Actividad antiartrtica del jarabe de Allium sativum L

Dra. Juana I. Tilln Cap,1 Lic. Annia Bentez Lpez,2 Lic. Ivette Hernndez Paderni,3 Tc. Carmen Carrillo4

RESUMEN Allium sativum L. es ampliamente utilizado por la poblacin cubana en la medicina tradicional y natural para aliviar procesos inflamatorios y en especial en la artritis reumatoide; sin embargo, su actividad no ha sido demostrada cientficamente como para poder establecer un ensayo clnico para su registro y produccin industrial. En el presente trabajo se evalu la accin de un jarabe de Allium sativum L. sobre la artritis reumatoide experimental, empleando los modelos de edema de la pata y pleuresa en ratas Wistar, basados en la reaccin pasiva de Arthus. En los dos modelos, se ensayaron placebo y dosis de 45, 90 y 180 mg/kg de peso corporal, en base a slidos totales contenido en el jarabe de A. sativum. Como controles positivos se utiliz ibuprofeno y prednisona a las dosis de 200 y 10 mg/kg respectivamente. Tanto los controles positivos, como las dosis de jarabe de Allium sativum L. ensayadas disminuyeron el proceso inflamatorio desencadenado por la reaccin antgeno anticuerpo que se logra mediante la reaccin pasiva de Arthus, el antisuero de albmina de huevo y antisuero de albmina bovina para el edema de la pata y el desarrollo de pleuresa respectivamente. Palabras clave: Allium sativum L., antiiflamatorio, antiartrtico, Reaccin pasiva de Arthus, antisueros, ratas. La artritis reumatoide es una forma de reumatismo crnico, inflamatorio, donde se involucran mecanismos de autoinmunidad. Comienza en las pequeas articulaciones de las manos y progresa en forma centrpeta y simtrica por todas las articulaciones del cuerpo. Sus sntomas son: dolor, tumefaccin, disminucin de la movilidad articular, rigidez matutina y entumecimiento.1 El factor reumatoideo es un anticuerpo policlonal que acta sobre las inmunoglobulinas, se combina con las IgG y forma un complejo inmunitario, activa el complemento, da como resultado la produccin de numerosos fenmenos de la inflamacin tales como el incremento de la permeabilidad vascular y la adherencia de los neutrfilos, monocitos y macrfagos, cuyas interacciones tienen como consecuencia la inflamacin.2-5 Allium sativum L. contiene cido amino sulfurado la alina, alicina ajoenos, fructosanos, peroxidasa, lisosimas, desoxirribonucleasas y fosfomonoesterasa, yodo, slice, azufre y vitaminas (A, B 1 , B 2 y C). Es ampliamente utilizada por la poblacin como hipotensor (vasodilatador perifrico), antisptico, expectorante, hipoglucemiante antirreumtico, antiedematoso, antiagregante plaquetario e hipocolesteromiante.6 Los resultados cientficos lo ubican como inhibidor de la sntesis de prostaglandinas, de la agregacin plaquetaria, la 5lipooxgenasa y la ciclooxgenasa, y del aumento de linfocitos T perifricos.7

Debido a la amplia utilizacin de Allium sativum L. por parte de la poblacin en los procesos inflamatorios crnicos y a la existencia de una formulacin en forma de jarabe, nos propusimos evaluar su accin antiartrtica en los modelos de edema de la pata de la rata y exudado de la cavidad pleural de rata (volumen y conteo de clulas), inducidos por una inyeccin intradrmica del anticuerpo seguida por una inyeccin intravenosa del antgeno (reaccin pasiva de Arthus ).2 MTODOS
Sustancia de ensayo

Jarabe de Allium sativum L. elaborado a partir de tintura de ajo al 20 % con 2,9 % de slidos totales (en base a los slidos contenidos en la tintura) suministrado por la Empresa Laboratorios Farmacuticos Sal Delgado, con N de lote 3001, as como el placebo correspondiente a la formulacin del jarabe. Antisuero de albmina bovina y antisuero de albmina de huevo, obtenidos en el laboratorio mediante la administracin intradrmica a conejos albinos de 2 mL de una emulsin de las respectivas albminas en cloruro de sodio 0,9 % y adyuvante completo de Freund. Se realizaron 3 administraciones con intervalos de 15 das.
Animales

Se utilizaron ratas Wistar hembras, con peso corporal de 200 250 g, procedentes de la Unidad de Control Biolgico del CIDEM. Se mantuvieron en una sala con temperatura controlada de 22 2 C y ciclo de luz/oscuridad de 12-12 horas. La alimentacin consisti en pienso peletizado CMO 1001, del Centro Nacional para la Produccin de Animales de Laboratorio (CENPALAB) y agua a voluntad.
Tratamientos

Los tratamientos estuvieron conformados por un grupo control sin administrar, otro con placebo (20 mL/kg), un grupo control positivo administrado con ibuprofeno (200 mg/kg) o prednisona (10 mg/kg) para los ensayos de edema de la pata y exudado pleural respectivamente y 3 grupos tratados con jarabe de Allium sativum L. elaborado a partir de la tintura al 20 %, a las dosis de 45, 90 y 180 mg/kg de peso corporal (expresadas en base al contenido de slidos presentes en la tintura).
Procedimiento experimental

Para la induccin del edema, basado en la reaccin pasiva de Arthus, se inyect en el tren posterior del rea plantar de la pata derecha de la rata, 0,1 mL de una solucin de antisuero de ovoalbmina de conejo diluido 1:3 en cloruro de sodio al 0,9 %. La pata contralateral fue inyectada con 0,1 mL de cloruro de sodio 0,9 % utilizada como control e inmediatamente tambin fue inyectada por va intravenosa albmina de huevo, a la dosis de 25 mg/kg de peso corporal.

El volumen de la pata inflamada y control fueron medidas a las 3 horas de la inyeccin subplantar con un pletismgrafo 7150 (Ugo, Basilea). El edema de la pata fue determinado por la diferencia entre el valor del volumen de la pata tratada y control. El ensayo de pleuresa basada en la reaccin pasiva de Arthus se llev a cabo mediante la administracin a los animales de 2 mL de una solucin de antisuero de albmina bovina de conejo, diluida 1:10 en cloruro de sodio 0,9 % en la cavidad pleural. Pasados 20 minutos se administr por va intravenosa 25 mg/kg de albmina bovina. Los animales fueron sacrificados 6 horas despus de la inyeccin intrapleural. El volumen de exudado de la cavidad pleural fue medido en mL y centrifugado durante 5 minutos a 1500 r.p.m. en una centrfuga Heinz Janetzki T23, el sedimento fue fijado sobre una lmina portaobjeto con metanol para su posterior tincin con Giemsa y el conteo diferencial al microscopio de clulas polimorfonucleares (neutrfilos) y linfocitos.
Procesamiento estadstico

Los resultados fueron procesados mediante un anlisis de varianza de una va y la prueba de Duncan para las diferencias entre las medias. Para determinar la dosis efectiva media (DE 50 ) del jarabe se emple el mtodo de los Probits.8 RESULTADOS En la Figura 1, se muestra el resultado de las diferentes dosis de jarabe de Allium sativum L. sobre el edema plantar de la rata, donde se puede apreciar la inhibicin de la formacin del edema dependiente de la dosis de jarabe de Allium sativum L. La DE 50 estimada por el mtodo de Probit9 para la inhibicin del edema fue de 143,62 mg/kg.

Fig 1. Efecto del jarabe de Allium sativum L. sobre el edema plantar inducido por la reaccin de interaccin antgeno anticuerpo. En la Figura 2, se pueden apreciar los resultados del jarabe de Allium sativum L., alcanzados sobre el volumen de exudado pleural inducido por la reaccin antgeno anticuerpo; as como el conteo diferencial de linfocitos y neutrofilos. En todos los grupos tratados con el jarabe de Allium sativum L. o prednisona se observa una disminucin significativa del volumen del exudado pleural con respecto al grupo control negativo que no recibi tratamiento. Tambin se observ una disminucin significativa del conteo de neutrfilos y un incremento de los linfocitos (Figuras 3 y 4).

Fig 2. Efecto del Jarabe de Allium sativum L. sobre el volumen de exudado de la cavidad pleural inducido por la reaccin de interaccin antgeno anticuerpo.

Fig 3. Efecto del Jarabe de Allium sativum L. sobre el contenido de neutrfilos del exudado de la cavidad pleural inducido por la reaccin de interaccin antgeno anticuerpo.

Fig 4. Efecto del Jarabe de Allium sativum L. sobre el contenido de linfocitos del exudado de la cavidad pleural inducido por la reaccin de interaccin antgeno anticuerpo. DISCUSIN La reaccin de Arthus permite reproducir experimentalmente la patofisiologa local de la artritis reumatoidea. La lesin obtenida es caracterizada por edema, eritema y acumulacin de polimorfonucleares. Cuando el antgeno es inyectado se forma el complejo con el anticuerpo y se produce la estimulacin del complemento; las anafilatoxinas son generadas rpidamente y causan degranulacin de los mastocitos. El complejo local intravascular puede causar tambin agregacin plaquetaria y liberacin de aminas vasoactivas provocando un aumento del edema, eritema y la formacin de factores quimiotcticos que producen la afluencia de los leucocitos polimorfonucleares (PMN).1 La administracin del jarabe de Allium sativum L. a las dosis ensayadas, increment significativamente ( p < 0,05) el porcentaje de inhibicin de la inflamacin inducida por la

reaccin antgeno anticuerpo con respecto al grupo control negativo y al grupo placebo. Con la dosis de 180 mg/kg de jarabe de Allium sativum L. se obtuvo una inhibicin del edema de 54,51 %, y al calcular la DE 50 (143,62 mg/kg) por el mtodo de Probit se observ linealidad y una buena relacin dosis respuesta. Estudios realizados en rganos aislados han demostrado que el extracto de Allium sativum L. produce inhibicin de la sntesis de prostaglandina de forma dosis dependiente, lo cual pudiera explicar nuestros resultados.9 En el modelo de la pleuresa, las dosis de jarabe ensayadas, disminuyeron significativamente el volumen del exudado de la cavidad pleural y el nmero de neutrfilos presentes en dicha cavidad con respecto al grupo placebo (p < 0,05). Los mejores resultados se lograron con la dosis de 90 mg/kg, aunque no hubo diferencias significativas entre las dosis de jarabe ensayadas. Con el conteo diferencial del exudado de la cavidad pleural se puedo observar un aumento de la proporcin de neutrfilos presentes en el grupo placebo el cual se ve disminuido significativamente en los grupos administrados con el jarabe de Allium sativum L. Investigaciones realizadas por Ramos,9 en la reaccin pasiva de Arthus peritoneal, demostraron que los mastocitos juegan un papel importante en la induccin de la inflamacin mediada por un complejo inmune. La histamina, leucotrienos y el factor de necrosis tumoral (TNF) liberados de los mastocitos, as como la activacin del complemento, son factores necesarios para la iniciacin del reclutamiento de neutrfilos.10 En la fase inicial de la reaccin de inflamacin los macrfagos como clulas de alarma juegan un papel importante en el reclutamiento de neutrfilos, mediados en parte por la liberacin de factores quimiotcticos. Los resultados obtenidos con los dos modelos empleados en el presente trabajo demuestran que el jarabe de Allium sativum L. inhibe la formacin de edema, el volumen del exudado de la cavidad pleural y la cantidad de neutrfilos en el foco inflamatorio causado por una reaccin de antgeno anticuerpo (reaccin pasiva de Arthus). SUMMARY
Antiarthritic activity of Allium sativum L syrup

Allium sativum L is widely used by Cuban people in folk and natural medicine to alliviate inflammatory processes and specially in rheumatoid arthritis; however, its activity hasnt scientifically enough demonstrated to stablish a clinical assay for its registration and industrial production. In present paper, action of a Allium sativum syrup on experimental rheumatoid arthritis was assessed, using models of leg edema and pleurisy in Wistar rats, based on passive reaction of Arthus. In two models, placebo and doses of 45, 90, and 180 mg/kg of body weight were assayed based on total solids in A.sativum syrup. As positive controls Ibuprofen and Prednisone were used at dosis of 200 and 10 mg/kg, respectively. Positive controls and assayed dosis of Allium sativum L syrup decreased inflammatory process triggered by antigen-antibody reaction achieved by means of passive reaction of

Arthus, by means of egg albumin antiserum, and bovine albumin antiserum for leg edema and development of pleurisy, recpectively. Key words: Allium sativum L, anti-inflammatory, anti-arthritic, passive reaction of Arthus, antisera, rats. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS 1. Litter Manuel. Farmacologa experimental clnica 7ma ed. Buenos Aires: El Ateneo;1986. 2. Wong A, Kenny TP, Ermel R. IgG3 reactive rheumatoid factor in Rheumatoid Arthritis: etiologic and pathogenic considerations .Autoimmunity.1994;19(3):19910. 3. Kalsi J, Isenberg D. Rheumatoid factor: primary or secondary event in the pathogenesis of Rheumatoid Arthritis. Int Arch Allergy-Immunol.1993;102(3):20915. 4. Stites DP, Stobo JD Fundenberg HH. Immunologa bsica y clnica. 5 ed. Cambridge: Cambridge University Press; 1987. 5. Roig JT. Plantas medicina les aromticas o venenosa de Cuba. La Habana: Ed. Ciencia y Tcnica. Instituto del Libro; 1974. 6. Weniger B, Robineau L. Elementos para una farmacopea caribea. Seminario Gramil.1988;21-25. 7. Finney DJ. Probits analysis. 3 ed. Cambridge: Cambridge University Press;1971. 8. Ali M, Khattar M, Farid A. Aqueous extracts of garlic ( Allium sativum ) inhibit prostaglandin synthesis in the ovine ureter. Prostaglandins- leucotrienes- Essenty Fatty Acids.1993;49(5):855-59. 9. Ramos BF, Zhang Y, Jakschik BA. Neutrophil elicition in the reverse passive Arthus reaction. J Immunol.1994; 152(3):1380-84. Recibido: 4 de mayo de 2007. Aprobado: 14 de mayo de 2007. Dra. Juana I. Tilln Cap. Centro de Investigacin y Desarrollo de Medicamentos (CIDEM) Direccin de Investigaciones. Ave 26 N 1605 entre Boyeros y Puentes Grandes Plaza Ciudad de la Habana, Cuba. E- mail: cinfa@infomed.sld.cu ; juana@cidem.quimefa.cu
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Lic. en Bioqumica Farmacutica, Investigadora Auxiliar, Dra en Ciencias Veterinarias. Lic. en Ciencias Farmacuticas. 3Lic. en Ciencias Farmacuticas. 4 Tcnico en Farmacia. Indice Anterior Siguiente