Principales parmetros del cromatograma de picos.

1.- Pico del aire.

Es el que corresponde a la deteccin de una cantidad muy pequea de aire que entra a la columna cuando se introduce la muestra en el cromatgrafo.

2.- La lnea de base.

Es la parte del registro que corresponde a la fase mvil pura (gas portador, ...).

3.- Altura de pico (h).

Es la distancia entre la cima del pico y la lnea de base. En el caso de que el vrtice sea redondeado se trazan rectas tangentes a los dos puntos de infle in de las laderas! el punto de corte de las dos rectas determina la altura del pico. ("er el cuarto pico de la figura anterior).

4.- Anchura del pico (a).

Es la longitud del tramo de la prolongacin de la lnea de base, comprendida entre las intersecciones con la misma de las laderas del pico o, en su caso, de las lneas tangentes antes mencionadas.

.- Anchura del pico en la semialtura (ah/2).

Es la distancia paralela a la lnea de base, entre las dos laderas del pico, tomada a la mitad de la altura del pico.

!.- "rea del pico (S).

Es la comprendida entre el pico y la prolongacin de la lnea de base. #recisamente a obtener el valor de este par$metro, en los picos del cromatograma, se dedican los dispositivos integradores

Principales parmetros cromatogr#icos.

1.- $iempo cero o tiempo de retenci%n del componente inerte (t0).
El tiempo cero (t0) o tiempo muerto (tm), es el tiempo de retencin del componente inerte o gas portador.

2.- $iempo de retenci%n de un componente (tii).

El tiempo de retencin ( ti o tR) es el tiempo transcurrido entre el instante en que se introduce la mezcla y el instante en que se detecta la seal propia del componente en su m$ ima intensidad. %os tiempos de retencin no son reproducibles, ni siquiera en una misma columna cromatogr$fica.

3.- $iempo de retenci%n corregido de un componente (t'i).

Es le tiempo que transcurre entre la aparicin de la saal que corresponde a un componente inerte y a la del componenteconsiderado& t'i = ti - t0

4.- $iempo de retenci%n relati&a (rip).

Es la razn entre los tiempos de retencin corregidos del componente considerado, i, y de otro, p, que se toma como patrn de referencia&

.- 'olumen de retenci%n de un componente ('().

Es el volumen necesario de fase mvil para transportar el soluto de un e tremo a otro del sistema cromatogr$fico. 'e define como& VR = tR-Fm donde VR es el volumen de retencin e presado como el producto del tiempo de retencin de un componente (tR) y el flu(o de la fase mvil (Fm). ) el flu(o de fase mvil se define como&

donde d es el di$metro interior del soporte utilizado y * es la porosidad de la fase estacionaria, que suele tener un valor de +,, para empaquetamientos slidos.

!.- 'olumen cero o muerto (V0 o Vm).

Es el volumen de eluyente que se consume sin que se detecte ning-n componente. 'e define igual que el volumen de retencin pero el tiempo utilizado es el tiempo muerto& Vm = tm Fm

).- 'olumen de retenci%n &erdadero (V'R).

El volumen de retencin verdadero de un componente es la diferencia entre el volumen de retencin del componente y el volumen muerto. V'R = VR - Vm o lo que es lo mismo& V'R = (tR - t0) Fm

*.- +oe#iciente de partici%n o de reparto de un componente (K).

'e define como el cociente entre la concentracin de componente presente en la fase estacionaria y la concentrecin de componente presente en la fase mvil&

donde Cs y Cm son las concentraciones de componente presente en las fases estacionaria y mvil respectivamente. El valor de K representa el valor de la pendiente de la recta que se obtiene al representar Cs frente a Cm .

,.- 'elocidad lineal media a lo largo de una columna (u).

Es la velocidad lineal media a la que se desplazan las molculas de soluto a lo largo de una columna. "iene dada por la e presin&

donde u es la velocidad lineal media, L es la longitud de la columna y tm es el tiempo muerto.

1-.- .actor de selecti&idad (/).

Es la relacin entre los tiempos de retencin de dos componentes&

donde . es el factor de selectividad, tRy y tRx son los tiempos de retencin de los componentes x e y , y Kx y Ky son los coeficientes de distribucin de los componentes. /ependiendo del valor de . se tiene una idea apro imada de como ser$ la separacin cromatogr$fica& . 0 1 se obtiene una mala separacin ya que son necesarios periodos muy largos para realizarla. 23 . 31 se obtiene una buena separacin cromatogr$fica.

11.- .actor de capacidad (K0).

El factor de capacidad relaciona vol-menes o tiempos de retencin de un componente respecto a la fase mvil. 'e puede definir como&

Es el cociente entre las probabilidades de encontrar una molcula determinada de soluto en la fase estacionaria o en la fase mvil, o lo que es lo mismo, el cociente entre el tiempo de permanencia de dic4a molcula en la fase estacionaria y en la fase mvil.

12.- 1#iciencia
#ara definir la eficacia se utiliza el concepto de piso terico, y se define ste como la seccin terico5transversal en la cual se realiza el equilibrio de particin durante el flu(o de fase mvil. 6uanto mayor se el n-mero de platos terico (N) mayor ser$ la eficiencia de la columna. El n-mero de platos tericos mide la capacidad de la columna para separar los componentes, no la retencin de los mismos. %a eficiencia o el n-mero de platos se puede observa directamente a partir del cromatograma, observando la agudeza de los picos.

/onde N es el n-mero de platos tericos, L es la longitud de la columna, H es la altura de cada plato, t'R es el tiempo corregido de retencin de un componente y ai es la anc4ura del pico cromatogr$fico. )&

'i H tiene un valor pequeo, la distancia entre platos es menor y por tanto la eficiencia ser$ mayor. #or el contrario, si H es grande la columna es poco eficiente para separar ese componente ya que sus molculas estar$n muy difundidas. %a velocidad de la fase mvil influye en la eficiencia del sistema cromatogr$fico, ya que si la velocidad es pequea los componentes tendr$n m$s tiempo parta que se pueda realizar el equilibrio de reparto, por lo que el n-mero de platos ser$ mayor y la altura de los platos menor.

1#ecto del n2mero de platos te%ricos en la distribuci%n de un soluto. 3ientras ma4or sea 56 (4 menor 7) ms angosto ser el pico del analito

13.- (esoluci%n (R o Rs).

Es el par$metro que e presa el grado de separacin que se puede obtener en un sistema cromatogr$fico para dos componentes dados. 7elaciona la capacidad separadora de un sistema cromatogr$fico para dos componentes. 'e define como&

/onde Rs es la resolucin, tRA y tRB son los tiempos de retencin de los componentes A y B, y aA y aB son las anc4uras de los picos del cromatograma de los anteriores componentes. E(emplo& El grado de separacin o resolucin de dos bandas adyacentes se define como la distancia entre los picos de las bandas (o centros) dividida entre el anc4o promedio de las bandas. 'i la retencin y el anc4o de la banda se miden en unidades de tiempo, como en la 8ig. la resolucin est$ dada por& 7s 9 (t:7,1 5 t:7,2);(+.<=(>1?>2))

%a resolucin puede observarse directamente sobre el cromatograma de picos. 'e tendr$ una buena resolucin si los picos no se solapan, y est$

perfectamente delimitado cada pico, sin que coincida el final de uno con el principio del siguiente. 'i el valor de la resolucin est$ pr imo a +,@ se obtendr$ una mala resolucin quedando los picos solapados, de forma que se distinguen las crestas, pero no la base, y si el valor de la resolucin est$ pr imo a 2,< se obtendr$n unos picos bien delimitados por lo que se obtendr$ una buena resolucin. Ana pobre resolucin es debida principalmente a&

Bay demasiada muestra en la columna. %a columna o placa es corta. %a fase mvil no discrimina entre los componentes. %a columna es demasiado gruesa.

Asimetra del Pico8 Ana que(a com-n entre los cromatografistas es la presencia de bandas asimtricas. Cfortunadamente, lo que las causa es bien conocido y con frecuencia es posible diagnosticar 2as razones de la asimetra de una banda en una separacin en particular. %as bandas simtricas, se observan normalmente slo con muestras que no e ceden un m$ imo de tamao, usualmente 2 mg de muestra por gramo de fase estacionaria (+.2 mg;g para empaques peliculares). 'i D: es mayor a concentraciones m$s ba(as de soluto, entonces el ala de ba(a concentracin del pico eluyente se mueve m$s lentamente que el ala de alta concentracin. 6onforme una banda inicialmente simtrica se mueva a lo largo de la columna se volver$ sesgada y, finalmente,desarrollar$ un frente agudo y una cola larga que da lugar al EcoleoF del pico. %asolucin en este caso es disminuir el tamao de la muestra 4asta el punto en que elperfil de todas las bandas se vuelva simtrico y los tiempos de retencin constantes.

7E'AGEH /E I#E7C6JIHE'&

1. +alculation o# the number o# $heoretical Plates (hal#-height method6 used b4 $osoh)

>4ere& H 9 Humber of t4eoretical plates "e 9 elution volume or retention time (m%, sec, or cm) 4 9 peaD 4eig4t K2;1 9 Kidt4 of t4e peaD at 4alf peaD 4eig4t (m%, sec, or cm)

2. +alculation o# the number o# $heoretical Plates (9:P method)

>4ere& H 9 Humber of t4eoretical plates "e 9 elution volume, retention time or retention distance (m%, sec, or cm) 4 9 peaD 4eig4t Kb 9 Kidt4 of t4e peaD at t4e base line (m%, sec, or cm)

3. +alculation o# pea; As4mmetr4 .actor (used b4 $osoh)

>4ere& Cs 9 peaD asymmetry factor b 9 distance from t4e point at peaD midpoint to t4e trailing edge (measured at 2+L of peaD 4eig4t) a 9 distance from t4e leading edge of of peaD to t4e midpoint (measured at 2+L of peaD 4eig4t) 4. +alculation o# $ailing .actor (9:P method)

>4ere& M 9 tailing factor (measured at <L of peaD 4eig4t) b 9 distance from t4e point at peaD midpoint to t4e trailing edge a 9 distance from t4e leading edge of t4e peaD to t4e midpoint

. +alculation o# the 7eight 1<ui&alent to a $heoretical Plate (71$P)

>4ere& B 9 Beig4t equivalent of a t4eoretical plate % 9 %engt4 of t4e column H 9 Humber of t4eoretical plates /imensions& K4en using B#%6 or AB#%6 columns, B is usually e pressed in Nm.

!. +alculation o# (educed Plate 7eight (h) Oiddings introduced dimensionless parameters for B and also for t4e linear velocity. /imensionless parameters alloK t4e direct comparison of t4e efficiency of tKo or more columns pacDed Kit4 different particle size pacDing materials. Cccording to t4e t4eory, a Kell pacDed column s4ould 4ave a reduced plate 4eig4t (4) in t4e range of 15P at a reduced velocity (v) of about P. Bere Ke only provide t4e formula for 4.

>4ere& 4 9 reduced plate 4eig4t (sometimes referred to as t4e number of band Kidt4s) B 9 4eig4t equivalent of a t4eoretical plate (Nm) dp 9 mean particle size (Nm)

). +alculation o# chromatographic (esolution