INSTRUCCIN TCNICA Elusin cida en fro Tcnica Diacidel

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DISTRIBUCIN: DEPARTAMENTO Direccin Hematologa Enfermera RESPONSABLE Jefe de la Unidad de Calidad Jefe de la Unidad de Hematologa Coordinadora de Enfermera

SUMARIO DE MODIFICACIONES REVISIN A FECHA 29/01/07 DESCRIPCIN Primera edicin

PREPARADO

REVISADO Y APROBADO

Nombre: Marga Alcover Cargo: Coordinadora de Enfermera Fecha: 29/01/07

Nombre: Joan Bargay Cargo: Jefe de Unidad de Hematologa Fecha: 29/01/07

La documentacin del Sistema de Gestin de la Calidad se encuentra en la Intranet de Hospital Son Lltzer. Existe una nica copia papel autorizada y controlada en poder del Coordinador de Calidad, por lo que cualquier otro documento papel se considerar copia no controlada.

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DEFINICIN La elucin consiste en liberar (despegar) los anticuerpos unidos o fijados en la membrana de los hemates permitiendo su estudio e identificacin. Es muy til para eluir anticuerpos tipo IgG. MATERIAL E INSTRUMENTACION Kitt reactivos Diacidel (DiaMed). Suero fisiolgico. Panel identificacin anticuerpos irregulares. Pipeta de 50 y 25l Puntas amarillas de 10 a 100l. Pipetas desechables Pasteur. Tubos de cristal termorresistentes. Centrfuga Bao seco a 37C. MUESTRAS REQUERIDAS Aproximadamente 4 ml. De sangre mantenida anticoagulada con EDTA. PROCEDIMIENTO - Lavar 6 veces los hemates con solucin salina isotnica 0.9%. Como mnimo se requiere 1 ml. de clulas concentradas. - Lavar 1 ml. de clulas concentradas 4 veces con la solucin de lavado Diacidel diluido 1/10 (1 parte de solucin de lavado y 9 de suero fisiolgico). - Decantar completamente despus del lavado y guardar parte del sobrenadante del ltimo lavado para la presencia de anticuerpos irregulares. - Aadir a 1 ml. de clulas concentradas lavadas, 1 ml. de la solucin de eluido DiaCidel. Mezclar bien. - Centrifugar inmediatamente durante 1 minuto a 2838 rpm (900g). - Transferir el sobrenadante eluido a un tubo limpio. - Aadir 5 gotas de Diacidel buffer solution para el eluido y mezclar bien. Observar que se forma un color azul permanente, indicado que el pH neutro de 6.5-7.5 est obtenido. Si no se obtiene el color azul, aadir ms buffer (1 gota) mientras se remueve bien. - Centrifugar el eluido durante 1 minuto a 2838 rpm (900 g) para eliminar algn precipitado o resto de clulas que puede haber quedado. - Proceder a las tcnicas habituales para la deteccin e identificacin de anticuerpos utilizando el eluido. - Se rotularn los diferentes pocillos de la tarjeta Liss Coombs con los nmeros de las distintas clulas identificadas (del 1 al 11) o clulas A y B si hay incompatibilidad ABO. - Se dispensarn 50 de clulas en los pocillos correspondientes. Se incubar 15 minutos a 37 C, se centrifugar y leer. OBSERVACIONES Y SUGERENCIAS: Se realizar un control negativo con el sobrenadante del ltimo lavado que hemos reservado.

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No deber prolongarse la inmersin de los hemates en la solucin eluida porque pueden hemolizarse los hemates.

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