UNIVERSIDAD CENTROOCCIDENTAL LISANDRO ALVARADO DECANATO DE CIENCIAS DE LA SALUD DEPARTAMENTO DE MEDICINA PREVENTIVA Y SOCIAL SECCION DE MICROBIOLOGA

Microbiologa Mdica I

TALLER DE PRUEBAS BIOQUMICAS BSICAS UTILIZADAS EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGA

Yudy Aranguren, octubre 2011

PASOS PARA EL DIAGNOSTICO: 1.- MUESTRA:

2.- DIRECTO: Coloraciones: Gram

3.- CULTIVO

4.- PRUEBAS BIOQUIMICAS

PRUEBAS BSICAS PARA EL DIAGNSTICO

MICROBIOLGICO DE
COCOS GRAM POSITIVO

PRUEBA DE LA CATALASA
La determinacin de la presencia de catalasa Se pone en contacto una pequea cantidad de cultivo bacteriano de 24-48 horas de incubacin, con en perxido de hidrgeno (H2O2) al 3%. La liberacin de O2 indica la presencia de catalasa.

H2O2 + catalasa = H2O + O2

Son catalasa negativo: Son catalasa positivo:

PRUEBA DE LA REDUCCIN DE NITRATOS A NITRITOS

Permite determinar la capacidad de un organismo de reducir el nitrato en nitritos
por algunas especies bacterianas que poseen la enzima nitrato-reductasa

Se agrega a un cultivo en caldo unas gotas de:

- Reactivo A: solucin de dimetilnaftilamina 0,6%. - Reactivo B: solucin de cido sulfanlico 0,8%.

Se observa un cambio de color: Positivo: Rojo ladrillo Negativo: Sin cambio de color

FERMENTACIN DE CARBOHIDRATOS
La fermentacin de un carbohidrato (azucares) por

un microorganismo en
identificacin.

particular ayuda a su

La acidez que se produce en el medio se pone en evidencia a travs del cambio de color de un indicador de pH

Se puede evidenciar la produccin de gas

AGAR SALADO MANITOL

PRUEBAS SEGUNDARIAS 1.- COAGULASA

2.- SENSIBILIDAD O RESISTENCIA A LA NOVOBIOCINA

PRUEBA DE LA COAGULASA
La determinacin de la presencia de la enzima coagulasa: Se pone en contacto una pequea cantidad de cultivo bacteriano con plasma con anticoagulante e

incubar 4 horas a 37C.

COAGULASA POSITIVA Staphylococcus aureus NEGATIVA Staphylococcus epidermidis Staphylococcus saprophyticus

PRUEBA DE SENSIBILIDAD

SENSIBILIDAD A LA NOVOBIOCINA
SENSIBILIDAD A LA NOVOBIOCINA

SENSIBLE-SIN CRECIMIENTO

RESISTENTE-CON CRECIMIENTO

Staphylococcus epidermidis

Staphylococcus saprophyticus

NOVOBIOCINA

NOVOBIOCINA

Sin crecimiento alrededor del disco de Novobiocina

Con crecimiento alrededor del disco de Novobiocina

CRECIMIENTO EN ALTAS CONCENTRACIONES DE SAL

COCOS GRAM POSITIVOS

Gnero Staphylococcus crece a altas

concentraciones de sal (7% NaCl)

Gnero Streptococcus NO crece a

altas concentraciones de sal (7% NaCl)

Gnero Enterococcus crece a altas concentraciones de sal de 6,5% per o NO a 7% NaCl

CRECIMIENTO EN ALTAS CONCENTRACIONES DE SAL Agar Salado Manitol: Crecimiento con o sin fermentacin de manitol
1.- Gnero Streptococcus no crece a 7% de NaCl 2.- Staphylococcus epidermidis y Staphylococcus saprophyticus Crecen y NO fermentan el manitol (color rosado del medio) 3.- Staphylococcus aureus crece y fermenta el manitol (color amarillo del medio)

PATRONES DE HEMLISIS

PATRONES DE HEMLISIS

AGAR SANGRE ALFA: Lisis parcial de los glbulos rojos BETA: Lisis total de los glbulos rojos

ALFA BETA

GAMMA
GAMMA: Sin lisis

PRUEBA DE CAMP
Prueba de CAMP: Las especies del genero Streptococcus del grupo B ( BETA
HEMOLITICOS) produce un factor que aumenta la beta hemlisis de una cepa indicadora de Staphylococcus aureus. Staphylococcus aureus

Streptococcus agalactiae

Streptococcus pyogenes

AUTOEVALUACIN

TIPO DE HEMLISIS

NO HEMOLITICO

CLASIFICACION DE LANCEFIELD PARA ESTREPTOCOCOS BETA HEMOLITICOS

http://www.youtube.com/watch?v=Zks-2AZuZ1Y&feature=related

Extracto soluble de la pared celular por accin enzimtica

Partculas de ltex cubiertos de anticuerpos especficos

CLASIFICACION DE LANCEFIELD PARA BETA HEMOLITICOS

PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LA BACITRACINA

Pruebas para diferenciar estreptococos Beta hemolticos (Grupo A y Grupo C)

Con crecimiento alrededor del disco de Bacitracina

Sin crecimiento alrededor del disco de Bacitracina

PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LA OPTOQUINA

Pruebas para diferenciar Streptococcus pneumoniae y otros estreptococos Alfa hemolticos (Streptococcus mitis)
Streptococcus pneumoniae Streptococcus mitis

DISCO DE OPTOQUINA

DISCO DE OPTOQUINA

Sin crecimiento alrededor del disco de Optiquina

Con crecimiento alrededor del disco de Optiquina

PRUEBA DE SENSIBILIDAD A BILIS

Pruebas para diferenciar Streptococcus pneumoniae y otros estreptococos Alfa hemolticos (Streptococcus mitis)

Streptococcus mitis NO lisado en presencia de Bilis

Streptococcus pneumoniae lisado en presencia de Bilis

PRUEBAS BSICAS PARA EL DIAGNSTICO

MICROBIOLGICO DE
BACILOS GRAM NEGATIVOS

PASOS PARA EL DIAGNOSTICO:

1.- MUESTRA:

2.- DIRECTO: Coloraciones: Gram

3.- CULTIVO

4.- PRUEBAS BIOQUIMICAS

FERMENTACIN DE LACTOSA EN MEDIO MAC CONKEY

PRUEBA DE MOVILIDAD
Permite conocer si las bacterias en estudio son mviles o no, eso ayuda en el proceso de clasificacin Se realiza una siembra pinchando el medio con la aguja bacteriolgica, y tras incubar 24 h, se observa si se ha producido crecimiento entorno a la zona inoculada.

PRUEBA DEL INDOL

Se cultiva la especie en estudio en un caldo rico en triptofano para que se produzca el Indol Se agrega al cultivo tres gotas del reactivo de Kovack (P-dimetil-aminobenzaldehido ) Se determina la presencia de Indol a travs de la formacin de un anillo rojo en la superficie del caldo

PRUEBA DEL CITRATO

Determina si el organismo bacteriano en cuestin se desarrolla o no en un medio que contiene citrato como nica fuente de carbono.

Medio citrato de Simmons

KLIGLER: Agar triple azucar hierro

PRUEBA DE LA OXIDASA
Prueba secundaria Permite conocer la presencia o ausencia del citocromo C en bacterias y es una caracterstica fisiolgica muy utilizada en taxonoma Se toma una pequea cantidad de cultivo bacteriano de 24-48 horas de edad y se transfiere a un trozo de papel filtro previamente embebido en n,n-dimetil p-fenilendiamina Este reactivo es rpidamente transformado a un
Prueba de oxidasa

producto oxidado de color prpura dentro de 30

segundos en presencia de citocromo oxidasa.