatografa liquida se usa para determinar la existencia de drogas, venenos, alcohol, en la sangre y otros tejidos o fluidos. Por ejemplo en la separacin y purificacin de los metabolitos de las drogas procedentes de muestras de orina. 3. Frmacos: Los frmacos son sustancias qumicas que producen efectos medibles o sensibles en los organismos vivos y que se absorbe, puede transformarse, almacenarse o eliminarse.

4. Industria qumica: La industria qumica es el sector que se ocupa de las transformaciones qumicas a gran escala, se ocupa de la extraccin y procesamiento de las materias primas, tanto naturales como sintticas, y de su transformacin en otras sustancias con caractersticas diferentes.

La cromatografa liquida en esta rea puede analizar productos como son los aromticos condensados, tensioactivos, propulsores, colorantes, etc. En el campo del medio ambiente esta tcnica se utiliza bastante, sobre todo en el mbito de contaminacin ambiental, la HPLC (High perfomance liquid chromatography) se utiliza para analizar la capacidad que tienen algunos pesticidas (insecticidas, larvicidas, herbicidas, etc..)

Determinacin de Hidrocarburos Poliaromticos por HPLC ( enfocado a suelos)

Hidrocarburos Poli aromticos: Aquellos hidrocarburos aromticos que tienen dos o ms anillos aromticos con dos tomos de carbono comunes a cada dos anillos; por ejemplo, naftaleno, antraceno, o benzopireno. Tambin se les conoce como hidrocarburos policclicos o hidrocarburos polinucleares y, en ingls, como PAH. Son contaminantes atmosfricos de gran importancia por sus propiedades toxicolgicas. Su anlisis se hace mediante cromatografa lquida de alta resolucin ( HPLC) con un detector de Fluorescencia ( HPLC-F)

Equipo HPLC

Un detector ideal para cromatografa de lquidos debera poseer todas las propiedades listadas en relacin con la cromatografa de gases, con la excepcin de que un detector para cromatografa de lquidos no es necesario que sea sensible en un intervalo tan grande de temperaturas. Adems, un detector de HPLC debe tener un volumen interno mnimo a fin de reducir el ensanchamiento de banda.

Los detectores en cromatografa de lquidos son de dos tipos bsicos. Los detectores basados en una propiedad de la disolucin responden a una propiedad de la fase mvil, tal como el ndice de refraccin, la constante dielctrica, o la densidad, que se modifica por la presencia de los analitos. Por contraste, los detectores basados en una propiedad del soluto responden a alguna de las propiedades del soluto, como la absorbancia UV, fluorescencia, o intensidad de difusin, que no son propias de la fase mvil. Detector de Fluorescencia: Los detectores de fluorescencia para HPLC son semejantes en diseo a los fluormetros y espectrofluormetros. En la mayora de ellos, la fluorescencia se detecta por medio de un detector fotoelctrico colocado perpendicularmente respecto al haz de excitacin. Los detectores ms sencillos utilizan una fuente de excitacin de mercurio, y uno o ms filtros para aislar la radiacin fluorescente. Los futuros desarrollos en los detectores de fluorescencia probablemente se basarn en el uso de fuentes de lser sintonizables, las cuales permiten una mayor sensibilidad y selectividad. Una ventaja inherente a los mtodos de fluorescencia es su alta sensibilidad, que resulta ser ms de un orden de magnitud mayor que la de los sistemas de absorbancia. En cromatografa de lquidos se ha aprovechado esta ventaja para la separacin y determinacin de los componentes fluorescentes de las muestras. Este detector se ocupa en con una fase reversa. En la cromatografa en fase inversa (o reversa), la fase estacionaria no es polar,con frecuencia se trata de un hidrocarburo, y la fase mvil es relativamente polar (como el agua, metanol y el acetonitrilo).

Detector de Fluorescencia

Columna utilizada en HPLC-F

Alcance y campo de aplicacin: Este mtodo aplica para medir la concentracin de ciertos hidrocarburos aromticos policclicos (HAP). Especficamente para analizar los siguientes compuestos ms conocidos y peligrosos: Benzo(a) pireno, Dibenzo (a,h)antraceno, Benzo(a)antraceno, Benzo(b)fluoranteno, Benzo(k)fluoranteno y Indeno (1,2,3-cd)pireno

Los lmites de deteccin para cada compuesto analizado por este mtodo corresponden al mtodo EPA (Agencia Proteccin Ambiental):

Condiciones de referencia para el cromatgrafo de HPLC: Columna analtica fase reversa de C18, donde el tamao de las partculas es de 0,5 m. Dimensiones : 250 mm de longitud por 2,6 mm de dimetro interno. La sensibilidad del mtodo generalmente depende de los niveles de interferencias, as como de las limitaciones del instrumento. Si se sospecha de interferencias y para mejorar la deteccin y cuantificacin de los analitos de inters, se recomienda utilizar un mtodo de limpieza del extracto en una columna de silica-gel.

Interferencias : El material de vidrio, disolventes, reactivos y aparatos utilizados en el anlisis pueden ocasionar contaminacin o lneas bases elevadas, causando una errnea interpretacin de los cromatogramas. Se debe demostrar que todos los materiales se encuentran libres de interferencias, bajo las condiciones de anlisis. Esto se hace incluyendo en el anlisis blancos de disolvente y blancos de reactivos. Se requiere de una seleccin especfica de reactivos y disolventes de alta pureza. La co-extraccin de interferencias de las muestras vara considerablemente de una fuente a otra. En el mtodo se menciona una tcnica general, sin embargo, algunas muestras pueden requerir de limpieza adicional para alcanzar el lmite de deteccin indicado en la Tabla B.1 para el los analitos de inters. Las condiciones cromatogrficas descritas permiten una resolucin de los HAP indicados en este mtodo. Otros HAP presentes en la muestra pueden causar interferencia.

Resumen del mtodo

Este mtodo especfica las condiciones de cromatografa de lquidos de alta resolucin para la identificacin y cuantificacin de algunos hidrocarburos aromticos policclicos a nivel de g/kg (ppb). Antes de la aplicacin de este mtodo de anlisis, se debe usar una tcnica apropiada de extraccin para aislar el o los analitos de inters. Se inyecta un volumen de 5 L a 25 L del extracto de la muestra a un cromatgrafo de lquidos, en donde los compuestos se analizan con un detector de fluorescencia y/o de UV-VIS

Conclusin

Bibliografa