PENACHO DE AZUFRE Y COLA DE PAVO

La biosntesis y biodegradacin de Organohalogenados por Basidiomycetes

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Resumen: Clorados alifticos y compuestos aromticos son generalmente considerados ser indeseables contaminantes xenobiticos. Sin embargo los hongos superiores, Basidiomicetos tienen capacidad extendida para biosntesis rganohalogenado. Halgenos orgnicos absorbibles y/o peso molecular bajo halgenos compuestos. Son producidos por Basidiomicetos de 68 generos de 20 familias diferentes. La mayora de los 81 halogenados metabolitos identificados por Basidiomicetos hasta la fecha son clorados, aunque bromados y tambin se han descrito metabolitos iodados. Dos amplias categoras de Basidiomicetos rgano halogenados metabolitos son compuestos aromticos halogenados y los compuestos halo alifticos. Algunos de estos metabolitos rganohalgenados tienen funcin fisiolgica demostrable como antibiticos y como metabolitos implicados en la degradacin de lignina. Basidiomicetos producen gran cantidad de bajo peso molecular organohalogenados o halgenos orgnicos absorbibles (AOX) cuando se cultiva en sustrato lignocelulsica. En nuestra opinin los basidiomicetos como compuestos de desechos forestales, son una importante fuente natural de rganohalgenos en ambiente forestal. Los basidiomicetos tambin son potentes degradadores de una amplia gama de contaminantes clorados, como sistemas efluente de molinos de kraft y pentaclorofenol bifelinos dioxinas y bifelinos policlorados. El medio extracelular, enzimas degradadoras de lignina y los basidiomicetos estn involucrados en la degradacin oxidativa de clorofenoles y dioxinas, pueden causar decloracion reductiva de halo metanos. No hay una separacin clara entre contaminacin y la limpieza dentro de los basidiomicetos, varios gneros Bjerkandera, Hericium, Phlebia y Trametes, producen cantidades significantes de compuestos clorados pero tambin son muy efectivos en el metabolismo o biotransformacin clorados.

INTRODUCCION

LA APARICION DE ORGANOHALOGENOS EN LA NATURALEZA ES GENERALMENTE ATRIBUIDO, a las actividades antropogenicas, sin embargo mas de 2600 compuestos naturales halogenados han sido identificados (66,67) y un gran estanque de parmetro mayor, ha sido detectado en medio ambiente no contaminados (18,69,134). Muestras de suelos forestales recogidos en todo el mundo contienen AOX concentraciones de entre 20 mg y 360 mg/kg de tierra seca. El amplio estanque de organoalogenos naturales en ambientes terrestres indica una fuente ubicua. Reciente anlisis de Noruega en basura de abeto encerrado en bolsas de basura y de un perfil de suelo de conferas indica fuertemente que los halgenos orgnicamente se producen en el suelo (92). Ademas ligadas orgnicamente los halgenos son dinamicos ya que su produccin y mineralizacin ocurre durante la descomposicin de lechos forestales. Los microorganismos que degradan el material lignocelulosico parece estar implicado en la produccin de AOX. Basidiomycetes son los grupos ms ecolgicos de organismos responsable de responsable de convertir los desechos lignocelulsicos tales como madera, paja y hojarasca (174). Estos hongos superiores producen cuerpos macroscpicos a menudo llamados: hongos o cuerpos fructferos. Dos ejemplos comunes que se encuentran en todo el mundo son mechones de azufre (hypholoma) y cola de pavo (trametes). Basidiomycetes constituyen una parte importante de la biomasa en residuos de los bosques. Un peso estimado de 1 tonelada del micelio basidiomicetos es producido anualmente por cada hectrea de un bosque de madera templada tpica. El hongo ARMILLARIA BULBOSA se cree que es uno de los mayores y mas antiguos organismos vivos. Muchos basidiomicetos producen cantidades importantes de AOX (187) y varios tambin se reportan para producir metabolitos organicos halogenados aromaticos y alifticos de novo indicando que este grupo de organismos es una fuente potencialmente importante de origen natural organohalogenado en ambientes terrestres y en la atmosfera (49,60,75). Esta critica postula que los basidiomicetos son de hecho una fuente importante de organohalogenos en el medio terrestre. Ademas, de los conocimientos actuales sobre la biosntesis, se discute el conocimiento actual sobre la biosntesis, funcin fisiolgica y destino medioambiental de los metabolitos organicos halogenados basidiomicetos. No solo son basidiomicetos implicados en la biosntesis organohalogenados, pero muchos informes indican que estos organismos pueden degradarse en compuestos organohalogenos antropogenicos. En muchos casos, las enzimas que degradan la lignina, son responsables en la degradacin de xenobiticos organohalogenados.

Ubicuidad de produccin organohalogenado entre basidiomicetos

Halogenos orgnicos y el total de halgenos orgnicos han sido usados como amplios parmetros a basidiomicetos, en una encuesta realizada por Verhagen para evaluar la ubicuidad de la produccin AOX entre los basidiomicetos. Aproximadamente el 50% de las cepas evaluadas y el 55% de los gneros ensayados produjeron ms de 0.1 mg/l AOX. 38 cepas produjeron altos niveles moderados de 1-67 mg AOX/L. Este grupo fue dominado por especies pertenecientes a el gnero Hypholoma, Mycena, Bjerkandera, Pholiota y Phellinus y especficamente produjeron AOX en el rango 1-30g AOX/Kg de peso en seco de biomasa micelial. Se identificaron muchas especies de hongos de gran importancia ecolgica entre los ms altos productores. Estas especies tambin produjeron AOX cuando se cultivaron sobre sustratos lignocelulosicos naturales. Oberg descubri un aumento significante en la cantidad total de organohalogenos con 8 de 9 pruebas de hongos blancos en lignocelulosica como la cola del pavo comn Biodiversidad de la capacidad de producir Organohalogenados La capacidad biolgica para AOX y TOX y/o produccin de metabolitos organohalogenados especfico (referencias en la seccin siguiente) es generalizada entre las diferentes familias de basidiomicetos. Existe una amplia distribucin taxonmica a travs de 68 gneros de 20 familias dentro de las rdenes de los Agaricales y Aphyllophorales. La mayora de las familias pertenecientes a los dos rdenes tienen al menos un representante positivo. Taxonmica pocos se encuentran en el orden de los Agaricales, que incluyen el Strophariaceae y el Tricholomataceae, el orden de los Aphyllophorales muestra la produccin alta organohalogena en la familia de los Hymenochaetaceae y varios gneros de toda la polyporaceae tambin producen organohalogenos. Se utilizaron tcnicas bilgicas moleculares para inferir relaciones filogenticas de la Polyporaceae. Utilizando datos de secuencia mitocondrial de ribosomas DNA, Bjerkandera, un productor muy potente de organohalogenos y Phanerochaete. Una especie negativa en nuestra prueba AOX, fueron demostrados para ser muy estrictamente relacionados. La amplia capacidad de basidiomicetos para producir organohalogenos, junto con la ausencia de correlacin organohalogenados produccin entre especies estrictamente relacionadas. Indica una gran biodiversidad de la capacidad de biohalogenacion. Tipos de organohalogenos de bajo peso molecular producidos Una amplia variedad de metabolitos de bajo peso molecular contienen halgenos que han sido explicados. Nuestro anlisis de la literatura en 1995 cre reportes de 53 metabolitos halogenados como de novo productos de 34 gneros de basidiomicetos (60). Este nmero ha incrementado ahora a 81 compuestos halogenados identificados de 46 generos diferentes de basidiomicetos. La tabla 1 enumera todos los gneros que producen organohalogenos de bajo peso molecular. Varios generos producen un amplio rango de compuestos aromaticos halogenados. Bjerkondera spp. Producen 23 metabolitos halogenados, Lepista nuda 17 metabolitos, Phellinus spp, 9 metabolitos,

Armillaria spp, 8 metabolitos, Hericium erinaceus 6 metabolitos, Mycena spp 5 metabolitos y Hypholoma spp 5 metabolitos. Los organohalogenos de bajo peso molecular estn subdivididos en 2 categoras: Los compuestos haloalifaticos y los compuestos aromaticos halogenados. Dentro de cada categora de compuestos similares, los halometanos o metabolitos clorados estn el nmero de compuestos relacionados producidos, las especies y el gnero implicado y el significado ambiental. Cuando se dispone el peso de la biosntesis y los partes psicolgica son tambin discutidos.. Compuestos alifticos clorados Los compuestos organohalogenados alifticos ms importantes son clorometano y los aminocidos no proteicos clorados. Quince compuestos organohalogenados alifticos se han identificado, producido por 16 gneros. Halometanos Los primeros informes sobre la produccin natural de halometano por Basidiomicetos aparecieron a principios de 1970 en la produccin de clorometano. El trabajo posterior mostr que el clorometano es el halometano ms abundante producido por Basidiomicetos; su biosntesis es particularmente comn entre los degradadores de madera (Hymenochaeteae) ampliamente distribuidos, como miembros de la Phellinus, Inonotus, Fomitopora, Hymenochaete, Onnia y gneros Phaeolus, y tambin de Fomitopsis cytisina. De las 63 especies examinadas en la familia de la Hymenochaeteae, 34 (53%) dio a conocer una cantidad detectable de clorometano. La produccin de clorometano tambin ha sido reportada en la de importancia comercial del hongo Agaricus bisporus. Adems de clorometano, los Basidiomicetos producen otros cinco metabolitos halometano cuando el medio se complementa con otros iones haluro: bromometano y yodometano por Phellinus pomaceus y cloroyodometano, diyodometano y dichloroiodomethane por Bjerkandera adusta. Tambin se ha reportado la produccin de cloroformo por especies Cantharellus. En medio definido con glucosa como fuente de carbono, la liberacin clorometano exhibi un tpico patrn de metabolito secundario, con la produccin detectable limitada al perodo despus de un crecimiento exponencial. . P. pomaceus mostr una conversin mayor que 90% de 50 mM de Cl-en clorometano cuando se cultivan en un medio de celulosa. Los hongos descomponedores de madera podran por lo tanto, potencialmente, hacer una contribucin significativa a la carga atmosfrica de clorometano. Sin embargo, la produccin real de clorometano a partir de los cuerpos fructferos perennes como soporte en crecimiento activo en la madera de la OA Phellinus y Inonotus spp. an no se ha determinado. La va para la biosntesis de clorometano todava no est clara. Para las algas y las plantas se ha propuesto que la formacin halometano procede va la metilacin de un haluro de inorgnico por una S-adenosil-L-metionina (SAM) dependiente de la transferasa. Se sugiri que el mismo sistema est activo en P. pomaceus. Sin embargo, los resultados recientes con P. chrysosporium indican que la metionina es convertida directamente o, ms probablemente, por intermedio de CH3Cl, mientras que SAM se determina que no es un producto intermedio en la

conversin de L-metionina para CH3Cl. La enzima halogenacin en P. pomaceus tiene una clara preferencia por bromuro y yoduro sobre cloruro, ya que cuando estos iones haluro estn presentes en concentraciones equimolares, se forman preferentemente yodometano y bromometano.

Tabla 1. Produccin de compuestos organohalogenados de bajo peso molecular y / o de AOX y TOX por Basidiomicetos
Familia
Agaricaceae Amanitaceae Bolbitiaceae Boletaceae Coprinaceae

Agaricales Gnero
Agaricus Amanita Agrocybe Boletus Xerocomus Coprinus Panaeolus Psathyrella Cortinarius Dermocybe Galerina Gymnopilus Hebeloma Lepiota Leucoagaricus Lactarius Russula Hypholoma Kuehneromyces Pholiota Psilocybe Stropharia Armillaria Baeospora Calocybe Clitocybe Collybia Flammulina Laccaria Lentinellus Lepista

Metabolito halogenado
1, 37, 38, AOX 711, AOX AOX 70, AOX AOX 37, AOX AOX 37, AOX 69 68, 69 AOX AOX AOX 13 73 12 41, 4450, AOX 1820, 31, 38, AOX 75, AOX 18, 19, AOX AOX 18, 19, AOX 5761, 6365, AOX, TOX AOX AOX 61, 62, AOX AOX AOX AOX 72, AOX 1520, 23, 27, 28, 30, 35, 36, 42, 43, 7779, AOX, TOX AOX 32, AOX 16, 19, 38, 66, 76, AOX 18, 19, AOX 16, AOX 66 AOX

Familia
Cantharellaceae Clavariaceae Coniophoraceae Corticiaceae

Aphyllophorales Gnero
Cantharellus Macrotyphula Coniophora Serpula Phlebia Meripilus Peniophora Resinicium Ganoderma Ramaria Hericium Fomitopora Hymenochaete Inonotus Onnia Phellinus Phylloporia Bjerkandera Daedaleopsis Fomes Fomitopsis Gloeophyllum Heterobasidion Ischnoderma Phaeolus Poria Schizopora Trametes Schizophyllum

Metabolito halogenado
6a AOX AOX AOX TOX AOX 16, 19, 37, 38, AOX 14 TOX 16, 19 5156, AOX 1 1 1 1 13, 18, 3740, 71, AOX, TOX 18, AOX 46,1526, 29, 30, 37, 38, 42, 43, 53, 80, AOX, TOX 16 16, AOX 1, AOX AOX 74, AOX 16, AOX 1 33, AOX, TOX AOX 16, 34, AOX, TOX 37

Cortinariaceae

Ganodermataceae Gomphaceae Hericiaceae Hymenochaetaceae

Lepiotaceae Russulaceae

Strophariaceae

Polyporaceae

Tricholomataceae

Schizophyllaceae

Macrocystidia Marasmius Mycena Oudemansiella Pleurotus Strobilurus Tricholomopsis

66, 67, AOX *Orden, Aphyllophorales se clasifico segn Ellis & Ellis. *Los nmeros se refieren a las estructuras qumicas que se indican en el texto. *AOX y TOX indican que el gnero produce absorbibles (AOX) o la cantidad total de halgenos orgnicos (TOX)

Xerula

El clorometano fue originalmente considerado un metabolito secundario de Basidiomicetos. Sin embargo, el clorometano se utiliza por los Basidiomicetos como un agente de metilacin en la biosntesis de ster de benzoato de metilo y metabolitos fenlicos metil-ter. Aparte de hymenochaeteae, que producen niveles detectables de clorometano ms adelante en su curva de crecimiento, otros hongos de podredumbre blanca, tales como Phanerochaete chrysosporium, Trametes versicolor, y Phlebia radiata, tambin utilizan clorometano como una fuente de metilo. Recientemente, Harper y colaboradores compararon las eficiencias de clorometano (CH3Cl), L-metionina, y S-adenosil-L-metionina (SAM) como precursores de metilo en la biosntesis de alcohol veratrlico en P. chrysosporium, un cofactor importante para la ligninaenzima que degrada la lignina peroxidasa y un metabolito secundario comn de hongos de podredumbre blanca. El alcohol veratrlico es tambin de gran importancia en la lignina peroxidasa mediada por la oxidacin de compuestos organohalogenados antropognicos tales como pentaclorofenol. Tanto el clorometano y metionina causaron un inicio ms temprano de la biosntesis de alcohol veratrlico, pero SAM retraso la formacin del compuesto. Un alto nivel de incorporacin de etiqueta deuterada en ambos grupos 3 - y 4-O-metlico de alcohol veratrlico se produjo cuando deuterado metionina o Clorometano estuvo presente. No se etiquetado significativa se detect cuando deuterado se aadi S-adenosilmetionina, que condujo a la conclusin de que CH3Cl se utiliz como un donante de metilo en la biosntesis de alcohol veratrlico. Los compuestos clorados son productos intermedios comunes para los productos no clorados en sntesis orgnica, y esto tambin podra ser el caso de los organismos vivos. Los resultados resumidos anteriormente indican un sistema de metilacin fuertemente acoplado que utiliza clorometano como un intermedio transitorio en muchos basidiomicetos. Aminocidos no proteicos clorados El gnero Amanita contiene algunos de los hongos ms txicos y en consecuencia ha sido el tema de muchas investigaciones qumicas. Varios metabolitos orgnicos halogenados se han aislado del subgnero Lepidella. Todos estos son aminocidos no proteicos clorados del tipo insaturado norleucina. El primer aminocido no proteico clorado se aisl de Amanita solitaria por Chilton y Tsou en 1972. Este compuesto , ( 2S ) - 2 - amino - 5 - cloro - 4 - hexenoico , fue purificada a partir de hongos frescos con un rendimiento de 300 mg / kg . Posteriormente, otro aminocido no proteico, ( 2S ) - 2 - amino - 4 - cloro - 4 - pentenoico, se aisl con un rendimiento de 50 ppm de cuerpos de fructificacin del hongo Amanita pseudo- porfiria. ( 2S cido , 4Z ) - 2 - amino - 5 - cloro - 6 - hidroxi - 4 - hexenoico ac -id [ 9 ] y ( 2S) - 2 - amino - 5 - cloro - 4 - pentenoico se han aislado ( 59mg/kg ) de Amanita abrupta y de Amanita vergineoides , respectivamente . Recientemente, otro aminocido clorado , ( 2S ) - 2 - amino - 5 - cloro - 4 - hidroxi - 5 - hexenoico , se aisl a partir de un cuerpo fructfero Amanita Gymnopus . El mismo compuesto tambin se aisl a partir de un no

identificado Amanita sp. seccin Roanokenses seccin ( Amanitaceae ) en un rendimiento muy alto de la fructificacin cuerpo fresco ( 1,000 mg / kg ) . Estructuralmente, algunos aminocidos no proteicos clorados parecen ser productos de la reaccin de clorhidrina. Amanita spp. producir varios aminocidos no proteicos insaturados, suchas2-amino-4,5-hexadienoicacidand / cido 2-amino-4-pentenoico, lo que probablemente son oxidados por una monooxigenasa en un epxido, que despus reacciona con cido clorhdrico para dar el clorhidrina. Los aminocidos de tipo norleucina insaturados tienen actividad antimicrobiana. Varios son muy txicos para los conejillos de indias y ratones e inhiben enzimas especficas o causar necrosis de clulas hepticas masivas (hepatotoxicidad). cido 2-amino-4-cloro-4-pentenoico aislado de A. pseudoporfiria tiene una fuerte actividad antibacteriana frente a varias bacterias gram-positivas y gram-negativas. La adicin de leucina invierte la inhibicin del crecimiento de siete bacterias, y por lo tanto se concluy que este aminocido clorado podra ser considerado como un antimetabolito. Este aminocido inactiva forma dependiente del tiempo y de forma irreversible L-metionina gamma-liasa procedente de Pseudomonasputida. Compuestos aromaticos clorados Varios otros metabolitos se producen alifticos clorados que no muestran ninguna relacin obvia con los clorometanos y aminocidos clorados se discuti anteriormente. Un orgnico halogenado voltil, 1-cloro-5-heptadecyne, se detect en una tapa de la leche salvaje comestible (Lactarius spp.). Lepiochlorin, un lactol antibacteriano, se aisl a partir de cultivos lquidos de una Lepiota sp., un hongo cultivado por las hormigas de jardinera. Otro aliftico halogenado compuesto con un grupo triclorometilo interesante se aisl a partir del micelio del hongo Resinicium pinicola en rendimiento 120 mg / kg. El compuesto, llamado pinicoloform, posee actividades antibiticas y citotxicas. TERES METLICOS CLORADOS HIDROQUINONA Drosophilins es el primer compuesto clorado aislado a partir de un basidiomiceto, se caracteriz en 1952( 7 , 104 ) . Drosophilin A ( p - methoxytetrachlorophenol ) [ 37 ] (Figura 4 muestra compuestos 37-50 ), que se parece mucho conservante de madera pentaclorofenol , se purific con un rendimiento del 3 mg / L del fluido de cultivo del hongo Drosophila subatrata ahora clasificado como Psathyrella subatrata . Drosophilin A fue el primer compuesto natural halogenado aislado para contener anillo de benceno halogenado ( 7 ) . La investigacin posterior ha detectado su anlogo metilado , 1,4 - dimetoxi - tetraclorobenceno [ 38 ] , en varios hongos ( Tabla 3 ) . Drosophilin A [37] y drosophilin A metil ter [ 38 ], han sido ya detectados en 12 especies de 9 gneros , incluyendo Phellinus , Bjerkandera , y Coprinus . Investigaciones recientes han demostrado que ambos drosophilins estan presentes en varias especies ( 178 ) . Otros dos metabolitos clorados hidroquinona ter metil (CHME) son producidos por Phellinus spp . P. robinea produce un relacionado e interesante nitro - grupo que contiene el compuesto 1,4 dimetoxi - 2 - nitro - 3, 5,6 triclorobenceno [ 39 ] ( 31 ) , mientras que P. ( sin. Fomes ) fastuosus produce 1,2,4 - trimetoxi - 3,5,6 - triclorobenceno [ 40 ] ( 98 ) . La produccin de drosophilins parece ser de importancia ambiental. Varios productores son hongos comunes ,produciendo niveles de moderados a altos de AOX ( 187 ) , y se detect un compuesto con un espectro de masa

idntico a drosophilin A en una compuesta muestra hojarasca ( E de Jong y JA campo , sin publicar) . La produccin de Drosophilin parece ser inducible. La adicin de 3,4 dicloroanilina induce la produccin de drosophilin A en Schizophyllum comun (161), mientras que la adicin de hidroquinona aumento, la concentracin en drosophilin P. fastuosus cuadruplic (178). La hidroquinona podra ser un sustrato para las reacciones de coloracin y metilacin y por lo tanto, en realidad podra ser un intermediario en biosntesis de drosophilin . El hongo Phlebia radiata aument la concentracin de drosophilin en P . fastuosus diez veces ( 178 ) , lo que indica un posible papel como un antibitico . Se ha informado actividad antimicrobiana de drosophilins (104) .

FIGURA 4. TERES METLICOS CLORADOS HIDROQUINONA

ORGANISMO
Agaricus bisporus Agaricus arvensis Bjerkandera adusta Coprinus plicatilis Hypholoma fasciculare Mycena megaspora Peniophora pseudeopini Phellinus fastuosus Phellinus robinea Phellinus yucatensis Psathyrella subatrata Schizophyllum spp

DROSOPHILIN A [37] (mg/lt)

0.5 0.5 20 1.0 15.7

ETER METILICO DROSOPHILIN A [38]

NQ 1.1 mg/liter Trace NQ 1.0 mg/liter 11.0 mg/liter 2.4 g/kg 0.8 g/kg 0.07 g/g

REFERENCIAS
30,70 178 178 21 UR 186 178 163,178 31 94 104

161 mg/lt, concentracin en un cultivo liquido;g/kg, cantidad aislada de un cuerpo fructfero de un basidiomiceto NQ: no cuantificado

3.2 NQ

Russuphelins El hongo toxico Russula subnigricans (Fila Russula ) produce una gama de metabolitos clorados, biolgicamente activos . Ocho metabolitos, un compuesto monomrico , 2,6 - dicloro - 4 - metoxifenol [ 41 ] , tres difenil teres russuphelin - D [ 44 ] , russuphelin - E [ 45 ] y russuphelin -F [ 46 ] , tres teres de trifenilo russuphelin A [ 47 ] , russuphelin - B [ 48 ] , russuphelin - C [ 49 ] , y tetrmero russuphelol [ 50 ] se han aislado de sus cuerpos fructiferos a partir de un clorohidroquinonas ( 142 , 175, 176 ) . Un Russuphelin fue aislado con un 250 mg rendimiento de 1 kg cuerpos fructferos frescos, mientras que los otros eran russuphelins presentes en concentraciones mucho ms bajas. Tambin el compuesto monomrico [ 41 ] se aisl en un rendimiento relativamente alto ( 125 cuerpos fructferos frescos mg / kg ) ( 176 ) . Los teres de trifenilo [ 47 , 48 , 49 ] y el tretamero[ 50 ] poseen actividad citotxica contra las clulas de leucemia Llos teres de difenilo slo [ 44 ] exponen actividad citotxica mientras que [ 45 , 46 ] son inactivos (142, 175 , 176) . Las actividades citotxicas de los russuphelins se debilitaron despus de decloracin , y se sugiri que la sustitucin de cloro influye en la conformacin de los russuphelins y por lo tanto sus actividades biolgicas ( 176 ) . 2,6- dicloro - 4 - metoxifenol [ 41 ] se deriva probablemente del metabolismo de los fenil propanoides de la fenilalanina o tirosina , mientras que las estructuras del oligmero se supone que son sintetizados a travs del acoplamiento oxidativo directo o , alternativamente , a travs de ( SN2 ) reacciones de sustitucin nuclefila bimolecular de [ 41 ] o su producto desmetilado , 2,6 dicloro - 1 ,4 - hidroquinona ( 176 ) . Bjerkandera y Lepista spp ., tambin produce dos clorados hidroquinona metil eteres [ 42 , 43 ] en la el transcurso (91, 168 ) . Estos compuestos son los ms probables productos de degradacin de los fisiolgicamente importantes alcoholes anisilo clorados [15, 18] (168).

FIGURA 5. TERES METILICOS ORCINOL CLORADOS

TERES METILICOS ORCINOL CLORADOS EL micelio de los hongos comestibles, erinaceus Hericium conocidos como barba de viejo , melena del len, contiene seis tipos diferentes de teres metlicos orcinol clorados ( VEN ) [ 51-56 ] (Figura 5 muestra los compuestos (51-56 ) ( 143 , 154 ) . El grupo alcohol ms oxidado, aldehdo, y cido grupo [52-54] se deriva probablemente del metabolismo del grupo metil orcinol . Adems, 4 cloro - 3 ,5 - dimetoxibenzaldehdo [53] se pudo aislar a partir de cultivos lquidos de Bjerkandera adusta (178). Muchos metabolitos orcinol clorados mostraron actividad antibacteriana (143 ) . SESQUITERPENOS ORSELLINATE CLORADOS Ms de 30 steres aril sesquiterpnicas han sido aislados de Armillaria spp : . De stos, ocho estn esterificados con orsellinate clorado (Tabla 4). El hongo de la miel , A. mellea , produce 70 mg del compuesto clorado armillaridin [ 58 ] ( Figura 6 muestra compuestos 57-65 ) por kg de micelio seco ( 102 ) , mientras que los cultivos lquidos de A. ostoyae contener los compuestos clorados melledonal C ( 50 mg / L , [ 61 ] ) y melleolide D ( 35 mg / L , [ 63 ] ) ( 167 ) . Clitocybe elegans es el nico gnero para lo cual se han reportado clorados steres aril sesquiterpnicas ( 13 ), incluyendo Melledonal D [ 62 ] , que todava no se ha detectado en Armillaria spp . El patogeno Basidiomycete Armillaria causa la enfermedad de raz, tanto en conferas y los rboles de hoja caduca . Armillaria spp . fueron los los hongos aislados ms frecuentemente asociados con pudricin de las races de los rboles de abeto y el abeto balsmico que viven en Ontario, Canad ( 190 ) . No se sabe lo que hace parte de la Armillaria spp . Virulenta, pero se sospecha que los metabolitos secundarios son la causa principal. En una prueba de hongos - o fitotoxicidad de 14 metabolitos Armillaria , 4 de ellos con cloro, la toxicidad disminuy con el aumento de hidrofobicidad , por ejemplo, metilacin el grupo hidroxi de la orsellinate y / o la adicin de un tomo de cloro ( 147 ) . Sonnenbichler et al enconto que el aumento de cantidades de Melledonal C [61] y otros steres aril sesquiterpnicas no clorados fueron producidos en cultivos de A. ostoye incrementando en la presencia de un hongo antagonista o clulas vegetales huespeds. (147, 167). La biosntesis del metabolito clorado se mejor hasta cinco veces sobre antagonizacin (167), lo que indica que el propsito fisiolgico de los steres de arilo sesquiterpnicas es su actividad antibitica.

Tabla 4. Orsellinate sesquiterpenos clorados biosintetizados por Aemillaria spp y Clitocybe elegans Cl-Compuesto No. Especie Referencia Armellide B Armillaridin Arnami l 57 58 59 A. novae-zelandiae A. mellea A. ostoyae A. mellea A. ostoyae A. tabescens A. monadelpha A. gallica A. cepestipes A. mellea A. novae-zelandiae A. mellea A. ostoyae A. novae-zelandiae C. elegans C. elegans A. mellea A. ostoyae A. novae-zelandiae A. novae-zelandiae A. ostoyae 14 102 147 40, 51 40, 147 40 40 40 40 16 14 16 147, 167 14 1 13 15 167 14 14 147

Melledonal B Melledonal C

60 61

Melledonal D Melleolide D Melleolide I Melleolide J

62 63 64 65

Figura 6. Orsellinate sesquiterpenos clorados

ESTROBILURINAS, OUDEMANSINA CLORADAS Las estrobilurinas fureon las primeras aisladas desde Strobilurus tenacellus. El cloro estrobilurinas ha estado aisalado desde 3 generos y 7 especies, e.g. Mycena alkalina, M. avenacea, M. crocata, M. vitilis, Xerula longipes, X. melanotricha, and S. tenacellus. Chlorinated oudemansin es

producida por X melanotricha. Los strobulirins clorados y no clorados y los oudemansins estrechamente relacionados son nuevos inhibidores de la respiracin, la unin a citocromo. Trece estrobilurinas y 3 oudemansins han estado aisaldas hasta el momento. Su alta actividad antifngica contra hongos fitopatgenos y los insectos y su baja toxicidad hacia mamferos y bacterias hacen compuestos de plomo atractivos para la sntesis de los fungicidas agrcolas (8). La mayora de los hongos que producen estrobilurinas y oudemansins crecen en la madera. O. mucida tambin produce una estrobilurina no clorado en madera de haya esterilizado. Por lo tanto, parece que las estrobilurinas juegan un papel en la obtencin de recursos de nutrientespara los productores de hongos en competencia. El anillo aromtico y el tomo de carbono benclico en las estrobilurinas y oudemansins se derivan de la va de shikimato, mientras que la cadena lateral est construido a partir de unidades de acetato. La posicin de 3-metoxi-4-cloro es el mismo que en uno de los metabolitos Lepista. CHLORINATED antraquinonas Los cuerpos fructferos frgiles del gnero Dermocybe son de sangre de color rojo y contiene muchas antraquinonas pigmentos. Dos cidos carboxlicos de antraquinona clorados, 5-chlorodermolutein y 5-chlorodermorubin [69], se aislaron por primera vez desde Dermocybe sanquinea y D. semisanquinea (169). Keller utiliza tcnicas de cromatografa en capa fina para analizar pigmento composicin inmany Dermocybe spp. para los propsitos sistemticas. 5-Chlorodermorubin fue detectado en uliginosa D. y D. sommerfeltii, y era ms probable tambin est presente en D. crocea, D. cinnamomea, D. malicoria, D. Phoenica y D. anthracina (105). 5-Chlorodermorubin [69] tambin se detect en varios Cortinarius spp., Por ejemplo, C. aspensis, C. marylandensis y C. pheoniceu var. occidentalis (106). Los pigmentos en antraquinonas se sintetizan a travs de la ruta polictido (64, 105), con la molcula de cloro posiblemente proveniente de una reaccin de clorhidrina. VARIOS COMPUESTOS CLORADOS AROMTICOS.

Algunos otros metabolitos aromticos clorados son producidas que muestran ninguna relacin obvia con los metabolitos se discuti anteriormente. Anlisis de los compuestos de sabor de las legumbres hongos comestibles Boletus edulis revel la produccin de un clorocresol no especificado [70] (Figura 9 muestra los compuestos 70-80) (180). Otro nuevo metabolito, 1,2,3trimetoxi-4, 5,6 triclorobenceno [71], se ha aislado recientemente de Phellinus fastuosus (98); este compuesto podra estar relacionado con los drosophilins descritos anteriormente. El compuesto tiene una actividad antibitica selectiva contra Botrytis cinerea. 2-Cloro-3-(4-metoxifenil)-2propen-1-ol [72] fue obtenido a partir de cultivos de Lentinellus cochleatus (191). Un isobenzofuranona clorado [73] se aisl a partir carneifolia Leucoagaricus (95). El hongo patgeno Heterobasidion annosum altamente sintetizado de una serie de compuestos especficos en la presencia de un hongo antagnico, Gloeophyllum abietinum, o clulas de la planta anfitrin (166). Un compuesto producido en cantidades traza fue un metabolito bencenoide clorada con una cadena lateral lactona [74]. Sin embargo, contrariamente a varios metabolitos no

clorados relacionados, este compuesto no mostr ningn efecto inhibidor del crecimiento. El hongo Kuehneromyces mutabilis produce metil 3,6-dicloro-2 metilbenzoato de metilo [75] (2). Mycenon [76] es producido por Mycena sp. a una concentracin de 2,5 mg / L. Este es el nico metabolito aislado de Basidiomycetes para contener grupos de cloro tanto en el anillo aromtico y en la cadena lateral aliftica. Mycenon muestra la actividad antibacteriana y antifngica (86). 3-metoxi-4-clorobenzaldehdo [77] fue reportado primero como un metabolito de Lepista diemii (179) y tambin ha sido recientemente aislado de L. nuda (91). Este ltimo hongo tambin produce 4 cloroanisol [78] y 2,6-dicloroanisol [79] (91). 2,4 diclorobenzoato [80] Tambin se ha reportado de Bjerkandera adusta (139).

IMPORTANCIA AMBIENTAL DE LOS ORGANOHALGENOS Estos resultados demuestran claramente que muchos basidiomicetos producen compuestos organohalogenados en el laboratorio. Aqu tratamos de demostrar que tambin hay una produccin considerable de compuestos organohalogenados en el ambiente natural. El clorometano es, con mucho, el ms abundante compuestos organohalogenados voltil en la atmsfera. A nivel mundial?, 3-8 106 toneladas mtricas / ao son derivados de fuentes naturales; Aportaciones hechas por el hombre, que se estima en el 2,6 104 toneladas mtricas / ao, son insignificantes en comparacin (75). Una parte importante de la clorometano producido por fuentes naturales se asume que es de origen biolgico (75), aunque la contribucin real de fuentes terrestres naturales, incluyendo los hongos basidiomicetos, podra ser relativamente bajo (65). Recientemente, se demostr que Basidiomycetes, por ejemplo, Bjerkandera, Hypholoma, y Lepista spp., Producen bajo peso molecular metabolitos anisilo clorados (CAM) cuando crecen sobre sustratos lignocelulsicos, esterilizados naturales (49, 89). Sin embargo, el anlisis de un parmetro de suma, tales como AOX, es mucho mejor para Basidiomycetes pantalla para la produccin de compuestos organohalogenados no voltiles. Verhagen et al, demostraron que muchos gneros produce AOX cuando se cultivan en el material lignocelulsico estril (187), el penacho de azufre (H. fasciculare) y Mycena metata sintetizados hasta 132 mg y 193 mg AOX / kg de peso seco de sustrato desechos del bosque en 6 semanas, respectivamente (187). Las tasas mximas de produccin especficos organohalogenado para estas especies en sustratos naturales es extremadamente alta. Utilizando mediciones ergosterol para estimar la biomasa de hongos, se encontraron valores entre 630-3200 mg / AOX producido por kg de micelio seco por da con H. fasciculare al colonizar la madera y basura del bosque (FJM Verhagen, BKHL Boekema, FBJ van Assema y JA campo, indito resultados). En cultivos lquidos, el mechn de azufre y otros Hypholoma spp. producir halgeno orgnicamente atado hasta el 3% de su peso seco de biomasa (187). Las tasas mximas de produccin organohalogenado ocurrieron durante la transicin del cultivo de hongos desde la

primaria hasta el metabolismo secundario. Estos resultados implican que tambin se pueden producir compuestos organohalogenados en el medio ambiente. Para evaluar la presencia de compuestos organohalogenados voltiles en ambientes naturales, la madera o el bosque basura en las cercanas de los cuerpos fructferos de Basidiomycetes se puso a prueba los metabolitos anisilo clorados (CAM) (49). En todos los casos, las cepas que produjeron CAM en el laboratorio tambin produjeron CAM en el medio ambiente. Las concentraciones de los metabolitos orgnicos halogenados encontradas en la naturaleza variaron de madera 15 mg / kg producido en la vecindad de B. adusta, 39 mg / kg de basura por L. nuda, 71 mg / kg de madera por P. squarrosa a 75 mg / kg de madera por Hypholoma spp. (49). En ambos experimentos de laboratorio y las muestras de campo, los alcoholes y aldehdos (16, 18, 19) anisilo clorados se encuentran en las concentraciones ms altas. Estas cantidades de metabolitos cloroaromticos exceden las normas holandesas y canadienses (Columbia Britnica) de clorofenoles anlogas en el suelo, que se fijan en aproximadamente 1 a 10 mg / kg para la rehabilitacin obligatoria (60). Un gran nmero de AOX naturales se ha detectado en los ambientes terrestres contaminados (18). El origen de estos compuestos organohalogenados es an en gran medida desconocida, aunque se estn acumulando pruebas de que Basidiomycetes son responsables de una parte sustancial de estos AOX. Cuando no estril abedul albura se incub con 9 hongos de podredumbre blanca durante 30 semanas, 8 cepas mostraron aumentos sustanciales en el espacio en blanco. La cantidad total de halgeno orgnicamente atado fue de 69 mg / kg de peso seco por B. adusta y 61 mg / kg de peso seco por P. lindbladii (139). Especies del gnero Hypholoma, Mycena, y Bjerkandera estaban entre los ms altos productores de AOX en el laboratorio (187), y estos gneros se han notificado a ser el primero, segundo y sexto Basidiomycetes que aparecen ms frecuentemente en los Pases Bajos, respectivamente (136) . La estimacin de la produccin anual de AOX no es fcil. La biomasa basidiomicetos especfica y total no es bien conocida. Adems, la relacin entre los altos y bajos AOX productora de cepas puede variar mucho entre los hbitats. Por lo tanto, la produccin total de AOX en los hbitats especficos se estim mediante la suma de la produccin de AOX de las especies separadas presentes, sobre la base de los valores estimados de biomasa y la produccin de AOX especfica (187). La produccin total de AOX en tres ecosistemas forestales diferentes vari de 100 a 200 g AOX / ha / ao en base a 13 spp. En una turbera con una biomasa micelial de Hypholoma elongatipes de 80 kg / ha / ao, con una produccin anual de 2 kg se calcula AOX / ha (187). Sin embargo, estos clculos son ms probables subestimaciones porque no tienen en cuenta todas las especies productoras de AOX, porque los clculos de biomasa y las tasas de produccin son inciertos, y debido a que el aumento de la produccin de compuestos aromticos clorados por las interacciones antagnicas entre especies de hongos que compiten o las clulas vegetales de acogida no se tuvo en cuenta (147, 167).

Estos resultados, junto con el papel ecolgico dominante de Basidiomycetes como descomponedores de residuos de los bosques, sugieren que son una fuente importante de compuestos organohalogenados naturales en ambientes terrestres. Sin embargo, la contribucin total de hongos al polo AOX terrestre es probablemente an mayor debido a que otros grupos de los hongos, por ejemplo, Ascomicetos y hongos imperfectos, apenas han sido investigados por su potencial de produccin orgnico halogenado. Madera que habitan Ascomycetes, por ejemplo, Xylaria y Mollisia spp., Y hongos imperfectos, por ejemplo, Aspergillus y Penicillium spp., Son conocidos por producir compuestos organohalogenados (3, 67, 126, 183). DESTINO AMBIENTAL La mineralizacin de compuestos aromticos clorados. En la seccin anterior hemos demostrado que los metabolitos anisilo clorados (CAM) podran ser detectados en las inmediaciones de los cuerpos fructferos de CAM de produccin Basidiomicetos (49). Sin embargo, a las acuferas de CAM colonias productores de basidiomicetos, los organohalogenados de bajo peso molecular ya no eran detectables, esto sugiere que los compuestos se biodegradan o biotransforman. Los Basidiomicetos ligninolticas mineralizan una amplia gama de compuestos cloroaromaticos incluyendo clorofenoles. Sin embargo los alcoholes anisilo clorados (15,18) son resistentes frente a las reacciones de oxidacin con enzimas ligninolticas (46). Pueden producirse reacciones reductiva o mineralizacin intercelular por estas enzimas ligninolticas, sin embargo muchos otros microorganismos y consorcios microbianos pueden mineralizar completamente una amplia gama de compuestos aromticos halogenados.(59,72,138,150). Recientemente se demostr, que los suelos de seis inalterados y vrgenes ecosistemas de todo el mundo tiene la capacidad para mineralizar 3-clorobenzonato de metilo y 2,4- diclorofenoxiaceto (2,4-D) (63). Por lo tanto, la mineralizacin de compuestos organohalogenados debe ser una caracterstica mundial, es anticipado que haya microrganismos bacidiomicetos presentes en la inmediacin de contaminantes con el potencial de degradar los compuestos organohalogenados naturales estables producidos por estos hongos. Una parte de los novo biosintetizados puede ser totalmente mineralizada, sin embargo, otra parte puede llegar a ser incorporada en humus de acuerdo con las siguientes biotransformaciones. METABOLISMO DE COMPUESTOS AROMATICOS CLORADOS Cmo se forman los compuestos organohalogenados de alto peso molecular? No se conoce con exactitud, aunque han sido propuestas dos explicaciones posibles. Los organohalogenados de bajo peso molecular biosintetizados por basidiomicetes y otros microorganismos pueden llegar a ser incorporados en un material de alto peso molecular (49), o un material de alto peso molecular se halgena directamente. Se ha demostrado que los basidiomicetes producen metabolitos halogenados dimericos y oligomericos.

El penacho de azufre produce un CAM dimerico (31) (68), y la polimerizacin de 2,6-dicloro4metoxifenol (41) en los cuerpos fructiferos de R. subnigricans , dando lugar a varios metabolitos oligomericos (44-50) (142 ,175,176). Tambin se ha propuesto que un metabolismo parcial por los bacidiomicetos y otros microorganismos en el mismo ecosistema como el grupo metoxi y alcohol/grupo aldehido de los metabolitos anisilo clorados (CAM), producirn reacciones de hidroxilacion, entre otros, 2 clorofenol y 3-clorocatecol (49). Los ltimos compuestos se co-polimerizan en humus con enzimas fenol oxidantes, como se ha demostrado, tanto in vitro (25,26,38,122,160) y durante microcosmos del suelo (33) y los estudios de compostaje (129). Los polmeros cloro humus resultantes contienen compuestos organohalogenados unidos covalentemente y no son txicos (25,121), y son poco biodegradables cuando se incuban en los suelos (43). De lo contrario, la cloroperoxidasa extracelular puede halogenar material de alto peso molecular directamente. Se ha indicado la presencia de cloroperoxidasas en muestras de suelo. Ambos mecanismos, la incorporacin de compuestos de bajo peso molecular y la cloracin de cloroperoxidasa catalizada, son pertinentes, y la investigacin futura debe indicar la importancia relativa de cada sistema. es de importancia la determinacin de la distribucin del peso molecular de compuestos lignina organohalogenados en la capa delgada y los diferentes horizontes A. Con las profundidades del suelo, los organohalogenados naturales incrementan el peso molecular y la relacin de cloro a carbn (90). La estructura qumica de compuestos organohalogenados de alto peso molecular es desconocida. Sin embargo, un mtodo desarrollado para la degradacin oxidativa es analizar las estructuras de bloques de construccin manomericos en humus naturales, se ha revelado que los principales compuestos se obtuvieron a partir de3-cloro-4-hidroxi- y 3,5dicloro-4- hidroxibenzonato de metilo, mientras que en la capa delgada 3-metoxi-5-cloro-4hidroxibenzonato tambin podra ser detectado (41,90). Sin embargo, este mtodo puede identificar solo el 2% de todos los AOX bsicamente, en el polmero humus solo se pudo recuperar el bloque de construccin de borde de ataque de una sucursal con el procedimiento de despolimerizacin qumica. Adems de compuestos clorados, tambin se han detectado esteres metlicos de cidos 4hidroxibenzoico bromados y yodados en una muestra de origen terrestre no contaminada (100). Curiosamente los efluentes de las industrias blanqueo de kraft fueron ms abundantes guayacilo clorado y unidades siringil (42). Si una reaccin de cloracin cloroperoxidasa catalizada es un mecanismo importante para la formacin de clorohumus, cabra esperar un perfil de degradacin ms similar a la encontrada en los efluentes de las industrias de blanqueo de kraft. Estos datos sugieren que los CAM y otros metabolitos halogenados son importantes precursores a los bloques de construccin para clorohumus. La presencia de productos intermedios clorofenolicos sugiere que reacciones biotoxificantes puedan ocurrir para generar compuestos naturales peligrosos, incluyendo dioxinas y dibenzofuranos (49). Se ha demostrado que una oxidacin peroxidacatalizada de clorofenoles da paso a las dioxinas cloradas y diobenzofuranos , y esas dioxinas estn formadas el lodo de aguas residuales. Interesantemente un reciente estudio en Alemania mostro significantes diferencias entre pastizales/tierras agrcolas y conferas/ caducados suelos

boscosos o en reas rurales. La suma de todas las dioxinas cloradas y diobenzofuranos que se encuentran en los suelos forestales ascendieron a alrededor de 2,2 ug/kg de materia seca, casi 13 veces ms alta que en los pastizales (159). DEGRADACION DE ORGANOHALOGENADOS ANTROPOGENICOS POR BASIDIOMICETOS Muchos bacidiomicetos producen cantidades sustanciales de compuestos organohalogenados. Curiosamente varios basidiomicetos producen grandes cantidades de organohalogenados de bajo peso molecular y AOX, por ejemplo, Bjerkandera y Hupholoma spp., pertenecen a los hongos de podredumbre blanca. Este grupo de basidiomicetos puede degradar completamente todos los tres componentes principales de madera, hemicelulosa, lignina y celulosa. La estrategia que estos hongos utilizan para degradar las ligninas es una combustin enzimtica (109). Su, sistema enzimtico oxidativo extracelular nico causa la degradacin no especifica de la lignina. Este sistema enzimtico no especifico, es tambin eficaz en la biotransformacin de una amplia gama de contaminantes clorados mediante el uso de reacciones tanto oxidativas y reductoras (20,29,58.) RANGO DE ORGANOHALOGENADOS ANTROPOGENICOS METABOLIZADOS POR BASICIOMICETOS A menudo se utilizan Phanerochaete chrysosporium y la cola de pavo, T. versicolor, como organismos modelo para estudiar la biodegradacin de compuestos organohalogenados Antropogenicas, aunque la capacidad de otros hongos de podredumbre blanca para degradar estos xenobioticos tambin ha sido investigada. La mineralizacin de compuestos organohalogenados in vitro en generalmente mejorada bajo condiciones de cultivo favorables para la mineralizacin de lignina, lo que sugiere que el sistema de lignina- degradante puede estar implicada en la transformacin de los compuestos antropogenicos (29). Enzimas extracelulares por hongos, incluyendo peroxidasas de lignina , peroxidasas de manganeso, lacasas y actan a travs de un mecanismo no especifico de radicales libres y est implicado en la degradacin de las ligninas (47,109); se ha propuesto que las mismas enzimas estn implicadas en la degradacin de hongos de varios compuestos organohalogenados (58,74,101,146). DEGRADACION DE ORGANOHALOGENADOS ALIFATICOS Sorprendentemente varios compuestos alifticos organohalogenados, incluyendo cloroformo, tricloroetileno y tetraclorometano, y algunos contaminantes ya altamente oxidados tambin son mineralizados por cultivos ligninoliticas de P. Chrysospirum en condiciones aerobias. (108,162). Esto sugiere un posible papel de peroxidasas ligninoliticas en la mineralizacin de estos productos qumicos. Investigaciones recientes han indicado que hongos de podredumbre blanca pueden utilizar diferentes mecanismos para causar reducciones reductivas (20). Sin embargo solo con la lignina peroxidasa ha sido demostrado la deshalogenacion reductora de compuestos organohalogenados alifticos. El sistema capaz de generar estas reacciones reductivas contiene lignina peroxidasa, alcohol veratrilico, etilenedianimetetraacetato (EDTA) o de oxalato y perxido

de hidrogeno. Se ha propuesto que el radical anin carboxi es la especie reductora real en esta reaccin. Dado que todos los componentes de este sistema reductivo con oxalato como un electrn donante se excretan por P. chrysosporium, este mecanismo puede estar implicado en la decoloracin reductiva de estos halocarburos por el hongo (108). EFLUENTES DE CLOROLIGNINA TRADICIONAL EN LEJIA KRAFT. El mtodo de blanqueo de pulpas KRAFT emplea cantidades sustanciales de cloro elemental, lo que resulta la formacin de altas concentraciones de clorolignina (165). Trametes versicolor, en particular, ha sido utilizado con xito en biorreactores para decolorar y eliminar el cloro blanqueador KRAFT de los efluentes de las industrias (12). Se logran rangos de reduccin de AOX desde 52% a 59% (145). La decoloracin de los efluentes de blanqueo tambin se ha observado con otros hongos de podredumbre blanca, por ejemplo, P. chrysosporium, Ganoderma lucidium y Hericium (24,62, 189). Sin embargo recientes cambios en los procedimientos de blanqueamiento en las industrias de celulosa, han bajado la aplicacin de hongos de podredumbre blanca (152). PENTACLOROFENOL Y OTROS CLOROFENOLES. La biodegradacin de conservantes de madera pentaclorofenol (PCP) por los basidiomicetos est bien documentada. Una alta mineralizacin (50-70%) de estos compuestos organicohalogenados se ha descrito para varios hongos de podredumbre blanca, incluyendo P. chrysosporium, Panerochaete srdida, Lentinula edodes, Unonotus dryophilus, Irpex lacteus, Bjerkandera adusta, Phellinus badius, y Trametes versicolor (4, 5, 120, 130, 144,170). El hongo blanco de podredumbre Mycena avenacea tambin puede metabolizar PCP (113). En casi todos los casos, el principal producto de transformacin fue pentacloroanisol. Es una tendencia general de los Badiomicetos el metilar clorofenoles, muy probablemente como un mecanismo de desintoxicacin o para prevenir la plimerzacion de los compuestos fenlicos. Sin embargo, tambin puede ser una reaccin no especfica de metil transferasas implicados en rutas biosinteticas. Ambas peroxidasas de lignina y lacasa han sido consideradas como catalizadores en la oxidacin inicial de clorofenoles y ootros organohalogenados por hongos de podredumbre blanca (36, 74, 157). Estas enzimas, asi como otras peroxidasas , oxidan el pentaclorofenol a travs de un radical fenoxilo a la correspondiente para quinona (Figura 10) (74, 103, 130, 157) y en otros casos, causar la liberacin de tomos de cloro de organohalogenados oxidantes. La deshalogenacion lacasa- o catalizada por fenoles peroxidasa de clorados pueden ser causados por acoplamiento oxidativo (45) o por sustitucin nucleofilica (74, 97). Tambin ha sido examinada la biodegradacin de PCP por P. chrysosporium en suelos estriles y no estriles en el laboratorio e in situ (37,114,115), y se ha demostrado que los hongos que degradan la lignina se pueden utilizar en la eliminacin de la madera tratada con pentaclorofenol (116).

Curiosamente, tanto spp bacteriana., Por ejemplo, Mycobacterium y Rhodococcus, y Basidiomicetos, por ejemplo Mycena sp., producen orgnicos halogenados naturales intermedios, durante la degradacin del pentaclorofenol y 2,6- diclorohidroquinona. Los microorganismos causaron una metilacin de tetraclorados hidroquinona intermedios de degradacin, lo que resulta en la formacin de drosophilin A (37) y drosophilin A metil ter (38). Del mismo modo, 2,6-diclorohidroquinona fue convertido a 3,5-dicloro-4-metoxifenol, que se asemeja a russuphelin precursor (41)(73,111,171). DIOXINAS CLORADAS El Phanerochaete chrysosporium puede metabolizar toxinas cloradas y tetracloradas. Se han propuestos varias vas comprobables para la degradacin de 2,7-diclorodibenzo dioxina y los fenoles 2,4- diclorofenol y 2,4,5- triclorofenol (101,184,185). En todos los casos se ha postulado la participacin de las peroxidasas, y enzimas intracelulares que causan la reduccin de las quinonas formadas y la metilacin de hidroquinonas con metil. Curiosamente, en estas vas se eliminaron todos los tomos de cloro antes que se produjera la escisin del anillo. POLICROROBIFENILOS Cultivos lignoliticos de P. chrysosporium degradaron algunos bifenilos policlorados (PCB) a CO2. Sin embargo, las tasas de degradacin fueron inversamente proporcionales al nmero de tomos de cloro en la molcula bifenilo. No hubo correlacion entre la tasa de degradacion y la sntesis de las peroxidasas de lignina o de MN- peroxidasas dependientes (50-181). El 4-40-diclorobifenilo fue ampliamente degradado en el cultivo lquido, y el cido 4-clorobenzoico y el alcohol 4- clorobencil fueron identificados como metabolitos producidos. En contraste, no hubo mineralizacin de tetracloro-o hexaclorobifenilo y hubo poca evidencia de metabolismo (50). En otro trabajo, P. chrysosporium ha demostrado ser capaz de una degradacin sustancial de mezclas de PCB altamente clorados tales como el Aroclor 1260, que tiene un promedio de seis molculas de cloro en cada estructura de bifenilo. Curiosamente, los PCB se mineralizaron tanto en bajo nitrgeno (lignoltico) as como en alto contenido de nitrgeno (no lignolitico), con la mayor degradacin de los congeneres en medio de extracto de malta (193), lo que indica que las enzimas que degradan la lignina no est involucradas en la degradacin de PCB. Otros hongos de podredumbre blanca, por ejemplo, Pleurotus ostreatus y Trametes versicolor, degradaron los PCB en un sistema de estado lquido (188-197). El DDT (1,1,1-tricloro-2,2-bis (4-clorofenil)etano) y el llamado subproducto son salida DDE, son contaminantes ambientales extremadamente persistentes. Los hongos de podredumbre blanca son excepcionales, ya que pueden metabolizar los dos componentes a CO2 (28,29). Sin embargo, la mineralizacin es a menudo menos de 10%. La participacin de la lignina peroxidada en la degradacin del DDT tambin ha sido cuestionada (110). Sin embargo, solo el primer paso en la degradacin reductiva en la degradacin del DDT es

independiente de las enzimas lignioliticas, pero su mineralizacin solo se produce en condiciones lignoliticas (20). ATRAZINA 2-cloro-4-etilamino-6-isopropilamino-s-triazina fue degradada por vida libre y hongos micorrcicos. La incorporacin ms lata de la atrazina de carbono en la biomasa se obtuvo con un hongo micorriza (52). La degradacion de la atrazina en el suelo se ha mejorado mediante la inoculacin con P. chrysosporium o Pleurotus pulmonarius (54, 88,125). Sin embargo no se ha encontrado ninguna mineralizacin del anillo de triazina. OTROS ORGANOHALOGENADOS DEGRADADOS POR BASIDIOMICETOS Otros compuestos halogenados antropogenicos tambin pueden ser degradados por basidiomicetos. En estos se incluyen el insecticida de tipo amidinohidrazona, hidrametilnon (1), alaclor (57), y clorobencenos (195). El 3,4-dicloro-anilina se metabolizapor varios basidiomicetos incluyendo Schizophyllum, Filoboletus, y Auriculariopsis (112, 151,151). El hongo de podredumbre marrn Tyromyces palustres y Serpula lacrymas y el hongo de podredumbre blanda T. versicolor degradan varios conservantes de la madera (119). La fluoroquinolona enrofloxacina tambin fue mineralizada por hongos de podredumbre marrn (123). El haluro de alquilo lindano y clordano se metaboliza por P. chrysosporium (107). Sin embargo, concluyeron que las peroxidasas extracelulares no estaban involucradas en la degradacin de estos insecticidas, sino ms bien la participacin de un P450 monooixigenasa estaba implicado (133). El P. chrysosporium tambin tuvo la mayor mineralizacin (50%) de dos herbicidas fenoxialcanoicos comunes, 2,4diclorofenoxiacetico acido (2,4-D) y cido 2,4,5- triclorofenoxiacetico (2,4,5-T), ricos en medios nutrientes (no ligninolitico). DESTINO DE ORGANOHALOGENADOS ANTROPOGENICOS Los basidiomicetos causan una biotransformacin casi completa de varios compuestos organohalogenados despus de un tiempo de incubacin prolongado, y una parte sustancial de los compuestos xenobioticos se mineralizo a dixido de carbono. Sin embargo, en los experimentos tanto con el suelo enriquecido con clorofenoles y cultivos lquidos enriquecidos con cloroanilinas, la mineralizacin real de dixido de carbono se estabilizo y se mantuvo, en la mayora de los casos, por debajo de 20% despus de una incubacin prolongada con varios hongos de podredumbre blanca. En los suelos estriles enriquecidos con PCP e inoculados con P. chrysosporium, una parte sustancial de los componentes radioactivos se convirti en suelo compacto y no extraible (117). Recientemente se ha demostrado que los dimeros y oligomeros se formaron como productos intermedios durante la biodegradacin de 4-cloroanilina (32) y clorofenoles (101). Estos oligomeros de 4-cloroanilina y clorofenoles se formaron in vivo. Las enzimas lignoliticas extracelulares, lignina peroxidasa y lacasa, oxidan estos monmeros para formar varios dmeros, trmeros y tetrmeros de clorofenoles y cloroanilinas (25, 32, 74, 101,112). La eliminacin de clorofenoles por enzimas lignoliticas podra mejorarse en presencia de reactivo co-sustratos que tengan un gran parecido a los bloques de construccin de la lignina, tales como

guayacol y 2,6 dimetoxifenol. La adicin de 2,6-dimetoxifenol mejora la formacin de polmeros insolubles desde 2,4.5 triclorofenol en un 90% con peroxidasa de rbano picante y un 98% con T. versicolor lacasa (158). La decoloracin se produce durante el acoplamiento de reacciones oxidativas debido a la eliminacin oxidativa de los grupos cloro prrafo, y la mayora del organoclorado restante parece ser incorporado en los polmeros que estn formados (25,44). Las enzimas oxidativas tambin pueden causar el acoplamiento cruzado de varios clorofenoles y cloroanilinas con material de alto peso molecular, tal como el cido hmico (43,1477). El uso de 13C-RMN para detectar 13C-2,4 diclorofenol y la liberacin de iones de cloruro confirmaron que los en laces covalentes se forman entre los clorofenoles y los cidos hmicos (25,44). El medio ambiente de destino de ambos compuestos organohalogenados naturales y Antropogenicas, parece bastante similar, CONCLUSIONES Hay una capacidad ubicua en los basidiomicetos para producir una gran variedad de metabolitos orgnicos halogenados. Hasta la fecha. 81 metabolitos derivados halogenados se han identificado a partir de los basidiomicetos, es probable que esta cifra aumente sustancialmente durante la prxima dcada. Los metabolitos ansalo clorados (CAM) son los ejemplos ms importantes, ya que son detectables en grandes cantidades en el medio ambiente y producidos por muchos gneros diferentes de basidiomicetos. Poco a poco est surgiendo una mayor comprensin de las rutas de biosntesis de las diferentes clases de compuestos organohalogenados , a pesar de eso la clave de halogenacion todava no se ha identificado. Los organohalogenados no son accidentes biolgicos. Algunos basidiomicetos producen una gran variedad de metabolitos organohalogenados, hasta un 3% de su peso seco de biomasa. Claramente los compuestos organohalogenados son producidos con un propsito. El clorometano es utilizado por basidiomicetos como agente de metilacin para carboxilos aromticos y grupos hidroxilo fenlicos. Los alcoholes anisilo clorados tienen un importante papel fisiolgico en la degradacin de lignina, ya que son sustratos para aril alcohol oxidasa generando H2O2, un cosustrato necesario para las peroxidasas extracelulares. Varios otros compuestos organohalogenados tienen un papel como una sustancia qumica de defensa, para la proteccin de colonias de organismos. En la mayora de los casos el grupo cloro es una parte vital del metabolito por su funcin fisiolgica o actividad antibitica. El grupo cloro activa metano para reacciones de transferasa en la biosntesis de metabolitos secundarios importantes metilados. La cloracin de metabolitos anisilo hace que se obtengan mejores sustratos para el H2O2 (perxido de hidrogeno)- generando el alcohol oxodasa arilo y los hace ms resistentes a las propias enzimas ligninoliticas de hongos. La sustitucin de cloro de los russuphel influye en la conformacin, y en las actividades biolgicas de estos compuestos. Los Basidiomicetos producen importantes cantidades de compuestos organohalogenados de bajo peso molecular, por ejemplo los metabolitos anisilo clorados, o halgenos organicos adsorbibles (AOX) cuando se cultivan sustratos lignocelulosicos. El penacho de azufre (Hypholoma fasciculare) y otros Hypholoma spp. fueron algunos de los productores de organohalogenados ms altos. Estos compuestos halogenados pueden incorporarse convertidos en humus segn biotransformaciones conocidas.

En habida cuenta de la importancia ecolgica de los Basidiomicetos como descomponedores de hojarasca, llegamos a la conclusin de que son una fuente importante de compuestos organohalogenados naturales en ambientes terrestres. Los basidiomicetos tambien pueden degradar una amplia gama de organohalogenados antropogenicos, y se ha propuesto que el destino ambiental de ambos, tanto organohalogenados naturales y antropogenicos es muy similar. Bajo algunas condiciones los metabolitos se mineralizan a dixido de carbono, mientras que en otros casos se metaboliza parcialmente y se vuelven susceptibles para incorporacin en humus.