Agrobiotecnologa.

Curso 2011
Clase 17: Fitorremediacin
Alternativas actuales para eliminar contaminaciones de metales pesados Transparencias 3-7 La contaminacin ambiental con metales pesados y radionucletidos es un serio problema tanto para la salud umana como para la agricultura. La !itorremediacin es una de las tecnologas emergentes "ue podr# solucionar$ al menos parcialmente$ este problema. Tanto la contaminacin de suelos como la de aguas ponen en riesgo la salud y la calidad de %ida umana. &or e'emplo$ el n"uel puede producir desde irritacin en la piel asta da(os pulmonares$ del sistema ner%ioso y de las mucosas$ y es adem#s un agente carcinog)nico. &or otro lado$ el plomo puede producir anemia$ en!ermedades del gado y ri(ones$ da(o cerebral y asta la muerte. La transparencia * muestra los rangos de concentracin com+nmente allados y los lmites permitidos para algunos contaminantes met#licos y para los radionucletidos m#s importantes La acti%idad industrial a crecido enormemente desde los comien,os del siglo --. .ste crecimiento !ue acompa(ado con el aumento de desec os t/icos$ noci%os tanto para el ambiente como para los organismos "ue en )l abitan$ incluyendo al ombre. La necesidad de disminuir el impacto ambiental de los subproductos industriales ocupa un lugar creciente en la agenda p+blica. &aralelamente$ comien,a a di%isarse un nue%o mercado econmico$ dirigido acia el tratamiento de e!luentes y descontaminacin ambiental. La transparencia 0 presenta algunos datos re!eridos al costo actual de los procesos de descontaminacin en .stados 1nidos. ./isten di%ersas alternati%as tecnolgicas para el tratamiento de suelos y aguas contaminados$ pero su alto costo ace "ue muc as de )stas resulten poco !actibles desde el punto de %ista econmico. 2ecientemente$ se a generado un gran inter)s en utili,ar especies %egetales capaces de crecer en suelos altamente contaminados en t)cnicas de biorremediacin 3transparencia 74. 5uc as de estas especies acumulan las sustancias contaminantes en su parte a)rea y esto permite utili,arlas como e/tractores de ba'o costo de una %ariada categora de sustancias t/icas. Fitorremediacin Transparencias 6-27 ./iste una abundante literatura sobre la remediacin de suelos y aguas mediante el uso de plantas. .sta tecnologa$ a+n emergente$ se %uel%e cada %e, m#s prometedora dadas las grandes %enta'as "ue presenta respecto de las tecnologas tradicionalmente utili,adas en descontaminacin. 8ependiendo de los autores$ pueden encontrarse distintas de!iniciones de 9!itorremediacin:. .n la transparencia ; se presentan dos de ellas a modo de e'emplo. La transparencia 10 enumera algunos e'emplos de contaminantes org#nicos y las !ormas m#s !recuentes utili,adas para degradarlos por !itorremediacin. La transparencia 11 ace lo propio para el caso de los contaminantes inorg#nicos.

<e conocen asta el momento m#s de *00 especies %egetales capaces de acumular sustancias t/icas con distintos grados de e!iciencia. La !itorremediacin o!rece una serie de %enta'as importantes en comparacin con las t)cnicas tradicionales de descontaminacin ambiental$ algunas de las cuales se enumeran en la transparencia 13. <in duda$ el mayor bene!icio "ue deri%a de los m)todos de !itorremediacin es de tipo econmico. &or e'emplo$ en .stados 1nidos$ el costo para remediar un acre de suelo asta 70 cm de pro!undidad ronda los 1=< *00.000 si se aplican tecnologas de e/ca%acin$ mientras "ue si se utili,an plantas para el mismo propsito el costo desciende a 1=< 00.000. .sta di!erencia se debe principalmente a "ue no se necesitan ma"uinarias costosas ni personal altamente cali!icado. .n muc os casos$ la !itorremediacin se utili,a como paso !inal para la descontaminacin de alg+n sitio "ue !ue pre%iamente tratado mediante el uso de otras tecnologas. A pesar de las grandes %enta'as listadas en la transparencia anterior$ al encarar un proceso de !itorremediacin deben considerarse tambi)n las limitaciones de este en!o"ue$ las cuales se enumeran en la transparencia 1*. 1n riesgo "ue debe ser correctamente e%aluado es el e!ecto potencial sobre la cadena alimentaria. &or e'emplo$ si alg+n erb%oro se alimenta de plantas utili,adas en un proceso de !itorremediacin$ ello podra tener e!ectos noci%os y asta letales sobre )l y>o sobre sus predadores. Aun"ue se est# traba'ando acti%amente en el an#lisis de e!ectos de este tipo$ se re"uiere a+n m#s in%estigacin para "ue se puedan establecer m)todos de mane'o adecuados. &ueden distinguirse distintos tipos de !itorremediacin seg+n el modo en "ue la planta capta o metaboli,a la sustancia contaminante 3transparencia 174. 1na de las !ormas m#s importantes$ la !itoe/traccin$ in%olucra el uso de plantas terrestres para absorber metales pesados desde el suelo$ para luego transportarlos acia el tallo y las o'as. 1na %e, !itoe/trados$ los metales pueden acumularse en la porcin a)rea de la planta y cosec arse para luego reducir su %olumen por incineracin. Los compuestos t/icos pueden tambi)n liberarse como especies %ol#tiles menos t/icas. .l dise(o del sistema a utili,ar para la descontaminacin %ariar# seg+n el o los compuestos contaminantes$ la concentracin de dic as sustancias y las condiciones del sitio a remediar 3transparencias 10 y 174. .l tipo de !itorremediacin "ue ser# utili,ado es muy importante$ ya "ue el dise(o del sistema depender# de ello. Algunos !actores cla%e a tener en cuenta son? Seleccin de la especie vegetal: en general se utili,an plantas de r#pido crecimiento$ !#ciles de crecer y mantener. @o debe ol%idarse el re"uerimiento de agua de las plantas en el terreno en "ue ser#n ubicadas. Algunos dise(os utili,an especies autctonas para no modi!icar demasiado la !lora local. Ab%iamente$ la especie seleccionada deber# descontaminar e!icientemente la sustancia t/ica. &ueden utili,arse plantas$ #rboles$ pastos o algas. Datos de toxicidad y de degradacin de contaminantes: es necesario anali,ar el tipo de contaminacin para asegurar la correcta eleccin del sistema. &robablemente deben reali,arse ensayos a pe"ue(a escala para comparar la e!ecti%idad de descontaminacin de distintas especies. Tambi)n es necesario anali,ar la cantidad y caractersticas de los compuestos "ue la planta produce y>o libera. Esquema y densidad de las plantaciones: la densidad de plantacin depender# de la planta utili,ada y del tipo de aplicacin. 8ebe estimarse la cantidad de biomasa producida lo largo del tiempo por unidad de super!icie. Adem#s$ en algunos casos ser# necesario reali,ar plantaciones sucesi%as a lo largo de un perodo preestablecido.

Irrigacin, insumos agronmicos y mantenimiento: en aplicaciones de !itorremediacin terrestre debe incluirse el costo de irrigacin. La !recuencia y cantidad de las llu%ias y las caractersticas del clima regional son !actores "ue podr#n modi!icar el re"uerimiento de agua de riego. Atros costos importantes "ue deben incluirse en el plan son las plantaciones sucesi%as$ el mantenimiento y monitoreo$ la cosec a y la !ertili,acin$ entre otros. Zona de captura de agua y tasa de transpiracin: 8ebe anali,arse el mo%imiento del agua y su destino !inal. 1n #rbol maduro es capa, de liberar m#s de 700 L de agua por a(o a tra%)s de la transpiracin. .n algunos casos$ las plantas liberar#n al medio productos menos t/icos "ue a"uellos "ue les dieron origen mediante el proceso de transpiracin. Tasa de captacin del contaminante y tiempo de limpieza requerido: e/isten %arias ecuaciones para determinar la tasa de descontaminacin. An lisis de riesgos contingentes: no debe e/cluirse la posibilidad de "ue se presenten e%entos inesperados 3plagas$ se"ua$ %ientos$ animales$ etc.4 "ue pongan en peligro el sistema de !itorremediacin planteado. .s recomendable considerar esto y disponer de estrategias de contingencia para asegurar el )/ito del programa. La transparencia 20 presenta algunos e'emplos de las especies m#s utili,adas en !itorremediacin. .n particular$ los #lamos an sido utili,ados para la remocin de suelos contaminados con di%ersos compuestos. .ntre ellos$ pueden citarse como e'emplos la atra,ina$ el tricloroetileno y el selenio. La !itoe/traccin$ uno de los tipos de !itorremediacin m#s utili,ados$ es empleada comercialmente para la descontaminacin de ciertos metales. .n la tabla de la transparencia 21$ se presentan e'emplos de pruebas de campo reali,adas para descontaminar distintos compuestos. <in embargo$ a+n se re"uiere un mayor desarrollo de la tecnologa para optimi,ar la capacidad de las especies !itoe/tractoras. 1na posibilidad a considerar es la aplicacin de t)cnicas mi/tas combinando !itorremediacin con tecnologas tradicionales. &ueden distinguirse tres grandes pasos durante el proceso de acumulacin de metales pesados en las plantas? a4 la captacin por las racesB b4 el transporte yB c4 los mecanismos de e%asin y de tolerancia. !aptacin por las ra"ces: los metales pueden presentarse disueltos en el agua super!icial del suelo o adsorbidos a componentes del mismo. .n el primer caso$ la planta ser# capa, de absorberlos directamente de la solucin en la "ue se encuentran. .n el segundo$ deber# solubili,ar pre%iamente los metales mediante la secrecin radicular de !itosider!oros$ protenas "uelantes 3!ito"uelatinas y metalotionenas4$ y protones "ue acidi!ican el medio. 1na %e, solubili,ados$ los iones met#licos podr#n ingresar a la ra, por %a apopl#stica 3e/tracelular4 o por %a simpl#stica 3intracelular4. Transporte: una %e, "ue los metales se encuentran dentro de la planta$ pueden ser acumulados en las races o e/portados acia el tallo. La e/portacin acia el tallo se reali,a a tra%)s del /ilema y la redistribucin dentro del mismo de reali,a por el !loema. Cinalmente$ los metales son almacenados dentro de la %acuola celular. #ecanismos de evasin y de tolerancia: la planta debe contar con mecanismos "ue e%iten "ue los metales pesados la a!ecten se%eramente. La e%asin$ es decir$ la limitacin en la captacin de los metales$ puede ser uno de los sistemas utili,ados. La

deto/i!icacin o la resistencia metablica a los metales pesados son otras alternati%as para e%itar los e!ectos t/icos. La transparencia 2* presenta algunos de los procesos biolgicos "ue a!ectan a la !itorremediacin y "ue deben ser estudiados en mayor pro!undidad para poder acer m#s e!icientes los procedimientos basados en esta t)cnica.

Tipos de fitorremediacin Transparencias 20-02 La !itorremediacin puede aplicarse tanto al tratamiento de contaminaciones con compuestos org#nicos como con sustancias inorg#nicas. Los agentes contaminantes pueden a su %e,$ estar presentes en un sustrato slido 3suelo4$ l"uido 3agua4$ o en el aire. Tomando en cuenta estos !actores$ los procesos de !itorremediacin puede di%idirse en distintos tipos? $itoextraccin$ rizo$iltracin$ $itoestimulacin$ $itoesta%ilizacin$ y $itotrans$ormacin. .n las transparencias 27 y 26 se resumen los aspectos esenciales de cada tipo de proceso. La transparencia 2; resume y complementa la in!ormacin anterior. <e enumeran los distintos tipos de !itorremediacin y se presentan algunos e'emplos de las contaminaciones m#s !recuentes para los "ue an sido utili,ados. La planta ideal para su utili,acin en procesos de $itoextraccin debera tolerar y acumular altas concentraciones de metales en las partes cosec ables$ tener una alta tasa de crecimiento y una alta produccin de biomasa. T&lapsi caerulescens$ perteneciente a la !amilia 'rassicaceae$ es una de las plantas identi!icadas como iperacumuladora de metales. <in embargo$ su reducido tama(o limita la utili,acin de esta especie en aplicaciones a campo. 'rassica (uncea es otra especie prometedora para su utili,acin en este proceso. .s capa, de acumular distintos metales pesados en su tallo$ y produce mayor cantidad de biomasa "ue T) caerulescens. <in embargo$ para la mayora de los casos citados en la tabla$ T) caerulescens acumula ni%eles m#s altos de metales pesados "ue ') (uncea. .n consecuencia$ al elegir la especie para un sistema de !itoe/traccin$ es muy importante establecer la relacin entre la biomasa producida y la capacidad de acumular sustancias t/icas. .n la transparencia 32$ se enumeran algunas plantas tpicas "ue an sido empleadas en procesos de !itoe/traccin. T) caerulescens es una de las especies m#s estudiadas por su capacidad iperacumuladora) .sta especie puede acumular asta *0 mg de ,inc por gramo de te'ido !oliar seco. Tambi)n puede acumular ni%eles considerables de cadmio. <in embargo$ es una planta de crecimiento lento y genera poca biomasa$ por lo "ue se la usa principalmente como un modelo e/perimental. La biodisponibilidad de los metales para su captacin por la planta es un !actor determinante de la e!ecti%idad de la remediacin 3transparencia 334. Los metales en estado inico o adsorbidos a constituyentes inorg#nicos del suelo pueden ser captados por la planta para comen,ar el proceso de !itoe/traccin. .l mane'o de la biodisponibilidad de los metales es crtico para el )/ito de cual"uier plan de !itorremediacin$ e/istiendo %arios m)todos para incrementar la misma. &or e'emplo$ el agregado de "uelantes origina la !ormacin de comple'os "uelante-metal y permite "ue los metales est)n disponibles para su captacin. .n suelos con ba'o pD$ la adsorcin de los metales se alla disminuida y aumenta la concentracin de las !ormas solubles. .n este caso$ manteniendo un pD le%emente #cido$ se puede incrementar la biodisponibilidad de los metales y$ por lo tanto$ su captacin. 5uc os metales pesados est#n unidos a /idos$ y su disolucin es otra !orma de aumentar la biodisponibilidad.

Algunas plantas e/udan agentes reductores por sus races$ lo "ue modi!ica el estado redox del suelo y permite disociar los /idos met#licos. .s sabido tambi)n "ue los microorganismos presentes en la ri,os!era !acilitan la captacin de nutrientes por la planta. .l enri"uecimiento de la ri,os!era con microorganismos capaces de !a%orecer la captacin de metales pesados puede contribuir a !acilitar la biodisponibilidad. La transparencia 3* muestra gr#!icos "ue representan dos estrategias de !itoe/traccin? $itoextraccin continua y $itoextraccin asistida por quelantes. *itoextraccin continua: se basa en la capacidad natural de algunas plantas de iperacumular metales a lo largo de su ciclo de %ida. La des%enta'a de este sistema deri%a de "ue muc as plantas iperacumuladoras son de ba'o crecimiento$ producen poca biomasa$ y no son capaces de acumular los principales metales contaminantes 3cadmio$ plomo$ uranio4. .n el es"uema de la transparencia 3* se muestra la captacin del metal a lo largo del tiempo a medida "ue las plantas crecen. La cosec a de las mismas se e!ect+a una %e, "ue alcan,an su tama(o ptimo y la m#/ima incorporacin del metal . *itoextraccin asistida por quelantes: debido a "ue los metales m#s problem#ticos no est#n ba'o !ormas disponibles en el suelo$ se utili,an "uelantes$ como .8TA$ para !a%orecer la biodisponibilidad de dic os compuestos e incrementar la acumulacin en la planta. .l es"uema de la transparencia 3* muestra las dos etapas del proceso. .n la primera$ se de'a crecer la planta asta el tama(o deseado$ siendo mnima la incorporacin del metal. .n la segunda$ se aplica el "uelante y se produce la m#/ima captacin del metal. Cinalmente$ se e!ect+a la cosec a. .l gr#!ico de barras muestra un e'emplo en "ue la aplicacin de .8TA permite aumentar la captacin de plomo. .n este caso$ se midi la concentracin del metal en los tallos de ') (uncea tras aber tratado el suelo con distintas concentraciones del "uelante. <e obser%a "ue a medida "ue se incrementa la cantidad de "uelante aplicado$ aumenta signi!icati%amente la captacin de plomo por la planta. 1na posible !orma de incrementar la acumulacin de metales en las plantas es mediante la sobre/presin constituti%a de protenas "ue inter%ienen en el transporte de )stos a la %acuola celular. .n las transparencias 37 y 30$ se muestran e/perimentos reali,ados con c)lulas de Sacc&aromyces cereviciae y plantas de +icotiana ta%acum trans!ormadas con el gen de Ara%idopsis t&aliana cax,$ el "ue codi!ica una protena transportadora de Ca2E. Los ensayos reali,ados se e/plican parcialmente en las propias transparencias. Todas las cepas de la le%adura se culti%aron asta saturacin y luego se diluyeron 700 %eces en medio conteniendo distintas concentraciones de 5nCl2. Las incubaciones se reali,aron por 1 da a 30 oC. La tolerancia al 5n2E est# cuanti!icada mediante la densidad ptica de los culti%os de S) cereviciae. Como puede obser%arse en la gr#!ica$ la sobre/presin de CA-2 en S) cereviciae aumenta la tolerancia a 5n2E$ tanto en la cepa mutante cn% como en la cepa sal%a'e. -anel superior de la transparencia ./: los ensayos se reali,aron complementando el medio con 10 m5 CaCl2$ 0$1 5 CdCl2 o 0$1 m5 5nCl2. .l contenido de iones se determin por espectrometra de absorcin atmica. Las plantas transg)nicas para CA-2 son capaces de acumular mayor cantidad de iones. .stos resultados son m#s notorios si se anali,a el contenido de iones de las races. -anel in$erior de la transparencia .0: para los tres iones anali,ados$ puede obser%arse "ue la e/presin de CA-2 en ambas lneas transg)nicas 3cur%as en anaran'ado y a,ul4 aumenta al transporte de iones comparado con la lnea control 3cur%a %erde4. La contaminacin con cadmio de los suelos se debe principalmente al e/cesi%o uso de !ertili,antes !os!atados$ desec os domiciliarios y deposicin ambiental. 5uc os culti%os de inter)s agronmico captan el metal. &or lo tanto$ dic o problema alcan,a la alimentacin umana y las tierras culti%ables. Algunos organismos resisten

naturalmente al estr)s causado por metales pesados mediante protenas "uelantes del metal en cuestin 3metalotionenas y !ito"uelatinas4. Aumentando la e/presin de dic as protenas en la especie %egetal a utili,ar mediante la sobre/presin de los respecti%os genes$ se podra desarrollar resistencia !rente al metal pesado. Como se muestra en la tabla de la transparencia 30$ el gen "ue codi!ica la protena de inter)s puede deri%ar de una especie %egetal o de otros organismos. Las algas y plantas acu#ticas constituyen una alternati%a de eleccin cuando se trata de descontaminar aguas o tierras inundadas. 1emna minor es una planta "ue posee una alta tasa de multiplicacin. La !itorremediacin de aguas contaminadas con esta especie ace uso de esta %enta'a para generar una gran cantidad de biomasa en un corto perodo de tiempo. La transparencia 37 presenta los dos mecanismos principales "ue utili,an las especies acu#ticas para remo%er contaminantes de aguas polucionadas. La transparencia 36 presenta un e'emplo de !itoe/traccin de n"uel y plomo reali,ado con 1) minor) Las !iguras muestran ensayos reali,ados en presencia de ambos metales con el !in de establecer la presencia o ausencia de e!ectos antagnicos o sin)rgicos. *igura superior: se obser%a la remocin de n"uel a partir de un ni%el inicial alto 37 mg>L4 para tres concentraciones di!erentes de plomo. La remocin del metal es r#pida$ y luego de las 7 permanece constante. <e logra remo%er asta un 67F del n"uel presente. *igura in$erior: se muestra la remocin del plomo a partir de un ni%el inicial alto 310 mg>L4 para tres concentraciones distintas de n"uel. <e obser%a una remocin del 63F. &uede concluirse "ue la presencia de cada uno de estos metales no incide sobre la captacin del otro$ por lo cual se deduce "ue los mecanismos in%olucrados son independientes. .l uso de races de plantas para absorber$ concentrar y precipitar metales t/icos de aguas o napas contaminadas se denomina rizo$iltracin 3transparencia 3;4. .ste sistema permite el tratamiento in situ de los contaminantes$ minimi,ando su impacto en el entorno. .n una primera etapa$ plantas con races bien desarrolladas se ponen en contacto con agua contaminada a modo de aclimatacin. Luego$ las mismas son implantadas en el sitio contaminado para colectar los compuestos t/icos. 1na %e, "ue las races se saturan con los mismos$ se lle%a a cabo la cosec a de las plantas. .studios reali,ados con este tipo de m)todos demostraron "ue algunas plantas tienen la capacidad de remo%er asta el 00F de su peso seco en !orma de metal t/ico. <e an reali,ado estudios para anali,ar la capacidad de distintas plantas acu#ticas para descontaminar sustancias t/icas presentes en su ambiente mediante ri,o!iltracin 3transparencia *04. &or e'emplo$ se a demostrado "ue #yriop&yllum aquaticum puede degradar trinitrotolueno 3T@T4. .sta planta posee la abilidad de tomar T@T de su medio y metaboli,arlo$ !ormando productos de o/idacin. Los productos de degradacin se acumulan en el te'ido %egetal. A pesar de "ue a+n no se an determinado los ni%eles de to/icidad del T@T ni de sus deri%ados para la planta$ se est#n lle%ando a cabo numerosos estudios para dilucidar este interrogante. 1n posible en!o"ue para la ri,o!iltracin de radionucletidos es la utili,acin de tumores de races obtenidos por trans!ormacin con Agro%acterium r&izogenes. Las transparencias *1 y *2 muestran ensayos reali,ados con races trans!ormadas de ') (uncea y !&enopodium amaranticolor para la captacin de uranio. .l panel in!erior de la transparencia *1 muestra estudios de captacin de uranio 3ba'as concentracionesB 27-700 54 reali,ados con las races de ambas especies. La relacin entre la concentracin de uranio en el medio y la cantidad de uranio captado por el te'ido radicular resulta lineal? a medida "ue aumenta la concentracin del metal en el medio$ aumenta proporcionalmente la cantidad de uranio captado por las races. La

transparencia *2 muestra estudios de captacin de uranio 3altas concentracionesB 7007000 54 reali,ados por las races de las especies mencionadas anteriormente. <e obser%a captacin lineal para el caso de las races de !) amaranticolor. &or el contrario$ los ensayos con races de ') (uncea muestran "ue el sistema llega a saturacin a partir de una determinada concentracin de uranio. La $itotrans$ormacin$ "ue abarca los procesos de !itodegradacin y !itosolubili,acin$ es la con%ersin de contaminantes org#nicos dentro de la planta mediante procesos metablicos propios de la misma. Los t/icos son degradados en compuestos m#s simples$ "ue se integran a alg+n te'ido de la planta. La transparencia *3 enumera los !actores "ue deben considerarse al implementar este tipo de !itorremediacin. La liberacin de contaminantes %ol#tiles a la atms!era mediante la transpiracin de la planta se conoce con el nombre de !ito%olatili,acin$ y es una !orma de !itotrans!ormacin. A pesar de "ue la liberacin de contaminantes a la atms!era no sea el ob'eti%o principal de la remediacin$ la !ito%olatili,acin puede ser deseable$ ya "ue se reduce el riesgo de contaminacin de las napas de aguas subterr#neas. <e a demostrado "ue algunos #lamos bridos son capaces de trans!ormar el tricloroetano 3TC.4 en tricloroetanol$ #cido tricloroac)tico$ y #cido dicloroac)tico$ con minerali,acin parcial de TC. a CA2. Tambi)n se a obser%ado "ue el pesticida atra,ina es trans!ormado por esta especie. Las especies %egetales son capaces de metaboli,ar distintas !amilias de compuestos org#nicos por"ue poseen rutas metablicas "ue no est#n presentes en otros organismos. La transparencia *7 muestra e'emplos de procesos de degradacin "ue pueden ser reali,ados por las plantas. La identi!icacin de estas rutas en distintas especies permitir# e/tender el uso de este tipo de !itorremediacin. Los traba'os pre%ios de remediacin de e/plosi%os se basaban en la capacidad de ongos y microorganismos para degradar compuestos tales como T@T 3trinitroglicerina4$ 28- 31$3$7-trinitro-1$3$7- tria,ina4$ T.T2GL 3@-metil-@$2$*$0tetranitroanilina4$ y D5- 3octa idro-1$3$7$7-tetra,ocina4. .stos en!o"ues presentan como des%enta'a el re"uerimiento de e/ca%ar la tierra contaminada para su procesamiento posterior en biorreactores$ lo "ue e"uipara los costos de este m)todo a los de la incineracin tradicional. 1na posible solucin a esta clase de contaminantes es la utili,acin de especies %egetales capaces de asimilar y modi!icar los compuestos mencionados. Aun"ue asta el presente la !itotrans!ormacin de e/plosi%os por esta %a a resultado parcial 3transparencia *04$ se traba'a intensamente para optimi,ar el proceso. .l T@T es uno de los e/plosi%os m#s t/icos y peligrosos. 8urante los +ltimos 100 a(os se a estado acumulando en depsitos y arsenales$ y su eliminacin se a con%ertido en un gran problema desde el punto de %ista ambiental. Actualmente$ la incineracin es el +nico m)todo disponible para el tratamiento de suelos contaminados con T@T$ pero este proceso produce ceni,as sin ninguna posible utilidad y contamina el aire. .n los procesos de !itotrans!ormacin de compuestos org#nicos debe contemplarse no slo la degradacin del compuesto original$ sino tambi)n la produccin de compuestos intermedios y productos !inales. La transparencia *7 muestra la ruta de degradacin del T@T. Como se puede obser%ar$ en los sucesi%os pasos de esta %a se generan distintos productos intermediarios. 2esulta de suma importancia anali,ar la to/icidad de los mismos$ ya "ue si estos resultan almacenados en las plantas podran ingresar en la cadena alimentaria y causar e!ectos noci%os$ y a+n mortales$ en los animales "ue se alimentan de ellas. .n general$ los e/plosi%os son compuestos !itot/icos$ aun"ue algunas especies %egetales poseen mecanismos para su deto/i!icacin. &or otra parte$ la en,ima

bacteriana nitroreductasa 3@24 de Entero%acter cloacae resulta acti%a para la degradacin del T@T. .n el e'emplo "ue se ilustra en las transparencias *6 a 70 se trans!ormaron plantas de +icotiana ta%acum con el gen de @2 de esta bacteria y se anali,aron los e!ectos t/icos del T@T sobre plantas transg)nicas 3@2 3-24 y plantas control no trans!ormadas 3@T4. &ara reali,ar los ensayos$ se culti%aron plantas de 1* d de edad en medio con o sin T@T durante 7 d adicionales y se midi su peso para establecer la %ariacin en biomasa. La %ariacin de este par#metro !ue tomada como indicati%a de !itoto/icidad. -anel superior de la transparencia 23: se esterili,aron super!icialmente 70 semillas$ se germinaron y se crecieron durante 1* d en medio sin T@T 3!igura i,"uierda4. Luego se incubaron los brotes de semillas no trans!ormadas y transg)nicas con 0$27 m5 de T@T en agua est)ril por 7 d adicionales 3!igura derec a4. .n medio conteniendo 0$27 m5 de T@T$ los brotes de semillas sin trans!ormar perdieron 3*F del peso !resco respecto de los controles sin T@T. Los brotes de semillas trans!ormadas aumentaron un 16F su peso !resco respecto de los mismos controles. -anel in$erior de la transparencia 23: se sembraron * semillas de cada tipo en placas y se registr el crecimiento de las races a los 20 d. .n presencia de 0$07 m5 de T@T$ los brotes de semillas no trans!ormadas mostraron atro!ia radicular$ mientras "ue los brotes de semillas @2 3-2 desarrollaron races similares a las de los brotes culti%ados en medio libre de T@T. .n medio con 0$1 m5 de T@T$ los brotes de semillas no trans!ormadas mostraron un retardo notable en el desarrollo. .n contraste con esto$ los brotes de semillas transg)nicas su!rieron mnimos e!ectos !itot/icos. Las transparencias *; y 70 muestran resultados del mismo traba'o. <e midi la longitud de las races de brotes @T y @2 3-2$ y se utili, este par#metro para calcular un ndice de tolerancia 3longitud de las races de brotes tratados con T@T>longitud de races de brotes control / 1004 en cada concentracin de T@T ensayada. Como puede obser%arse$ las races de los brotes trans!ormados e/ iben mayor longitud "ue las races de los brotes no trans!ormados$ e!ecto "ue se obser%a tanto en el tratamiento de 0$07 m5 como de 0$1 m5 de T@T$ lo "ue se re!le'a en los respecti%os ndices de tolerancia. Los resultados "ue se muestran son un promedio de las mediciones reali,adas sobre 10 brotes indi%iduales. La tabla de la transparencia 70 muestra las %ariaciones registradas en el peso de brotes e/puestos a dos concentraciones distintas de T@T. .n medio con 0$1 m5 de T@T$ los brotes transg)nicos mostraron una mayor ganancia en peso "ue los brotes de plantas sin trans!ormar. Cuando ambos tipos de plantas se culti%aron en presencia de 0$27 m5 de T@T$ se obser%aron reducciones de peso en ambos casos. <in embargo$ la p)rdida de peso result menor en el caso de los brotes transg)nicos. Las transparencias 71 a 73 muestran otro e'emplo de degradacin de e/plosi%os$ en este caso la e/a idro 1$3$7-trinitro-1$3$7-tria,ina 328-4. .ste e/plosi%o es t/ico para todo tipo de organismos 3incluyendo las plantas4 y un posible carcingeno. <u degradacin ambiental es muy lenta y su presencia en suelos y napas de agua constituye un problema gra%e. .l ongo -&aneroc&aete c&rysosporium y las bacterias del g)nero 4&odococcus son capaces de degradar 28-$ pero no desarrollan su!iciente biomasa para ser utili,ados en procesos de biodegradacin. La mol)cula responsable de la degradacin es un citocromo &*70. Como prueba de concepto$ se aisl el gen de citocromo &*70 5plA de 4&odococcus r&odococ&rous y se lo e/pres en plantas de A) t&aliana. Las plantas !ueron utili,adas en ensayos de deto/i!icacin de suelos contaminados con 28-. Los resultados obtenidos se muestran en las transparencias mencionadas. Las !lec as del diagrama presentado en la transparencia 7* muestran las principales intercon%ersiones del mercurio en el medio ambiente. .l mercurio elemental$ Dg304$ y el mercurio unido a a,u!re$ 2<Dg$ se con%ierten lentamente en mercurio inico libre$ Dg3HH4$ el cual act+a como sustrato de las reacciones de metilacin. .l producto

resultante$ metilmercurio$ es una gra%e amena,a ambiental debido a su tendencia a entrar en la cadena alimentaria acu#tica y a biomagni!icarse. <e a estimado "ue el metilmercurio se concentra en los peces entre 0 y 7 rdenes de magnitud sobre la concentracin presente en las aguas contaminadas y "ue constituye entre el ;0 y el 100F del mercurio total. &or comparacin$ el mercurio inico se bioconcentra muc o menos e!icientemente y se elimina con m#s rapide,. .l Dg a sido utili,ado en di%ersas industrias cuyos e!luentes pudieron contaminar los cuerpos de agua con dic o metal. .ste proceso pro%oc dos epidemias de en%enenamiento en Iapn en los a(os 00. @o se conocen plantas "ue deto/i!i"uen al mercurio. &ara poder desarrollar un planteo de !itorremediacin a ni%el e/perimental$ se trans!ormaron plantas de A) t&aliana con los genes responsables de la con%ersin de metilmercurio a mercurio elemental$ los "ue se aislaron de la bacteria Desul$ovi%rio desul$uricans. La transparencia 77 muestra los pasos in%olucrados en la con%ersin de metilmercurio a mercurio elemental. La transparencia 70 muestra ensayos de crecimiento reali,ados con plantas de A) t&aliana trans!ormadas con cada uno de los genes mencionados anteriormente 3plantas merA y merJ4 o con ambos en !orma simult#nea 3plantas merA>merJ4. &or otro lado$ se e%alu si la tolerancia al mercurio org#nico se relaciona con la tasa de %olatili,acin de Dg304 utili,ando 0 lneas de plantas merA>merJ. Los ensayos se reali,aron en ausencia o presencia de 7 5 de acetato de !enilmercurio 3&5A4. <lo 2 de las lneas 3merA>J-1 y merA>J-24 !ueron capaces de crecer normalmente en estas condiciones. -anel superior: se compararon las tasas de crecimiento de plantas transg)nicas 3merA;-1$ merJ-* y merA>merJ-14 y controles no trans!ormadas 3@T4 en medio conteniendo mercurio org#nico. Las plantas se culti%aron %erticalmente durante 3 semanas para obser%ar el desarrollo radicular. .n ausencia de mercurio$ las plantas transg)nicas y no transg)nicas crecen de manera similar. Las plantas merA no toleraron la concentracin mnima de mercurio org#nico. Las plantas merJ crecieron %igorosamente en presencia de 1 5 de mercurio org#nico$ pero su crecimiento !ue notablemente menor en 7 5 y e/ ibieron una marcada clorosis en 10 5. .n cambio$ las plantas merA>merJ-1 germinaron y crecieron sostenidamente a+n en 10 5 de mercurio org#nico. -anel in$erior: las plantas transg)nicas y control se culti%aron en una c#mara cerrada en medio suplementado con 27 5 de acetato de metilmercurio 35eDg4. <e reali,aron mediciones del contenido de Dg304 en el aire de la c#mara cada 2 min. Los datos est#n e/presados en pg de Dg304 por mg de peso !resco de te'ido. <e gra!icaron los totales acumulati%os de 10 min en promedios de Dg304 por minuto. Las plantas no trans!ormadas 3@T4$ merA y merJ e/ ibieron %alores basales. Las plantas doble transg)nicas son poblaciones C2 y por lo tanto$ el ni%el de %olatili,acin obser%ado representa el promedio de las plantas portadoras de ambos transgenes. Las lneas merA>J-1 y merA>J-2 son las "ue muestran mayor tasa de %olatili,acin de Dg304. Las lneas merA>J-3 y merA>J-7 presentaron una %olatili,acin intermedia y crecieron 3aun"ue lentamente4 en medio con 7 5 de &5A. Las lneas merA>J-* y merA>J-0 no lograron germinar. .stos resultados sugieren "ue la resistencia a metilmercurio est# relacionada directamente con la con%ersin del compuesto a mercurio elemental. 1na estrategia similar a la del traba'o presentado en las transparencias 77 y 70 anteriores se sigui en tabaco$ pero introduciendo los genes responsables de la reduccin de metilmercurio en el genoma de los cloroplastos 3transparencia 774. <e germinaron semillas in vitro en medio conteniendo espectinomicina 700 mg>L. Las pl#ntulas 310 d post-germinacin4 !ueron trans!eridas a in%ernadero y culti%adas en tierra por 0 d adicionales. Luego$ las plantas !ueron tratadas con 0$70$ 100$ y 200 5 de acetato de !enilmercurio 3&5A4. Las !otogra!as de la transparencia 77 se tomaron

1* d despu)s del tratamiento. Las lneas transg)nicas crecieron normalmente en suelo conteniendo asta 100 5 de &5A y sobre%i%ieron a 200 5 &5A. Ambas concentraciones de &5A resultaron letales para las plantas no trans!ormadas. .l selenio 3<e4 es un elemento esencial para muc os organismos$ pero resulta t/ico en altas concentraciones. La to/icidad se basa en la incorporacin inespec!ica del <e en algunas protenas en reempla,o del grupo a,u!rado 3<4 de los residuos de cistena 3Cys4. ./isten %arios mecanismos de tolerancia al <e$ y la mayora de ellos se basan en e%itar la incorporacin de <e-Cys en las protenas 3el <e se puede %olatili,ar como dimetildisel)nido$ de ba'a to/icidad$ o acumular en !orma de amino#cidos "ue no se incorporan a las protenas4. 8ado "ue las plantas acumulan y %olatili,an e!icientemente <e del suelo y>o del agua$ se a propuesto utili,arlas para el tratamiento de ambientes contaminados con este compuesto. <e a planteado la posibilidad de sobre/presar en plantas la en,ima selenocistena liasa 3<L4 para aumentar su capacidad de acumular este elemento. .n el traba'o "ue se presenta en las transparencias 76 y 7; se sobre/pres el gen de la <L de ratn 3"ue posee alta acti%idad !rente a <e-Cys y ba'a !rente a Cys4 en A) t&aliana y se anali, la incorporacin de <e en las protenas$ su acumulacin in planta$ y la tolerancia desarrollada en las plantas transg)nicas. La transparencia 7; muestra resultados del traba'o presentado anteriormente. Las construcciones gen)ticas utili,adas para la trans!ormacin con el gen de selenocistena liasa permitieron la acumulacin de la protena a ni%el del citoplasma o del cloroplasto. -anel superior: se anali, la incorporacin de <e a protenas de la planta. &ara ello se culti%aron plantas de A) t&aliana en medio conteniendo 0$7 5 de selenito durante 1* d. <e obser% "ue tanto las plantas "ue e/presaban la selenocistena liasa en el citoplasma 3cit<L4 como en cloroplastos 3cp<L4 contenan en promedio un *2F menos de <e incorporado en las protenas respecto de las plantas control no transg)nicas 3@T4. .sto demuestra "ue la e/presin de la en,ima pre%iene la incorporacin no espec!ica de <e-Cys en las protenas. -anel in$erior: se estudi la tolerancia a <e. &ara ello se culti%aron plantas de Ara%idopsis en medio conteniendo 70 5 de selenato$ 27 5 de selenito o 70 5 de <e-Cys. Como par#metro representati%o de la tolerancia$ se midi la longitud de las races. .stos ensayos mostraron "ue las plantas cit<L son m#s tolerantes "ue las plantas @T. Las plantas cp<L resultaron menos tolerantes 3notar las di!erentes escalas utili,adas para la medicin de la longitud de las races4. Las plantas transg)nicas cit<L resultan prometedoras como !itorremediadoras$ dado "ue toleran altas concentraciones de <e y son capaces de acumularlo en el tallo. &odra utili,arse este modelo para generar plantas transg)nicas de otras especies con el !in de aplicarlas en ensayos de campo en ambientes contaminados. Actualmente$ se est# traba'ando en la obtencin de ') (uncea transg)nicas para <L. La $itoestimulacin$ tambi)n conocida como biodegradacin estimulada por la ri,os!era$ ri,odegradacin o biorremediacin asistida por plantas$ es la degradacin de contaminantes org#nicos presentes en el suelo a tra%)s del estmulo de la acti%idad microbiana en la ,ona cercana a las races de la planta 3ri,os!era4. La acti%idad microbiana se %e estimulada mediante compuestos liberados por las plantas 3a,+cares$ carbo idratos$ amino#cidos$ acetatos$ en,imas4. Adem#s$ el sistema radicular o/igena la ri,os!era y as se asegura la trans!ormacin aerbica. &or otro lado$ la biomasa de las races aumenta el carbono org#nico disponible. Los ongos micorrticos "ue crecen en las inmediaciones de las races pueden tambi)n degradar contaminantes org#nicos. Las transparencias 01 y 02 enumeran las caractersticas de las especies utili,adas en !itoestimulacin. .ste en!o"ue est# siendo ensayado para

reducir la contaminacin por combustibles utili,ando plantas de al!al!a. Tambi)n se reali,aron estudios con #lamos para combatir la contaminacin con atra,ina. La $itoesta%ilizacin se basa en la inmo%ili,acin de metales pesados del suelo. .llo tiene importantes consecuencia en minimi,ar la erosin$ reducir la solubilidad de los contaminantes y su biodisponibilidad en la cadena alimentaria. La aplicacin de materia org#nica$ !os!atos$ agentes alcalinos$ entre otros$ puede disminuir la solubilidad de los metales en el suelo$ minimi,ando su pasa'e a las napas de aguas subterr#neas. La planta puede acumular los contaminantes en las races o causar la precipitacin de los mismos en las inmediaciones de las races. La transparencia 03 enumera los principales contaminantes tratados por este m)todo$ las caractersticas buscadas en las plantas candidatas y algunos e'emplos de plantas utili,adas para este !in.