HEMATOPOIESE

Alexandra Mota
S
Serviço
i d Hematologia
de H t l i
Hospital Geral de
S t A
Santo António
tó i
Porto
Locais da Hematopoiese
Aspirado Medular
Biopsia de med
medula
la óssea
Biópsia de med
medula
la óssea (HE)
CFU S assay
CFU-S assa
 Ensaios Clonogénicos

• CFU-S (
(Unidade formadora de colónias-
baço) Till and Mc Cullough(1961)

• CFU- GM (Unidade formadora de colónias

-granulomonocíticas )
– Pluznick and Sachs Bradley and Metcalf
(1965)
Sistemas in vitro para o estudo da hematopoiése e dos factores que a regulam
• Sistemas in vitro que suportam o desenvolvimento de células
- da linha milóide
- da linha linfóide

células imobilizadas podem ser isoladas analizadas repicadas

• células HSC podem ser usadas para estabelecer colónias mistas

• células progenitoras podem ser usadas para estabeleciento de linhagens restrictas

• Necessidade de factores de crescimento solúveis (citocinas) : sobrevivência

proliferação
diferenciação
maturação
Ensaios Clonogénicos
 Stem cell assa
assays
s

IIn vitro
it
LTBMC(Long term bone marrow cultures)

In vivo
• Marrow repopulating assays (NOD / SCID
mouse )
 Culturas Celulares

• Culturas tipo DEXTER (1977)

– Culturas dependentes
p do estroma

– Papel
P lddo microambiente
i bi h
hematopoiético
ié i
J.Clin. Invest.116:1195-1201(2006)
 Estrutura Hierárquica do Tecido
Hematopoiético

• Células Stem
• Células Progenitoras (CFU) – unidade
formadora de
colónias

• Células Precursoras
• Células Maduras
 Características das células stem
hematopoiéticas

• Células pluripotenciais
• Capacidade
p de auto-renovação
ç
• Capacidade de reconstituição
h
hematopoiética
ié i
• Fase Go
• CD34 positivas
p
• HLA DR -
 Características das células
progenitoras

• Sem capacidade de auto-renovação

• Capacidade de diferenciação limitada e
irreversível
• Potencial proliferativo baixo
• Em ciclo celular
Diferenciação Hematopoiética
 Microambiente Hematopoiético

• Regulação
R l ã d
da migração
i ã ddas células
él l para
o exterior

• Suporte da Hematopoiese

• Regulação na produção de Factores de

Crescimento Hematopoiético
Microambiente Hematopoiético

• Células do estroma

• Componentes da matrix extracelular

• Citocinas
 Estroma Med
Medular
lar

• Células de origem mesenquimatosa

– Células endoteliais
– Fibroblastos
– Adipócitos
Adi ó it
– Osteoblastos

• Macrófagos
 Componentes
p da Matrix
Extracelular

• Colagéneo
• Laminina
• Trombospondina

• Fibronectina
– Produzida
P d id por fib
fibroblastos
bl t e cél.
él endoteliais
d t li i
 Reg lação da Hematopoiese
Regulação

• Interacção das células hematopoiéticas

– componentes da matrix extracelular

– células do estroma
 Regulação
g ç da Hematopoiese
p

Receptores de citocinas

Receptores de moléculas de adesão

– Modulação
ç da resposta
p da HSC aos factores
extracelulares
– Indução ou inibição da proliferação e
diferenciação celulares
 Regulação
g ç da Hematopoiese
p

• Moléculas de adesão
– Integrinas (beta1)
• Ad
Adesão
ã dos
d neutrófilos
t ófil ao endotélio
d téli
• Activação / Interacção com a matrix extracelular
• Envio de “sinais” para diferenciação celular

– Superfamília das Igs

• Receptores de antigénios
• Receptores de FCH
 Factores de Crescimento
Angiogénico
• VEGF - factor de crescimento endotelial e vascular

• Família das Angiopoietinas

– Promovem a migração e proliferação das células endoteliais

durante a formação da vasos sanguíneos
– Modulam o crescimento e diferenciação das células hematopoiéticqs e
a sua mobilização.
 FACTORES REGULADORES DA
HEMATOPOIESE

• Interleucinas (IL-1
(IL 1 ,IL
IL-2
2, IL-3
IL 3,... IL-18)
IL 18)

• Factores de Crescimento Hematopoiético

CSF- colony stimulating factors

• Inibidores da Hematopoiese
p
 Interle cinas
Interleucinas

• Glicoproteínas
– Hematopoiese
– Resposta Imune
– Resposta à infecção
 INTERLEUCINAS
Interleucina Síntese Células Alvo Cromossoma

IL-3
IL 3 Linfócitos T Progenitores 5q23-31
5q23 31
multipotentes

IL 5
IL-5 Linfócitos T Eosinófilos 5q23-31
5q23 31

IL-6 Fibroblastos Megacariócitos 7p21-14

Linfócitos T

IL-11 Macrofagos Megacariócitos 19q13-13.4

Progenitores
multipotentes
lti t t
 Factores de Crescimento
Hematopoiético

• Glicoproteínas
• Actuam sobre diferentes linhas celulares
• Efeito sobre a proliferação e diferenciação
• Acção sobre o funcionalismo celular:
– Adesão
– Fagocitose
– Metabolismo celular
– Citotoxicidade
Metcalf, D. Blood 2008;111:485-491
Metcalf, D. Blood 2008;111:485-491
 Factores de Crescimento
FCH Síntese Células Alvo Cromossoma

Células do estroma CFU-G

G-CSF Macrofagos 17q11-22
Função/Número
Células do estroma CFU-GM
GM-CSF Linfócitos T 5q31-32
q
Progenitores
multipotentes
Cél dendríticas(IL-4)
( )

Eritropoietina Rim BFU-e 7pterq22

Fígado
g CFU-e

Trombopoietina Fígado Megacariócitos 3q26-27

Rim Stem cells
BFU-e
Inibidores da Hematopoiese

• MIP-1 (Proteina Inflamatória

Macrofágica)

• Interferons

• TNF (Factor
(F t de d Necrose
N Tumoral)
T l)
Metcalf, D. Blood 2008;111:485-491
Metcalf, D. Blood 2008;111:485-491
TROMBOCITOPOIESE
ERITROPOIESE
ERITROPOIESE
FCH Redundância
FCH- R d dâ i ou S
Subtileza?
btil ?
 Uso clínico dos FCH
• Objectivos • Factores

– Tratar anemia – Eritropoietina

– Acelerar granulopoiese – G-CSF, GM-CSF

– Mobilização celular – G-CSF

Metcalf, D. Blood 2008;111:485-491
FCH e terapê
terapêutica
tica da LMA
Mobili ação e” Homing”
Mobilização

J.Clin. Invest.116:1195-1201(2006)
“The stem cell niches”

J.Clin. Invest.116:1195-1201(2006)
 International Societyy for Cellular
Therapy position statement
• Minimal Criteria for defining Multipotent
Mesenchymal Stromal Cells

– Plastic adherent when maintained in standard culture conditions

– CD105+
– CD75+
– CD90+
– CD45-
– C
CD34-
– CD14-
– CD115
CD115-
Cytotherapy.2006;8:315-317
Nauta, A. J. et al. Blood 2007;110:3499-3506
Visão esquemática
da Hematopoiese