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Biblioteca

Evaluacin de la utilizacin de la vacuna STARTVAC en una explotacin lechera afectada por mastitis ambientales
Carlos Ribeiro, Mdico Veterinario; Dlia Castro, Mdica Veterinaria
cr.cveta@netvisao.com | Centro Veterinario de Aveiro, Portugal

1. Introduccin

as mastitis representan un coste muy elevado en una explotacin lechera. El coste de una mastitis puede suponer una reduccin del 20% al 25% tanto en la produccin de leche como en la proporcin de grasa de la misma (Sharma et al. , 2009). A estas prdidas econmicas se le suman los costes inmediatos ligados al tratamiento de la mastitis, el valor de la leche desechada y las penalizaciones en el precio de la leche, resultantes del aumento del recuento de clulas somticas (RCS) y de los recuentos bacterianos totales. A todo esto hemos de aadir que muchas mastitis conducen a la prdida de uno o ms cuartos mamarios y al rechazo precoz de algunas vacas. Las mastitis nunca podrn ser erradicadas, porque son el resultado de mltiples factores: animal, ambiente, manejo, rutina de ordeo y microorganismos. La elevada produccin de leche tambin es uno de los factores de predisposicin para la aparicin de mastitis, pues aumenta la sensibilidad de la ubre frente a las infecciones. Diversos estudios han demostrado que casi

Tasa de Taxa denuevas novas infecciones infeces

Parto Parto

Lactancia Lactao

Secado Secagem Parto Parto Perodo Perodo seco seco

Grca 1. Tasa de nuevas infecciones intramamarias durante la lactancia y el perodo seco (Adaptado de Naztke)

la mitad de las mastitis ambientales desarrolladas en el inicio de la lactancia estaban relacionadas con infecciones adquiridas durante el perodo seco (Bradley et al. , 2000) (Grfica. 1).

En el terreno del control de las mastitis, aparte de los antibiticos, del manejo ambiental, de las medidas de higiene y de la rutina de ordeo, surge ahora en Europa el tratamiento profilctico mediante vacunacin.

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Infertilidad (3) Infertilidade

Trastorno causa Doen.de causa desconocida (2) desconhecida

Baja en la Baixa na produccin (3) produo

Mastitis crnica Mamite crnica (10)

de las LesoLesin dos tetos mamas (1)

Probl. msculoProb. musculoesquelticos (1) esquelticos

Sndrome de Sindrome vaca gorda da (1) vaca gorda

Cetosis (1) Cetose

Problemas Problemas podales (1) podais

Problemas Problemas digestivos (1) digestivos

Lig. ubre roto Lig. ubere (1) partdo

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10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0
Vacas Vacas

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Aborto (2) Aborto Corticosteroides Corticos Antiinamatorios Anti-in. Hormonas Hormonas Desparasitantes Desparasitantes Suplementos Suplementos Vacunas Vacinas Otros Outros

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tal y los considerables costes que supone la aplicacin de antibiticos intramamarios (Grfica 3) nos llevaron a elegir esta explotacin de vacas de leche como blanco de nuestro estudio. De hecho, durante el ao 2009, la explotacin estudiada tuvo unos gastos aproximados de 11.000 euros en antibiticos intramamarios para el tratamiento de mastitis clnicas de vacas en lactancia, lo que corresponde al 72% del coste total correspondiente a medicamentos de la explotacin.

2. Metodologa
El protocolo utilizado fue el indicado por el fabricante (HIPRA) y consisti en la aplicacin intramuscular de 2 ml de STARTVAC, entre 45 y 15 das antes del parto y 50 das despus del parto, en vacas y novillas gestantes. Este protocolo de vacunas fue aplicado durante un perodo de seis meses, tras el cual se evaluaron la incidencia de nuevas infecciones en el total de animales vacunados, la evolucin del recuento celular en el hato y los costes asociados al tratamiento de las mastitis. El estudio en cuestin se llev a cabo sobre un grupo de 65 vacas en lactancia. El ensayo se inici el 27 de julio de 2009 y durante el mismo fueron vacunadas 10 novillas y 16 vacas adultas. La primera vaca vacunada tena el parto previsto para el 7 de septiembre de 2009, por lo que fue a partir de esta fecha cuando empezaron a recogerse datos para el anlisis de la eficacia de la vacuna en el grupo por comparacin con los 6 meses anteriores.

Grca 2. Motivos de rechazo durante el perodo de 15/3/2009 a 16/3/2010

Las vacunas tipo J5 ( E. coli ), ya disponibles hace algunos aos en los Estados Unidos, son utilizadas en la prevencin de mastitis provocadas por coliformes, tales como E. coli , Klebsiella spp , Citrobacter spp y Enterobacter spp . Segn varios estudios, la administracin antes del parto en vacas adultas y novillas representa una slida inversin, con un significativo beneficio econmico. HIPRA ha registrado ahora STARTVAC, que asocia la proteccin inmunitaria contra E. coli y coliformes a la proteccin contra S. au-

reus y estafilococos coagulasa negativos (ECN), en el sentido de reducir la gravedad y la duracin del estado clnico de las mastitis y prevenir nuevas infecciones. Con el objetivo de evaluar la eficacia y la relacin coste/beneficio de esta vacuna, utilizamos STARTVAC en una explotacin lechera con elevadas prdidas econmicas debidas a mastitis por agentes coliformes, sin haber sido alterado el control preventivo. El alto porcentaje de rechazo por mastitis (Grfica. 2), el elevado recuento celular to-

80 60
Porcentaje Percentagem

40 20 0

3. Anlisis de los resultados


Para descartar la posibilidad de que nuestros resultados quedaran enmascarados por el eventual rechazo de vacas crnicas, comparamos el nmero de animales eliminados por mastitis en los seis meses anteriores al ensayo y durante el mismo. Analizando estos datos, observamos que el nmero de vacas rechazadas por mastitis se mantuvo igual en ambos semestres (Tabla.
Antibiticos Antibiticos mastitis mamite Antibiticos Antibiticos Antibiticos Antibiticos secado secagem en general

Grca 3. Costes (en %) en medicamentos (2009)

Evaluacin de la utilizacin de la vacuna Startvac en una explotacin lechera afectada por mastitis ambientales

1), por lo que podemos considerar que ste no ser un criterio con influencia en los resultados. Durante los seis meses del ensayo (de septiembre a febrero), fueron rechazadas 6 vacas por mastitis, al igual que en el semestre anterior. Considerando que, a partir de 250.000 cels/ml, el animal presenta ndices de prdidas de produccin y de calidad de la leche (Brito et al. , 1997), seguimos este criterio en nuestro ensayo. De esta forma, analizamos el nmero de vacas vacunadas, con RCS por encima de 250.000 clulas (RCS por encima de 300.000 implican la prdida de un punto de bonificacin en el pago de la leche) (Tabla. 2). De los 26 animales vacunados (novillas y vacas adultas), 5 aparecen marcadas en la lista de animales con RCS mayor de 250.000 cels/ml. Esto representa el 25% de nuevos casos en el total de vacas adultas y el 10% de las novillas vacunadas durante este perodo de tiempo. El recuento celular en el tanque disminuy (como media por semestre) de 449.000 cels/ml a 239.000 cels/ml. (Grfica 4). Analizando la evolucin de los costes de tratamiento, verificamos una significativa reduccin de los mismos en relacin con la medicacin intramamaria para las mastitis (Grfica 5). Al observar el grfico, constatamos un gasto medio mensual en medicamentos intramamarios por encima de los 1.000 . Este valor qued reducido a menos de la mitad a partir de septiembre. La inmunizacin durante el perodo seco puede considerarse como una posible explicacin de los resultados tan inmediatos en la reduccin de los costes de tratamiento, al registrarse una menor incidencia de mastitis en el posparto y responder ms rpidamente los casos clnicos a los antibiticos comunes. Ante la hiptesis del carcter estacional tpico de las infecciones por coliformes, buscamos si en el ao anterior, y en la misma poca, se haba verificado esta reduccin de costes en materia de antibiticos intramamarios. Al analizar la tabla de datos del ao 2008, de la cual slo disponemos de cifras a partir del mes de abril, no se observa estacionalidad, mantenindose los costes constantes a lo largo del ao en una media de 1.250 (Grfica 6).

Tabla 1. Vacas rechazadas en el perodo de 01-02-2009 a 28-02-2010.


Fecha 24/02/2009 24/02/2009 24/02/2009 24/02/2009 24/02/2009 24/02/2009 24/02/2009 18/03/2009 18/03/2009 18/03/2009 22/03/2009 19/05/2009 20/06/2009 20/06/2009 20/06/2009 23/06/2009 25/08/2009 25/08/2009 19/09/2009 22/09/2009 24/09/2009 25/09/2009 15/12/2009 15/12/2009 16/12/2009 16/12/2009 16/12/2009 16/12/2009 18/01/2010 18/01/2010 18/01/2010 21/02/2010 21/02/2010 21/02/2010 Id. Vaca 1057 8601 4260 1046 4256 8600 3857 4023 3243 5629 4104 8697 4830 8602 8597 2234 1048 9602 4296 4253 6741 4252 6970 1595 2702 2227 4266 0344 6968 9520 4241 9451 4255 4293 Causa del rechazo MASTITIS CLNICA MUERTE SBITA COMPLICACIONES POSTPARTO LESIN DE LOS PEZONES ABORTO LIPIDOSIS HEPTICA LIPIDOSIS HEPTICA MASTITIS CRNICA ABORTO MASTITIS CRNICA BAJA EN LA PRODUCCIN LIGAMENTO UBRE ROTO MASTITIS CRNICA INFERTILIDAD ENFERMEDAD CAUSA DESC. ENFERMEDAD CAUSA DESC. PROB. DIGESTIVOS MASTITIS CRNICA CETOSIS ABORTO LIPIDOSIS HEPTICA PROB.MUSCULOESQUELTICOS MASTITIS CRNICA MASTITIS CRNICA MASTITIS CRNICA MASTITIS CRNICA MASTITIS CRNICA MASTITIS CRNICA INFERTILIDAD BAJA EN LA PRODUCCIN BAJA EN LA PRODUCCIN INFERTILIDAD PROBLEMAS PODALES LESIN DE LOS PEZONES N Parto 1 3 2 1 3 2 3 4 3 2 5 3 3 2 3 3 1 2 2 3 4 3 3 3 3 4 2 3 3 4 3 1 4 2 Das en lactacin 2 293 5 325 330 441 408 347 365 403 482 112 43 417 111 178

Tabla 2. Lista de vacas con valores de RCS por encima de 250.000 clulas somticas.
Id. Vaca 4261 4295 1042 1053 4262 4268 1051 4300 1043 1049 1052 1060 N Parto 05/04/09/2/G 04/05/09/2/G 07/05/09/2/G 19/05/09/1/G 15/06/06/2/S 26/07/09/2/G 11/09/09/1/I 27/11/09/2/I 27/12/09/2/C 18/01/10/2/I 23/03/10/2/P 17/04/10/2/P 05 04 04 04 03 Ene Feb Mar May Jun 34 146 40 111 77 50 33 149 176 36 272 205 44 47 1151 65 121 40 262 738 20 3556 379 139 39 275 219 29 412 265 303 226 143 64 20 3556 379 139 03 Jul 171 577 41 29 80 874 176 176 03 03 03 04 03 03 Oct Nov Dec Ene Feb Mar 227 301 381 15 47 31 111 398 309 76 967 545 1770 43 58 133 199 345 541 153 109 570 306 1185 64 102 236 43 336 137 876 929 1975 487 207 200 71 79 64 92 290 787 1929 1020 112 179 638 138 1559 130 147 304 577 880 781 2570 405 433 305 1550 437 Das en lactacin 332 349 300 288 307 220 173 96 66 44 Total produccin 13,426 9,969 12,057 9,200 10,237 6,039 5,875 4,729 2,377 1,702 Media produccin 40.44 28.56 40.19 31.94 33.35 27.45 33.96 49.26 36.02 38.68 -

600 500 CCS x1000 400 300 200 100


Septiembre Diciembre Octubre Febrero Enero Junio Agosto Noviembre Marzo Abril Mayo Julio

Abr

Mai

Jun

Jul

Ago

Set

Out

Nov

Dez

Jan

Fev

Mar

Grca 4. Evolucin del RCS durante el ltimo ao. El recuento celular en tanque ha disminuido (en media por semestre) de 449.000 cls/ml para 239.000 cls/ml.

4 Evaluacin de la utilizacin de la vacuna Startvac en una explotacin lechera afectada por mastitis ambientales
Carlos Ribeiro, Mdico Veterinario; Dlia Castro, Mdica Veterinaria | cr.cveta@netvisao.com

4. Conclusiones

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Bibliografa

Durante el semestre en que llevamos a cabo la vacunacin con STARTVAC conseguimos resultados muy positivos, con una disminucin del recuento celular en el hato (reduccin de una media de RCS de 449.000 a 239.000) y con una extraordinaria reduccin de costes en antibiticos intramamarios (disminucin de la media mensual, que se hallaba por encima de 1.000 , a menos de la mitad). As pues, se puede concluir que realmente existi una disminucin de la gravedad de las mastitis clnicas y tambin de las subclnicas (RCS > 250.000). En lo referente a la aparicin de nuevos casos, no podemos afirmar cul fue su evolucin, sabiendo slo que la incidencia en el total de los animales vacunados fue del 20%. Para reforzar estas conclusiones sera interesante que se efectuasen nuevos estudios para evaluar la relacin coste/eficacia de la vacuna, con un nmero mayor de animales y durante un tiempo ms prolongado.

5
4.000 3.500 3.000 2.500 2.000 1.500 1.000 500 0
Febrero Enero Marzo

| Centro Veterinario de Aveiro, Portugal

Septiembre

Diciembre

Octubre

Jan Fev Mar Abr Mai Jun Jul Ago Set Out Nov Dez Jan Fev

Grca 5. Gasto en medicamentos intramamarios en 2009

1.600 1.400 1.200 1.000 800 600 400 200

Septiembre

Abr

Mai

Jun

Jul

Ago

Set

Out

Nov

Grca 6. Coste medio mensual con uso de intramamarios: ~1.250

1. Auldist, M.J.; Hubble, I.B. 1998. Effects of mastitis on raw milk and dairy products. The Australian Journal of Dairy Technology, 53: p. 28-36. 2. Bradley, A.J.; Green, M.J. 2000. A study of the incidence and signicance of intramammary enterobacterial infeccion acquired during the dry period. J. Dairy Sci.; 83: 1957-1965 3. Brito, J. R. F.; Caldeira, G. A. V.; Verneque, R. S. et al.; 1997. Sensibilidade e especicidade do Califrnia Mastitis Test como recurso diagnstico da mastite sub-clnica. Em relao contagem de clulas somticas. Pesquisa Veterinria Brasileira, v.17 (2): p.49-53, abr./jun. 4. Erskine, R. J., J. H. Kirk, J. W. Tyler, and F. J. DeGraves. 1993. Advances in the therapy for mastitis. Vet. Clin. N.Am. Food Anim. Pract. 9:499-517 5. Green, M. J. ; Green, L. E. ; Medley, G. F.; Schukken, Y. H.; Bradley, A. J. 2002. Inuence of Dry Period Bacterial Intramammary Infection on Clinical Mastitis in Dairy Cows; J Dairy Sci, October1; 85(10): 2589 - 2599.

6. Larry Smith, K.; Hogan, J. S.; 1998. Milk quality A worldwide perspective. In: National Mastitis Council, 37, Madison. Proceedings... Madison: NMC, p. 3-9, 1998. 7. Natzke, R. P. 1981. Elements of mastitis control. J. Dairy Sci. 64:1431 1442. 8. Oliver, S. P .; Calvinho, L. F. 1995. Inuence of inammation on mammary gland metabolism and milk composition. In: 2nd International Workshop on the Biology of Lactation in Farm Animals, J. Animal Sci. 73:18-33. 9. Sharma, M. 2009. Recent trends in mastitis management. Publication date 2/01/2009 in www.engormix.com 10. Venturini1, T.; Api1, I.; Restelatto, R.; Paixo, S.J.; Ziech, M.F.; Montagner, M.M.; Ocorrncia de mastite subclnica em vacas das raas Holands e Jersey; III Seminrio: Sistemas de Produo Agropecuria - Medicina Veterinria.
Laboratorios Hipra, S.A. Avd. la Selva, 135 17170 Amer (Girona) Spain

Tel.:(34) 972 43 06 60 Fax: (34) 972 43 06 61 hipra@hipra.com www.hipra.com

Diciembre

Octubre

Junio

Abril

Julio

Agosto

Noviembre

Mayo

Noviembre

Dez

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Agosto

Enero

Mayo

Junio

Julio

Abril

Startvac

Biblioteca

Aspectos generales del biolm e implicacin en la mastitis de rumiantes


Antoni Prenafeta
antoni.prenafeta@hipra.com Dpto. I+D, HIPRA. Avda. La Selva, 135. Amer (Girona)

1. El biolm como mecanismo de supervivencia

2. El biolm en ambientes naturales y su implicacin en las infecciones


La formacin de biolm en ambientes naturales es ubicua, encontrndose este tipo de estructuras biolgicas en el fondo de ros o en la supercie de aguas estancadas; en ambientes extremos, desde emanaciones de aguas termales hasta glaciares de la Antrtida; en duchas o baos, favorecido por el ambiente hmedo y clido; en el interior de conductos de distribucin de agua potable o tuberas de gas y aceite industrial; en simbiosis con plantas, etc. Por otro lado, la formacin de biolm est implicada en la patognesis de muchas infecciones humanas. La adhesin de Staphylococcus o Streptococcus a las protenas de la membrana basal del epitelio cardaco daado es una causa de endocarditis. En el caso de pacientes de brosis qustica, la disminucin de la actividad ciliar de la mucosa respiratoria y la hiperviscosidad de la secrecin mucosa favorecen la colonizacin y la formacin de biolm de Staphylococcus aureus, Haemophilus inuenzae y Pseudomonas aeruginosa. Otro ejemplo bien conocido de biolm es la placa subgingival de Streptococcus mutans. La formacin de biolm tambin se ha descrito en cepas de Escherichia coli uropatgenas. Finalmente, el biolm es un importante factor de virulencia implicado en el desarrollo de infecciones relacionadas con el implante de catteres intravenosos, vlvulas cardacas, prtesis, catteres peritoneales de dilisis, tubos endotraqueales causadas principalmente por la adhesin de S. aureus y Staphylococcus epidermidis a la supercie de estos implantes (Hall-Stoodley et al., 2004). La contribucin del biolm a la patognesis se atribuye a su resistencia a los antibiticos y a la fagocitosis, facilitando de este modo la cronicacin de las infecciones. El desprendimiento de clulas bacterianas del biolm es causa de septicemia y nuevas colonizaciones, mientras que la produccin de endotoxinas y exotoxinas producen inamacin y lesiones tisulares. Uno de las dicultades para eliminar las infecciones relacionadas con la produccin de biolm es la resistencia a los antibiticos. En la Tabla 1 se puede apreciar que la muerte bacteriana dentro del biolm requiere una mayor cantidad de antibitico que la concentracin con actividad bactericida en las clulas bacterianas planctnicas (libres o en suspensin).

l biolm puede ser denido, en trminos generales, como una comunidad microbiana, dinmica y bien estructurada, adherida a una supercie slida y englobada en una matriz extracelular. La capacidad de formar biolm es una caracterstica muy extendida entre los organismos procariotas, tanto en el dominio Archea como Bacteria, hallndose en el registro fsil formaciones con una antigedad de hasta 3.200 millones de aos. Desde el punto de vista evolutivo, probablemente la formacin de biolm conri una ventaja adaptativa al proporcionar homeostasis frente a las condiciones extremas y uctuantes de la tierra primitiva (temperaturas, pH y exposicin a radiaciones UV). Adems de ofrecer proteccin ante factores ambientales fsico-qumicos, el biolm facilita las funciones catalticas extracelulares (al mantener las clulas prximas entre ellas) y favorece la concentracin de nutrientes en la supercie (Hall-Stoodley et al., 2004). La resistencia del biolm a los agentes antimicrobianos (por ejemplo los antibiticos) puede ser debida a la dicultad en la penetracin del agente antimicrobiano a travs de la matriz extracelular, a la disminucin de la tasa de multiplicacin de las clulas del biolm (los antibiticos -lactmicos son efectivos en las clulas Gram-positivas que se dividen activamente) o a la existencia de fenotipos resistentes entre una poblacin hetereognea genticamente.

Aspectos generales del Biolm e implicacin en la mastitis de rumiantes Antoni Prenafeta

| antoni.prenafeta@hipra.com | I+D., HIPRA. Avda. La Selva, 135. Amer (Girona)

Tabla 1. Sensibilidad a los antibiticos de distintos gneros bacterianos creciendo en forma planctnica (libre o en suspensin) o en biolm (segn Donlan and Costerton, 2002). MIC o MBC del Concentracin efectiva Microorganismo Antibitico crecimiento contra el crecimiento planctnico (g/ml) en biolm (g/ml) S. aureus Vancomicina 2 (MBC) 20 NCTC 8325-4 Pseudomonas aeruginosa ATCC Imipenem 1 (MIC) 1024 27853 E. coli Ampicilina 2 (MIC 512 ATCC 25922 P. pseudomallei Ceftazidima 8 (MBC) 800 Streptococcus Doxiciclina 0,063 (MIC) 3,15 sanguls 804

MIC: concentracin mnima inhibitoria. MBC: concentracin mnima bactericida.

3. Desarrollo del biolm de S. aureus

La formacin de biolm de S. aureus es un proceso bien caracterizado que ocurre en dos pasos. En primer lugar las clulas bacterianas se adhieren a una supercie de manera especca o mediante interacciones fsico-qumicas. En la adhesin especca estn involucradas protenas de S. aureus que se unen a factores de la matriz extracelular del husped, tales como las protenas de unin a la bronectina (FnBPA, FnBPB) (ONeill et al., 2008), protenas de unin al bringeno (ClfA, ClfB) (McDevitt et al., 1994), protena de unin al colgeno (Can) (Patti et al., 1992) o la protena de unin a la sialoprotena del hueso (Bbp) (Tung et al., 2000). En un segundo paso, las clulas bacterianas adheridas se multiplican, interaccionan entre ellas y se acumulan en capas, quedando envueltas por una matriz extracelular secretada por la propia clula bacteriana (Figura 1). El principal constituyente de la matriz extracelular y responsable de la interaccin intercelular de S. aureus y S. epidermidis es el exopolisacrido poli-N-acetil -1,6glucosamina (PNAG), sintetizado por los enzimas codicados en el opern icaADBC (Cramton et al., 1999). Asimismo, se han descrito algunas protenas de S. aureus que tambin pueden estar implicadas en la interaccin intercelular y en la formacin de biolm: Bap (Cucarella et al., 2001), protena A (Merino et al., 2009), SasC (Schroeder et al., 2009) y SasG (Corrigan et al., 2007).

4
2

4. Implicacin del biolm en las mastitis de rumiantes causadas por S. aureus


En las mastitis bovinas y ovinas causadas por estafilococos, las clulas bacterianas se adhieren a las clulas epiteliales de la glndula mamaria y crecen formando colonias envueltas en una matriz extracelular, constituyendo el biofilm. Debido a su tamao, el biofilm no es susceptible de ser fagocitado por los neutrfilos polimorfonucleares o macrfagos y, por otro lado, confiere resistencia a los antibiticos, promoviendo de este modo la cronificacin de la infeccin. Distintos estudios demuestran la presencia del opern icaADBC, que codifica los enzimas responsables de la biosntesis del exopolisacrido PNAG, principal componente de la matriz extracelular del biofilm, en un 94,36 % (Cucarella et al., 2004) o un 100 % (Vasudevan et al., 2003) de los S. aureus aislados de mastitis bovina. Aparte de esta capacidad gentica, en diversos trabajos se ha demostrado tambin la capacidad de cepas aisladas de mastitis bovina para formar biofilm in vitro. En este sentido, Vasudevan et al. (2003) determinaron que un 91 % de los aislados de S. aureus de mastitis bovina tenan la capacidad de formar biofilm in vitro mediante la determinacin de la morfologa colonial en placas de agar con Rojo Congo (Figura 2), mientras que un 69 % mostraban adherencia en microplaca (Figura 3). En otro estudio, Oliveira et al. (2007) caracterizaron como productores de biofilm in vitro a un 80,8 % de los aislados de S. aureus y un 75,9 % de los aislados de S. epidermidis de mastitis bovina. Dhanawade et al. (2010) determinaron que el 48,03 % de las cepas de S. aureus aisladas de mastitis bovina tenan la capacidad de formar biofilm in vitro segn la prueba de cultivo en placas de agar con Rojo Congo. Si bien parece clara la capacidad gentica y la produccin in vitro de biofilm en los aislados de S. aureus de mastitis bovina, existe alguna evidencia de la produccin de biofilm de S. aureus en la glndula mamaria? Watson et al. (1989) observaron, mediante microscopa electrnica, la produccin de una matriz extracelular

Figura 1. Micrografa mediante microscopio electrnico de rastreo de un biolm de S. aureus creciendo in vitro (www.erc.montana.edu).

Figura 2. Determinacin de la capacidad de formar biolm mediante la caracterizacin de la morfologa colonial en placas de agar con Rojo Congo. Los aislados slime positivos o productores de biolm forman colonias rugosas y de contorno irregular en placas de Rojo Congo (A), mientras que los aislados slime negativos o no productores de biolm forman colonias brillantes, lisas y de contorno bien denido (B).

5.Vacunas frente al biolm de S. aureus para combatir la mastitis en rumiantes


Teniendo en cuenta que la formacin de biolm es un importante factor de virulencia de S. aureus en la patognesis de la mastitis en ovejas y vacas, se ha ensayado la ecacia de distintas vacunas experimentales, observndose distintos grados de proteccin. Watson et al. (1993) y Nordhaug et al. (1994) utilizaron vacunas basadas en clulas enteras e inactivadas de S. aureus envueltas en su propia matriz extracelular denominada por ellos como pseudocpsula. Las vacunas experimentales en el estudio de Amorena et al. (1994) consistan en una mezcla de slime (matriz de exopolisacrido del biolm) en liposomas, toxoide y distintos aislados de S. aureus inactivados. Ms recientemente, sabiendo que el exopolisacrido PNAG es el principal componente de la matriz extracelular del biolm de S. aureus, Prez et al. (2009) realizaron una prueba de inmunizacin e infeccin experimental intramamaria con una cepa virulenta de S. aureus en ovejas, usando como vacunas bacterinas (clulas bacterianas enteras e inactivadas), extracto crudo, PNAG puricado y distintos adyuvantes. Los resultados de este estudio pusieron de maniesto que las bacterinas de aislados altamente productores de biolm indujeron los ttulos ms altos de anticuerpos especcos frente a PNAG y conrieron una mayor proteccin frente a la infeccin experimental intramamaria, en comparacin con las vacunas que contenan bacterinas de cepas poco productoras de biolm, extracto crudo o PNAG puricado. En el estudio realizado por Prenafeta et al. (2009) se pone de maniesto el papel de los anticuerpos especcos anti-SAAC en la proteccin frente a la mastitis causada por S. aureus en una infeccin experimental en vacas. SAAC es una fraccin celular aislada de cepas de S. aureus productoras de biolm. La presencia de este componente extracelular se ha determinado en todos los aislados de

Figura 3. Anlisis de la produccin de biolm en microplaca (test de adherencia). Despus de un perodo de incubacin del aislado de S. aureus en los pocillos de la microplaca, la placa se vaca, se lavan los pocillos, se jan las clulas que se hayan adherido, se tien y se determina la densidad ptica (DO) de los pocillos mediante un lector de placas de ELISA. Si el aislado form biolm durante el crecimiento, la DO de los pocillos es elevada (las A, B y C), mientras que la DO no es signicativa si el aislado no produjo biolm (las D, E y F), en comparacin con los pocillos control negativo no inoculados (las G y H).

de polisacrido (denominada pseudocpsula por los autores) en clulas de S. aureus aisladas directamente de la leche de ovejas y vacas con mastitis clnica. Poco ms tarde, Baselga y colaboradores (1993) demostraron la produccin de una matriz de exopolisacrido, en clulas de S. aureus, mediante anlisis inmunohistoqumico de muestras de tejido parenquimal de la glndula mamaria de ovejas infectadas experimentalmente con S. aureus por va intramamaria. La expresin de exopolisacrido in vivo tambin se ha demostrado indirectamente al observar la produccin de anticuerpos especficos frente a PNAG (Prez et al ., 2009) y frente a SAAC ( Slime Associated Antigenic Complex ; Prenafeta et al ., 2009) en ovejas y vacas respectivamente infectadas experimentalmente con S. aureus por va intramamaria.

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S. aureus caracterizados como productores de slime en placas de agar con Rojo Congo (Figura 4) y su produccin est directamente relacionada con la formacin de biolm in vitro (Tabla 2). La caracterizacin qumica del SAAC revel que est compuesto por un 58 % (p/v) de polisacrido y un 42 % (p/v) de protena. Entre la fraccin polisacardica, se hall un contenido del 6,1 % de glucosamina y galactosamina, pudiendo corresponder estos azcares a formas deacetiladas del PNAG. Cabe destacar, que los anticuerpos frente a las formas deacetiladas del PNAG son los que presentan una mayor capacidad de opsonizacin (unin especca de los anticuerpos al antgeno) y proteccin frente a las infecciones de S. aureus (Cerca et al., 2007). Tabla 2. Determinacin del fenotipo productor de slime (+/-), capacidad de formacin de biolm en microplaca (DO del biolm en el ensayo) y produccin de SAAC (mg SAAC / mg protena total) en aislados de S. aureus. La correlacin entre la produccin de SAAC y la capacidad de formar biolm en microplaca es signicativa (R = 0,882). Aislado Fenotipo DO en el ensayo S. aureus productor de slime de biolm (DE1) SA1H + 1,444 (0,04) SA2H + 1,597 (0,02) SA3H + 0,385 (0,03) SA4H + 1,499 (0,04) SA5H + 1,521 (0,03) SA6H 0,088 (0,01) SA7H + 1,030 (0,02) SA8H 0,388 (0,06) SA9H 0,200 (0,02) SA10H 0,145 (0,01) SA11H 0,130 (0,01) SA12H 0,235 (0,01) SA13H + 0,632 (0,02)
1 2

Produccin de SAAC (DE1) 54,0 (0,012) 63,3 (0,015) 20,8 (0,011) 60,5 (0,012) 27,6 (0,015) 2,2 (0,011) 26,5 (0,012) Nd2 Nd2 0,1 (0,010) Nd2 Nd2 6,9 (0,013)

DE: desviacin estndar de la media. Nd.: no detectado.

El principal mecanismo de defensa de la glndula mamaria frente a las infecciones es la opsonizacin mediada por anticuerpos y la consiguiente fagocitosis por los neutrlos polimorfonucleares. No obstante, no se puede descartar que los anticuerpos especcos frente al biolm acten adems de una manera directa en la proteccin, unindose a las clulas bacterianas e impidiendo la adherencia al epitelio y la interaccin intercelular que lleva a la formacin del biolm. En este sentido, en un estudio in Vitro, se ha demostrado que los anticuerpos anti-SAAC son capaces de inhibir la formacin de biolm sin la presencia de neutrlos (en la Figura 5 se muestran los resultados de un estudio realizado por el autor). Una de las ventajas que ofrece el uso de PNAG o el componente SAAC como antgenos vacunales, a diferencia de los antgenos capsulares, es que no se han descrito serotipos entre aislados de S. aureus. Por lo tanto, los anticuerpos inducidos por la vacunacin con estos antgenos conere proteccin cruzada independientemente del tipo capsular de S. aureus. STARTVAC (HIPRA) es la primera vacuna frente a la mastitis bovina registrada en toda la Unin Europea va EMEA (Agencia Europea del Medicamento). Esta vacuna consta de clulas inactivadas de una cepa de S. aureus altamente productora de biolm y con un alto

Figura 4. Anlisis por inmunoelectroforesis en gel de agarosa de extractos bacterianos de una cepa de S. aureus productora de biolm (A: pocillos 1 y 3) y una cepa no productora (B: pocillos 4 y 6), usando un suero policlonal contra la bacteria entera (lneas 2 y 5). La echa muestra la lnea de inmunoprecipitacin correspondiente al antgeno SAAC, presente nicamente en cepas caracterizadas como productoras de exopolisacrido en placas de agar con Rojo Congo.

contenido de SAAC asociado. Asimismo, la vacuna contiene la cepa E. coli J5 inactivada y un adyuvante apropiado para potenciar la respuesta inmunolgica. Tanto en las pruebas preclnicas como en las pruebas clnicas realizadas durante el desarrollo de la vacuna, la inmunizacin con STARTVAC indujo ttulos elevados y duraderos de anticuerpos anti-SAAC en sangre y en leche. En las pruebas clnicas realizadas con STARTVAC en 6 granjas (198 vacas vacunadas con STARTVAC y 188 vacas control no vacunadas) se demostr que la vacunacin redujo signicativamente la incidencia de mastitis clnica y subclnica y la severidad de los sntomas clnicos de mastitis causados por S. aureus, coliformes o estalococos coagulasa negativos (SCN) (reduccin en el recuento de clulas somticas,

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disminucin de los signos clnicos y reduccin del tratamiento con antibiticos en los animales infectados). Adicionalmente, la vacunacin con STARTVAC increment la tasa de curacin espontnea en las vacas infectadas. En este sentido, STARTVAC es la primera vacuna registrada en todo el mundo que conere proteccin frente a la mastitis causada por estalococos coagulasa negativos. Los anticuerpos frente al exopolisacrido PNAG del SAAC, inducidos por la inmunizacin con STARTVAC, podran ser uno de los factores responsables de conferir proteccin cruzada frente a infecciones de SCN.

6. Perspectivas del biolm en la mastitis


La capacidad de formar biolm es un importante factor de virulencia de S. aureus implicado en las mastitis ovinas y bovinas. A pesar que otros factores de virulencia pueden estar involucrados en la patognesis de la mastitis, los anticuerpos especcos frente PNAG o SAAC pueden impedir el establecimiento de la infeccin de S. aureus en la glndula mamaria, unindose a la matriz extracelular de exopolisacrido (antes que se constituya el biolm) y facilitando, de este modo, la fagocitosis mediada por neutrlos polimorfonucleares y la eliminacin de la infeccin. Desde este punto de vista, la vacunacin con STARTVAC ofrece una opcin para la disminucin de las infecciones intramamarias de S. aureus y SCN.

1,400

a
1,200

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c c

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S. aureus

Ac -

Ac + Cultivo

Control Biolm

Figura 5. Inhibicin de la formacin de biolm de S. aureus en microplaca mediada por anticuerpos anti-SAAC. En el grco se representa la DO del crecimiento bacteriano al nalizar la incubacin de la microplaca (en azul) y la DO del biolm despus de realizar la tincin de las clulas adheridas (en azul claro). En este estudio se incub un cepa de S. aureus productora de biolm sin presencia de anticuerpos (columnas S. aureus), en presencia de suero sin anticuerpos anti-SAAC (columnas Ac-) o en presencia de un suero hiperinmune con anticuerpos anti-SAAC (columnas Ac+). Las columnas Control corresponden a los pocillos con medio de cultivo no inoculados. Las columnas con la misma letra no presentan diferencias signicativas entre ellas (P < 0,05). Las barras de error indican la desviacin estndar de la media.

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n
Bibliografa

1. Amorena, B., Baselga, R. und Albizu, I., 1994. Use of liposome-immunopotentiated exopolysaccharide as a component of an ovine mastitis staphylococcal vaccine. Vaccine. 2:243-249. 2. Baselga, R., Albizu, I., De La Cruz, M., Del Cacho, E., Barberan, M. und Amorena, B., 1993. Phase variation of slime production in Staphylococcus aureus: implications in colonization and virulence. 3. Cerca, N., Jefferson, K.K., Maira-Litrn, T., Pier, D.B., Kelly-Quintos, C., Goldmann, D.A., Azeredo, J. und Pier, G.B., 2007. Molecular basis for preferential protective efcacy of antibodies directed to the poorly acetylated form of staphylococcal poly-N-acetyl--(1-6)-glucosamine. Infect. Immun. 75:3406-3413. 4. Corrigan, R.M., Rigby, D., Handley, P. und Foster, T.J., 2007. The role of Staphylococcus aureus surface protein SasG in adherence and biolm formation. Microbiology. 153:2435-2446. 5. Cramton, S.E., Gerke, C., Schnell, N.F., Nichols, W.W. und Gtz, F., 1999. The intercellular adhesion (ica) locus is present in Staphylococcus aureus and is required for biolm formation. Infect. Immun. 67:5427-5433. 6. Cucarella, C., Tormo, M.A., beda, C., Trotonda, M.P., Monzn, M., Peris, C., Amorena, B., Lasa, I. und Penads, J.R., 2004. Role of biolm-associated protein Bap in the pathogenesis of bovine Staphylococcus aureus. Infect. Immun. 72:2177-2185. 7. Dhanawade, N.B., Kalorey, D.R., Srinivasan, R., Barbuddhe, S.B. und Kurkure, N.V., 2010. Detection of intercellular adhesion genes and biolm production in Staphylococcus aureus isolated from bovine subclinical mastitis. Vet. Res. Commun. 34:81-9. 8. Donlan, R.M. und Costerton, J.W., 2002. Biolms: survival mechanisms of clinically relevant microorganisms. Clinical Microbiology Reviews. 15:167-193. 9. Hall-Stoodley, L., Costerton, J.W. und Stoodley, P., 2004. Bacterial biolms: from the natural environment to infectious diseases. Nature Reviews Microbiology. 2: 95-108. 10. Merino, N., Toledo-Arana, A., Vergara-Irigaray, M., Valle, J., Solano, C., Calvo, E., Lpez, A.J., Foster, T.J., Penads, J.R. und Lasa, I. 2009. Protein A-mediated multicellular behaviour in Staphylococcus aureus. J. Bacteriol. 191:832-843. 11. McDevitt, D., Francois, P., Vaudaux, P. und Foster, T.J., 1994. Molecular characterization of the clumping factor (brinogen receptor) of Staphylococcus aureus. Mol. Microbiol. 11:237-248. 12. Nordhaug, M.L., Nesse, L.L., Norcross, N.L. und Gudding, R., 1994. A eld trial with an experimental vaccine against Staphylococcus aureus mastitis in cattle. 1. Clinical parameters. J. Dairy Sci. 77:1267-1275.

Biblioteca Startvac

13. Oliveira, M., Nunes, S.F., Carneiro, C., Bexiga, R., Bernardo, F. und Vilela, C.L., 2007. Time course of biolm formation by Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis mastitis isolates. Vet. Microbiol. 124:187-191. 14. ONeill, E., C. Pozzi, P. Houston, D. Smyth, H. Humphreys, D.A. Robinson, A. Loughman, T. J. Foster und J.P. OGara., 2008. A novel Staphylococcus aureus biolm phenotype mediated by the bronectin-binding proteins, FnBPA and FnBPB. J. Bacteriol. 190:3835-50. 15. Patty, J.M., Jonsson, H., Guss, B., Switalski, L.M., Wiberg, K. et al. 1992. Molecular characterization and expression of a gene encoding a Staphylococcus aureus collagen adhesion. J. Biol. Chem. 267:1766-1772. 16. Prez, M.M., Prenafeta, A., Valle, J., Penads, J., Rota, C., Solano, C., Marco, J., Grill, M.J., Lasa, I., Irache, J.M., Maira-Litran, T., Jimnez-Barbero, J., Costa, L., Pier, G.B., de Andrs, D., Amorena, B., 2009. Protection from Staphylococcus aureus mastitis associated with poly-N-acetyl -1,6 glucosamine specic antibody production using biolm-embedded bacteria. Vaccine. 27, 2379-2386. 17. Prenafeta, A., March, R., Foix, A., Casals, I. und Costa, LL., 2009. Study of the humoral immunological response after vaccination with a Staphylococcus aureus biolm-embedded bacterin in dairy cows: possible role of the exopolysaccharide specic antibody production in the protection from Staphylococcus aureus induced mastitis. Vet. Immun. Immunopathol. 134:208-217. 18. Schroeder, K., Jularic, M., Horsburgh, S.M., Hirschhausen, N., Neumann, C., Bertling, A., Schulte, Foster, S., Kehrel, B.E., Peters, G. und Heilmann, C., 2009. Molecular characterization of a novel Staphylococcus aureus surface protein (SasC) involved in cell aggregation and biolm accumulation. PLoS ONE. 4(10):7567. 19. Tung, H., Guss, B., Hellman, U., Persson, L., Rubin, K. et al., 2000. A bone sialoprotein-binding protein from Staphylococcus aureus: a member of the staphylococcal Sdr family. Biochem J. 345(3):611-619. 20. Vasudevan, P., Nair, M.K.M., Annamalai, T. and Venkitanarayanan, K.S., 2003. Phenotypic and genotypic characterization of bovine mastitis isolates of Staphylococcus aureus for biolm formation. Vet. Microbiol. 92:179185. 21. Watson, D.L. und Watson, N.A., 1989. Expression of a pseudocapsule by Staphylococcus aureus: inuence of cultural conditions and relevance to mastitis. Research in Veterinary Science. 47:152-157. 22. Watson, D.L. und Davies, H.I., 1993. Inuence of adjuvants on the immune response of sheep to a novel Staphylococcus aureus vaccine. Vet. Microbiol. 34:139-153.
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Revisin Bibliogrca: Mamitis bovina causada por Estalococos Coagulasa Negativos


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1. Introduccin

no de los grupos de bacterias que provocan la mamitis son los denominados estalococos coagulasa negativos (ECN). Estas bacterias son de elevado inters debido a que actualmente son los microorganismos ms frecuentemente aislados de los rebaos en vacas y novillas, estando consideradas en la actualidad como patgenos emergentes de la mamitis bovina (Pyrla S. et al. 2009). Normalmente los ECN se encuentran en la piel sana del pezn y en las manos del ordeador. A menudo son denominados microorganismos oportunistas, ya que habitan zonas desde donde les es sencillo colonizar el canal del pezn y penetrar hasta los tejidos secretores. La implementacin de programas de control de mastitis durante los ltimos 30 aos condujo a una reduccin de la incidencia general de mastitis clnica en la mayora de rebaos. En algunos casos, la disminucin lleg al 90%. Mientras que la enfermedad clnica causada por patgenos mayores, como los Staphylococcus aureus y Streptococcus agalactiae descendi signicativamente, patgenos menores como los ECN han ido en aumento tomando cada vez una mayor importancia.

Las vacas y las novillas pueden ser infectadas por ECN antes del parto. En la lactacin, la infeccin debida a ECN se asocia a un aumento en el recuento de clulas somticas (RCS), que provoca prdidas econmicas por la penalizacin en el precio de la leche. La prevalencia de las mamitis por ECN es ms elevada en primparas. Generalmente suelen ser infecciones leves y se limitan a flculos en la leche debidos a cambios locales en la ubre. Muchas de estas infecciones incluso se curan espontneamente; pero puntualmente, tambin se observan animales con infecciones intramamarias por ECN con sntomas a nivel sistmico y otros con infecciones persistentes que, si no se interviene, pueden tener una duracin de varios meses. Hay ms de 50 especies de estafilococos coagulasa negativos, y quizs sea un error observar su comportamiento como grupo y no como especies individuales. Aunque no se consideran un grupo de bacterias tan patgenas como los principales patgenos causantes de mamitis, su patogenicidad y la resistencia a tratamientos antimicrobianos vara dependiendo de la especie de ECN.

Algunos investigadores los consideran patgenos secundarios en ubre, pero la importancia de estas infecciones intramamarias son an tema de debate, ya que, por otro lado, otros trabajos les otorgan gran importancia en la etiologa de la mamitis subclnica o clnica y en el aumento de clulas somticas de las vacas afectadas.

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2. Etiologa y epidemiologa

Los ECN son cocos Gram positivos que habitan tanto en el exterior como en el interior de las ubres infectadas. Muchas veces se les denomina oportunistas de la ora de la piel porque pueden ser aislados de la piel del pezn, del canal del pezn, la vagina, el pelaje y las fosas nasales. Este grupo de bacterias incluye ms de 50 especies y subespecies (Pyrla S. et al. 2009). Las bacterias ms comunes de ECN aisladas de mamitis bovina son Staphylococcus chromogenes, Staphylococcus epidermitis, Staphylococcus hyicus y Staphylococcus simulans. Especies como Staphylococcus epidermitis, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus simulans y Staphylococcus warneri pertenecen a la ora bacteriana normal de la piel del pezn; mientras otras, como Staphylococcus xylosus y Staphylococcus sciuri, parecen provenir del ambiente. Staphylococcus chromogenes puede colonizar la piel del pezn y tambin otros lugares del cuerpo del animal como el pelaje, la vagina y el canal de pezn. Parece ser que hay diferencias en cuanto a la patogenicidad de las distintas especies de ECN que se investigan mediante tcnicas de diagnstico molecular (Zadoks and Schukken, 2006). Encontramos especies con diferente susceptibilidad antimicrobiana y diversos factores de virulencia de ECN aislados de mamitis bovina (Taponen S. et al. 2009). La incidencia de nuevas infecciones es mxima durante el perodo de vaca seca y antes del parto; por lo tanto, el porcentaje de cuartos infectados es alto en el momento del parto. La prevalencia de ECN es ms alta en primparas que en vacas adultas. Desafortunadamente, muchos productores creen errneamente que sus novillas estn sanas, y la presencia de mastitis no se observa hasta el momento del parto. La recra representa la futura lactacin, y el cuidado de la salud de ubres es bsico para asegurar la rentabilidad de las explotaciones lecheras. Muchas de las infecciones intramamarias causadas por ECN curan espontneamente y la prevalencia decrece a medida que avanza la lactacin. Aunque por lo general las infecciones por ECN suelen ser leves o de tipo subclnico, se ha demostrado tambin que pueden causar procesos ms graves y persistentes, provocando un aumento en el recuento de clulas somticas y una disminucin en la calidad y produccin de

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la leche debido al dao causada al tejido mamario (Taponen S. et al. 2009; Gillespie BE et al. 2009).

3. Caractersticas de las infecciones por ECN

Suelen ser infecciones leves y causar mamitis subclnicas. Aumento en el RCS. Pueden provocar procesos clnicos persistentes que no responden al tratamiento antibitico. Aspecto de la leche normal, pero puede provocar infecciones intramamarias con alteraciones en la leche (flculos). Alta prevalencia en primparas (sobre todo en el perodo alrededor del parto). Mayor incidencia de nuevas infecciones en el perodo seco de la vaca. No suele haber afectacin del estado general del animal, ni signos sistmicos graves. Elevada tasa de curacin espontnea.

aureus, y la mayora de especies de CNS son susceptibles a los antibiticos comnmente utilizados para el tratamiento de mamitis. El tratamiento mediante la terapia intramamaria en el periparto y en el secado es ecaz para poder controlar las infecciones debidas a CNS. Sin embargo, no siempre es efectivo el tratamiento. Segn el National Mastitis Council (NMC), podemos clasicar a estos grmenes como Staphylococcus Coagulase Negatives novobiocina sensibles y Staphylococcus Coagulase Negative novobiocina resistentes.

Tratamiento de mamitis clnicas debidas a Staphylococcus Coagulase Negative (CNS) novobiocina sensibles: Penicilinas y/o Penetamato o Cefalosporinas (va intramamaria y/o parenteral). Tratamiento de mamitis debidas a CNS novobiocina resistentes: El tratamiento no es necesario ya que presentan curaciones espontneas. Tratamiento antibitico de secado: Penicilinas y/o Penetamato o Cefalosporinas

4. Diagnstico
Una vez detectados los cuarterones con elevados recuentos celulares, o bien que presentan mamitis clnicas, se deben recoger muestras de leche de forma adecuada y asptica para su posterior procesado en el laboratorio. El anlisis microbiolgico es la prueba ms importante para el diagnstico en los programas de control de mamitis. La metodologa habitual incluye la siembra en medios de crecimiento general y especcos para los principales grupos etiolgicos. Se incuban a 37C, realizando lecturas a las 24 y 48 horas. El Agar Baird Parker es el medio de cultivo especco para estalococos. Permite diferenciar entre CNS y Staphylococcus aureus. La identicacin de las diferentes especies de CNS es importante para poder determinar su patogenicidad y desarrollar prcticas de manejo especcas para prevenir la mastitis. El problema es que la identicacin de ste grupo de organismos es difcil y relativamente costosa. Por esta razn, muchos laboratorios no incluyen la identicacin de especies de CNS en sus procedimientos de rutina.

5. Tratamiento
Generalmente se asume que el porcentaje de curacin espontnea de CNS es elevado Los CNS responden mucho mejor a la terapia antimicrobiana que los Staphylococcus

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6. Medidas de control
Se aplicarn medidas de control en las vacas en lactacin, en las vacas secas y tambin a las novillas de recra. La recra puede ser una fuente de infeccin en la lechera, particularmente bajo los sistemas de manejo actuales, donde las novillas son transportadas y mezcladas varias veces antes de llegar a la lechera donde van a parir (Oliver y Nickerson). Generalmente, en las explotaciones no se presta demasiada atencin a las novillas, y tampoco al periodo seco de la vaca; pero si tenemos en cuenta que las novillas forman aproximadamente una tercera parte del rebao cada ao, y que junto con las vacas secas son la inversin de futuro de nuestra explotacin, la salud de la ubre y el buen funcionamiento de las novillas y vacas secas debera ser la prioridad nmero uno. Las medidas de control deben disminuir el contacto del animal con los organismos que provocan mastitis mucho antes del parto. Manejo Separar las terneras en boxes individuales: evitar que se mamen unas a otras, ya que pueden transmitir

bacterias y causar infecciones persistentes que se establecen muy temprano en la vida del animal. No alimentar a las novillas lactantes con leche infectada: evitar la transmisin de agentes infecciosos de las vacas adultas a las becerras. Separar las novillas de las vacas antes del parto. Proporcionar reas de parto limpias para las vacas y tambin para las novillas. Ambiente Control de moscas: las moscas pueden ser vectores de agentes patgenos y tambin crean una lesin en la punta del pezn, lo cual permite a las bacterias como Staphylococcus aureus o bien, CNS establecerse en la piel del pezn y entrar por el oricio del mismo. Asegurar un ambiente seco y limpio. Tambin para la recra. Programa vacunal No podemos asegurar una buena prevencin y control de la salud de las ubres de novillas y vacas de la explotacin sin tener en cuenta un buen Programa de Vacunacin. Es importante para protegerse contra la incidencia y la severidad de la mastitis causada

por los microorganismos medioambientales. La llegada al mercado de la primera vacuna registrada a nivel mundial contra CNS puede ser una buena herramienta para incrementar la inmunizacin de las explotaciones. El protocolo a base de dos aplicaciones antes del parto y una despus ayuda a disminuir la incidencia y la severidad en el momento de ms prdidas de una explotacin Terapia antibitica de secado y pautas generales Administrar una correcta terapia antibitica de secado en funcin del perl bacteriolgico de la explotacin. Corregir la rutina de ordeo. Realizar una correcta desinfeccin de la punta del pezn mediante baos desinfectantes preordeo y postordeo. Eliminar animales crnicos. Garantizar la higiene de los tratamientos de secado. Vericar el estado de los alimentos y del agua de bebida. Utilizar y mantener adecuadamente la mquina de ordeo. Cuidar especialmente el estado de las camas y las zonas de paso en el secado y en la lactacin.

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Bibliografa

Ecacia en el posparto gracias a su pauta vacunal Con el uso de dos aplicaciones preparto (a los 45 das y 10 das antes del parto) y una aplicacin posparto (a los 52 das), se reducen las mamitis en el momento de ms riesgo de infecciones y prdidas econmicas.

Biblioteca Startvac

1. John R.Middleton, Christopher D.Luby, D.Scott Adams, 2009 Efcacy of vaccination against staphylococcal mastitis: A review and new data 2. Schukken, Y.H., et al., 2009 CNS mastitis: Nothing to worry about? 3. Stephen C.Nickerson, 2008 Control of heifer mastitis: Antimicrobial treatment-An overview 4. Suvi Taponen, Satu Pyrl, 2009 Coagulase-negative staphylococci as cause of bovine mastitis-Not so different from Staphylococcus aureus? 5. Satu Pyrl, Suvi Taponen, 2009 Coagulase-negative staphylococciEmerging mastitis pathogens 6. White, L.J., et al., 2001 A multispecies model for the transmission and control of mastitis in dairy cows 7. Zadoks, R.N., et al., 2001 Cow- and quarter-level risk factors for Streptococcus uberis and Staphylococcus aureus mastitis 8. Zadoks, R.N., Schukken, Y.H., 2006 Use of the molecular epidemiology in veterinary practice.

9. A.A. Sawant, B.E. Gillespie, S.P.Oliver, 2008 Antimicrobial susceptibility of coagulase-negative Staphylococcus species isolated from bovine milk 10. O.C.Sampimon, H.W.Barkema, I.M.G.A.Berends, J.Sol, T.J.G.M.Lam, 2008 Prevalence and herd-level risk factors for intramammary infection with coagulasa-negative staphylococci in Dutch dairy herds 11. National Mastitis Council Annual Meeting Proceedings, StephenC. Nickerson 12. Wilson, D.J., Gonzalez, R.N. and Das, H.H. Bovine Mastitis Pathogens in New York and Pennsylvania: Prevalence and Effects on Somatic Cell Count and Milk Production 13. W. Nelson Philpot, Ph.D. y Stephen C. Nickerson, Ph.D. Ganando la lucha contra la mastitis 14. Arthur Saran-Marcelo Chaffer Mastitis y Calidad de Leche 15. Boehringer Ingelheim Espaa, S.A. Div. Veterinaria Dosier solomamitis etiologia, tratamiento y diagntico.

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2. Patogenia
Escherichia coli, as como la mayora de bacterias Gram-negativas, tiene en su membrana celular externa una macromolcula caracterstica y esencial denominada lipopolisacrido (LPS). Este LPS es el principal factor de patogenicidad de la bacteria y el desencadenante del tpico cuadro de mamitis hiperaguda por coliformes. La inyeccin intramamaria experimental de LPS en animales sanos provoca la misma sintomatologa y es dosis dependiente, provocando la muerte del animal a dosis altas. La bacteria penetra nicamente va canal del pezn, se multiplica rpidamente en la cisterna de la ubre y, en el proceso de multiplicacin y lisis, la toxicidad y la potente capacidad inductora de citoquinas inamatorias del LPS provoca en la vaca una sintomatologa generalmente aguda, que cursa con una prdida casi total de la produccin lctea, una inamacin aguda del cuarto afectado y, a menudo, prdida de apetito, ebre, decaimiento, shock y en algunos casos la muerte del animal. Dependiendo del estado inmunitario de la vaca la presentacin puede ser no tan aguda. La infeccin crnica con episodios clnicos recurrentes tambin puede ocurrir, pero es menos frecuente. La capacidad del sistema inmunitario de la vaca es clave para limitar la rpida proliferacin de E. coli en la ubre y reducir la accin txica del LPS. Los neutrlos son los principales actores en la lucha contra las infecciones intramamarias. Se encargan de secuestrar, matar y eliminar al patgeno, ayudados por anticuerpos opsonizantes, principalmente IgG2 y citoquinas proinamatorias, las cuales son responsables del paso masivo de neutrlos desde los capilares sanguneos de la ubre hacia la cisterna. La rpida movilizacin de los neutrlos hacia la ubre es fundamental para reducir los efectos del cuadro clnico.

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Mastitis colibacilar
Demetrio Herrera
qlettscp@gmail.com

1. Introduccin

pesar de los esfuerzos de ganaderos y tcnicos para mejorar la salud de ubre de los rebaos, la mamitis colibacilar sigue siendo un problema importante en muchas ganaderas. En granjas donde las mamitis de origen contagioso estn prcticamente erradicadas y con bajos recuentos celulares de tanque, entre el 20 y el 40% de los episodios de mamitis clnicas son provocados por coliformes. Escherichia coli, Klebsiella spp. y, en menor grado, Enterobacter spp. son los coliformes ms comnmente aislados de episodios clnicos de este tipo. La presentacin del cuadro clnico y sus costes derivados (leche retirada, coste tratamiento, reposicin por muerte o sacricio del animal, etc.) es muy variable y depende primordialmente, ms que de la patogenicidad de la cepa implicada, de factores ligados a la vaca. En el presente artculo discutiremos los factores predisponentes y las medidas de prevencin para luchar contra esta patologa.

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3. Factores predisponentes
La mayora de infecciones intramamarias por coliformes se dan en las dos primeras semanas del perodo seco y, sobre todo, en el periparto. Adems, prcticamente la mitad de las mamitis clnicas que ocurren dentro de los primeros 100 das en lactacin tienen el origen en el secado y periparto. La presentacin aguda o hiperaguda de la mamitis colibacilar no es exclusiva del posparto, pero s un elevado porcentaje. Las infecciones intramamarias por coliformes en la lactacin avanzada, provocan casos leves o moderados que el propio sistema inmune de la vacas es capaz de resolver y a menudo pasan desapercibidos.

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El parto en s mismo es estresante para la vaca. Los niveles plasmticos de cortisol experimentan un fuerte incremento siolgico, necesario para el desencadenamiento del parto y la calostrognesis. El cortisol inhibe la respuesta inamatoria e inuye negativamente en la funcionalidad de los neutrlos. Balance Energtico Negativo (BEN). Hay innidad de estudios que relacionan el BEN con patologas posparto. El incremento de las necesidades energticas en el posparto, unido a una capacidad de ingesta reducida, provoca la movilizacin de reservas grasas que, tras su metabolizacin en el hgado, pueden provocar cetosis. Los cuerpos cetnicos inuyen negativamente en la capacidad de migracin y reclutamiento de neutrlos hacia la ubre, en la fagocitosis y tambin en la capacidad de oxidacin y destruccin por parte de los neutrlos. Estrs. Factores estresantes como calor, estrs metablico, competencia, transporte, etc. inducen la secrecin de cortisol y provocan inmunosupresin. En el posparto, el estrs es un crculo vicioso. Vacas estresadas comen menos, con lo que el BEN se alarga o acenta, y la inmunosupresin se potencia. Otros:

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El inicio del perodo seco es una fase de riesgo debido principalmente a: Incremento de la presin en el interior de la ubre que, a veces, provoca prdidas de leche y tambin del antibitico de las jeringas de secado, dejando el esfnter abierto, por donde pueden penetrar bacterias. Proliferacin bacteriana en la piel del pezn, fruto del cese del ordeo y la prctica de pre y postdipping. Retraso en la formacin del tapn de queratina. Hay vacas que tardan das, incluso semanas, en sellar el pezn. Una higiene deciente al aplicar las cnulas intramamarias de secado puede provocar infecciones intramamarias.

El periparto es tambin una fase de riesgo debido a que el sistema inmune se ve comprometido por varios factores:

* Prdidas de leche, fruto del incremento de

la presin intramamaria al nal del perodo seco. El esfnter est abierto para la entrada de patgenos. * La mayora de formulaciones antibiticas de las cnulas de secado no cubren la fase nal del secado, especialmente en secados estndares de 60 das. Adems, la mayora de los productos que hay en el mercado presentan una actividad limitada frente a los Gram negativos. * Ordeo posparto a menudo dicultoso por el edema de ubre, que provoca admisiones de aire durante el ordeo, facilitando la entrada de patgenos hacia la cisterna.

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4. Tratamiento
El tratamiento se debe enfocar hacia la vaca, no hacia la bacteria. E. coli se multiplica rpidamente en la ubre alcanzando el pico de concentracin en menos de 12 horas (Erksine et al 1989). El reconocimiento de los signos clnicos de mamitis colibacilar ocurre normalmente despus de la mxima concentracin bacteriana en la ubre. Esta idea pone en duda la conveniencia de tratar con antibiticos la mastitis colibacilar. Adems, hay muchos estudios que demuestran la pobre ecacia de los tratamientos antibiticos contra las mamitis por Gram negativos. Por lo tanto, nos centraremos en el tratamiento sintomtico: 1. Suero hipertnico salino IV. La vaca debe tener acceso libre a agua limpia y fresca. 2. AINEs para controlar ebre e inamacin. 3. Calcio, hierro y vitaminas ADE para potenciar la funcin de los neutrlos. 4. Oxitocina y ordeos frecuentes. El propio dolor e inamacin inhibe la bajada de la leche. La oxitocina ayuda a un mejor vaciado de la ubre, eliminando as mayor nmero de bacterias. 5. Antibiticos activos frente a Gram negativos por va parenteral (como preventivo de la sepsis, no para curar la infeccin).

5. Prevencin
Teniendo en cuenta la baja ecacia de cualquier tratamiento frente a la mamitis colibacilar hiperaguda, la prevencin es el mejor tratamiento posible. Conociendo los perodos de mximo riesgo y los factores predisponentes, las estrategias de prevencin se centran bsicamente en 2 vas: 1. Minimizar la exposicin de la punta del pezn a la bacteria presente en el ambiente: Extremar la higiene de las zonas de descanso de las vacas, especialmente patios de secas, pre y posparto; teniendo en cuenta que estos son los perodos de mximo riesgo de contraer infeccin intramamaria por coliformes. Cubculos o camas limpias y secas son claves para evitar la proliferacin de E. coli en las zonas de reposo. Los materiales inertes, como son la arena o marmolina, son ms adecuados que los orgnicos (paja, serrn o cascarilla), proliferando menos las bacterias. Ordear pezones limpios y secos. 2. Incrementar la resistencia del animal a la infeccin: Minimizar el estrs de cualquier tipo. Raciones y estrategias de alimentacin que reduzcan al mnimo el BEN y su duracin en el tiempo. El objetivo es maximizar la ingesta de materia seca. Asegurar los aportes necesarios de Vit E y Se en la racin, importantes para el sistema inmune, ya que incrementan la actividad fagocitaria de los neutrlos. Los estados carenciales de estos elementos incrementan la posibilidad de sufrir mastitis y tambin la severidad y duracin de la infeccin. Vacunacin. La vacunacin contra la mamitis colibacilar es una estrategia comnmente implementada en granjas lecheras de los Estados Unidos (entre el 40-65% de las granjas la aplican). Las ms utilizadas son vacunas basadas en la cepa J5 de E. coli. Esta cepa es un mutante que carece de la cadena O-polisacrida del LPS, dejando expuesto al sistema inmunitario el antgeno core del LPS. A diferencia de la cadena O-polisacrida, la composicin y estructura de dicho antgeno core se encuentra muy conservada entre los distintos Gram-negativos, por lo que las vacunas con J5 inducen anticuerpos opsonizantes anticore con inmunidad cruzada contra diferentes cepas de E. coli y otros gram negativos. La ecacia de la vacunacin en la proteccin contra la mamitis colibacilar aguda ha sido demostrada en diferentes estudios de campo. En numerosas referencias bibliogrcas se constata

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Conclusiones

que la inmunizacin con J5 no previene las infecciones intramamarias por coliformes, pero s reduce la aparicin del caso clnico, su severidad y las prdidas econmicas por muerte o sacricio del animal. Segn algunos estudios econmicos llevados a cabo en los EEUU, un programa vacunal contra este tipo de mastitis es econmicamente rentable cuando ms del 1% de las lactaciones se ven afectadas por mamitis colibacilar. De acuerdo con la bibliografa, la vacunacin puede ser una herramienta de gran utilidad en la prevencin de las mastitis causadas por Gram-negativos en granjas donde existe tal problemtica. Considerando que el posparto es el perodo ms crtico y donde se dan la mayora de casos clnicos por las causas ya citadas, el objetivo deber ser potenciar la inmunidad en este perodo, vacunando los animales en el secado y revacunando antes del parto. Una dosis de recuerdo durante los primeros meses de lactacin puede ser apropiada para prolongar la duracin de la inmunidad. En climas clidos y hmedos, donde la incidencia puede ser alta en los meses de verano, una dosis de recuerdo a todos los animales podra proteger tambin el rebao.

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Bibliografa
1. Bradley et al. 2001 Adaptation of E. coli to the bovine mammary gland, J Clin Microbiol Mai 2001; 39(5):1845-9). 2. Passey S, Bradley A, Mellor H. Escherichia coli isolated from bovine mastitis invade mammary cells by a modied endocytic pathway. V et Microbiol. 27 Juillet 2008;130(1-2):151-64. 3. Wilson DJ et al., 2007. Comparison of J5 Vaccinates and Controls for Incidence, Etiologic Agent, Clinical Severity, and Survival in the Herd Following Naturally Occurring Cases of Clinical Mastitis J.DairySci, Sept. 2007 ,90(9):4282-8) 4. Mallard BA, Burnside EB, Burton JH, Wilkie BN. Variation in serum immunoglobulins in Canadian Holstein-Friesians. J Dairy Sci 1983; 66:8626. 5. Burton JL, Chaiyotwittayakun A, Smith K, et al. Novel applications for coliform vaccine programs. Proceedings of the 41st Annual Meeting of the National Mastitis Council. Orlando (FL); 2002. p. 89110. 6. Preisler MT, Weber PSD, Tempelman RJ, et al. Glucocorticoid receptor down-regulation in neutrophils of periparturient cows. Am J Vet Res 2000; 61:149. 7. David J. Wilson, Ruben N. Gonzalez,Vaccination strategies for reducing clinical severity of coliform mastitis Vet Clin Food Anim 19 (2003) 187 197. 8. P, Ruegg. Evaluating the effectiveness of Mastitis Vaccines, 2001. 9. Adrian Gonzalez Garrido. Manejo del posparto para el control de las enfermedades Metablicas. Libro ponencias Congreso ANEMBE2007. 10. Wilson DJ, Grohn YT, Bennett GJ, Gonzlez RN, Schukken YH, Spatz J.Milk production change following clinical mastitis and reproductive performance compared among J5 vaccinated and control dairy cattle. J Dairy Sci. Oct. 2008; 91(10):3869-79. 11. Jeanne L. Burton,Ronald J. Erskine, Immunity and mastitis. Some new ideas for an old disease Vet Clin Food Anim 19 (2003) 145. 12. Erskine RJ, VanDyk EJ, Bartlett PC, Burton JL, Boyle MC. Effect of hyperimmunization with an Escherichia coli J5 bacterin in adult lactating dairy cows J Am Vet Med Assoc. Oct. 2007; 231(7):1092-7. 13. NAHMS Dairy 2007 Part III: Reference of Dairy Cattle Health and Management Practices in the United States, 2007 www.aphis.usda.gov/ vs/ceah/ncahs/nahms/dairy/dairy07/Dairy2007_PartIII.pdf.

La mastitis colibacilar es una patologa importante en muchas explotaciones por el impacto econmico que conlleva. La prevencin es la mejor herramienta para controlar este problema. El manejo del perodo seco y en el periparto es clave. Vacas alojadas en patios o cubculos limpios, secos y confortables van a reducir las infecciones intramamarias por coliformes. Adems estrategias de alimentacin que minimicen el BEN en el posparto y reduzcan el estrs ayudarn a la vaca a luchar contra la mastitis hiperaguda. Por ltimo, sealar que un protocolo de vacunacin en el secado, puede ser de gran ayuda para prevenir los casos clnicos por coliformes en las explotaciones donde exista esta problemtica.

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2. Es posible vacunar?
Junto a todas estas medidas clsicas de control anteriormente citadas, se ha agregado otra medida complementaria: la vacunacin.Tomando en cuenta la dicultad de que nos encontramos con agentes como el S. aureus o el E. coli, por su pobre respuesta a los tratamientos antibiticos, la prevencin con una adecuada vacunacin (sumada a las medidas ya mencionadas) sera de gran importancia. Para el caso de las mastitis por Staphylococcus aureus, las vacas lecheras son los reservorios de la bacteria. La terapia antibitica es pobre cuando estas bacterias se encuentran en la profundidad del tejido mamario (Ma y col., 2004). Autores como Blowey y col (1995), realizando una revisin bibliogrca de tratamientos con Cloxacilina, muestran tasas de curacin de la mastitis por S. aureus del 24 % para casos clnicos y del 40% para los subclnicos, siendo la tasa ms elevada la de la terapia de secado (60%) que, por esta razn, se considera el tratamiento de eleccin para esta bacteria. La baja tasa de curacin podra ser atribuida a la habilidad de la bacteria para sobrevivir al tratamiento cuando se encuentra intracelularmente en las clulas epiteliales o en los macrfagos (Hensen y col., 2000; Herbet y col 2000).

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Inmunidad y Mastitis: Es posible vacunar?


Marcelo Chaffer DVM PhD
Colegio Veterinario del Atlntico | Universidad de la Isla Prncipe Eduardo | Canad

1. Introduccin

a mastitis es una reaccin inamatoria de los tejidos secretores o conductores de la leche en la glndula mamaria, como respuesta a una infeccin bacteriana, que afecta principalmente la produccin lechera en cantidad y calidad. Los agentes causantes de la mastitis bovina son microorganismos que habitan en la ubre de la vaca y sus alrededores. De acuerdo con su epidemiologa, pueden dividirse en tres grupos: 1) contagiosos, con bacterias como Staphylococcus aureus y Streptococcus agalactiae, 2) ambientales, donde se destacan Streptococcus no agalactiae y gramnegativas, como por ejemplo E. coli y 3) oportunistas, donde tenemos a los Staphylococcis coagulasa negativos. El control de la Mastitis se ha basado en distintas medidas: 1) Rutina de ordeo adecuada e higinica; 2) Mantenimiento y uso adecuados del equipo de ordeo; 3) Terapia de secado apropiada; 4) Tratamiento de casos clnicos durante la lactacin; 5) Tratamiento de problemas de piel de la ubre y los pezones; 6) Descarte de vacas con mastitis crnica; 7) Examen de vacas que se deseen introducir a la explotacin como reposicin; 8) Registro de datos; 9) Mantener un ambiente limpio.

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En lo que respecta a E. coli, segn lo estudiado por Sandholm y col (1995), la terapia antibitica tendra poco efecto en mejorar los sntomas provocados por la bacteria, debido a que estos sntomas son debidos principalmente a la endotoxina. La vacunacin tiene como n mejorar y potenciar el sistema inmune contra un antgeno especco. En el caso de las vacunas contra la mastitis lo que se busca es una adecuada llegada de neutrlos al lugar donde se encuentra el agente patgeno; lo que junto con una adecuada cantidad de inmunoglobulinas, favorecer su opsonicacin y posterior fagocitosis. Sumado a esto, los anticuerpos generados por la vacunacin pueden tambin ejercer una importante funcin en la neutralizacin de toxinas, interriendo en los mecanismos de adhesin de la bacteria e induciendo su lisis. La revisin bibliogrfca nos muestra benecios en el uso de vacunas protectoras contra S. aureus o E. coli. As, se observa el efecto de la vacunacin reejado en:

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Benecios obtenidos al utilizar vacunas contra S. aureus y E. coli 1) Reduccin en la severidad y duracin de la sintomatologa de mastitis por coliformes; 2) Disminucin en las tasa de infecciones 3) Disminucin en el uso de antibiticos y en su posible aparicin como residuos en la leche 4) Disminucin en los recuentos celulares somticos y aumentos en la produccin diaria de leche.

Nordaugh y col., (1994) utilizando una vacuna inactivada de S. aureus, mostraron su efecto positivo en la no aparicin de casos clnicos en el grupo de vacas vacunadas, contra un 6% de casos en las no vacunadas. En lo que respecta a casos de mastitis subclnica por S. aureus, sta fue diagnosticada en un 8% del grupo de vacunadas y en un 14% en las vacas no vacunadas. En Israel, en un ensayo de campo, Leitner y col. (2003), utilizando una vacuna compuesta de fragmentos de S. aureus obtenidos por sonicacin, mostraron efectos beneficiosos y estadsticamente significativos en lo que respecta a produccin lechera y clulas somticas en el grupo de vacas vacunadas. Lo importante en una vacunacin contra S. aureus es hacerla de manera temprana, preferiblemente en la etapa de novillas preparto, evitando as una posible infeccin que comprometa su vida productiva lechera. En lo que respecta a una mastitis por coliformes, Hogan y col. (1995), en un experimento de desafo con cepa virulenta de E. coli a vacas vacunadas con una bacterina de E. coli J5 y a no vacunadas, demostraron que la duracin de la infeccin intramamaria, as como la intensidad de los sntomas, son menores en el grupo vacunado. Deluyker y col. (2005), en un ensayo de campo, encontraron que si bien la vacuna contra E. coli no ayud a disminuir la cantidad de casos clnicos en el grupo vacunado con respecto del no

vacunado, si hubo diferencias significativas en la cantidad de casos de mastitis txicas sistmicas a favor del grupo vacunado. Para el caso del S. aureus, se han desarrollado en el pasado distintos tipos de vacunas con resultados diversos. Estas vacunas las podramos dividir en dos grandes grupos, 1) Bacterinas y 2) Vacunas que incluyen algn componente de la bacteria considerado de importancia antignica. En el primer grupo (de las bacterinas) las vacunas son elaboradas con todos los componentes de la clula bacteriana y stas pueden ser muertas o vivas. As se han desarrollado pruebas con este tipo de vacunas en mastitis por autores como Pankey (1985) o Leitner y col. (2003). El segundo grupo, que son aquellas vacunas que incluyen elementos de importancia antignica, se desarrolla a partir de factores de virulencia como pueden ser: a) Protena A, componente de la pared celular de la bacteria que se une a las inmunoblogulinas (Pankey y col., 1985; Carter y Kerr, 2003). b) Pseudocpsula, polisacrido extracelular con propiedades antifagocticas (Watson y col., 1992; Nordhaug y col., 1994). c) Antgenos capsulares, como por ejemplo el polisacrido Slime, tambin llamado Slime Associated Antigenic Complex (Yosida y col., 1987; Calzolari y col., 1997; Giraudo y col., 1997). d) Alfa y Beta toxinas (Herbelin y col., 1997). e) Fibronectin binding protein, molcula de superficie que acta como factor de adherencia bacteriano (Shkreta y col., 2004). f) Clumping factor A, molcula de superficie que acta como factor de adherencia bacteriano (Brouillete y col. 2002).

3. Ensayo de vacunacin contra mastitis realizado en Espaa


En un ensayo multicntrico realizado en 6 ncas lecheras de Catalua se dividieron 386 vacas lecheras multparas y primparas en dos grupos. El primer grupo de 188 vacas fue el grupo control no vacunado; mientras que el segundo grupo, de 198 vacas, fue vacunado. El plan de vacunacin para este grupo consisti en una primera dosis de vacuna unos 45 das antes del parto, una segunda dosis antes de llegar a los diez das previos al parto y una tercera dosis a los 50 das post-parto.

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La vacuna utilizada contena antgenos de S. aureus de cepas CP8 altamente productoras de Slime Associated Antigenic Complex, sumado a cepas E. coli J5. (Laboratorios Hipra, Amer, Girona, Espaa). Los datos recabados fueron analizados por regresin logstica con anlisis de varianza. 3.1 Recuento celular somtico, tasa de curacin y tratamientos farmacolgicos adicionales durante el ensayo Durante el ensayo de campo se midi el recuento celular somtico, el parmetro ms aceptado en el seguimiento de salud de ubre y calidad de leche (Laevens,1997; Pyorala, 2003; Schukken et al., 2003). El grupo vacunado present un recuento celular de 324.1 x 103 comparado con 581.4 x 103 en el grupo control. Cuando se compar en forma logartmica, estas diferencias fueron estadsticamente signicativas (p=0.0182). La tasa de curacin para las multparas vacunadas fue de 53.33%, en comparacin con el 20.45% registrado en las no vacunadas, siendo esta diferencia signicativa (p<0.05). En las primparas, a pesar de ser la tasa de curacin favorable al grupo vacunado, la diferencia registrada no fue significativa. En el mismo ensayo se midieron tratamientos farmacolgicos en los dos grupos de vacas, vacunadas o control. Hubo 24 animales tratados por mastitis en el grupo vacunado, 14 vacas multparas y 10 primparas. Las multparas de este grupo vacunado recibieron 21 tratamientos, dando un promedio de 1.5, mientras que las primparas recibieron 13 tratamientos, con un promedio de 0.7. Por otro lado, en el grupo control 40 vacas recibieron tratamiento farmacolgico adicional, 28 multparas y 12

primparas. El promedio registrado para este grupo control no vacunado fue de 2.1 para las multparas y 2.8 para las primparas. El anlisis estadstico de estos resultados dio que, para el grupo de las multparas, esta diferencia

registrada en tratamientos farmacolgicos adicionales necesarios fue significativamente diferente (p=0.003). Siendo el nmero de tratamientos por vaca menor en el grupo vacunado, el tiempo de tratamiento requerido es tambin menor. Estos puntos son sumamente interesantes ya que, en definitiva, determinan no slo el menor uso de frmacos, sino tambin un menor descarte de leche por uso de antibiticos. Tanto el experimento realizado en Catalua como la literatura aportan datos que muestran efectos positivos de las vacunas contra la mastitis. Si bien es un elemento a tener en cuenta y recomendado en la lucha contra esta enfermedad, no se debe olvidar que la vacunacin debe ser combinada con las medidas tradicionales de control de mastitis en el establecimiento.

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Bibliografa

1. Blowey, R. and Edmonson, P., 1995. Mastitis Causes, epidemiology and control. In Mastitis Control in Dairy Herds (Chapitre 4). Farming Press Book, Royaume-Uni. 2. Brouillette E, Lacasse P, Shkreta L, Blanger J, Grondin G, Diarra MS, Fournier S, Talbot BG. (2004) DNA immunization against the clumping factor A (ClfA) of Staphylococcus aureus. Vaccine 20:2348-2357.

3. Calzolari A, Giraudo JA, Rampone H, Odierno L, Giraudo AT, Frigerio C, Bettera S, Raspanti C, Hernndez J, Wehbe M, Mattea M, Ferrari M, Larriestra A, Nagel R. (1997) Field trials of a vaccine against bovine mastitis. 2. Evaluation in two commercial dairy herds. J Dairy Sci. 80:854-858. 4. Carter E.W. and Kerr D.E. (2003) Optimization of DNA-based vaccination in cows using green uorescent protein and protein A as a prelude to immunization against staphylococcal mastitis.J Dairy Sci. 86:1177-1186.

5. Deluyker, H.A., Van Uffel, K., Elfring, G.D., Van Oye, S.N., Dutton, C., and Nanhjian, I. (2005). Efcacy of a J-5 Escherichia coli bacterin in clinical coliform mastitis dairy cattle. Mastitis in dairy production. Ed. H. Hogeveen. N. Wageningen Academic Publisher.

6. Giraudo JA, Calzolari A, Rampone H, Rampone A, Giraudo AT, Bogni C, Larriestra A, Nagel R. (1997) Field trials of a vaccine against bovine mastitis. 1. Evaluation in heifers. J Dairy Sci. 1997 80:845-853. 7. Hbert, A., Sayasith, K., Snchal, S., Dubreuil, P., Lagac, J., 2000. Demonstration of intracellular Staphylococcus aureus in bovine mastitis alveolar cells and macrophages isolated from naturally infected cow milk. FEMS Microbiology Letters, 193: 57-62.

Biblioteca Startvac

11. Laevens, H., Deluyker, H., Schukken, Y.H., De Meulemeester, L., Vandermeersch, R., De Mulenaere, E. and De Kruif, A., 1997. Inuence of parity and stage of lactation on the somatic cell count in bacteriologically negative dairy cows. Journal of Dairy Science, 80: 3219-3226. 12. Leitner, G., Lubashevsky, E., Glickman, A., Winkler, M., Ezra, E., Chaffer, M., Saran, A. and Trainin, Z (2003). Development of a Staphylococcus aureus vaccine against mastitis in dairy cows, II. Field trials. J. Vet. Imm. and Immunopath. 93:151-158 13. Ma, J., Cocchiaro, J. and Lee, J.C., 2004. Evaluation of serotypes of Staphylococcus aureus strains used in the production of a bovine mastitis bacterin. J. Dairy Science, 87:178-182. 14. Nordhaugh, M.L., Hesse, L.L., Norcross, L.L. and Gudding R. (1994) A eld trial with an experimental vaccine against Staphylococcus aureus mastitis in cattle. 2. Antibody response. J Dairy Sci. 77:1276-1284. 15. Pankey, J.W., Boddie, N.T., Watts J.L. and Nickerson, S.C., 1985. Evaluation of protein A and a commercial bacterin as vaccines against Staphylococcus aureus mastitis by experimental challenge. J. Dairy Sci., 68: 726-731. 16. Pyrl, S., 2003. Indicators of inammation in the diagnosis of mastitis. Veterinary Research, 34: 565-578. 17. Sandholm, M. and Pyrl, S., 1995. Coliform mastitis. Endotoxin mastitis endotoxin shock. In: The bovine udder and mastitis. Ed: Sandholm, M., Honkanen-Buzalski, T., Kaartinen, L. and Pyrl, S., University of Helsinki. 18. Schukken, Y.H., Wilson, D.J., Welcome, F., Garrison-Tikofsky, L. and Gonzalez, R.N., 2003. Monitoring udder health and milk quality using somatic cell counts. Veterinary Research, 34: 579-596. 19. Shkreta L, Talbot BG, Diarra MS, Lacasse P (2004) Immune responses to a DNA/protein vaccination strategy against Staphylococcus aureus induced mastitis in dairy cows. Vaccine. 23:114-126. 20. Watson, D.L. (1992) Vaccination against experimental staphylococcal mastitis in dairy heifers. Res Vet Sci. 53:346-353. 21. Yosida, K, Umeda, A. and Ohshima Y. (1987). Induction of resistance in mice by the capsular polysaccharide antigens of Staphylococcus aureus. Microbiol Immunol. 1987;31(7):649-56.

8. Hensen, S.M., Pavicic, M.J.A.M.P., Lohuis, J.A.C.M. and Poutrel, B., 2000. Use of bovine primary mammary epithelial cells for the comparison of adherence and invasion ability of Staphylococcus aureus strains. J. Dairy Sci., 83: 418-429. 9. Herbelin C, Poutrel B, Gilbert FB, Rainard P (1997) Immune recruitment and bactericidal activity of neutrophils in milk of cows vaccinated with staphylococcal alpha-toxin. J Dairy Sci. 80:2025-2034. 10. Hogan, S.J., Weiss, W.P., Smith K.L., Todhunter, D.A, Schoenberger, P.S. and Sordillo (1994). Effects of an Escherichia coli J5 Vaccine on mild clinical coliform mastitis. J. Dairy Sci. 78:285.

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