ISRN Pharmacology Volume 2011 (2011), Article ID 851870, 8 pages http://dx.doi.org/10.5402/2011/851870 Catharina M. C.

Mels, Peet Jansen van Rensburg, Francois H. van der Westhuizen, Pieter J. Pretorius, and Elardus Erasmus Centre for Human Metabonomics, North-West University (Potchefstroom Campus), Private Bag X6001, Potchefstroom 2522, South Africa Received 30 November 2010; Accepted 13 January 2011 Academic Editors: J. C. Laguna and A. Zhang Copyright 2011 Catharina M. C. Mels et al. This is an open access article distributed under theCreative Commons Attribution License, which permits unrestricted use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original work is properly cited.
Aumento de la excrecin de especies C4-carnitina despus de una dosis teraputica de cido acetilsaliclico: evidencia de un efecto inhibitorio sobre el metabolismo de cidos grasos de cadena corta cido acetilsaliclico y sus metabolitos estn implicados para tener varios efectos sobre el metabolismo y, especialmente, en la funcin mitocondrial. Estos efectos incluyen efectos inhibitorios tanto estimulantes. Investigamos el efecto de cido acetilsaliclico oral combinado y separado y administracin de acetaminofn en dosis teraputicas sobre el perfil del metabolito urinario de sujetos humanos. En este papel, proporcionamos pruebas in vivo, en sujetos humanos, de un aumento estadsticamente significativo en isobutyrylcarnitine despus de la administracin de una dosis teraputica de cido acetilsaliclico. Por lo tanto, proponemos un efecto inhibitorio del cido acetilsaliclico en el metabolismo de cidos grasos de cadena corta, posiblemente a nivel de isobutyryl-CoA dehydrogenase.1. IntroduccinEl deshidrogenacin de acil-CoA intermedios en el catabolismo de los cidos grasos y aminocidos de cadena ramificada en los seres humanos es catalizada por las enzimas de mitocondrial acil-CoA deshidrogenasa [1, 2]. Varios defectos heredados en este grupo de enzimas han sido caracterizados. Defectos en o inhibicin, isovalerylCoA deshidrogenasa y 2-methylbutyryl-CoA deshidrogenasa resultado de la acumulacin de especies C5-carnitina [3] mientras que defectos en o inhibicin de cadena corta del acil-CoA deshidrogenasa y isobutyryl-CoA deshidrogenasa resultado la acumulacin de especies C4carnitina [2] (Figura 1).

Figura 1: Propuesta inhibicin por cido saliclico del catabolismo de aminocidos de cadena ramificada. Inhibicin (o carencia) de (1) isovaleryl-CoA deshidrogenasa, (2) 2-methylbutyryl-CoA deshidrogenasa y (3) isobutyryl-CoA deshidrogenasa, resultar en una acumulacin de especies de carnitina-C4 y C5-carnitina. En el cuerpo humano, el cido acetilsaliclico se hidroliza a cido saliclico, el cual es excretado en forma de conjugados con glicina y glucurnico cido, en su forma hidroxilada en 2,5dihydroxybenzoic cido, o sin cambios como el cido saliclico [4]. Se han realizado numerosos estudios in vitro e in vivo que demuestra varios efectos de cido acetilsaliclico (y sus metabolitos) en el metabolismo y, especialmente, en la funcin mitocondrial, tales como el desacoplamiento de la fosforilacin oxidativa [5, 6], inhibicin de la oxidacin del cido graso [5] con la estimulacin concomitante del citocromo P450 dependiente -oxidacin [9] y, por consiguiente, la acumulacin de cidos dicarboxlicos [10]. Adems, la inhibicin de tanto el ciclo de Krebs enzimas Cetoglutarato deshidrogenasa y succinato deshidrogenasa [6, 11], as como un aumento del flujo a travs del ciclo de Krebs [12], se han divulgado. Otros efectos del cido saliclico incluyen la estimulacin del consumo de oxgeno, estimulacin de la hidrlisis de ATP [5], la activacin de la piruvato deshidrogenasa y la inhibicin de la gluconeognesis [12]. Tambin puede conducir a las concentraciones de glucosa de sangre disminuido, aumento triglicridos hepticos [6] y un ligero aumento en Butiril-CoA (iso), -methylcrotonyl-CoA, isovaleryl-CoA y concentraciones octanoylCoA [13].El mecanismo exacto de la inhibicin que el cido acetilsaliclico y sus metabolitos ejercen sobre la oxidacin de los cidos grasos no es claro, ya que diversos estudios indican

diferentes sitios de inhibicin. Estos incluyen un efecto inhibitorio sobre la activacin y transporte de cidos grasos de cadena media y larga a la mitocondria [7], por el secuestro de extramitochondrial coenzima A y carnitina [6], inhibicin de la sintetasa de acil-CoA de cadena media [8] o inhibicin de las enzimas la carnitina Aciltransferasa (CAT) [14]. Por el contrario, se demostr que el objetivo de inhibicin fue encontrado para ser a nivel de la actividad de la deshidrogenasa de 3-hidroxiacil-CoA de cadena larga (LCHAD) de la enzima trifuncional mitocondrial de -oxidacin (MTE) y no en el nivel de absorcin o activacin de los cidos grasos [15]. Mientras realiza biotransformacin metabolismo y estado de estrs oxidativo perfiles de estudios, en los individuos referidos a nuestro laboratorio, mediante el uso de cido acetilsaliclico y paracetamol como sustratos de sonda, hemos hecho la observacin de la presencia de elevados C3, C4 y especies C5-carnitina algo sorprendente en su orina. Estas observaciones condujeron a una investigacin ms a fondo sobre la naturaleza de estas especies de acilcarnitinas y si su excrecin creciente debido al efecto de la administracin de paracetamol y cido acetilsaliclico separado o combinado. Puesto que la acumulacin de especies C4 y C5-Carnitina es predominante asociada con el metabolismo de aminocidos de cadena ramificada deficiente nivel de enzimas de la deshidrogenasa del acil-CoA diferentes [2, 3], presumimos que la administracin de cido acetilsaliclico est asociada con la elevacin de estas especies, que pueden estar vinculadas a la inhibicin del metabolismo de los cidos grasos C4 y C5 (Figura 1). La formulacin de esta hiptesis fue apoyada por la observacin anterior de que un ligero aumento en Butiril-CoA (iso), methylcrotonyl-CoA, isovaleryl-CoA y concentraciones octanoyl-CoA se producen despus de la ingesta de cido acetilsaliclico [13].Esta investigacin proporciona la primera evidencia de un aumento significativo en la excrecin isobutyrylcarnitine tras la ingesta de cido acetilsaliclico en dosis teraputicas en los seres humanos, y proponemos que esta acumulacin puede ser debido al efecto inhibitorio de acetilsaliclico sobre el metabolismo de los cidos grasos C4 y C5. 2. Materiales y Methods2.1. SubjectsThe sujetos fueron divididos en dos grupos. El primer grupo incluye 30 sujetos, 19 hembra y macho 11 entre los 12 y 65 aos de edad. Participantes en este grupo se refirieron originalmente por biotransformacin metabolismo y evaluacin del estado de estrs oxidativo, que incluyen la administracin de paracetamol y cido acetilsaliclico. El segundo grupo incluye a siete participantes elegidos al azar del primer grupo y fueron utilizado para determinar si los efectos observados eran debido a la ingesta de cido acetilsaliclico, paracetamol entrada o una combinacin de stos. El estudio se adhirieron a los lineamientos establecidos en la declaracin de Helsinki. Aprobacin para este trabajo se obtuvo de la Comisin de tica de la Universidad del noroeste, y se obtuvo consentimiento informado de participacin subjects.2.2. Carga de protocolo y CollectionFasting de la muestra las muestras de orina de la base de todos los temas de prueba en el primer grupo de prueba se recolectaron la maana del da de la prueba. A 21:00, en el mismo da, todos los sujetos de prueba dejaron de comer y beber (excepto agua), vaciaron sus vejigas y tomaron dosis teraputicas (1000 mg) cido acetilsaliclico acetaminofn y (600 mg), segn lo recomendado por las diferentes compaas farmacuticas para el alivio de leve a moderado dolor. El volumen total de orina excretada durante diez horas despus de la

administracin de paracetamol y cido acetilsaliclico se recolect y se document la cantidad de orina excretada.El segundo grupo de prueba seguido un protocolo para determinar si el efecto observado en el perfil de acilcarnitinas era debido a la ingesta de cido acetilsaliclico, paracetamol entrada o una combinacin de stos. En el primer da de 21:00, todos los temas dejaron de comer y beber (excepto agua) durante el da y recogi una muestra de orina de base, tras lo cual vaciaron sus vejigas. Todos los sujetos tomaron 600 mg de cido acetilsaliclico y haba recopilada toda la orina durante la noche hasta las 7:00 de la maana siguiente. En la segunda ocasin, fue seguido el mismo protocolo excepto que todos los sujetos tomaron 1000 mg de paracetamol y haba recopilada toda la orina durante la noche hasta las 7:00 de la maana y en la tercera ocasin todos los sujetos tomaron 600 mg de cido acetilsaliclico y paracetamol de 1000 mg y haba recopilada toda la orina durante la noche hasta las 7:00 de la maana siguiente. Temas esperaban durante un mnimo de tres das antes de pasar al siguiente protocolo. 2.3. ReagentsThe siguiendo los reactivos fueron comprado de acetonitrilo Merck Chemical Co. (Darmstadt, Alemania), cido frmico y metanol. cido clorhdrico butanolic 3N, valina, leucina, isoleucina, fenilalanina, metionina, citrulina, glicina y lisina fueron comprados de Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, Estados Unidos). Se obtuvieron las siguientes normas de carnitina y acilcarnitinas y estndares de carnitina y acilcarnitinas deuterados de Dr. H. J. ten Brink, Free University Hospital (Amsterdam, Holanda): L-carnitinecido clorhdrico, n-acetil-L-carnitinecido clorhdrico, propionil-L-carnitinecido clorhdrico, isovaleryl-L-carnitinecido clorhdrico, octanoyl-LcarnitineHCl, L-hexadecanoyl-carnitinecido clorhdrico, [metil-d3] - L - carnitinecido clorhdrico, [d3] - acetyl - L-carnitinecido clorhdrico, [3,3,3-d3] - propionil - L-carnitinecido clorhdrico, [d9] - isovaleryl - L-carnitinecido clorhdrico, [8,8,8-d3] - octanoyl - L-carnitinecido clorhdrico y [16,16,16-d3] - hexadecanoyl - L-carnitineHCl. Se obtuvieron los siguientes aminocidos deuterados de Cambridge istopo Laboratories Inc. (Andover, MA, USA): [d10] - L isoleucina, [d8] - L - valina, [d2]-glicina, [d3] - metil - L-metionina, [d5] - anillo - L-fenilalanina, [d5] L - glutamina, [d5] - indole - L-triptfano, [d4] - L - lisina: 2HCl y [d4] - L - citulline. 2.4. Electrospray ionizacin Tandem Mass espectromtricos (ESI-MS/MS) mtodo de anlisis de AcylcarnitinesThe electrospray ionizacin tndem espectrometra de masas (ESI-MS/MS) para la determinacin de suero acylcarnitines descrita por Vreken et al [16] fue adaptado para determinar acylcarnitines en orina. A un tubo de microcentrfuga, orina centrifugada L 10 fue agregado a 400 L de la acylcarnitines deuterados (solucin de patrn interno) con las siguientes concentraciones: 30.45 mol/L para *metil-d3] - L - carnitinecido clorhdrico, 20.83 mol/L para *d3+ n-acetil-Lcarnitinecido clorhdrico, 19,69 mol/L para *3,3,3-d3] propionil-L-carnitinecido clorhdrico, 17,73 mol/L para *d9+ isovaleryl-L-carnitinecido clorhdrico, 15,43 mol/L para *8,8,8-d3] octanoyl-L-carnitinecido clorhdrico y 11.47 mol/L para *16,16,16-d3] hexadecanoyl-LcarnitineHCl. Las muestras fueron entonces se evapor a sequedad bajo un chorro suave de nitrgeno a 55 C. A este residuo seco, 200 L 3N butanolic HCl fue agregado y las muestras se incubaron a 55 C durante 20 min. Las muestras Butiladas fueron se evapor a sequedad otra vez bajo una corriente de nitrgeno a 55 C. El residuo seco fue reconstituido en agua: acetonitrilo (50:50) (v/v) que contiene 0.1% de cido frmico.Un cromatgrafo de lquidos serie de Agilent

1200 (Santa Clara, CA, USA) con un muestreador de placa de 96 pocillos fue utilizado para el manejo de la muestra, as como entrega de fase mvil. Se inyectaron muestras (10 L de cada uno), y un flujo constante de 0,2 mL/min se mantuvo a lo largo de la carrera. La fase mvil consisti en 0,1% de cido frmico en agua: acetonitrilo (50:50) (v/v). Se realiz el anlisis de espectrometra de masas (MS/MS) en tndem en un Agilent 6410 Triple Cuadrupolo (Santa Clara, CA, USA) de ionizacin positiva. Acylcarnitines se analizaron con un escner de in precursor, tras colisin controlada inducida por la disociacin, con una tensin de fragmentor de 135 V y energa de la colisin de 20 V. Se detectaron todos carnitina, acilcarnitinas y otras especies butilados que rindieron una masa cargada de 85 Da despus de la fragmentacin. Acylcarnitines fueron cuantificadas por la comparacin de la intensidad de la seal de carnitina y acylcarnitines contra la intensidad de la seal de los correspondientes anlogos deuterados. Las concentraciones de carnitina analizado y acylcarnitines se expresaron como creatinina mmol/mol. 2.5. Lquido mtodo de cromatografa de tndem espectrometra de masas (LC-MS/MS) Anlisis de acilcarnitinas IsomersThe LC-MS/MS para la separacin e identificacin de ismeros de cadena corta acylcarnitine descrita por Ferrer et al [17] fue utilizado, con modificaciones menores para separar butyrylcarnitine y isobutyrylcarnitine. Un volumen de 100-L de orina fue la misma en cuanto al mtodo ESI-MS/MS preparado. Cromatografa lquida de alto rendimiento se realiz en un cromatgrafo lquido de la serie de Agilent 1200 equipado con una columna C18(2) Luna (150 mm 2,00 mm, partculas tamao 5 m) de Phenomenex (Torrance, CA, USA). Mvil fase un consisti de acetato de amonio 10 mM en fase mvil B de acetato de amonio 10 mM en metanol y agua. Temperatura de la columna se mantuvo a 20 C y la velocidad de flujo en 0,2 mL/min. Las muestras (10 L) fueron inyectadas y la composicin de la fase mvil fue cambiada del 40% de B hasta el 60% de B sobre 15 minutos, despus de lo cual el porcentaje de B fue aumentado a 100% en los prximos 5 minutos y mantuvo durante 5 minutos ms. El porcentaje de B fue cambiado a 40% ms de 3 minutos, y la columna se equilibr por 7 min.El anlisis de MS/MS fue realizado en un Agilent 6410 Triple Cuadrupolo (Santa Clara, CA, USA) de ionizacin positiva tras colisin controlada inducida por la disociacin, con voltajes fragmentor optimizado y energas de colisin para butyrylcarnitine, isobutyrylcarnitine y los deuterados anlogos utilizados para la cuantificacin. Las condiciones de la espectrometra de masas fueron optimizadas con el software MassHunter de optimizador de Agilent. Acylcarnitines se analizaron en reaccin mltiple (MRM) modo, de monitoreo con las transiciones siguientes monitoreadas, m/z 288 85 para butyrylcarnitine y isobutyrylcarnitine, m/z 277 85 para *3,3,3-d3] propionil-L-carnitinecido clorhdrico, 311 m/z 85 para *d9+ isovaleryl-L-carnitinecido clorhdrico y m/z 347 to 85 para [8,8,8-d3] octanoyl-L-carnitineHCl. Se determinaron las concentraciones de los ismeros C4carnitina comparando la intensidad de la seal de acylcarnitines contra la intensidad de la seal de los correspondientes anlogos deuterados. Para butyrylcarnitine y isobutyrylcarnitine, existi una relacin lineal entre la concentracin e intensidad, con 2 > 0. 9 9. Las concentraciones de ismeros acylcarnitine analizados se expresaron como creatinina mmol/mol.

2.6. Electrospray ionizacin Tandem Mass espectromtricos (ESI-MS/MS) Anlisis de aminocidos AcidsSamples se prepararon de la misma manera en cuanto a los anlisis de acylcarnitines. Agregar solucin de patrn interno contena deuterados aminocidos con las siguientes concentraciones: 17,43 mol/L para [d10] - L - isoleucina, 32.20 mol/L para *d8+ - L - valina, 15,99 mol/L *D2+-glicina, 3.98 mol/L para *d3+ - metil - L-metionina, 5.77 mol/L para *d5+ - anillo - Lfenilalanina, 3.28 mol/L para *d5+ - L - glutamina, 14,89 mol/L para *d5+ - indole - L-triptfano, 14,16 mol/L para *d4+ - L - lisina: 2HCly 4.21 mol/L para [d4] cidos citrulline.Amino - L - se analizaron en el modo de MRM para las transiciones siguientes: Glicina 132 m/z 30, *d2+-glicina 134 m/z 32, alanina 146 m/z 44, serina 162 m/z 60, prolina y arginina 172 m/z 70, valina 174 m/z 72, *d8+ - L - valina, treonina 176 m/z 74, leucina e isoleucina 188 m/z 86, *d10+ 89 de 191 m/z - L - isoleucina, metionina 206 m/z 104, *d3+ - metil - L-metionina 209 m/z 107, histidina m/z 212 a 110, citrulina 215 m/z 113, fenilalanina 222 m/z 120, *d5+ anillo - L-fenilalanina 227 m/z 125, tirosina 238 m/z 136, ACIDO ASPARTICO m/z 246 144, el cido glutmico 260 m/z 158, cido glutmico-d3 263 m/z 161, triptfano 261 m/z 159, [d5] - indole - L-triptfano 266 m/z 164, lisina 203 m/z 84 y *d4+ - L - lisina: cido clorhdrico 2 m/z 207 88. Comparando la intensidad de la seal de los aminocidos contra la intensidad de la seal de los correspondientes anlogos deuterados se determinaron las concentraciones de los aminocidos. Las concentraciones de aminocidos analizados se expresaron como mmol/mol creatinine. 2.7. Anlisis de cromatografa Tandem Mass espectromtricos (LC-MS/MS) lquido de AcidsSamples aminocidos de cadena ramificada se prepararon de la misma manera en cuanto a la determinacin de acilcarnitinas ismeros. Cromatografa lquida de alto rendimiento se realiz en un cromatgrafo lquido de la serie de Agilent 1200 equipado con una columna C18(2) Luna (150 mm 2,00 mm, partculas tamao 5 m) de Phenomenex (Torrance, CA, USA). Temperatura de la columna se mantuvo a 20 C, y la tasa de flujo en 0,2 mL/min mvil fase un consisti de 0.1% de cido frmico en agua y fase mvil B de 0.1% de cido frmico en metanol. Se inyectaron las muestras (10 L), y la composicin de la fase mvil fue cambiada del 40% de B hasta el 60% de B sobre 15 minutos, despus de lo cual el porcentaje de B fue aumentado a 100% en los prximos 5 minutos y mantuvo durante 5 minutos ms. El porcentaje de B fue cambiado a 40% ms de 3 minutos, y volver a la columna equilibrado durante 4 minutos. El anlisis MS/MS fue realizado en un Agilent 6410 Triple Cuadrupolo (Santa Clara, CA, USA) de ionizacin positiva despus de choque controlado inducida disociacin con optimizado fragmentor tensiones y energas de colisin para los deuterados anlogos utilizados para la cuantificacin, leucina, isoleucina y valina. Las condiciones de la espectrometra de masas fueron optimizadas con el software MassHunter de optimizador de Agilent. Los aminocidos de cadena ramificada se analizaron en el modo de MRM, para las mismas transiciones como se describe en el anlisis de ESI-MS/MS de aminocidos. Comparando la intensidad de la seal de los aminocidos de cadena ramificada contra la intensidad de la seal de los correspondientes anlogos deuterados se determinaron las concentraciones de los aminocidos de cadena ramificada. Las concentraciones de aminocidos de cadena ramificada analizados se expresaron como creatinina mmol/mol.

2.8. -prueba AnalysisA emparejado estadstica fue utilizado para demostrar diferencias estadsticamente significativas entre las muestras de prueba. En todos los casos, la significacin estadstica se fij en <. 5.3 0. Results3.1. Anlisis Acylcarnitine (ESI-MS/MS) A la comparacin entre los perfiles de acilcarnitinas en muestras de orina de lnea de base del primer grupo de prueba ( = 3 0) obtenidos antes y despus de la administracin de una combinacin de cido acetilsaliclico y paracetamol, revel un aumento estadsticamente significativo en la excrecin de C3 - ( =. 0 5), C4 - ( =. 0 0) y partes de C5-carnitina ( =. 0 0). Comparacin de la acylcarnitine perfiles en las muestras de orina de lnea de base del segundo grupo de prueba ( = 7) a los perfiles obtenidos despus de la administracin de una dosis teraputica de cido acetilsaliclico solo, revel un aumento estadsticamente significativo en la excrecin de C4-carnitina ( =. 0 3) (cuadro 1). Sin embargo, una comparacin entre los perfiles de acilcarnitinas obtenidos antes y despus de la administracin de una dosis teraputica de paracetamol ( = 7), revel una excrecin disminuida de varios carnitina cido dicarboxlico conjugados, es decir, C4-DC ( =. 0 5), C5-DC/C10-OH-carnitina ( =. 0 1), C6-DC ( =. 0 1) y C8-DC ( =. 0 0) (cuadro 1).

Table 1: Paired -test values (-values) of acylcarnitine species in baseline urine samples compared to acylcarnitine species in urine samples obtained after acetylsalicylic acid administration ( = 7), acetaminophen administration ( = 7), and combined administration of both acetylsalicylic acid and acetaminophen ( = 3 0).

Paired -test (-value) Acylcarnitine species C0-carnitine C2-carnitine C3-carnitine C4-carnitine C4-OH-carnitine C4-DC-carnitine C5-carnitine C5-OH-carnitine C5-DC/C10-OHcarnitine C5:1-carnitine C6-carnitine C6-DC-carnitine C8-carnitine Acetylsalicylic acid administration ( = 7) 0.18 0.08 0.96 0.03* 0.18 0.16 0.73 0.69 0.17 0.24 0.20 0.29 0.41 Acetaminophen administration ( = 7) 0.20 0.06 0.88 0.31 0.12 0.05* 0.85 0.33 0.01* 0.50 0.62 0.01* 0.10 Combined administration ( = 3 0) 0.72 0.87 0.05* 0.00* 0.32 0.08 0.00* 0.35 0.26 0.29 0.98 0.77 0.20

C8-DC-carnitine C10-carnitine C5: 1DC/C10:1-OHcarnitine C12-carnitine C14-carnitine C16-carnitine

0.84 0.20 0.82 0.20 0.41 0.21

0.00* 0.11 0.10 0.11 0.20 0.07

0.55 0.20 0.90 0.15 0.70 0.95

* Las diferencias se consideran estadsticamente significativa en comparacin con los valores basales si <. 0 5.

3.2. Acylcarnitine ismero anlisis (LC-MS/MS) comparando los datos de referencia (LC-MS/MS con que obtuvo despus de la administracin de una combinacin de cido acetilsaliclico y paracetamol, revel que el aumento en la excrecin de C4-carnitina era debido a la creciente de la excrecin de isobutyrylcarnitine ( =. 0 4) y no debido al aumento de butyrylcarnitine ( =. 4 6) (Figura 2). Los resultados obtenidos por los diversos ismeros C4-carnitina revelaron diferencias estadsticamente significativas cuando se compararon las concentraciones o butyrylcarnitine o isobutyrylcarnitine en muestras de orina de lnea de base a las muestras ( = 7) tomadas despus de la administracin de cido acetilsaliclico ( =. 6 1 y =. 2 0) y muestras ( = 7) tomadas despus de la administracin de paracetamol ( =. 6 2 y =. 2 de 3). Sobre el anlisis de aminocidos, una disminucin estadsticamente significativa en la excrecin de Isoleucina ( =. 0 0), leucina ( =. 0 4), valina ( =. 0 1) y triptfano ( =. 1 0) (cuadro 2) era evidente en las muestras de orina obtenidas despus de administracin de paracetamol y cido acetilsaliclico ( = 3 0). Una comparacin entre los perfiles de aminocidos en las muestras de orina de referencia y las muestras tomadas despus de cido acetilsaliclico ( = 7) y paracetamol ( = 7) administracin revel una disminucin estadsticamente significativa en la excrecin de alanina, glicina, los aminocidos de cadena ramificada, metionina, fenilalanina, tirosina, lisina, histidina, cido asprtico y cido glutmico. Adems, significativamente menos serina, prolina/arginina y triptfano estuvieron presentes en la orina despus de la administracin de paracetamol, pero no despus de la administracin de cido acetilsaliclico (cuadro 2). Tabla 2: Emparejado (-valores) los valores de -prueba de aminocidos en las muestras de orina de base en comparacin con los aminocidos en las muestras de orina obtenidas despus de la administracin de cido

acetilsaliclico ( = 7), administracin de paracetamol ( = 7) y combinar la administracin de cido acetilsaliclico y paracetamol ( = 3 0). Paired -test (-value) Acetylsalicylic acid Acetaminophen administration administration ( = 7) ( = 7) 0.00* 0.03* 0.02* 0.04* 0.02* 0.01* 0.06 0.02* 0.12 0.06 0.19 0.01* 0.03* 0.01* 0.05* 0.02* 0.00* 0.02* 0.01* 0.03* 0.01* 0.01* 0.02* 0.01* 0.03* 0.03* 0.07 0.00* 0.03* 0.00* 0.05* 0.02*

Amino Acids

Combined administration ( = 3 0) 0.50 0.82 0.01* 0.04* 0.00* 0.73 0.21 0.43 0.01* 0.32 0.31 0.13 0.45 0.20 1.00 0.39

Alanine Glycine Valine Leucine Isoleucine Methionine Proline/Arginine Phenylalanine Tryptophan Serine Threonine Tyrosine Lysine Histidine Aspartic acid Glutamic acid

* Las diferencias se consideran estadsticamente significativa en comparacin con los valores basales si <. 0 5. . Paracetamol y cido DiscussionAcetylsalicylic se utilizan generalmente como sustratos de la sonda en la evaluacin del metabolismo de la biotransformacin y estado de estrs oxidativo en humanos [18]. Investigacin cuidadosa de los perfiles acylcarnitine de temas revel la presencia de concentraciones crecientes de C3 - C4, C5-carnitina especies y en su orina. Puesto que estas especies acylcarnitine alcanzaron concentraciones normalmente asociadas con errores innatos del metabolismo en algunos temas [19], se investig si este fenmeno se origin de la administracin de cido acetilsaliclico o paracetamol o una combinacin de stos. Una mayor excrecin de acylcarnitines varios derivados de la oxidacin del cido graso inhibidos, tales como octanoylcarnitine y palmitoilcarnitina [7], as como ciertos carnitinas cidos dicarboxlicos con longitudes de cadena desde C6 a C12 [10] se esperaba despus de la administracin de cido acetilsaliclico. En el caso de la

administracin de paracetamol, una mayor excrecin de palmitoilcarnitina era esperado [20]. Sin embargo, nuestros anlisis revelaron un aumento estadsticamente significativo en la excrecin de C4-carnitina en el caso de la administracin de cido acetilsaliclico, una disminucin estadsticamente significativa en la excrecin de varios carnitina cido dicarboxlico conjugados despus de la administracin de paracetamol y un aumento estadsticamente significativo en la excrecin de C3, C4 y C5-carnitina en el caso de la administracin combinada. La observacin ms importante a este respecto es que la creciente de la excrecin en C4-carnitina fue debido a la ingesta de cido acetilsaliclico y paracetamol ni un efecto combinado. Aunque no haba ninguna diferencia estadsticamente significativa en las concentraciones de C3 y C5-carnitina despus de la administracin de cido acetilsaliclico ( = 7), como en el caso de la administracin combinada, uno no puede excluir que el cido acetilsaliclico podra ser la causa de este aumento, tomando conciencia del tamao de la muestra relativamente pequea.Se sabe que butyrylcarnitine (C4-carnitina) se acumula con deficiente o inhibidos cadena corta acil-CoA deshidrogenasa y eso isobutyrylcarnitine (C4-carnitina) se acumula cuando isobutyryl-CoA deshidrogenasa es deficiente o inhibido [2]. En el caso del C5-carnitina, los ismeros son isovalerylcarnitine y 2-methylbutyrylcarnitine, que se acumular con deficiente o inhibidos isovaleryl-CoA deshidrogenasa y 2methylbutyryl-CoA deshidrogenasa [3] (Figura 1). Fue demostrado por Glasgow et al [15] que los metabolitos de cido acetilsaliclico pueden ejercer inhibicin mixta en -oxidacin a nivel de la actividad LCHAD de la MTE, como resultado de similitudes estructurales entre el acil-parte de los cidos grasos y cido acetilsaliclico. Era, por tanto, necesario determinar si la excrecin creciente observada de C4-carnitina fue debido a la creciente butyrylcarnitine o isobutyrylcarnitine. La separacin cromatogrfica de estos ismeros uno del otro en las muestras de referencia y las muestras obtenidas despus de cido acetilsaliclico y paracetamol administracin era de suma importancia y durante la separacin cromatogrfica, al realizar una exploracin del in precursor de un producto con un m/z del 85, se detectaron dos iones precursor para C4-carnitina con un m/z de 288 (Figura 2).Una comparacin de la cantidad de los ismeros del C4-carnitina en las muestras de referencia a las muestras de prueba (despus de cido acetilsaliclico y paracetamol administracin, resp.) no revel ninguna diferencia estadsticamente significativa. Sin embargo, en las muestras analizadas para investigar un posible efecto de la administracin de paracetamol y cido acetilsaliclico combinado ( = 3 0) se observ un aumento estadsticamente significativo en slo la concentracin de isobutyrylcarnitine. Estos resultados apoyan la hiptesis de que el cido acetilsaliclico puede tener un efecto inhibitorio sobre el metabolismo de cidos grasos de cadena corta, posiblemente a nivel de isobutyryl-CoA

deshidrogenasa involucrado en el catabolismo de aminocidos de cadena ramificada. Puesto que no haba ningn efecto observado en estas rutas metablicas despus de la administracin de paracetamol solo, existe la posibilidad tambin que el aumento de especies C5-carnitina observado despus de la administracin combinada puede ser debido al mismo efecto inhibitorio sobre el metabolismo de cidos grasos de cadena corta. En este caso, puede ser a nivel de la isovaleryl-CoA deshidrogenasa y S-2methylbutyryl-CoA deshidrogenasa enzimas. Adems, se ha demostrado que el cido metil-enecyclopropylacetic, un metabolito de la hipoglicina puede inhibir irreversiblemente todos tres enzimas de la deshidrogenasa del acil-CoA en el metabolismo de aminocidos de cadena ramificada [21].Para demostrar an ms el posible efecto inhibitorio del cido acetilsaliclico y sus metabolitos en el metabolismo de aminocidos de cadena ramificada, se analizaron los perfiles de aminocidos totales. Tambin se realizaron estos anlisis en muestras de referencia y las muestras tomadas despus de cido acetilsaliclico y paracetamol administracin, individualmente y combinado. La comparacin entre los perfiles de aminocidos en las muestras de orina de referencia y las muestras tomadas despus de cido acetilsaliclico ( = 7) y paracetamol ( = 7) administracin revel una disminucin estadsticamente significativa en la excrecin de varios aminocidos, incluyendo los aminocidos de cadena ramificada. Mientras que la administracin combinada de cido acetilsaliclico y paracetamol revel una disminucin estadsticamente significativa en slo los aminocidos de cadena ramificada y triptfano. Sin embargo, se prev un aumento en la excrecin del aminocido de cadena ramificada despus de la administracin de cido acetilsaliclico debido al efecto inhibitorio propuesto aguas abajo en el catabolismo de aminocidos de cadena ramificada.En slo algunos de los temas, la cantidad de excreta isobutyrylcarnitine despus de la administracin de cido acetilsaliclico, alcanz concentraciones normalmente asociadas con deficiencia de isobutyryl-CoA deshidrogenasa. En este sentido, nos gustara especular sobre las posibles implicaciones de esta observacin. Ya que no todos los individuos son afectados en el mismo grado, es posible que el efecto inhibitorio del cido acetilsaliclico es ms pronunciado en los portadores de la deficiencia de isobutyryl-CoA deshidrogenasa o en individuos con tarifalimitando los polimorfismos en el mismo sistema enzimtico. Si este es el caso, se abre la oportunidad de investigar si la administracin de cido acetilsaliclico puede utilizarse para predecir el estado del portador en deficiencia de isobutyryl-CoA deshidrogenasa. Puesto que el primer paciente con deficiencia de isobutyryl-CoA deshidrogenasa fue diagnosticado solamente ms de una dcada atrs [21], y puesto que hay una variacin sustancial en la presentacin clnica de esta deficiencia, se plantea tambin la oportunidad de investigar otros efectos bioqumicos

implicados en la patologa de la deficiente isobutyryl-CoA deshidrogenasa, la aclaracin del desarrollo de caractersticas fenotpicas de enfermedades metablicas sigue siendo un desafo formidable.En conclusin, de las fuentes de la literatura, es evidente que el cido acetilsaliclico y sus metabolitos tienen varios efectos sobre el metabolismo y, especialmente, en la funcin mitocondrial. En este estudio, las primeras pruebas en vivo, en sujetos humanos, de un aumento estadsticamente significativo en isobutyrylcarnitine fue proporcionada la excrecin como resultado de la administracin de una dosis teraputica de cido acetilsaliclico. Puesto que anteriormente se demostr que las similitudes estructurales entre el acilporcin de cidos grasos y cido acetilsaliclico pueden resultar en inhibicin mixta en -oxidacin [15], proponemos un posible efecto inhibitorio sobre isobutyryl-CoA deshidrogenasa, como isobutyrylcarnitine elevada excrecin es generalmente el resultado de una deficiencia en el catabolismo de aminocidos de cadena ramificada.

Figura 2: Separacin e identificacin de los ismeros de cadena corta acylcarnitine. (a) en el anlisis de LC-MS/MS de acilcarnitinas ismeros, isobutyrylcarnitine es detectado en 17,282 min y butyrylcarnitine en 18.042. (b) exploracin del ion el producto de 288 m/z para isobutyrylcarnitine y butyrylcarnitine.