Toxicologia de Saneantes

Minicursos CRQ-IV - 2008 toxicologia aplicada a saneantes
TOXICOLOGIA DE SANEANTES
Marco Antonio Abla marcoabla@hotmail.com
Conselho Regional de Qumica IV Regio (SP) Apoio: Caixa Econmica Federal
CONTEDO PROGRAMTICO
1. Toxicologia: Do agudo ao crnico - Uma viso histrica. 2. Fundamentos em Toxicologia. 3. Toxicologia na legislao de saneantes. 4. Alguns testes toxicolgicos "in vivo"e "in vitro". 5. Tendncias futuras em toxicologia.

Do Agudo ao Crnico Uma Viso Histrica
Shen Nung 2696 AC

O Pai da Medicina Chinesa. Destacou-se por ter provado 356 ervas, vindo a falecer em funo de uma dose txica de uma delas. Escreveu a obra On Herbal
Medical Experiment Poisons.

Papiro de Ebers 1500 AC

O mais bem preservado documento mdico do Egito antigo. Contm cerca de 110 pginas sobre anatomia, toxicologia, magias e tratamentos.

Gula 1400 AC
Textos sumrios referem-se a uma deidade feminina, Gula. Esta figura mitolgica, que j foi associada com magias e venenos, foi tambm chamada de Deusa da Sade ou a Grande Fsica.
Homero 850 AC
Escreveu sobre o uso de flechas envenenadas nos picos Ilada e Odissia. O Toxikon grego uma flecha envenenada.

Scrates 470 a 399 AC

Morte de Scrates de heresia por Hemlock, e acusado religiosa
corrupo moral de jovens. O princpio ativo era o alcalide conina, que quando ingerido causa paralisia, convulses e, potencialmente, morte.

Clepatra 69 a 30 AC
Rainha do Egito experimentou estrcnina em pobres e prisioneiros. Cometeu suicdio com a Egyptian asp, cobra normalmente utilizada em execues.
Fogo Grego - 671

O fogo grego (napalm) foi muito utilizado pelos bizantinos na Idade Mdia, tanto em batalhas no mar quanto na terra.

Ecloso do Ergot - 994

O fungo do Ergot, quando consumido, causou gangrena em mais de 40.000 pessoas que consumiram trigo e arroz contaminados.

Peste Negra- 1347 a 1351

A peste negra se espalhou de forma devastadora pela Europa e sia, vitimando um nmero inacreditvel de pessoas.
Rodrigo e Cesar Borgia 1400 a 1500

Assassinos italianos durante os seculos 15 e 16, os Borgia utilizavam arsnico para obterem ganhos polticos e monetrios.
Paracelsus 1493 a 1541

Todas as substncias so venenos e no existe nenhuma que no seja. O que diferencia o medicamento de um veneno a dose.

John Jones 1701

John Jones pesquisou extensi-
vamente os efeitos mdicos do pio e escreveu The Mysteries of Opium Revealed.
Pierre Ordinaire 1797 a 1915

Criou um elixir utilizando absinto popularizado e vendido por Henry Pernod. Foi banido em 1915 e teve usurios famosos, como por exemplo, Degas e Van Gogh, dentre outros.

Upton Sinclair - 1878 a 1968

Educado na Universidade de Columbia, este novelista poltico publicou a obra The Jungle, na qual criticava as condies da industria de empacotamento de carne. Sua posio levou ao Ato de Inspeo da Carne em 1906.

Ato de Drogas e Alimentos - 1906

Suportado pelo qumico-chefe do Departamento de Agruicultura, Harvey W. Wiley, o Food and Drugs Act foi criado para proteger a populao de drogas e alimentos potencialmente perigosos.
Guerra Qumica - 1915

Desenvolvimento de produtos qumicos para serem utilizados como armas militares. Cloro, Cloropicrina, Fognio e Gs Mostarda foram utilizados extensivamente.
Proibio Americana - 1915

Instituda atravs da 18a Emenda, a proibio a fabricao clandestina de lcool, em funo dos inmeros agravos a sade, incluindo casos de cegueira e danos cerebrais, por seu consumo recreativo pela populao.
Protocolo de Geneva - 1925
Proibio do uso de armas qumicas e biolgicas.

Food and Drug Administration - 1930

Criado para regulamentar o contedo e segurana das drogas e alimentos, o FDA foi estabelecido como agncia governamental. Algumas de suas funes especifcas eram a regulamentao dos dizeres de rotulagem de alimentos, superviso dos testes clnicos para novos medicamentos e investigao das queixas dos consumidores sobre drogas e alimentos.

Desastre do Elixir Sulfanilamida - 1937

Mais que 100 pessoas, em sua maioria crianas, morreram quando o Elixir Sulfanilamida foi distribudo sem ser testado e continha Dietilenoglicol
como veculo.

Albert Hofmann - 1938

O cido lisrgico (LSD) foi sintetizado no Laboratrio
Sandoz e, em 1943, Hofmann o testou em si prprio.

DDT 1939 Paul Hermann Mller - 1948

Reconhecido como inseticida pelo cientista suio Paul Hermann
Mller, que ganhou o prmio Nobel em Fisiologia e Medicina. O DDT foi banido em 1972.

Baa de Minamata anos 50

Dejeitos de metais pesados de uma planta de acetaldedo provocaram a contaminao da vida aqutica local, que depois afetou local tambm (perda a de
populao
coordenao motora).

Desastre da Talidomida 1959 e anos 60

Desenvolvida por uma companhia alem, a Gruenenthal, com a finalidade de auxiliar o enjo matinal de mulheres grvidas. Entretanto provocou inmeros asos de fetoxicidade, com defeitos de nascena nos filhos de mulheres que a consumiram no estgio de gravidez.

Fundao da EPA 1970

A Environmental Protection Agency (EPA) foi fundada, em 1970, como resultado de uma lei promulgada pela administrao Nixon.
Desastre de Bohpal 1984

Liberao acidental de 40 toneladas mtricas de isocianato de metila de un planta de pesticidas da Union Carbide no corao da cidade provocou a milahares de mortes e centenas de milhares de agravos sade.

Acidente de Chernobyl 1986

Em abril, planta nuclear de Chernobyl produziu radioativa uma coluna a de fumaa Ucrnia,
sobre
Escandinvia, Reino Unido e leste dos EUA.


Ataque ao Metr de Tquio - 1995

Membros de grupo religioso lanaram gs Sarin em cinco locais do metr de Tquio, matando 12 e afetando mais de 5.000 pessoas.

FUNDAMENTOS EM TOXICOLOGIA
Toxicologia:
A Cincia dos venenos.
Estudo dos efeitos adversos de agentes qumicos e fsicos em organismos vivos. Estudo dos efeitos de xenobiticos sobre organismos vivos.
Perigo:
Capacidade inerente a uma substncia de causar um afeito adverso.

Risco:
Probabilidade que um perigo ocorra sob condies
especficas de exposio ou uso.
Identificao do risco:
Dados epidemiolgicos. Dados de literatura.
Testes em animais de experimentao. Mtodos alternativos (SAR).

Toxicocintica:
Percurso de uma substncia txica no organismo. Envolve as seguintes etapas:
o Absoro: oral, drmica ou inalatria. o Biotransformao. o Distribuio. o Eliminao.
Toxicodinmica:
Processo de interao de substncias potencialmente txicas com rgos-alvo.

Biotransformao:
FUNDAMENTOS EM TOXICOLOGIA Efeito Agudos: aqueles que que ocorrem aps a administrao por via oral ou drmica de uma dose nica de uma dada substncia ou mistura, ou multiplas doses, durante 24h, ou por via inalatria por exposio de 4h, e observao dos sinais txicos desenvolvidos duante 1 ou 2 semanas e necrpsia ao final deste perodo.

Efeitos Subcrnicos: aqueles que so observados aps exposio repetida a uma substncia ou produto qumico por um perodo de dias at 6 meses. Efeitos Crnicos: aqueles que so observados aps
exposio repetida por um perodo superior a 6 meses. Dados egressos de exposio crnica por um perodo superior a 2 anos podem ser considerados para estudos de
carcinognese.

DL50 (dose letal 50): aquela capaz de levar a bito 50% da populao a qual a dose foi admnistrada. CL50 (concentrao letal 50): : aquela capaz de levar a bito 50% da populao exposta a tal concentrao. NOEL ou NOAEL: quantidade de substncia que no causa efeito ou efeito adverso na populao exposta. LOEL ou LOAEL: menor quantidade de substncia que causa efeito ou efeito adverso na populao exposta.
Resoluo RDC n 14, de 28 de fevereiro de 2007

Aprova o Regulamento Tcnico para Produtos Saneantes com Ao Antimicrobiana harmonizado no mbito do Mercosul atravs da Resoluo GMC n 50/06, que consta em anexo presente Resoluo.
5.9 Os produtos com ao antimicrobiana devero apresentar Dose Letal 50, por via oral, para ratos brancos machos, superior a 2000 mg/Kg de peso corpreo para produtos sob a forma lquida ou superior a 500 mg/Kg de peso corpreo para produtos sob a forma slida. Ser permitido o clculo terico de DL 50 oral.

ANEXO II: DADOS NECESSRIOS PARA AVALIAO DE NOVOS PRINCPIOS ATIVOS
1. Toxicidade aguda por via oral para ratos, com valores de DL50 e descrio dos sintomas observados; 2. Toxicidade aguda por via drmica para ratos, com valores de DL50 e descrio dos sintomas observados; 3. Toxicidade aguda por via inalatria para ratos, com valores de CL50 e descrio dos sintomas observados; 4. Teste de irritao drmica e ocular considerando os critrios estabelecidos nas respectivas metodologias internacionais para realizao dos ensaios; 5. Teste de sensibilidade drmica em cobaias; 6. Teste para verificao de mutagenicidade in vitro e in vivo;
ANEXO II: CONTINUAO 7. Teste para avaliao do metabolismo e excreo, em ratos; 8. Teste para verificao de efeitos teratognicos em ratos e coelhos; 9. Teste para verificao de efeitos carcinognicos em duas espcies sendo uma de preferncia no roedora; 10. Teste para verificao de efeitos nocivos ao processo reprodutivo, em ratos, pelo mnimo, em 2 geraes. Dependendo do caso, o rgo competente poder solicitar alguns dos dados abaixo relacionados: 11. Teste de toxicidade com doses repetidas dirias por via oral, drmica e inalatria, (14/21/28 dias), em camundongos, coelhos e ratos; 12. Teste de toxicidade subcrnica (noventa dias) por via oral, drmica e inalatria em camundongos, coelhos e ratos.

ANEXO IV FRASES OBRIGATRIAS ANTIMICROBIANA
PARA
OS
PRODUTOS
COM
AO
A) Em todos os rtulos dos produtos com ao antimicrobiana devero constar as seguintes frases: 1 CUIDADO! Irritante para os olhos, pele e mucosas. - esta frase poder ser omitida se for comprovado que o produto enquadra-se na classificao drmica e ocular primria como no irritante ou levemente irritante, de acordo com o teste de Draize em coelhos albinos ou atravs de ensaios in vitro devidamente validados e aceitos pela Autoridade Sanitria competente. Esta frase dever constar no painel principal.
ANEXO IV FRASES OBRIGATRIAS PARA OS PRODUTOS COM AO ANTIMICROBIANA (continuao) 2 No misturar com outros produtos , exceto se tal procedimento estiver indicado pelo fabricante no rtulo. 3 Usar luvas para sua aplicao. - esta frase poder ser omitida se for comprovado que o produto enquadra-se na classificao drmica primria como no irritante ou levemente irritante, de acordo com o teste de Draize em coelhos albinos ou atravs de ensaios in vitro devidamente validados e aceitos pela Autoridade Sanitria competente.
Minicursos CRQ-IV - 2008 toxicologia aplicada a saneantes Portaria n 15, de 23 de agosto de 1988
Determina que o registro de produtos saneantes domissanitrios com finalidade antimicrobiana seja procedido de acordo com as normas regulamentares.
VIII - AVALIAO TOXICOLGICA 1. A avaliao toxicolgica dos princpios ativos no listados no SUBANEXO 1 ser efetuada com base nos testes constantes do SUBANEXO 4, de acordo com suas caractersticas fsicas e toxicolgicas, considerando as finalidades e instrues de uso. 1.1. O mesmo procedimento suceder com as substncias adjuvantes no listadas na legislao de Vigilncia Sanitria em vigor.
VIII - AVALIAO TOXICOLGICA (continuao) 2. A classificao de risco dos produtos saneantes domissanitrios com ao antimicrobiana ser efetuada tomando-se por base os testes toxicolgicos agudos do SUBANEXO 4 de acordo com a forma de apresentao, as finalidades e instrues de uso. 2.1. Para a classificao de risco dos produtos em cujas composies figurem exclusivamente os princpios ativos constantes do SUBANEXO 1 devero ser apresentados os dados toxicolgicos agudos conforme a tabela do SUBANEXO 3.

VIII - AVALIAO TOXICOLGICA (continuao) 2.2. Para a classificao de risco dos produtos em cujas composies figurem princpios ativos No listados no SUBANEXO 1 devero ser apresentados os dados toxicolgicos agudos completos, itens a, b, c (este quando for o caso), d e e do SUBANEXO 4 2.3. A classificao de risco dos produtos no depender de todas as informaes toxicolgicas se enquadrarem na mesma classe de risco. O dado mais agravante ser tomado como base para classificar a formulao. 3. A avaliao toxicolgica e a classificao de risco de que tratam os itens 1 e 2 ser efetuada mediante a apresentao dos ensaios realizados em laboratrios idneos nacionais ou estrangeiros, desde que a metodologia empregada seja a estabelecida pelo INCQS/FIOCRUZ ou aceita pela Organizao Mundial de Sade.

VIII - AVALIAO TOXICOLGICA (continuao)
4. Os testes toxicolgicos para o estabelecimento da classificao de risco dos produtos devero ser realizados com as formulaes no diludas, excetuando-se os produtos para desinfeco de piscinas e utenslios de lactrio, para os quais os testes consideraro a diluio de uso recomendada. 4.1. Estes produtos somente sero autorizados quando as suas diluies, alm de serem eficientes sob o ponto de vista microbiolgico, se enquadrarem na classe de risco IV, constante do SUBANEXO 5, no que tange a efeitos adversos sobre a pele e olhos.

VIII - AVALIAO TOXICOLGICA (continuao)
5. Os produtos abrangidos pelos itens 1 e 2, ttulo IV, quando apresentados sob a forma de lquido premido (aerossol) ou lquido para pulverizao, se capazes de promover a emisso de partculas com dimetro aerodinmico igual ou inferior a 15 micrmetros somente sero autorizados se enquadrados nas classes de risco III e IV, no que tange irritabilidade ocular, conforme a classificao do SUBANEXO 5. 5.1. Para os produtos classificados nos itens 3 e 6, ttulo, IV, ser tolerada, tambm, a classe de risco II, pertinente irritabilidade ocular.

SUBANEXO 3: TABELA DOS DADOS TOXICOLGICOS AGUDOS PARA PRODUTOS COM PRINCPIOS ATIVOS AUTORIZADOS Forma Fsica Lquidos (simples) Lquidos pulverizveis Lquidos premidos Ps Granulados Tabletes Bastes Blocos Pastilhas DHSP ID, IO ID, IO ID, IO N N N DHASC ID, IO N N N N N EST ID, IO N N N N N -
Legendas: ID - irritabilidade trmica, IO - irritabilidade ocular, N - no autorizado, DHSP Desinfetante Hospitalar para Superfcies Fixas, DHASC Desinfetante Hospitalar para Artigos SemiCrticos, EST-Esterilizante
Minicursos CRQ-IV - 2008 toxicologia aplicada a saneantes SUBANEXO 4: TOXICOLGICA

1.Toxicidade
TESTES
PARA
AVALIAO
aguda por via oral para ratos, com valores de
DL50 e descrio dos sintomas observados.

2.Toxicidade
aguda por via drmica para ratos, com valores
de DL50 e descrio dos sintomas observados.

3.Toxicidade
aguda por via inalatria para ratos, com valores
de CL50 e descrio da sintomatologia observada.

SUBANEXO 4: TESTES PARA AVALIAO TOXICOLGICA (continuao)

4. Testes de irritabilidade da pele e olhos em coelhos, sendo dispensvel no caso de produtos com pH igual ou inferior a 2 ou igual ou superior a 11,5, enquadrados automaticamente na classe de risco I (corrosivos). 5. Teste de sensibilizao drmica em coabaias. 6. Testes para verificao de mutagenicidade "in vitro" e "in vivo".

SUBANEXO 4: TESTES PARA TOXICOLGICA (continuao)
7.
AVALIAO
Teste de toxicidade sub-crnica (noventa dias) via oral, em ratos. 8. Teste para avaliao do metabolismo e excreo, em ratos. 9. Teste para verificao de efeitos teratognicos em ratos e coelhos. 10. Teste para verificao de efeitos carcinognicos em camundongos e ratos, via oral, com durao no inferior a 18 e 24 meses, respectivamente
SUBANEXO 4: TESTES PARA AVALIAO TOXICOLGICA (continuao)

11. Teste para avaliao de toxicidade crnica, via oral, com espcie roedora e outra no roedora. 12. Teste para verificao de efeitos nocivos ao processo reprodutivo, em ratos, por, no mnimo, 2 geraes. 13. Teste para verificao de toxicidade drmica subaguda (vinte e um dias), em ratos ou coelhos. 14. Teste para verificao de toxicidade inalatria subaguda (quatorze a vinte e um dias), em ratos.
SUBANEXO 4: TESTES PARA TOXICOLGICA (continuao)

14. Teste
AVALIAO
para verificao de neurotoxicidade retardada. complementares para enzimas especficas. sobre o emprego de antdotos, antagonistas e
15. Testes 16. Dados
primeiros socorros para os casos de intoxicao.
Minicursos CRQ-IV - 2008 toxicologia aplicada a saneantes Portaria n 152, de 26 de fevereiro de 1999
Aprova o Regulamento Tcnico para produtos destinados desinfeco de gua para o consumo humano e de produtos algicidas e fungicidas para piscinas.
D - CARACTERSTICAS GERAIS: D.6. Para os produtos algicidas e fungicidas para piscinas, somente sero permitidos produtos cuja classificao quanto irritabilidade drmica e ocular, na concentrao de uso, enquadrem-se na classe IV do Anexo V. ANEXO I: B. RELATRIO TCNICO CONTENDO: Dados toxicolgicos: irritabilidade drmica e ocular na concentrao final de uso para os produtos algicidas e fungicidas para piscinas;.
ANEXO III: DADOS PARA AVALIAO TOXICOLGICA DE PRINCPIOS ATIVOS NO CONSTANTES DO ANEXO II:
1.Toxicidade
aguda por via oral para ratos, com valores de DL50 e
descrio dos sintomas observados.

2.Toxicidade
aguda por via drmica para ratos, com valores de DL50
e descrio dos sintomas observados.

3.Toxicidade
aguda por via inalatria para ratos, com valores de
CL50 e descrio da sintomatologia observada.


ANEXO III: DADOS PARA AVALIAO TOXICOLGICA DE PRINCPIOS ATIVOS NO CONSTANTES DO ANEXO II (continuao)
4. Testes de irritabilidade da pele e olhos em coelhos, sendo dispensvel no caso de produtos com pH igual ou inferior a 2 ou igual ou superior a 11,5, enquadrados automaticamente na classe de risco I (corrosivos). 5. Teste de sensibilizao drmica em coabaias. 6. Testes para verificao de mutagenicidade "in vitro" e "in vivo".

7. 8.
Teste para avaliao do metabolismo e excreo, em ratos. Teste para verificao de efeitos teratognicos em ratos e coelhos.
9.
Teste para verificao de efeitos carcinognicos em duas espcies sendo uma de preferncia no roedora.
10. Teste
para avaliao de toxicidade crnica, via oral, com espcie
roedora e outra no roedora.


11. Teste para verificao de efeitos nocivos ao processo reprodutivo, em ratos, por, no mnimo, 2 geraes. 12. Teste de toxicidade com doses repetidas dirias por via oral, drmica e inalatria (14/21/28 dias), em camundongos, coelhos e ratos. 13. Teste de toxicidade subcrnica por via oral, drmica e inalatria em camundongos, coelhos e ratos.
Minicursos CRQ-IV - 2008 toxicologia aplicada a saneantes Resoluo - RDC n 326, de 09 de novembro de 2005
Aprova o Regulamento tcnico para produtos Desinfestantes Domissanitrios harmonizado no mbito do Mercosul atravs da Resoluo GMC n 49/99.
15. Determinao da DL50 oral para ratos brancos machos para
produtos de venda livre ao consumidor; 16. Dados toxicolgicos, para produtos inseticidas de venda restrita entidades especializadas, envolvendo aspectos de toxicidade aguda: DL50 drmica, DL50 oral, irritabilidade drmica primria, irritabilidade ocular e sensibilizao cutnea.

ANEXO 4: ESTUDOS TOXICOLGICOS ENVOLVENDO ASPECTOS BIOQUMICOS E PROVAS TOXICOLGICAS PARA AVALIAO DE INGREDIENTES ATIVOS NO AUTORIZADOS PELA AUTORIDADE SANITRIA COMPETENTE 1. Dose letal 50 aguda - DL 50 - por via oral e drmica, para animais de laboratrios; 2. Toxicidade a curto prazo, compreendendo a alimentao de animais de laboratrio diariamente, com raes adicionais de vrias doses de ingredientes ativos testados, por perodo de tempo nunca inferior a um dcimo da vida mdia (90 dias para ratos e camundongos, 1 ano para ces), incluindo dados sobre curvas ponderais, consumo de alimentos, exame clnico, provas hematolgicas, testes bioqumicos de sangue e urina, inclusive para deteco de possveis efeitos hormonais, exames anatomopatolgicos e histopatolgicos abrangendo pelo menos duas espcies de animais, uma das quais no roedora;

3. Toxicidade a longo prazo, compreendendo a alimentao de animais de laboratrio, diariamente, com raes adicionais de vrias doses de ingredientes ativos testados, por perodo de tempo no mnimo equivalente a metade da vida mdia das espcies dos animais empregados (18 meses para camundongos e 24 para ratos), incluindo observaes semelhantes as dos ensaios de toxicidade de curto prazo e alem disso, de estudos sobre ocorrncia de possveis efeitos carcinognicos. 4. Efeito sobre a reproduo e a prole, em trs geraes sucessivas; 5. Metabolismo e via de excreo incluindo a mdia de vida biolgica do ingrediente ativo, com animais de laboratrio. Toxicidade dos metablitos se forem diferentes em plantas e animais; 6. Possveis efeitos teratognicos; 7. Possveis efeitos mutagnicos; 8. Possveis efeitos neurotxicos retardados, quando aplicvel;,
Minicursos CRQ-IV - 2008 toxicologia aplicada a saneantes Portaria n 322, de 28 de julho de 1997
Aprova as Normas Gerais para Produtos para Jardinagem Amadora.
ANEXO 1: INFORMAES NECESSRIAS PARA A AUTORIZAO DO REGISTRO DE PRODUTOS PARA USO EM JARDINAGEM AMADORA 15. Determinao da DL50 oral para produtos de venda direta ao consumidor.
CLASSE
DL50 ORAL 50
Minicursos CRQ-IV - 2008 DL CL LESES OCULARES LESES toxicologia aplicada a saneantes

50 50
DRMICA 200
INALATRIA 0,2
capacidade de crnea e/ou irite irreversvel em 7 dias, corroso, ulcerao
DRMICAS
eritema severo persistente por 72 horas, edema moderado a severo por 72 h. eritema moderado persistente por 72 horas, edema regredindo em 72 horas. eritema leve reversvel em 72 horas, sem edema.
II
> 50 500
> 200 e 2000
> 0,2 e 2
capacidade da crnea e irite reversveis em 7 dias, moderada hipermia da conjuntiva
III
> 400 e 5000
> 2000 e 4000
> 2 e 20
sem capacidade de crnea, irite reversvel em 48 horas, leve hiperemia de conjuntiva reversvel em 7 dias
IV
> 50000
> 4000
> 20
sem irritao ou leve hiperemia da conjuntiva reversvel em 24 h.
sem irritao ou leve eritema reversvel em 24 h.
DL50 expressa em mg do produto por kg de peso do animal em teste. CL50 expressa em mg do produto por volume em litros do ambiente de teste. Conselho Regional de Qumica IV Regio (SP) Apoio: Caixa Econmica Federal
TESTES IN VIVO

TESTES IN VIVO
Toxicidade aguda:

Toxicidade oral aguda (DL50 oral); Toxicidade drmica aguda (DL50 drmica); Toxicidade inalatria aguda (CL50).
Toxicidade subcrnica e crnica:
Todos com exceo da Mutagenicidade.


TESTES IN VIVO
OECD:
Organization for Economic Cooperation and development.
EPA:
Environmental Protection Agency.

TESTES IN VIVO
TOXICIDADE ORAL AGUDA (DL50 oral) Finalidade: Estabelecer, para fins de avaliao
e classificao do perigo, a dose capaz de matar, POR VIA ORAL, 50 % da populao submetida ao teste. OECD 420: Acute Oral toxicity Fixed dose method (Dezembro, 2001): o 5 ratos machos e 5 fmeas no nulparas por dose. o Doses de 5, 50, 500 e 2.000 mg/kg. o Necrpsia de todos animais submetidos ao teste.

TESTES IN VIVO OECD 423: Acute Oral toxicity Acute Toxic Class Method (Dezembro, 2001): o 3 ratos de mesmo sexo por dose. o Doses de 5, 200 e 2000 mg/kg inicialmente. o Necrpsia de todos animais submetidos ao teste. OECD 425: Acute Oral toxicity Up and Down Procedure (Dezembro, 2001).

TESTES IN VIVO
TOXICIDADE DRMICA AGUDA (DL50 drmica) Finalidade:

Estabelecer, para fins de avaliao e classificao de perigo, a dose capaz de matar, POR VIA DRMICA, 50 % da populao submetida ao teste. OECD 402: Acute Dermal Toxicity (Fev., 1987) o 5 ratos machos e 5 fmeas no nulparas por dose. o Doses de 5, 50, 500 e 2000 mg/kg. o Necrpsia de todos animais submetidos ao teste.

TESTES IN VIVO
TOXICIDADE INALATRIA AGUDA (LC50) Finalidade:

Estabelecer, para fins de avaliao e classificao de perigo, a concentrao capaz de matar, POR VIA INALATRIA, 50 % da populao submetida ao teste. OECD 403: Acute Inhalation Toxicity (Maio, 1981) o Substncias-teste particuladas. volteis, premidas ou
o 5 ratos machos e 5 fmeas no nulparas por dose. o 4 horas de exposio Conc. Limtrofe: 5mg/L da substncia teste.

TESTES IN VIVO
Devem ser registradas ao final do estudo: Espcie / cepa utilizada.

Concentraes da substncia teste. Tempo de morte individual e concentrao correspondente. N de animais que demonstraram outros sinais de toxicidade. Patologia dos indivduos testados.

TESTES IN VIVO
Irritabilidade Drmica
Primria => aplicao nica com durao de 5 dias.
Repetida => aplicao por 10 dias consecutivos e avaliao durante 14 dias.

TESTES IN VIVO OECD 404: Acute Dermal Irritation / Corrosion (Abril, 2002)
o 3 coelhos albinos Nova Zelndia, no mximo; o Tricotomia de 2 reas no dorso do animal (controle e tratamento); o Aplicao de 0,5 mL do produto; o Patch oclusivo por 4 horas; o Leitura 24 e 72 horas aps aplicao; o Parmetros: Eritema e edema. o Deve ser obedecida a rvore decisria antes da realizao do teste.

TESTES IN VIVO
1. Dados em humanos ou animais relativos a corrosividade, irritabilidade ou ausncia de efeitos drmicos; 2. QSAR (Rel. Estrutura atividade) previsvel quanto a corrosividade ou irritabilidade drmica; 3. Avaliao do pH e da capacidade tamponante; 4. Dados sobre a toxicidade dermal sistmica; 5. Testes validados in vitro ou ex vivo referentes a corrosividade / irritabilidade drmica; 6. Teste para corroso / irritao drmica in vivo com 1 animal; 7. Teste para corroso / irritao drmica in vivo com 2 animais adicionais.

TESTES IN VIVO
Conselho Regional de Qumica IV Regio (SP) Apoio: Caixa Econmica Federal INCQS, 2004

TESTES IN VIVO
INCQS, 2004

TESTES IN VIVO
INCQS, 2004

TESTES IN VIVO

TESTES IN VIVO
Conselho Regional de Qumica IV Regio (SP) Apoio: Caixa Econmica Federal INCQS, 2004

TESTES IN VIVO

TESTES IN VIVO

TESTES IN VIVO
Graduaes
Eritema : 0 - pele normal 1- eritema leve levemente avermelhada 2 - eritema bem definido - vermelhido 3 eritema moderado vermelhido intensa 4 eritema severo c/ escaras

TESTES IN VIVO
Graduaes
Edema : 0 s/edema 0 a 0,24 mm 1- edema muito leve 0,25 a 0,49 mm 2 - edema leve - 0,5 a 0,74 mm 3 edema moderado 0,75 a 1 mm 4 edema severo > 1 mm

TESTES IN VIVO
Clculos e Classificao
0 0,9 1 1,9 2 4,9 5-8
No irritante Irritante leve Irritante moderado Irritante severo

TESTES IN VIVO
Irritabilidade Ocular
Draize 1944/1959
Kay & Calandra 1964 classificao Vrias modificaes reduo de 9 para 5 animais. lavagem ou no 24 horas aps aplicao. baixo volume (10uL). FDA, CFR, OECD, etc.

TESTES IN VIVO
KAY & CALANDRA 1964

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. No irritante Praticamente no irritante Minimamente irritante Levemente irritante Moderadamente irritante Severamente irritante Extremamente irritante Maximamente irritante

TESTES IN VIVO
Modificaes no Teste de Draize

Guideline FDA OECD INCQS N de animais 6 1+2 5 Leituras (horas) 24, 48, 72 1, 24, 48 e 72 24,48,72,148 Classificao No irritante/ irritante No irritante/ irritante No irritante, Leve, Moderado, Severo, Mximo

TESTES IN VIVO
Mtodo in vivo:
OECD 405: Acute Eye Irritation / Corrosion (Abril, 2002) o o o o o o 3 coelhos albinos da Nova Zelndia 100uL (0,1 mL) no saco conjuntival. massagem por 30 segundos. lavagem ou no 24 horas aps aplicao. leituras com 24h, 48h, 72 hs e 7 dias. Obedecer rvore decisria antes do incio do teste.

TESTES IN VIVO
1. Dados em humanos ou animais relativos a corrosividade, irritabilidade e/ou ausncia de efeitos oculares; 2. Dados em humanos ou animais relativos a corrosividade, irritabilidade e/ou ausncia de efeitos drmicos; 3. QSAR (Rel. Estrutura atividade) previsvel quanto a corrosividade ou irritabilidade ocular; 4. QSAR (Rel. Estrutura atividade) previsvel quanto a corrosividade ou irritabilidade drmica; 5. Avaliao do pH e da capacidade tamponante; 6. Dados sobre a toxicidade drmica sistmica;
TESTES IN VIVO 7. Testes validados in vitro ou ex vivo referentes corrosividade / irritabilidade ocular; 8. Testes validados in vitro ou ex vivo referentes corrosividade / irritabilidade drmica; 9. Testar corroso / irritao drmica in vivo; 10. Teste para corroso / irritao ocular in vivo com animal; 11. Teste para corroso / irritao ocular in vivo com animais adicionais.
a a
1 2

TESTES IN VIVO

TESTES IN VIVO
Observao e graduao das alteraes

opacidade (0 4) Crnea rea (0 4) ris irite (0 2) secreo (0 3) quimose (0 4) hiperemia (0 3
Conjuntiva
TESTES IN VIVO Minicursos CRQ-IV - 2008 toxicologia aplicada a saneantes
Olho Normal
1 hora Hiperemia 3 Quimose 4 Irite 1 Opacidade 2
24 horas Hiperemia 3 Quimose 3 Irite 2 Opacidade 1
48 horas Hiperemia 3 Quimose 3 Irite 2
72 horas Hiperemia 3 Quimose 2 Irite 2
7 dias Hiperemia 3 Quimose 2 Irite 2
Conselho Regio Federal Opacidade 1 Regional de Qumica IV Opacidade 2 (SP) Apoio: Caixa Econmica Opacidade 4

TESTES IN VIVO
Mtodos
Mais difundidos: Buehler Skin Sensization: OECD 406 (Julho, 2002). Local Limph Node Assay OECD 429 (Abril, 2002).

TESTES IN VIVO
Princpio da sensibilizao
Fase de Induo aprox. 3 semanas Fase de repouso aprox. 2 semanas Fase de desafio em geral 3 dias

TESTES IN VIVO
Animais de experimentao convencionais: Rato, Camundongo, Cobaia, Coelho, Hamster. No convencionais: Cavalo, Carneiro, Porco, Peixe, Gerbil, Furo, Macaco.

TESTES IN VIVO
Gerbil
Furo

TESTES IN VIVO
Tipos de Animais de experimentao
Convencionais. SPF - Specific Pathogen Free. Germ Free.


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Tipos de Biotrios
Criao Experimentao

TESTES IN VIVO Cantos curvos. Corredores limpo e sujo. Manuteno de luzes e equipamentos pelo teto. Sem ralos nas salas. Pintura e superfcies de fcil limpeza. Sem janelas. rea de lavagem e esterilizao. Salas de recepo. Quarentena.

TESTES IN VIVO Salas separadas por espcies. Diferencial de presso. biotrio de criao => - fora/ + dentro. biotrio de exper. => + fora/ - dentro. Controle de temperatura. Controle de umidade. Ciclo claro/escuro de 12/12 hs - (nvel de luz). Nmero de animais por caixa. Tipos de caixas apropriados. Baixos nveis de rudo.

TESTES IN VIVO o o o o o o Treinamento (UE - diferentes categorias). Uso de EPIs: Luvas; Gorro; Mscara; Sapatilha; Vvental cirrgico/jaleco. Uso de EPCs: Fluxo laminar.

TESTES IN VIVO Identificao de caixas. Complementao alimentar (Vitamina C ou capim para cobaias). Feno para cobaias (distrao). Calibrao de balanas, autoclaves, etc. Controle ambiental. Cuidados com a cama. Freqncia de trocas. Barreiras fsicas. Sala de sacrifcio.

TESTES IN VIVO
TICA NO MANUSEIO DE ANIMAIS DE LABORATRIO

Conjunto de procedimentos que visam o tratamento humano dos animais de laboratrio, de forma a manter o bem-estar e reduzir o stress.
TESTES IN VIVO Existem grupos colegiados que examinam os procedimentos a serem executados, de modo a garantir que os animais sero manuseados com rigor tico, bem como avaliar a relevncia cientfica do projeto, evitando assim que ocorram: repeties desnecessrias, uso excessivo de animais, utilizao de modelos experimentais inadequados, imposio de sofrimento, debtre outros.
TESTES IN VIVO Sacrifcio humano: o anestsico, CO2. Uso de anestsicos e analgsicos, sempre que possvel. Considerar a existncia de mtodos alternativos validados. Respeito com os animais.

TESTES IN VIVO GUIAS SOBRE MANEJO DE ANIMAIS DE LABORATRIO
So compndios que determinam as regras bsicas a serem seguidas para um manuseio adequado e manuteno do bem - estar das espcies animais utilizadas em experimentao: o Canadian Council for Animal Care. o NIH (National Institute of Health). o COBEA (Colgio Brasileiro de Experimentao Animal).

TESTES IN VITRO
Mtodos Alternativos
1760 - Fergusson - preocupao com mtodos brbaros em testes com animais Sc. XIX - Bentham - preocupao com o bem estar dos animais (a questo no Eles podem raciocinar?` nem Eles podem falar?`, mas, Eles sofrem? Sc. XIX - Marshal Hall - proposta de cdigo na prtica de pesquisa => diminuio da dor, substituio de grandes animais por organismos inferiores e preveno de repeties desnecessrias.

TESTES IN VITRO
Mtodos Alternativos
1842 - fundao da British Society for the Prevention of Cruelty to Animals (mais tarde RSPCA) - primeira sociedade protetora dos animais, no mundo 1959 - Russel & Burch - publicao do livro Principals of Humane Experimental Technique - surgimento do conceito dos 3Rs (Replacement, Reduction and Refinement) 1978 - campanha para a retirada do mtodo de Draize dos testes em cosmticos, por defensores dos direitos animais

TESTES IN VITRO
O que so mtodos alternativos?

So procedimentos que podem substituir completamente o uso de animais em experimentos (Replacemnt), reduzir o nmero de animais necessrios (Reduction) ou diminuir a dor ou desconforto sofrido pelos animais (Refinement).
(adaptado de FRAME - Fund for the Replacement of Animals in Medical Experiments)

TESTES IN VITRO
Progressos na reduo
Procedimentos de screening. Hierarquizao de testes (j descrito na literatura para irritao, fotossensibilizao e sensibilizao). Integrao de mtodos (p. ex.: QSAR + in vitro).

TESTES IN VITRO
A busca dos mtodos alternativos

Experimentais
cultivo celular HET-CAM LAL Corrositex Skintex Eyetex QSAR PBPK
Educacionais
vdeos simuladores modelos plsticos

TESTES IN VITRO
Mtodos vlidos x validados

Vlidos mtodos passveis de serem utilizados (BCOP, ICE, NRU, etc.) Validados aceitos oficialmente; reconhecidos (TER, SkinEthics, UV-NRU, etc.)
TESTES IN VITRO
HET- CAM TEST (HENS EGG TEST CHORIOALLANTOIC MEMBRANE TEST)

TESTES IN VITRO
VISO GERAL DO TESTE

Histria do teste A base foi o modelo de embries de galinhas usados por embriologistas e virologistas. O mtodo HET-CAM foi inicilamente proposto por Luepke (1985) e Luepke e Kemper (1986) Em 1988 iniciou-se um projeto de validao (financiado pelo Governo Federal da Alemanha) Fase preliminar com o estabelecimento do teste e desenvolvimento do protocolo. Estudos interlaboratoriais com 35 substncias em 12 laboratrios. Uma base dados desenvolvida com 200 substncias em 7 laboratrios.

TESTES IN VITRO
PRINCPIOS DO TESTE
Uma dose definida de substncia-teste aplicada a uma membrana
clorioalantnica de em ovos fertilizados e incubados de galinha (CAM). O CAM avaliado por 300s para o desenvolvimento de pontos finais definidos: O tempo decorrido at o aparecimento do primeiro ponto final individual registrado. A substncia-teste rinsada em tempos definidos (por exemplo, 30, 120, 300s) para avaliar e registrar as alteraes, se as caractersticas fsicoqumicas da substncia-teste permitirem a visualizao de forma clara.

TESTES IN VITRO
A MEMBRANA CHORIOALONTNICA
A membrana respiratria vascularizada que circunda o embrio composta por: Uma camada ectodrmica (epitlio 2 a 3 clulas de espessura). Uma camada mesodrmica (tecido conectivo, substncia base e vasos sanguneos). Uma camada endodrmica. Os vasos sanguineos que esto presentes na camada mesodrmica do CAM so ramificaes das artrias e veias embrioalantnicas que formam uma camada capilar.
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TESTES IN VITRO
MATERIAIS
Ovos brancos de Galinha Leghorn. Ovos frescos,, claros, ferteis (no mais que 7 dias) entre 50 e 60 g. Incubadora com dispositivo de rotao automtica. Substncia controle negativa: Soluo de NaCl a 0.9% (p/v) NaCl solution, ou leo de oliva ou outro veculo com soluo a de NaCl a 0.9% (p/v). Substancia controle positiva: NaOH a 10%, NaOH em pellets, 1% dodecilsulfato de sdio.

TESTES IN VITRO
PREPARAO DO SISTEMA - TESTE

- Incubao dos ovos por 9 dias. - Iluminao dos ovos aps 8 dias de incubao para assegurar a viabilidade. - Incubao por mais 24h sem rotao. - Antes do uso remover a casca do ovo com auxlio de uma serra. - Umedecer a membrana branca interna do ovo com a soluo de NaCl a 0,9% (p/v). Manter os ovos aquecidos at seu uso. - Remover cuidadosamente a a membrana interna antes do uso (no mais do que 20min aps a remoo da casca externa).
Minicursos CRQ-IV - 2008 TESTES IN VITRO a saneantes toxicologia aplicada

TESTES IN VITRO
TRATAMENTO COM A SUBSTNCIA - TESTE

Aplicao da substncia teste no diluda diretamente na CAM Liquidos: 0,3 mL Solidos, pastas ou material particulado: 0.3 mL, no mais que 0,3g Os slidos devem ser reduzidos a um p fino. Cobrir ao menos 50% da superfcie do CAM com a substncia-teste. Exposio por, no mnimo, 300s.

TESTES IN VITRO
PONTOS FINAIS ATRAVS DA INSPEO VISUAL Hemorragia Lysis Desaparecimento de vasos sanguneos na CAM. Coagulao
Antes da aplicao do teste
Hemorragia
Coagulao

TESTES IN VITRO
Coagulao do albmen

TESTES IN VITRO
Medio e registro dos dados: Tempo decorrido entre a aplicao da substncia-teste e o aparecimento dos pontos finais. Severidade das reaes principais aps 300 s. Nmero de replicatas: Um mnino de 3 ovos por substncia-teste (por concentrao no caso de diversas diluies) Nmero de replicatas: No necessrio a no ser que respostas inequvocas sejam observadas em 3 ovos testados.

TESTES IN VITRO
Determinao da concentrao limite de irritao (ITC) como a maior concentrao na qual uma leve reao seja observada. Clculo do escore de irritao (IS): (301 Hemorrhage time) x 5 + (301 Lysis time) x 7 + (301 Coagulation time) x 9 300 300 300 Escore mnimo: Escore mximo: 0 21

TESTES IN VITRO
Critrios de Deciso (exemplos de deciso IRRITANTE SEVERO / CORROSIVO) ITC < 1% ou 1.0% < ITC < 2.5% e IS (10%) > 16 ou 2.5% < ITC < 10.0% e IS (10%) < 16 ou IS (substncia-teste no diluda ou dissolvida) 9.0 ou Tempo de deteo mdio para o aparecimento de coagulao (substncia-teste no diluda ou dissolvida) < 60 sec

FUTURO DOS TESTES TOXICOLGICOS
O QUE OS SENHORES ACHAM???????

Muito Obrigado
Marco Antonio Abla

marcoabla@hotmail.com

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Shen Nung 2696 AC

Medical Experiment Poisons.

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Do Agudo ao Crnico Uma Viso Histrica

Papiro de Ebers 1500 AC

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Scrates 470 a 399 AC

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Fogo Grego - 671

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Ecloso do Ergot - 994

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Peste Negra- 1347 a 1351

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Rodrigo e Cesar Borgia 1400 a 1500

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Paracelsus 1493 a 1541

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John Jones 1701

vamente os efeitos mdicos do pio e escreveu The Mysteries of Opium Revealed.

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Pierre Ordinaire 1797 a 1915

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Upton Sinclair - 1878 a 1968

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Ato de Drogas e Alimentos - 1906

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Guerra Qumica - 1915

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Proibio Americana - 1915

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Protocolo de Geneva - 1925

Proibio do uso de armas qumicas e biolgicas.

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Food and Drug Administration - 1930

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Desastre do Elixir Sulfanilamida - 1937

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Albert Hofmann - 1938

Sandoz e, em 1943, Hofmann o testou em si prprio.