UNIVERSIDAD SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE CIENCIAS QUMCAS Y FARMACIA ESCUELA DE ESTUDIOS DE POSTGRADO

COMPARACION QUMICA Y DE RENDIMIENTO DEL ACEITE ESENCIAL DE HOJA Y RAZ DE Valeriana prionophylla Standl. DE DOS DIFERENTES LOCALIDADES DE GUATEMALA

RAMN BENJAMN PIEDRASANTA BATZ

MAESTRA MULTIDISCIPLINARIA EN PRODUCCIN Y USO DE PLANTAS MEDICINALES

Guatemala, noviembre del 2007

UNIVERSIDAD SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE CIENCIAS QUMCAS Y FARMACIA ESCUELA DE ESTUDIOS DE POSTGRADO

COMPARACION QUMICA Y DE RENDIMIENTO DEL ACEITE ESENCIAL DE HOJA Y RAZ DE Valeriana prionophylla Standl. DE DOS DIFERENTES LOCALIDADES DE GUATEMALA

Informe de tesis Presentado por

RAMN BENJAMN PIEDRASANTA BATZ

Para optar al ttulo de MAESTRA MULTIDISCIPLINARIA EN PRODUCCIN Y USO DE PLANTAS MEDICINALES

Guatemala, noviembre del 2007

UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS Y FARMACIA

JUNTA DIRECTIVA

scar Manuel Cbar Pinto, Ph.D Pablo Ernesto Oliva Soto Licda. Lillian Raquel Irving Antilln, M.A. Licda. Liliana Vides de Urizar Licda. Beatriz Eugenia Batres Jimnez Br. Mariesmeralda Arriaga Monterroso Br. Jos Juan Vega Prez

DECANO SECRETARIO VOCAL I VOCAL II VOCAL III VOCAL IV VOCAL V

CONSEJO ACADMICO SISTEMA DE ESTUDIOS DE POSTGRADO

scar Manuel Cbar Pinto, Ph.D., DECANO Licda. Anne Liere de Godoy, M.Sc. Dr. Jorge Luis de Len Arana Dr. Jorge Erwin Lpez Gutirrez Flix Ricardo Veliz Fuentes, M.Sc.

4 INDICE Resumen 1. Introduccin 2. Definicin del Problema 3. Justificacin 4. Marco Terico 4.1 4.2 4.3 4.4 4.5 4.6 4.7 Aceites Esenciales Composicin Qumica de los aceites esenciales Clasificacin de los aceites esenciales Distribucin y estado natural Anlisis de los aceites esenciales Deterioro que estn expuestos los aceites esenciales Tcnicas de extraccin y aislamiento 4.7.1 Expresin 4.7.2 Extraccin por arrastre con vapor de agua 4.7.3 Extraccin con solventes voltiles 4.7.4 Enfloracin 4.7.5 Extraccin con fluidos supercrticos 4.8 Descripcin botnica de Valeriana prionophylla Standl 4.8.1 Descripcin botnica 4.8.2 Distribucin 4.8.3 Hbitat 4.8.4 Usos populares 4.8.5 Composicin qumica 4.9 4.10 5.1 5.2 Cromatografa de Gases-masa Cromatografa en capa fina (TLC) General Especficos 1 2 3 4 5 5 5 6 7 7 8 8 8 8 9 9 9 12 12 13 13 13 13 13 14 16 16 16 17

5. Objetivos

6. Hiptesis estadstica

5 6.1 6.2 7.1 7.2 7.3 7.4 Nula Alternativa Localizacin Recursos humanos Recursos materiales Metodologa experimental 7.4.1 Diseo de tratamientos 7.4.2 Diseo experimental 7.4.3 Unidad experimental 7.4.4 Variable respuesta 7.4.5 Manejo del experimento 7.4.6 Descripcin del procedimiento 7.4.6.1 Extraccin con arrastre de vapor de agua 7.4.7 Metodologa de la cromatografa en capa fina (TLC) 8. Anlisis de la informacin 8.1 8.2 9.1 Modelo estadstico Anlisis estadstico Resultados del anlisis estadstico de la informacin 17 17 18 18 18 19 20 20 20 20 20 21 21 21 22 23 23 23 24 26 29 32 33 35 38 40

7. Mtodo de Investigacin

9. Resultados 10 Discusin de resultados 11. Conclusiones 12. Referencias bibliogrficas 13. Anexo 1 Equipo utilizado 14. Anexo 2 Fotografas de la obtencin y secado del material vegetal 15. Anexo 3 Salidas del anlisis cromatogrfico

6 RESUMEN

En el presente trabajo se han determinado los porcentajes de rendimiento de hoja y raz de Valeriana prionophylla Standl, as como la determinacin de la composicin qumica del aceite esencial de dos tipos de cultivares, siendo estos Cerro Raxqum en Totonicapn, que este es un tipo de cultivo silvestre y el otro que est ubicado en el Departamento de San Marcos, Municipio Tacan, aldea Vista Hermosa. Los aceites esenciales han sido extrados de las muestras secas, utilizando el mtodo de arrastre con vapor, obteniendo como resultado que el aceite esencial de raz procedente del Departamento de Totonicapn, es el que presenta mayor porcentaje de rendimiento con un 0.3622 %, adems es el que presenta mayor abundancia de acido valerico; por otra parte el porcentaje de aceite esencial de hoja y raz procedente del Departamento de San Marcos presenta rendimientos similares, pero la presencia de cido valerico es mnima. A los resultados de rendimiento se les realiz un Anlisis de Varianza, confirmando que existe diferencia significativa, entre los dos tipos de cultivares y las dos partes vegetativas utilizadas.

7 1. INTRODUCCIN

Las plantas poseen una gran variedad de principios activos, que estn asociadas a los procesos vitales bsicos, y los metaboltos secundarios participan activamente en el ajuste del vegetal a las condiciones ambientales as como con la interrelacin con parsitos y simbiontes. (5) Para el ser humano, los metaboltos secundarios, especialmente aquellas de origen vegetal, poseen diversas aplicaciones siendo utilizadas en salud, alimentacin, perfumera e higiene personal. stas sustancias se pueden obtener por diferentes procesos, dependiendo de la finalidad y del grado de pureza pretendido. Tcnicas como expresin, destilacin simple, arrastre con vapor de agua y maceracin con disolventes son algunas de las ms empleadas. La seleccin del mtodo de extraccin depende de factores como viabilidad econmica y estabilidad trmica y qumica. Los mtodos tradicionales de extraccin/separacin, con la utilizacin de solventes orgnicos, estn sujetos a dos problemas principales: el uso de temperaturas elevadas para separar los solventes de los extractos ocasionando una prdida en la composicin de los componentes voltiles o termosensibles de la planta y el aumento de la temperatura, con lo cual difcilmente es posible la eliminacin completa del solvente residual el que puede acarrear alteraciones qumicas en el soluto. Esta planta medicinal, actualmente es cultivada en la parte noroccidente del pas y adems crece de forma silvestre en el altiplano nacional, posee un aceite esencial bastante caracterstico, y que tiene un olor bastante parecido a la Valeriana officinalis, planta que es ampliamente utilizada a nivel mundial como un potente sedante y para inducir el sueo. Es una planta ampliamente estudiada y se tiene la evidencia que el aceite esencial es el que tiene el principio activo responsable de dicha accin farmacolgica. En el caso de la Valeriana prionophylla no existen estudios de la composicin qumica del aceite esencial, por tal razn es importante que se sienten las bases para contar con estudios referentes a esta planta medicinal y lo mas importante, que es nativa de Guatemala y por su parecido a la Valeriana officinalis, puede ser una planta con un gran potencial econmico para nuestro pas.

8 2. DEFINICIN DEL PROBLEMA

La Valeriana prionophylla una planta nativa de Mesoamrica , que en estudios an no publicados, se ha demostrado que la raz contiene acido valernico que es el principal componente del aceite esencial y otros componentes como valepotriatos. Adems, esta planta presenta actividad sedante, as como se ha demostrado en un estudio reciente que tiene actividad antioxidante y vasorelajante. (1,12) Los aceites esenciales son lquidos voltiles que tienen una gran infinidad de usos en la industria y en medicina, con pequeas cantidades pueden tener el efecto teraputico para curar muchas enfermedades. En el caso del aceite esencial de la Valeriana prionophylla, se sabe que por su similitud con la Valeriana Oficcinalis, el mismo es el responsable de tener el principio activo que acta directamente sobre algunos trastornos del sueo, adems de ser un poderoso sedante. Existen diferentes mtodos para obtener el aceite esencial entre estos estn: arrastre con vapor, extraccin con disolventes voltiles, expresin, enfloracin y extraccin con fluidos supercrticos. En la actualidad, no existe estudios acerca de la evaluacin del rendimiento, de la composicin qumica ni de la calidad del aceite esencial de Valeriana prionophylla, y en este estudio se evalu el rendimiento de aceite obtenido de hoja y raz de dos localidades de cultivo que fueron: El cerro Raxquim en Totonicapn, y el departamento de San Marcos, municipio Tacan, Aldea Vista Hermosa, teniendo como referencia de calidad la presencia de cido valerico.

9 3. JUSTIFICACIN

Los aceites esenciales son de importancia para el ser humano, por su utilidad y beneficio que brindan, siendo estos utilizados como materias primas en diferentes artculos como lo son: perfumera, preparados fitofarmacuticos, condimentos, pesticidas, etc. El principal inconveniente que se presenta, es que la mayora de las plantas vegetales que tienen aceite esencial, tienen bajos rendimiento, y que los costos para obtenerlos son elevados. Por otra parte se sabe que cuando existen condiciones climatolgicas de crecimiento de las plantas, condiciones de suelo, poca de cultivo, de cosecha y todo lo referente a la parte agrotecnlogica, puede presentarse una gran variabilidad de metabolitos secundarios, y con este estudio se estn sentando las bases necesarias, para que un futuro se pueda hacer mas estudios donde se evale diferentes mtodos de obtencin de aceite esencial de Valeriana prionophylla, ya que se sabe que el mismo es bastante beneficioso para combatir varias afecciones provocadas por la falta de sueo.

10 4. 4.1 Aceites Esenciales Son los compuestos odorferos naturales que se encuentran en las plantas y son aislados de las mismas. Generalmente, son lquidos (en algunas ocasiones semislidos y muy raras veces slidos) poco solubles en agua pero si volatilizables con vapor, se evaporan a diferentes velocidades bajo presin atmosfrica. Los componentes voltiles provenientes de plantan han atrado la atencin del hombre desde la antigedad como principios aromticos o especies de gran complejidad en su composicin. El estudio de los aceites esenciales como materias primas bsicas para la industria de fragancias, sabores y medicinales, se ha transformado en una de las reas de investigacin y desarrollo ms importante para muchos pases. Inicialmente considerados como material de deshecho del metabolismo de las plantas, la importancia biolgica de los aceites esenciales ha sido reconocida slo recientemente. El trmino aceite esencial es utilizado, en general, para designar sustancias voltiles obtenidas por extraccin, a base de vapor de las plantas, o por otros mtodos. Con esta definicin, se quiere hacer una distincin entre los aceites fijos y los que son fcilmente voltiles. Las propiedades bsicas que caracterizan a estos aceites son la volatilidad y origen vegetal. El termino popular ms comn con el que se conocen estas sustancia es el de esencias, tambin se conocen por el nombre de aceites voltiles o etreos. (3) En su gran mayora son de olor agradable, aunque existen algunos de olor relativamente desagradable como por ejemplo los componentes que forman parte de la fraccin aromtica del ajo y la cebolla, los cuales contienen compuestos azufrados. El aceite esencial dentro de la planta se encuentra confinado en un tejido el cual se le denomina micela, de lo contrario, podra tener influencia en la transpiracin de la planta, e inhibir la formacin de clorofila, esto es perjudicial o beneficioso, dependiendo del tipo de planta, si es clorofila o no. De lo anterior se puede concluir que los aceites esenciales generados por la planta son de diferentes utilidades, segn su gnero, especie o variedad. MARCO TERICO

4.2

Composicin Qumica de los aceites esenciales La composicin qumica de los aceites esenciales es variada, en una misma especie

la composicin cambia. Se pueden encontrar ms de cincuenta compuestos qumicos en

11 una planta en proporciones considerables, para ser tomados en cuenta como componentes importantes del aceite. Hay componentes qumicos, cuya cantidad presente en el aceite esencial, no es considerable cuantitativamente, pero si influye cualitativamente. Los aceites esenciales generalmente son mezclas complejas de hasta ms de 100 componentes que pueden tener la siguiente naturaleza qumica: (7) Compuestos alifticos de bajo masa molecular (alcanos, alcoholes, aldehdos, cetonas, steres y cidos), Monoterpenos, Sesquiterpenos, Fenilpropanos.

4.3 Clasificacin de los aceites esenciales Los aceites esenciales se clasifican con base en diferentes criterios: consistencia, origen y naturaleza qumica de los componentes mayoritarios. De acuerdo con su consistencia, los aceites esenciales se clasifican en esencias fluidas, blsamos y oleorresinas. Las esencias fluidas son lquidos voltiles a temperatura ambiente. Los blsamos son de consistencia ms espesa, son poco voltiles y propensos a sufrir reacciones de polimerizacin, son ejemplos el blsamo de copaiba, el blsamo del Per, Benju, blsamo de Tol, Estoraque, etc. Las oleorresinas tienen el aroma de las plantas en forma concentrada y son tpicamente lquidos muy viscosos o sustancias semislidas (caucho, gutapercha, chicle, oleorresina de pprika, de pimienta negra, de clavo, etc.) De acuerdo a su origen los aceites esenciales se clasifican como naturales, artificiales y sintticos. Los naturales se obtienen directamente de la planta y no sufren modificaciones fsicas ni qumicas posteriores, debido a su rendimiento tan bajo son muy costosos. Los artificiales se obtienen a travs de procesos de enriquecimiento de la misma esencia con uno o varios de sus componentes, por ejemplo, la mezcla de esencias de rosa, geranio, jazmn enriquecidas con linalool, o la esencia de ans enriquecida con anetol. Los aceites esenciales sintticos como su nombre lo indica son los producidos por la combinacin de sus componentes los cuales son la mayora de las veces producidos por

12 procesos de sntesis qumica. Estos son ms econmicos y por lo tanto son mucho ms utilizados como aromatizantes y saborizantes. (7) Desde el punto de vista qumico y a pesar de su composicin compleja, los aceites esenciales se pueden clasificar de acuerdo con los componentes mayoritarios. Segn esto los aceites esenciales ricos en monoterpenos se denominan aceites esenciales monoterpnicos (por Ej. Hierbabuena, albahaca, salvia, etc.). Los ricos en sesquiterpenos son los aceites esenciales sesquiterpnicos (por ej. Copaiba, pino, junpero, etc.) Los ricos en finilpropanos son los aceites esenciales fenilpropanoides (por ej. Clavo, canela, ans, etc.)

4.4

Distribucin y estado natural Los aceites esenciales se encuentran ampliamente distribuidos en plantas que

incluyen las Compuestas, Labiadas, Laurceas, Mirtceas, Pinceas, Rosceas, Rutceas, Umbelferas, etc. Se les puede encontrar en diferentes partes de la planta: en las hojas (ajenjo, albahaca, eucalipto, hierbabuena, mejorana, menta, etc), en las races (anglica, crcuma, jengibre, sndalo, sasafrs, valeriana, vetiver, etc.), en el pericarpio del fruto (ctricos como limn, mandarina, naranja, etc.) en las semillas (ans, cardamomo, hinojo, comino, etc.) en el tallo (canela, etc.) en las flores (lavanda, manzanilla, pinetro, tomillo, rosa, etc.) y en los frutos (nuez moscada, perejil, pimienta, etc.)

4.5

Anlisis de los aceites esenciales Los fines principales del anlisis de los aceites voltiles son el descubrimiento de

adulteracin y la evaluacin de la calidad de un aceite no adulterado. Rara vez se realiza un anlisis para identificacin. Se hace un examen preliminar y organolptico, en el cual se coloca una muestra del aceite en un frasco o probeta graduada. Se observa el color, la claridad, la viscosidad, la presencia o ausencia de sedimentos, las ceras separadas y el agua. A continuacin se caracteriza la muestra por medio de cromatografa gaseosa, para identificar los principales

13 componentes y, de ser posible, cuantificarlos. Finalmente se evalan sus propiedades fisicoqumicas como densidad, solubilidad e ndice de refraccin. Tambin se ejecutan pruebas especiales segn el aceite con que se ensaya (contenido de steres, total de alcoholes, punto de congelacin, residuo de evaporacin, porcentaje de aldehdos, etc.) El anlisis para determinar componentes se realiza a travs de comparacin con estndares, en cromatografa de gases o en cromatografa de capa fina, lo cual indica que componentes posee un aceite esencial. (2,3)

4.6

Deterioro a que estn expuestos los aceites esenciales Generalmente, el deterioro es atribuido a reacciones generales como: oxidacin,

resinificacin, polimerizacin, hidrlisis de steres y a la interaccin de grupos funcionales. Estos procesos parecen estar activados por calor, aire, oxigeno, humedad, luz y en algunos casos, posiblemente por metales. (9)

4.7

Tcnicas de extraccin y aislamiento Los diferentes procesos de extraccin utilizados para extraer de las muestras

vegetales mediante diferentes mtodos como: Expresin, arrastre con vapor de agua, extraccin con solventes voltiles, enfloracin y con fluidos supercrticos.

4.7.1 Expresin Consiste en extraer el aceite esencial al prensar el material vegetal, mediante un proceso mecnico, obtenindose aceite esencial de alta calidad. Este mtodo tambin se utiliza para obtener el aceite graso de la semilla del algodn. Comercialmente se utiliza poco en la obtencin de aceite esencial por el bajo rendimiento y alto costo, incluso para extraer el aceite graso de la semilla del algodn se combina con la lixiviacin para obtener un buen rendimiento.

4.7.2 Arrastre con arrastre con vapor de agua

14 La muestra vegetal generalmente fresca y cortada en trozos pequeos, se coloca en un recipiente cerrado y sometida a una corriente de vapor de agua sobrecalentado, la esencia as arrastrada es posteriormente condensada, recolectada y separada de la fraccin acuosa. Esta tcnica es muy utilizada especialmente para esencias fluidas, especialmente las utilizadas en perfumera. Se utiliza a nivel industrial debido a su alto rendimiento, la pureza del aceite obtenido y porque no requiere tecnologa sofisticada. (13)

4.7.3 Extraccin con solventes voltiles La muestra seca y molida se pone en contacto con solventes tales como alcohol, cloroformo, etc. Estos solventes solubilizan la esencia pero tambin solubilizan y extraen otras sustancias tales como grasas y ceras, obtenindose al final una esencia impura. Se utiliza a escala de laboratorio pues a nivel industrial resulta costoso por el valor comercial de los solventes, porque se obtienen esencias impurificadas con otras sustancias, y adems por el riesgo de explosin e incendio caractersticos de muchos solventes orgnicos voltiles. (8)

4.7.4 Enfloracin El material vegetal (generalmente flores) es puesto en contacto con una grasa. La esencia es solubilizada en la grasa que acta como vehculo extractor. Se obtiene inicialmente una mezcla (concreto) de aceite esencial y grasa la cual es separada posteriormente por otro medio fsico-qumico. En general se recurre al agregado de alcohol caliente a la mezcla y su posterior enfriamiento para separar la grasa (insoluble) y el extracto aromtico (absoluto). Esta tcnica es empleada para la obtencin de esencias florales (rosa, jazmn, azahar, etc.) Pero su bajo rendimiento y la difcil separacin del aceite extractor la hacen costosa. (9)

4.7.5 Extraccin con fluidos supercrticos Es el desarrollo ms reciente. El material vegetal cortado en trozos pequeos, licuado o molido, se empaca en una cmara de acero inoxidable y se hace circular a travs de la muestra un fluido en estado supercrtico (por ejemplo CO2), las esencias son as

15 solubilizadas y arrastradas y el fluido supercrtico, que acta como solvente extractor, se elimina por descompresin progresiva hasta alcanzar la presin y temperatura ambiente, y finalmente se obtiene una esencia cuyo grado de pureza depende de las condiciones de extraccin. Aunque presenta varias ventajas como rendimiento alto, es ecolgicamente compatible, el solvente se elimina fcilmente e inclusive se puede reciclar, y las bajas temperaturas utilizadas para la extraccin no cambian qumicamente los componentes de la esencia, sin embargo el equipo requerido es relativamente costoso, ya que se requieren bombas de alta presin y sistemas de extraccin tambin resistentes a las altas presiones.(11)

16 Cuadro No. 1 Mtodos de extraccin de mezclas aromticas

Mtodos de extraccin de mezclas aromticas

Mtodo 1. Mtodos directos 1.1.1 Compresin de cscaras 1.1 Expresin 1.1.2 Raspado de cscaras 1.2.1 Lesiones mecnicas en corteza gomas, resinas, blsamos aceites esenciales ctricos Procedimiento Productos obtenidos

1.2 Exudado Destilacin 2.1 Directa 2.2 Por arrastre con vapor (directo, indirecto a presin, a vaco)

aceites esenciales, y aguas aromticas Infusiones y resinoides alcohlicos en caliente, oleorresina Concretos y absolutos, resinoides en fro, oleoresinas pomadas en caliente, lavados y absolutos de pomadas.

3. Extraccin son solvente

3.1 Solventes voltiles

3.1.1 En caliente

3.1.2 En fro

3.2.1 En caliente 3.2 Solventes fijos (grasas y aceites)

3.2.2 En fri 4. Extraccin con fluidos supercrticos Cosolvente 40C

pomadas en fro, lavados y absolutos de enflorados

Aceites esenciales

17 4.8 Descripcin Botnica de Valeriana prionophylla Standl.

Nombre Cientfico: Valeriana prionophylla Standll Nombres Comunes: Pericn de monte, valeriana Reino: Subreino: Divisin: Clase: Subclase: Orden: Familia: Gnero: Especie: 4.8.1 Descripcin Botnica: Hierba perenne erecta, a menudo bifurcada, races olorosas, los tallos de 10-80 cm de alto, esparcidamente pilosos o casi glabros, los ncleos pilosulosos; hojas predominantemente basal, usualmente numerosas y aprisionadas, algunas cespitosas, las hojas individidas, oblongo-linear a espaluladas, de mayora de 3-30 cm de largo, 0.5-3 cm. de ancho, obtusas, atenuadas hacia la base subpeciolar, los margenes serrados, serradodentado, crenada o raramente entero, usualmente ciliado, glabra o pilosulada, hojas caulinares 2-3 pares principalmente 2-20 cm. de largo, usualmente sesiles y envuelta en la base, algunas veces corto-perciolada; inflorescencia largamente redunculada, las flores numerosas dispuestas en un dicasio agregado, densa o difusa; bracteas lineares, limbo del cliz con 9-11 segmentos exserta, lan anteras aprisionadas 4-lobadas, la teca surcada: estilo exserto aquinios 2-3 cm. de longitud, lisos o transversalmente ruguloso, glabreo o psuloso, el adaxial con costrilas usualmente conspicuas. (4) Plantae Tracheobionta MAGNOLIOPHYTA Magnoliopsida Asteridae Dipsacales Valerianaceae valeriana prionophylla

18 4.8.2 Distribucin: Chimaltenango, Guatemala, Huehuetenango, Quetzaltenango, Sacatepquez, San Marcos, Solol, Totonicapn, Mxico (Chiapas) y Costa Rica.

4.8.3 Hbitat: En campos abiertos, fro, bosque de pino, en prados montaosos fros y hmedos o preferiblemente en lugares desrticos en riscos rocosos, algunas veces sobre calizas.

4.8.4 Usos Populares: Sedante y antiespasmdico.

4.8.5 Composicin Qumica Generalmente est compuesto de componentes voltiles, valerenico. (14,16) valepotriatos, cido

4.9

Cromatografa de Gases-masa En cromatografa de gases se incluyen todos los mtodos cromatogrficos en los que

la fase mvil es un gas (gas portador), siendo la fase estacionaria un lquido (CGL) o un slido (CGS). Se desarrolla en una columna cerrada en la que se encuentra retenida la fase estacionaria y por la que se hace pasar el gas portador, la tcnica de separacin es la elusin. Iniciado el proceso cromatogrfico los componentes de la mezcla se distribuyen entre la fase estacionaria y la fase mvil; la elusin tiene lugar forzando el paso de un gas inerte a travs de la columna. La fase mvil no interacciona con el analito y su nica misin es la de transportar la muestra.

19 La cromatografa gas-slido tiene una fase estacionaria slida en la cual se produce la retencin de los analitos debido a la adsorcin fsica sobre la superficie del slido. Esta tcnica ha tenido una aplicacin limitada debido a la tendencia de los picos de elusin a formar colas y a la retencin semipermanente de gases activos sobre la fase estacionaria. La cromatografa gas-lquido se basa en la distribucin del analto entre una fase mvil gaseosa y una fase estacionaria lquida inmovilizada sobre la superficie de un slido inerte (soporte) o en las paredes interiores de la columna, si sta es capilar. (9)

4.10

Cromatografa en capa Fina (TLC) La cromatografa en capa fina es una tcnica cromatogrfica utilizada, para separar

componentes puros que forman parte de una mezcla. Esta separacin se consigue mediante la diferencia entre las fuerzas de adhesin de las molculas de los componentes a una fase mvil (normalmente un disolvente) y a una fase estacionaria (la llamada capa fina, que puede ser papel o gel de slice). e identificacin. En este mtodo se utilizan como soporte placas de vidrio, plstico, aluminio, etc. En las que se deposita una fina capa de absorbente (gel de slice, almidn, polvo de celulosa, etc.) Cuyo espesor puede ajustarse a conveniencia. A la altura de 1.5 cm de una de las bases se marca debidamente con un lpiz fino una lnea teniendo cuidado de no romper la capa absorbente. Esta lnea servir de base para situar las muestras a analizar. Una vez realizada la cromatografa, hay que identificar el compuesto. Escogemos la distancia recorrida desde el origen, pero esta distancia depende del tiempo, adems de otros factores y, por lo tanto est muy en funcin de las condiciones experimentales. Si la relacionamos con otra, todas las variables se anularan, diferencindose slo en la distancia recorrida en la cromatografa y, por tanto, en la diferente naturaleza de los componentes. La diversidad de absorbentes y eluyentes disponibles, permiten que esta tcnica sea de utilidad para separar e identificar un amplio repertorio de biomolculas. Una vez revelada la placa se puede establecer un coeficiente de relacin entre la distancia alcanzada Esta diferencia se traduce en un mayor o menor desplazamiento o movilidad de cada componente individual, lo cual permite su separacin

20 por el frente y la distancia alcanzada por una sustancia especfica, a esta relacin se conoce con el nombre de Rf (distancia de la sustancia/frente de la fase mvil).

21 5. OBJETIVOS

5.1 General Comparar el aceite esencial obtenido de hoja y raz de Valeriana prionophylla, de dos localidades, usando como marcador de calidad, la presencia de acido valerico.

5.2 Especfico 1. 2. 3. 4. Determinar el porcentaje de rendimiento de aceite esencial de hoja y raz de Valeriana prionophylla, de dos diferentes localidades. Encontrar las variables ptimas de operacin para el mtodo de extraccin utilizado. Cuantificar por medio de cromatografa de gases-masa, el cido valerico presente en cada aceite esencial extrado. Identificar por medio de cromatografa de capa fina TLC, la presencia de acido isovalerenico, en cada uno de los aceites esenciales extrados.

22 6. HIPTESIS ESTADSTICA

6.1

Nula:

Ho: No existe diferencia significativa en el rendimiento de aceite esencial de Valeriana prionophylla, si se utilizan dos localidades diferentes de cultivo y dos partes de la planta (hoja y raz).

M iTi = M jT j
Donde:

M iTi : Rendimiento de aceite esencial de valeriana de la interaccin del i-simo

experimento localidad.

M jT j : Rendimiento de aceite esencial de Valeriana de la interaccin del j-simo

experimento localidad.

6.2

Alternativa:

Ha: Existe diferencia significativa en el rendimiento de aceite esencial de Valeriana

prionophylla, si se utilizan para la extraccin, dos localidades diferentes de cultivo y dos

partes de la planta (hoja y raz).

M iTi M jT j

23 7. MTODO DE INVESTIGACIN

7.1

Localizacin La parte experimental de la investigacin se llev a cabo en los siguientes lugares: Laboratorio de Productos Naturales LIPRONAT de la Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia, de la Universidad de San Carlos de Guatemala En estas instalaciones se llev a cabo la extraccin de aceite esencial, aplicando el mtodo de arrastre con vapor de agua. Laboratorio de ensayos toxicolgicos de la antigua Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia de la Universidad de San Carlos de Guatemala. En este lugar se realiz el anlisis de cromatografa de gases-masas, para identificar los componentes de dicho aceite.

7.2

Recursos Humanos Autor de la Investigacin: Ing. Benjamn Piedrasanta Batz Asesor: Lic. M.A. Rodolfo Orozco Sr. Miguel Angel Chiwichon Colaborador en la obtencin del material silvestre de valeriana prionophylla Lic. Zully Cruz: Colaboradora en la metodologa en la extraccin de hidrodestilacin

24 7.3 Recursos Materiales

Especie Vegetal: Consiste de hojas y raz, recolectadas en su hbitat natural

A nivel de Laboratorio: 1000 mL de agua desmineralizada 10 mL de pentano Refrigerante para el agua del condensador Agua de circulacin y bao mara

Cristalera y Equipo: Equipo para extraccin de aceites esenciales por arrastre con vapor (Figura 1) Balanza analtica Plancha de Calentamiento Bomba hidrulica Baln de 1000 mL Erlenmeayer de 50 mL Un embudo varilla de agitacin perlas, ncleos de ebullicin o agitador magntico Dos metros de manguera de caucho Dos soportes de 50 cm. Tres pinzas (adaptables a los soportes y el equipo de vidrio) Pizeta Cronmetro Recipiente para agua de destilacin ocho viales de 1 mL Tres micro pipetas, con bulbo

25 Beaker de 50 mL Cromatoplacas para cromatografa en capa fina Cromatgrafo de gases-masa

7.4

Metodologa Experimental:

7.4.1 Diseo de tratamientos: Para el rendimiento y la calidad de la extraccin de aceite esencial de Valeriana

prionophylla, se evalu hoja y raz seca, de dos cultivares, silvestre y cultivado, por medio
de arrastre con vapor de agua, obtenindose cuatro tratamientos con tres repeticiones cada uno, dando como resultado doce datos.

7.4.2 Diseo experimental. Se utiliz un diseo controlado, en el cual se aplic un experimento factorial, con dos factores de efecto fijo, por lo que cada tratamiento fue seleccionado especficamente para realizarse en el laboratorio. Con el valor de cada repeticin de la variable respuesta, se procedi a realizar el anlisis de varianza.

7.4.3 Unidad Experimental: Cada unidad de tratamiento para cada mtodo estuvo distribuida de la siguiente manera: 50 gramos de material seco de raz y hoja de Valeriana prionophyla para el mtodo de arrastre con vapor de agua.

7.4.4 Variable Respuesta: La variable de respuesta para cada mtodo fue el rendimiento obtenido de aceite esencial.

26

7.4.5 Manejo del Experimento: El material vegetal se obtuvo de dos estaciones de cultivo: En el cerro Raxquim ubicado en el departamento Totonicapn, a 3250 msnm el cual es silvestre, estuvo a cargo del Ing. Benjamn Piedrasanta, y el otro que es un cultivo controlado est localizado en el Departamento de San Marcos, municipio Tacan, Aldea Vista Hermosa, que estuvo a cargo del seor Francisco Teleguario. Luego fue llevado a un secador solar que se encuentra localizado en las instalaciones de la Facultad de Agronoma de la Universidad de San Carlos, donde se secaron las hojas y races, que fueron utilizadas en cada tratamiento. Este material fue puesto en bolsas plsticas, siendo amarradas perfectamente. se requirieron para cada uno de los tratamientos. Las cantidades de agua, fueron medidas con la mayor exactitud posible. Luego de obtener el aceite esencial en cada tratamiento, se midi la cantidad de aceite obtenido. Despus se almacen en viales limpios y hermticamente sellados, y as de esta manera se llev a cabo la evaluacin del rendimiento de cada uno de los tratamientos realizados, para luego hacer la prueba de cromatografa de capa fina y la cromatografa de gases-masa para la identificacin de los componentes voltiles del aceite esencial. Luego este material fue reducido de tamaa por medio de tamices, y fueron pesadas las cantidades que

7.4.6 Descripcin del procedimiento:

7.4.6.1 1. 2. 3. 4. 5.

Extraccin con arrastre de vapor de agua: Moler la materia seca vegetal y medir 50 g del material molido. introducir los 50 g de material molido en un baln de destilacin de 1000 ml Agregar aproximadamente de 400-500 mL de agua destilada hasta cubrir los 50 g de material instalar el destilador de aceites esenciales (ver figura 1, de anexo 1), conectar el baln de destilacin con el recipiente colector. Conectar la bomba que circula la solucin de enfriamiento por el refrigerante

27 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. Llenar con agua el tubo N hasta el nivel B del tubo graduado Agregar 2 mL de un disolvente orgnico (pentano) en el tubo K utilizando una pipeta Pasteur y colocar el tapn al tubo hasta que empiece a destilar el aceite Destilar a temperatura constante durante 2-3 horas, mantener el flujo de destilacin de 2-3 ml por minuto Determinar el tiempo de extraccin a partir que empieza a obtenerse el aceite Medir la capa superior de aceite esencial recogido en el recipiente graduado Esperar 10 minutos despus de terminar el calentamiento antes de colectar el aceite Abrir la llave, dejar caer el agua y descartarla. Recibir la parte orgnica en un baln de 125 mL y agregar al tubo K aproximadamente 1 mL de disolvente orgnico utilizado anteriormente, para lavar y arrastrar todo el aceite recuperado 13. 14. 15. 16. Eliminar el disolvente orgnico utilizando rotavapor (Figura 2) Pesar el aceite obtenido, verterlo en viales color mbar y almacenar a 4 C Determinar el porcentaje de rendimiento a partir del peso del aceite entre el peso de la materia vegetal por cien Lavar el destilador con suficiente metanol y agua destilada para dejarlo completamente limpio y evitar cualquier contaminacin cruzada en la siguiente corrida. (11,14)

7.4.7 Metodologa de la cromatografa en capa fina (TLC) Se tom una cromatoplaca de silica gel, se marco con un lpiz una lnea de 1 cm en la base, sobre esa lnea se marcaron 5 puntos, donde se aplicaron 10 L de cada uno de los aceites esenciales obtenidos y tambin del estndar de acido isovalerenico. Para la fase mvil utilizada se prepar una mezcla polar de tolueno-acetato de etilo en proporcin (75:25) y para el revelado del cromatograma se utiliz una mezcla de cido clorhdricocido actico glacial en proporcin (8:2) y este se asperj sobre la placa cromatogrfica y posteriormente se calent a 110 C, durante 10 minutos, para luego revisar la placa cromatogrfica tanto a la luz visible como a la luz ultravioleta para determinar o detectar todos los puntos aparecidos.

28 8. 8.1 Modelo Estadstico: ANLISIS DE LA INFORMACIN

El modelo es el siguiente:

Z ( i , j ) = + i + j + ( ) ij + i , j ,k Donde: Z ( ij ) =variable respuesta de la i, j sima unidad muestreada experimental

=Efecto de la media general i =Efecto del i-simo localidad de cultivo j =Efecto del j-simo parte vegetal ij =Efecto de la interaccin cultivar-parte vegetal i , j ,k =Efecto del error experimental

8.2

Anlisis Estadstico:

A los porcentajes de rendimiento de las dos localidades utilizadas para obtener el aceite esencial, se les realiz un anlisis de varianza, y prueba de medias con el objeto de determinar si existe diferencia significativa entre el rendimiento obtenido en cada uno de los tratamientos utilizados. (6)

29
9. RESULTADOS

En la Tabla 1 se presenta los resultados de los rendimientos obtenidos de las extracciones de aceite esencial de hoja y de raz de las dos diferentes localidades.

Tabla.1Rendimiento%delaceiteextrado Repeticin1 Repeticin2 Repeticin3 40ghojaTotonicapn 0.04571 0.0402 0.04295 40grazTotonicapn 0.3622 0.07857 0.2203 40grazsanmarcos 0.2687 0.08875 0.1787 40ghojasanmarcos 0.2036 0.183 0.1933

% de rendimiento de la extraccin de aceite esencial de Valeriana prionophylla

Figura 1 Porcentaje de rendimiento de aceite esencial de hoja y raz de dos diferentes localidades.

30

Abundancia relativa en porcentaje del componente principal, de valeriana prionophylla

Figura 2 Cantidad relativa (%) del componente principal, de Valeriana prionophylla, (acido pentanoico o acido valerico)

1. Raz de San Marcos 2. Raz de Totonicapn 3. Hoja de San Marcos 4. Hoja de Totonicapn 5. Estndar cido isovalerenico

Fig. No. 3 Cromatografa en capa fina de los aceites obtenidos de cada extraccin

31
9.1 RESULTADOS DEL ANALISIS ESTADISTICO DE LA INFORMACIN

Tabla. 2 Interaccin de los resultados de la variable respuesta (% de rendimiento) y la parte vegetal utilizada.

DESCRIPTIVAS

Mean

Std. Deviation

Std. Error

95% Confidence Interval for Mean Lower Upper Bound Bound .0314182 .0855245 .0944252 .0967534 -.3583744 .2048351 .3135489 .2232381 .2209099 .6760377

Minimu m

Maximu m

BetweenComponent Variance

Hoja Raiz Total Mod el Fixed Effects Random Effects

6 6 12

.11812 67 .19953 67 .15883 17

.08262390 .10864146 .10136843 .09651340

.03373 106 .04435 269 .02926 254 .02786 102 .04070 500

.04020 .07857 .04020

.20360 .36220 .36220

.00176132

Tabla 3 Anlisis de Varianza (ANOVA)

Sum of Squares Between Groups Within Groups Total (Combined) Linear Term Contrast .020 .020 .093 .113

df 1 1 10 11

Mean Square .020 .020 .009

F 2.135 2.135

Sig. .175 .175

32

Boxplot of C3
0.4

0.3

C3

0.2

0.1

0.0 Hoja C2 Raiz

Figura 4 Comparacin de los rendimientos obtenidos de hoja y raz de las dos diferentes localidades, por medio de una grfica tipo cajn.

Tabla 4 Interaccin de los resultados de la variable respuesta (% de rendimiento) y las dos localidades.

Descriptivas rendimiento 95% Confidence Interval for Mean N San Marcos Totonicapan Total Model Fixed Effects Random Effects 6 6 12 Mean .18600 83 .13165 50 .15883 17 Std. Deviation .0578311 2 .1322468 1 .1013684 3 .1020628 6 Std. Error .02360 946 .05398 953 .02926 254 .02946 301 .02946 301(a) Lower Bound .1253183 .0071295 .0944252 .0931840 .2155314 (a) Upper Bound .2466984 .2704395 .2232381 .2244793 .5331947 (a) .0002590 0 Minimu m .08875 .04020 .04020 Maxim um .26870 .36220 .36220 BetweenCompone nt Variance

33 Tabla 5 Anlisis de Varianza (ANOVA)

rendimiento Sum of Squares Between Groups Within Groups Total (Combined) Linear Term Contrast .009 .009 .104 .113 Mean Square 1 1 10 11 .009 .009 .010

df

F .851 .851

Sig. .378 .378

Boxplot of rendimiento
0.4

0.3 rendimiento

0.2

0.1

0.0 San Marcos origen Totonicapan

Figura 5 Comparacin de los rendimientos obtenidos de hoja y raz de las dos diferentes localidades, por medio de una grfica tipo Cajn.

34
10. DISCUSIN DE RESULTADOS

Para este estudio se utiliz el mtodo de arrastre de vapor con agua, haciendo uso del aparato que lleva como nombre neoclevenger, en dicho aparato se coloc la muestra vegetal tanto hoja como raz y durante dos horas y media se estuvo extrayendo el aceite esencial, como se puede observar en la figura 4, pag. 36 de anexo 1, se realizaron dos corridas experimentales a la vez, y esto trae repercusin en los resultados de los rendimientos, como se puede observar en la tabla de resultados de rendimiento, en la segunda corrida se obtuvieron rendimientos por debajo de la primera corrida, esto se debe exclusivamente a que en la segunda corrida el agua de condensacin llega con una temperatura no ptima para el proceso, por lo tanto el aceite esencial no se condensan por completo, y los mismos se escapan a la atmosfera. Este es un factor muy importante que habra que tomar en cuenta para futuros estudios. Es importante establecer que uno de los objetivos primordiales de este estudio es encontrar la diferencia que existe tanto en el rendimiento como en los componentes qumicos del aceite esencial de dos diferentes tipos de cultivo, que en este caso serian silvestre y cultivado, en la cual el tipo silvestre se encuentra localizado en el Departamento de Totonicapn especficamente en el cerro Raxquim a 3, 221 msnm, en esta regin la temperatura en promedio es fro. Por otro lado el otro cultivo que es controlado, est ubicado en el municipio de Tacan, aldea Vista Hermosa del Departamento de San Marcos aproximadamente a 2500 msnm el clima es templado-fro. Son dos localidades que en Las condiciones climatolgicas y de altitudes son totalmente diferentes, ms sin embargo tienen las condiciones necesarias para que se desarrolle la valeriana prionophylla. condiciones previas a las que fueron sometidas los dos tipos de cultivo fueron totalmente distintas, ya que la valeriana prionophylla de tipo silvestre se sec en un secador ubicado en la Facultad de Agronoma de la USAC, y este estuvo en condiciones de temperatura y humedad controlada, en cambio el material cultivado en San Marcos, fue secado nicamente bajo la sombra y tom aproximadamente 20 das para su secado en comparacin con el cultivo de Totonicapn que tom 7 das. De todos modos el material antes de ser procesado se le midi la humedad tanto a la raz como a la hoja y sta reportaba aproximadamente de un 13-15 % por lo tanto los dos tipos de cultivo tuvieron

35 que ser introducidos a un horno desecador bajo una temperatura de 40 C y un tiempo de 4 horas, al final la humedad tanto de la raz como de la hoja y de los cultivos estuvo en el rango de 8-10%, siendo esta la humedad ptima para procesar dicho material. En la seccin de anexos, aparecen los perfiles cromatogrficos de la hoja y raz, y de las dos localidades evaluadas, adems de las tablas donde se presentan los componentes qumicos identificados. Para la realizacin de la cromatografa de gases-masa se tomaron 2 microlitros de aceite mezclados con 1.5 mililitros de alcohol y como se puede observar en dichos resultados el acido pentanoico o cido valerico, es el que se presenta en mayor cantidad en los aceites, pero llama la atencin que en el aceite esencial obtenido de la raz con procedencia San Marcos es el que presenta menor cantidad de acido valerico con un 3.35 % de abundancia, sin embargo, el porcentaje de rendimiento es relativamente alto, tambin el aceite esencial de la hoja presenta una abundancia relativamente baja, presentando en la raz como componente mayoritario el -bisaboleno, Tambin es importante mencionar que el aceite esencial tanto de la hoja como de la raz del cultivo procedente de Totonicapn presentan una abundancia de cido valerico similar y que ste es el componente mayoritario de las dos partes utilizadas de la planta. En la Figura 2 se puede apreciar grficamente como est distribuida la presencia de cido valerico en cada uno de los aceites esenciales obtenidos. A las cuatro muestras de aceite esencial, se le realiz una cromatografa de capa fina, como se puede apreciar en la Figura 3 en la cual se utiliz como componente estndar el acido isovalerenico, en este caso se utiliz 10 L en una placa cromatogrfica de slica gel, donde la fase mvil utilizada fue una mezcla polar de tolueno-acetato de etilo (75:25), y para el revelado del cromatograma se utiliz una mezcla de cido clorhdrico-cido actico glacial (8:2) asperjado sobre la placa y calentado posteriormente a 110 C por 10 minutos, luego del calentamiento se revis la placa cromatogrfica tanto a la luz visible como a la luz ultravioleta para destacar todos los puntos que aparecieran. Como resultado se obtuvo que efectivamente en las cuatro muestras de aceite esencial existe presencia de cido isovalerenico. Como se podr observar en los resultados, el rendimiento de las extracciones de aceite esencial es muy variado, y como se mencion anteriormente la aplicacin de la metodologa pudo influir de manera significativa, como lo pudo ser la temperatura de

36 condensacin, tiempo de extraccin, etc. En la figura. 1 de la seccin de resultados, se puede observar la distribucin de los diferentes porcentajes de rendimiento segn parte de la planta y lugar de origen, en este caso la raz procedente de Totonicapn es la que presenta mayor rendimiento de extraccin con un 0.322 % y esto viene a contrastar significativamente con el rendimiento obtenido con la hoja que es 0.04575 %, sin embargo de esta localidad es la que contiene mayor cantidad de cido valerico. Por otro lado el rendimiento de aceite esencial obtenido de hoja y raz de San Marcos, tienen porcentajes similares, no habiendo mucha diferencia significativa en los mismos, pero en este caso la presencia de acido valerico es muy pobre. En la figura 4 y 5 se proyectan dos grficas en las cuales por medio de una representacin de los datos en cajones, se puede apreciar claramente la diferencia significativa de rendimiento tanto de parte usada de la planta as como de los lugares de procedencia del material, en la Figura 4 se puede apreciar que se tiene una mayor cantidad de aceite esencial de raz que de hoja y en la Figura. 5 se observa que existe una mayor cantidad de aceite esencial del material procedente de Totonicapn, a pesar de que la hoja tiene muy bajo rendimiento. Con respecto a los resultados obtenidos por medio del anlisis estadstico a los rendimientos, en este caso aplicando un anlisis de varianza (ANOVA) se efectu una comparacin tanto de la parte vegetal utilizada, as como del material de procedencia, y en efecto se puede observar en las tablas 2 y 3 que por el valor de p dado en cada una de los ANOVA corridos, existe una diferencia significativa entre cada dato analizado, que en este caso la variable de respuesta era el rendimiento y los factores eran parte vegetal utilizada y material de procedencia, por lo tanto se rechaza la hiptesis nula y se acepta la hiptesis alternativa, que establece, que s existe diferencia significativa entre el rendimiento de aceite esencial obtenido y las dos diferentes fuentes de material vegetal, as como tambin, existe una diferencia significativa entre el rendimiento de aceite esencial obtenido y parte de la planta utilizado.

37
11. CONCLUSIONES

1. Existe diferencia significativa entre el material cultivado y el material silvestre, con respecto a los porcentajes de rendimiento de aceite esencial con un valor de (p=0.378). 2. Existe diferencia significativa entre la raz y la hoja, con respecto a los porcentajes de rendimiento de aceite esencial con un valor de (p=0.175). 3. El aceite esencial obtenido de hoja y raz cuya procedencia es Totonicapn es el que presenta mayor cantidad de principios activos, con una abundancia promedio de cido valerico de 63.16 %. 4. El aceite esencial obtenido de hoja y raz cuya procedencia es San Marcos presentan rendimientos de aceite esencial similares, pero la abundancia de cido valerico es en promedio 20.2 %.

38
12. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

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39 12. Loaiza ES. Extraccin supercrtica con CO2, Guatemala (Tesis de graduacin, Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia) 1,994 (p. 6-15) 13. Puhlow M. El gran libro de las plantas medicinales, 6ta ed Espaa, Editorial Everest, 1985 (p. 95) 14. Muoz M. Destilacin por arrastre con vapor de agua, Guatemala: practica No. 10, Experimento No. 1, 1992 (p. 15-18) 15. Piccinelli AL. New lignans from the roots of Valeriana prionophylla with antioxidative and vasorelaxant activities, Artculo, Abril del 2,004. 16. X.Q. Gao, L. Bjrk, Valerenic acid derivates and valepotriates among individuals, varieties and species of Valeriana, Artculo, Enero de 1,999. 17. Amrica QCh. Et al. Aceite esencial de las Hojas de Hyptis umbrosa Salzm, extrado por diferentes tcnicas. Tchira Venezuela, Artculo, octubre del 2,004 18. Stashenko EE. Jaramillo BE. Comparacin de la composicin qumica y la actividad antioxidante in vitro de los metabolitos secundarios voltiles de plantas de la familia verbenaceae, Colombia, Artculo, diciembre del 2,003. 19. Camilo D. Monsalve LA. Estudio comparativo de la composicin qumica de aceites esenciales de Lippia Alba provenientes de diferentes regiones de Colombia, y efecto del tiempo de destilacin sobre la composicin del aceite. Colombia, Artculo, Mayo del 2,007. 20. Olivero JT. Jaramillo BE. Composicin qumica voltil y toxicidad aguada (CL50) frente a Artemia salina del aceite esencial del crotn malambo colectado en la costa norte de Colombia. Colombia, mayo del 2,007 21. Guerra CM. Estudio comparativo de los aceites esenciales de Callistemon speciosus DC. Recolectado en los Estados Carabobo, Lara y Mrida. Venezuela, Revista de la Facultad de Farmacia Vol. 45, 2,003 22. Tam CU. Yang QW. Optimization and comparison of three methods for extraction of volatile compounds from Cyperus rodundus evaluated by gas chromatographymass spectrometry. Macau China, Artculo, Noviembre del 2,006 23. Guan W. Li S. Comparison of essential oils of clove buds extracted with supercritical carbn dioxide and other three traditional extraction methods. Tianjin China. Artculo, Marzo del 2,006.

40
13. ANEXO 1: EQUIPO UTILIZADO

Figura 1. Diagrama del equipo utilizado para arrastre con vapor

Figura 2 Diagrama del Rotavapor

41 Figura 3 Horno secador del Laboratorio de Productos Naturales LIPRONAT

Figura 4 Obtencin del aceite esencial de Valeriana prionophylla, por medio del mtodo de arrastre con vapor.

42 Figura 5 Determinacin de la humedad de la muestra seca.

43
14. ANEXO 2: FOTOGRAFAS DE LA OBTENCIN Y SECADO DEL MATERIAL VEGETAL

Figura 6 Cosecha de Valeriana prionophylla, en el cerro Raxquim Totonicapn.

Figura 7 Raz obtenida del cerro Raxqum Totonicapn

44 Figura 8 Distribucin de la raz para el secador solar

Figura 9 Secador solar de la Facultad de Agronoma USAC

45
13. ANEXO 3: SALIDAS DEL ANLISIS CROMATOGRFICO

En las siguientes tablas se presenta la composicin qumica del aceite esencial de las hojas y races obtenidas de las dos diferentes localidades, as como los cromatogramas .

No.CAS 105431 512618 87445 20085932 17066670 560327

Tabla1HojaTotonicapn Componente acidopentanoico,cido3metilvalrinico alfasantaleno transcaryophylleno Seyshelleno selineno patchouleno

%rea 62.59 3.56 11.88 5.7 2.27 4.5

RT 7.16 11.3 11.47 11.68 11.95 11.96

qual 72 97 76 97 91 99

Abundance TIC: 3750R.D 2200000 2000000 1800000 1600000 1400000 1200000 1000000 800000 600000 400000 200000 0 8.00 Time--> 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00 26.00 28.00 11.95 14.34 14.66 15.86 16.51 12.12 11.38 12.86 13.26 15.35 17.24 7.15 11.48

11.68 11.76 11.30

Figura 10 Perfil cromatogrfico tpico del aceite esencial de hoja de Valeriana prionophylla, obtenido por arrastre con vapor del cerro Raxqum, Totonicapn.

46

No.CAS 105431 512618 28973979 20085932 560327 53585130 17066670

Tabla2RazTotonicapn Componente acidopentanoico,cido3metilvalrinico alfasantaleno TransFarneseno Seyshelleno patchouleno transbisaboleno selineno

%rea 63.74 3.51 11.84 5.98 4.59 4.59 2.33

RT 7.21 11.29 11.84 11.69 11.76 11.76 11.95

qual 83 97 70 96 97 95 91

Abundance TIC: 3751.D 7.21 4500000 4000000 3500000 3000000 2500000 11.68 2000000 11.29 11.76 1500000 1000000 500000 0 8.00 Time--> 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00 26.00 28.00 11.95 12.12 11.38 13.25 15.86 16.51 12.86 17.24 14.68 11.6112.71 13.84 11.48

Figura 11

Perfil cromatogrfico tpico del aceite esencial de raz de Valeriana

prionophylla, obtenido por arrastre con vapor del cerro Raxqum, Totonicapn.

47

No.CAS 105431 515139 512618 495614 20085932 560327 3691110 5986550

Tabla3RazSanMarcos Componente acidopentanoico,cido3metilvalrinico elemeno alfasantaleno bisaboleno Seyshelleno patchouleno deltaguaieno 1,6metanona

%rea 3.35 1.55 8.57 33.62 11.93 8.82 7.65 2.64

RT 6.94 11.08 11.29 11.49 11.69 11.76 11.95 13.25

qual 83 94 97 91 98 96 97 99

Abundance TIC: 3752.D 11.48 1.2e+07 1e+07 8000000 6000000 4000000 2000000 6.94 0 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00 26.00 28.00 Time--> 13.26 11.38 12.12 11.09 15.87 9.95 13.05 15.28 11.90 16.51 8.99 12.91 11.30 11.68 11.76 11.95 12.85

Figura 12

Perfil cromatogrfico tpico del aceite esencial de raz de Valeriana

prionophylla, obtenido por arrastre con vapor de San Marcos.

48

No.CAS 105431 142621 512618 28973979 629947 112858 13287246

Tabla4HojaSanMarcos

%rea 37.49 2.55 0.94 3.86 4.02 4.34 4.45

RT 7.12 7.48 11.3 11.48 15.28 15.49 15.86

Qual 74 83 94 89 87 90 81

Componente acidopentanoico,cido3metilvalrinico acidohexanoico alfasantaleno TransFarneseno heneicosano Eicosano nonadecano

Abundance TIC: 3753.D 7.12 3000000 2800000 2600000 2400000 2200000 2000000 1800000 1600000 1400000 1200000 1000000 800000 600000 400000 200000 0 8.00 Time--> 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00 26.00 28.00 7.39 15.87 15.28 11.68 11.30 16.51 11.76 15.49 14.72 11.95 15.71 15.13 17.25 14.94 14.59 7.48 12.86 14.52 14.36 14.18 7.80 14.10 18.11 13.26 11.83 13.91 12.13 8.51 9.38 11.09 6.56 13.05 10.69 11.48

13.84

Figura 13

Perfil cromatogrfico tpico del aceite esencial de hoja de Valeriana

prionophylla, obtenido por arrastre con vapor en San Marcos.

49