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Ano 11 | Nmero 3 | Setembro 2008

Ceux qui veulent opposer le Laboratoire la Clinique et la Clinique au Laboratoire nont rien compris ni la Clinique ni au Laboratoire.
C. RIcHET, LIO INAUGUrAl NA FAcUlDADE DE MEDIcINA DE PArIS

Eletroforese de Protenas
1. Histrico
O termo protena foi criado por Mulder, em 1839, referindo-se s substncias qumicas que integravam a matria viva, tanto animal como vegetal. O nome se originou do grego proteios, que signica primrio, essencial, em funo da sua signicncia biolgica, j na poca apontada pelo autor. Alguns anos mais tarde, em 1851, utilizando uma tcnica de precipitao com cido actico, Panum conseguiu separar uma frao das protenas, que designou casena do soro, sendo, posteriormente, em 1862, chamada de globulina ou substncia broplstica, por Schimidt. Em 1866, Kuhne foi o primeiro a citar as fraes proticas, obtendo duas partes, uma atravs da precipitao com anidro carbnico, que denominou de paraglobulina, e outra com cido actico, que denominou de alcalialbuminato, tendo sido posteriormente denominada de seroglobulina, por Weil e Hynius. A comprovao de que as partculas coloidais, no caso concreto as protenas, podem ser separadas atravs das suas caractersticas de mobilidade frente a campos eltricos, constituindo o fundamento da eletroforese, teve incio com os estudos de Michaelis, em 1909, que idealizou o tubo em U. A tcnica foi aperfeioada por Sverdberg e Scott (1924), Sverdberg e Tiselius (1926) e Theorell (1935). O desenvolvimento de metodologias para a medio dos componentes proticos no sangue teve incio no nal do sculo XIX, com a publicao, em 1878, do Trait pratique et elementaire de chimie mdicale (Tratado prtico e elementar de qumica mdica), por Mehu, um qumico francs do Hospital Necker de Paris, que propunha um mtodo para a quanticao do que designou de albumina ou albuminides. O mtodo que veio a se tornar a base para o sistema atual de eletroforese para a separao de protenas foi desenvolvido no incio dos anos 1930 por Arn Tiselius, ganhador do prmio Nobel

2. Conceitos
Eletroforese um termo bastante amplo, que se refere migrao de solutos e partculas em um meio lquido, sob inuncia de um campo magntico. As protenas possuem cargas positivas e negativas, sendo sua mobilidade eletrofortica diretamente proporcional carga da partcula e inversamente proporcional viscosidade do meio. Existem atualmente dois tipos de metodologia de eletroforese: 2.1 Eletroforese convencional por zona Existem atualmente dois tipos de metodologia de Eletroforese. Na metodologia convencional, de eletroforese por zona, as protenas migram em meio de suporte poroso como acetato de celulose, gel de agarose ou poliacrinamida, gerando um eletroferograma por zonas de protenas. 2.2 Eletroforese capilar A eletroforese capilar baseia a separao das protenas pelo seu tamanho e outras propriedades fsico-qumicas, atravs do uxo em um tubo capilar. O mtodo semelhante HPLC (Cromatograa Lquida de Alta Performance) , que utiliza colunas similares agarose, fornecendo resultados comparveis eletroforese em gel de agarose. Devido sua alta resoluo, a eletroforese capilar permite a separao de bandas pouco visveis no mtodo convencional, como os picos de Beta1 (transferrina e hemopexina) e Beta2 (complemento C3), resultando em um padro de seis bandas. Estas caractersticas permitem ganho adicional na avaliao de pacientes com gamopatias monoclonais.

Ano 11 | Nmero 3 | Setembro 2008

2.3 Vantagens da Eletroforese capilar

Estudos clnicos demonstram uma maior sensibilidade da eletroforese capilar (93 a 95%) para a ELeTROfeROGRAMA POR ANLISe CAPILAR, MOSTRANDO deteco de gamopatias monoclonais, em relao AS DIfeReNTeS ZONAS De PROTeNAS. eletroforese por zona em gel de agarose (86 a 91%). A eletroforese capilar particularmente mais sensvel deteco de componentes monoclonais em pequenas concentraes, especialmente IgA ou cadeias leves, que podem no ser detectadas pela tcnica em gel de agarose, devido co-migrao com a transferrina e o C3. Outra vantagem a no deteco dos picos de brinognio pela eletroforese capilar, que uma constante fonte de resultados falsamente positivos quando se utiliza a metodologia convencional de eletroforese por zona. O brinognio, normalmente ausente nas amostras de soro, pode ser detectado em casos de coagulao incompleta do sangue (amostra processada em tempo insuciente) ou quando o paciente se encontra sob utilizao de drogas anticoagulantes. O aumento da sensibilidade com a eletroforese capilar, permite ainda uma maior deteco dos casos de bisalbuminemia adquirida, que pode ter relevncia em algumas situaes clnicas como em casos de fstulas pancreticas, presena de ascite e uso de antibiticos. Outra vantagem do mtodo por capilaridade a possibilidade de automao total do processo, que garante maior qualidade e rapidez de resultados.

FIGURA 1

FIGURA 2
ZONAS De eLeTROfOReS COM CORReLAO COM AS DIfeReNTeS PROTeNAS.

Nota:

Pre A = pr-Albumina Alb = albumina a1 Ac = alfa1-Antiquimiotripsina a1 Ag = alfa1-glicoprotena cida a1 At = alfa1-antitripsina a2M = alfa2-macroglobulina aLp = alfa-lipoprotena

Pl = plasminognio Hpx = hemopexina Hpt = haptoglobina AT3 = pr-Albumina b Lp = beta-lipoprotena C1q; C1r, C1s, C3, C4, C5, C1inh = complemento

Cer = ceruloplasmina CRP = protena C reativa Fibr = brinognio IgA, IgD, IgE, IgG, IgM = imunoglobulinas Tf = transferrina FB = fator B

RICHET NOUVELLES

3. Principais protenas encontradas nas bandas eletroforticas

3.1 Albumina Elevado: Desidratao aguda Diminuido: analbuminemia, inamaes, doena heptica, glomerulopatias, leso tubular, enteropatia perdedora de protenas, doena inamatria intestinal, desnutrio protica, linfomas, leucemias, hipertireoidismo e uso de corticides. Durante a gravidez os nveis diminuem at a oitava semana, retornando ao normal em cerca de oito semanas aps o parto. A bisalbuminemia, que uma anormalidade caracterizada pela presena de uma dupla banda na zona de albumina, pode ser congnita e sem signicncia clnica, ou adquirida, e estar relacionada utilizao de antibiticos ou presena de ascite ou de fstula pancretica. O aumento da intensidade da interzona albumina/alfa-1 globulina pode acontecer em casos de alcoolismo crnico e gravidez. A diminuio est associada cirrose, hepatites e inamaes. 3.2 Alfa-1 Globulina Esta banda composta basicamente pela alfa1-antitripisina. O restante (10%) se deve alfa1-glicoprotena cida, alfa-fetoprotena e certas protenas carreadoras. As elevaes desta zona esto associadas reao de fase aguda, cirrose, disproteinemia familiar idioptica, Doena de Hodgkin, carcinomatose metasttica, lcera pptica, gravidez, enteropatia perdedora de protena, estresse, colite ulcerativa, uso de estrgenos, corticides e antiinamatrios. A diminuio nesta banda pode estar associada a hepatites virais agudas, m-absoro, ensema pulmonar, sndrome nefrtica e ao jejum prolongado. 3.3 Alfa-2 Globulina Composta pela haptoglobina, alfa-2 macroglobulina e ceruloplasmina. Esta zona encontra-se raramente diminuda, uma vez que a diminuio de um dos componentes compensada pela elevao dos demais. Pode se encontrar elevada nas seguintes situaes: Febre reumtica, analbuminemia, senilidade, hipoalbuminemia, glomerulonefrite, cirrose, diabetes, disproteinemia familiar idioptica, Doena de Hodgkin, doena aguda, carcinomatose metasttica, cirrose heptica, infarto agudo do miocrdio, mixedema, sndrome nefrtica, osteomielite, lcera pptica, pneumonia, poliarterite nodosa, enteropatia perdedora de protena, artrite reumatide, sarcoidose, estresse, colite ulcerativa e uso de corticides. A haptoglobina uma glicoprotena de sntese heptica, que se liga de forma irreversvel hemoglobina aps a hemlise das hemcias. Valores diminudos de haptoglobina so marcadores de hemlise. A alfa-2 macroglobulina o principal inibidor das proteinases plasmticas. A ceruloplasmina contem 95% do cobre srico. Nveis diminudos ocorrem na doena de Wilson, desnutrio, sndrome nefrtica, e enteropatia perdedora de protenas. Nveis elevados podem estar associados reaes do tipo fase aguda. 3.3 Beta Globulina A frao beta 1 corresponde a transferrina e hemopexina e a frao beta 2 corresponde ao complemento C3. A transferrina a principal protena responsvel pelo transporte de ferro. Em casos de anemia ferropriva, seus nveis se encontram elevados. Nveis elevados podem ser encontrados em casos de reao de fase aguda, neoplasias, desnutrio protico-calrica e na perda de protenas (sndrome nefrtica, enteropatia perdedora de protena). O complemento C3 uma protena de fase aguda fraca e tardia, podendo tambm se encontrar elevada na obstruo biliar. 3.4 Gama Globulina A frao gama corresponde zona de migrao das imunoglobulinas (G, A, M, D, E). A interpretao de variaes nesta zona depende da faixa etria e tambm de um mnimo de informaes clnicas. Hipogamaglobulinemia Hipogamaglobulinemia fisiolgica no recm-nato. Imunodeficincia isolada ou total (envolvendo as trs classes de imunoglobulinas, G, M, A), em crianas e adultos. Hipogamaglobulinemia secundria, devido utilizao de corticides, terapia imunossupressora, quimioterapia ou radioterapia. Hipogamaglobulinemia do mieloma de cadeias leves: o diagnstico ser conrmado atravs da deteco de protena de Bence-Jones na urina. Hipergamaglobulinemia Hipergamaglobulinemia policlonal (aumento difuso), observado principalmente em infeces hepticas, AIDS ou doenas auto-imunes. Hipergamaglobulinemia monoclonal (pico monoclonal homogneo), podendo estar associada com doena maligna (mielona ou doena de Waldenstrm), em conjunto com leucemia linftica crnica ou linfoma, ou gamopatia benigna, vista em pacientes idosos. Na presena de pico monoclonal na zona gama, necessrio a eliminao da possibilidade de se tratar de brinognio remanescente (o que no ocorre com a utilizao de eletroforese capilar). Hipergamaglobulinemia oligoclonal (vrios e pequenos picos). Em casos especcos, a hipergamaglobulinemia resultante da elevao de subclasses de imunoglobulinas. Estas bandas so derivadas da sntese de anticorpos contra

vrios antgenos e s podem ser identicadas quando so utilizadas metodologias de alta resoluo, como a eletroforese capilar. Geralmente, estas imunoglobulinas correspondem a: - Doenas auto-imunes: artrite reumatide, sndrome de Sjgren, lupus eritrematoso, esclerose sistmica progressiva. - Anticorpos contra protenas virais: HIV, hepatite viral, meningite, infeco por citomegalovirus. - Resposta auto-imune em pacientes transplantados sob terapia imunossupresora. - Resposta imune em indivduos normais: 1 a 5% dos indivduos normais podem apresentar forma oligoclonal sem signicado clnico. Este tipo de elevao monoclonal geralmente est presente em baixas concentraes e de forma transiente.

Concluses
A eletroforese de protenas permanece como uma forma fcil e comum de investigao, sendo de utilidade para a conrmao de caos de estados inamatrios ou infecciosos, com respectivas elevaes poli ou monoclonais de gamaglobulinas. A eletroforese capilar torna o teste mais sensvel e especco, possibilitando a deteco de alteraes que no poderiam ser vistas atravs das tcnicas tradicionais.

Referncias Bibliogrcas
1. Didier Le Carrer, Serum protein Electrophoresis Immunoxation, Edition FM-BIO, Vanves, 2005. 2. J. Villar Caso, Las protenas Del Plasma, Editorial Cientco-Mdica-Barcelona, 1950. 3. Burtis CA, Ashwood ER. Tietz, Fundamentals of Clinical Chemistry 5th Ed., 2001.

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