PRCTICA N 3

Cuantificar la concentracin de hemoglobina

Objetivo:
El alumno aprender a realizar la prueba de concentracin de hemoglobina en sangre, utilizando para ello el mtodo de la cianometahemoglobina.

Introduccin:
La hemoglobina es producida en los glbulos rojos en desarrollo (normoblastos). Esta compuesta por el Hem (un pigmento con capacidad de trasporte de oxigeno) y la globina (una protena responsable de la especificidad de especie y el transporte de anhidrido carbonico). En la molecula de hemocglobina hay 4 estructuras de hem unidas a cada una de globina. El hem est compuesto de hierro reducido (Fe ++) unido a protoporfirina. La determinacin de la concentracin de hemoglobina se ha convertido en una de las pruebas ms importantes en el diagnstico y tratamiento de la anemia. Las tres causas principales de anemia son: alteracin en la sntesis de los eritrocitos en la mdula sea, prdidas de sangre excesivas y transporte alterado de eritrocitos hacia sangre perifrica. Se observan valores de hemoglobina elevados en policitemia vera, eritrocitosis, deshidratacin, recin nacidos, cianosis congnita o adquirida, enfermedad renal y pulmonar crnica, quistes renales y en una serie de tumores productores de eritropoyetina. El diagnstico clnico no debe realizarse teniendo en cuenta el resultado de un nico ensayo, sino que debe integrar los datos clnicos y de laboratorio.

Material y Reactivos.
Espectrofotmetro para lecturas de 540 nm Celdas para el espectro Pipetas de 1 a 15 ml. Pipeta salhi Boquillas

Gradillas 9 tubos de ensaye de 3x100 Sol. Drabkin Solucin estndar de cianometahemoglobina

Procedimiento:
1.- Colocar 5 ml. De solucin de Drabkin en un tubo d e ensaye de 13x100 2.- llenar la pipeta Sahli de muestra sanguine hasta la marca 0.02ml 3.- vaciar la sangre de la pipeta Sahli al tubo que contiene solucin de Drabkin y limpiar el escesio de sangre con una gasa 4.- agitar en el tubo varias veces hasta que quede un color homogneo, y dejar reposar durante 10 minutos para dar lugar a la formacin de cianometahemoglobina, y posteriormente hacer la lectura en el espectrofotmetro a 540 nm 5.- interpretar y hacer la curva de calibracin.

DETERMINAR LA CURVA DE CALIBRACION

La curva de calibracin se prepara a partir de un estndar de concentracin de hemoglobina y utilizando como diluyente la solucin drabkins

Dereminacin de Hemoglobina por el mtodo de SAHLI.

Fundamento.
Consiste en convertir la hemoglobina en hematina cida que tiene en solucin un color marron. La intensidad del color est en relacin con la cantidad de hemoglobina. Se aade agua a la solucin marrn hasta que el color es igual al de un patrn calibrado.

Material y reactivos.
Hemoglobina de Sahli una pipeta de Sahli agua destilada Acido Clorhdrico

Procedimiento.
1.- Con la pipeta Sahli aspira sangre hasta la marca 0.02ml y verter en un tubo en el cual ya hemos depositado HCl, hasta la marca 10 2.- Una vez pasados 10 minutos homogenizar la sangre con el cido, hasta que tome un color acaramelado y a continuacin aadir agua destilada con una pipeta hasta igualar el color con el tubo patrn. 3.- ya igualado el color observar en la escala a que altura ha llegado el lquido, la marca ser la porcin de hemoglobina.

Esquemas

VALORES DE REFERENCIA Valores normales de hemoglobina para diversas edades (en g %, gramos /100ml de sangre)
Edad Al nacer 1-2 aos 2-4 aos 5-7 aos 8-15 aos 16 o ms Sexo masculino 14 - 22 10 - 12 12 -15 12.5 - 15 13 - 15.5 13.5 - 17 Sexo femenino 14 22 10 12 12 15 12.5 15 12.5 15 12.5 - 15

Resultados

Conclusin

Cuestionario
1.- En dnde est contenida la hemoglobina? Y de que esta compuesta?

2.- Por qu es importante la prueba de Hemoglobina?

3.- Menciona las tres causas principales de anemia.

4.- En que casos se observa el aumento de la hemoglobina?

5.- Porque realizamos la curva de calibracin?

6.- Si detectamos hemoglobina alta de qu tipo de enfermedades se sospecha?

7.- En qu consiste el mtodo de Salhi?

8.- Cul es el principal objetivo de realizar este mtodo?

9.- En qu etapa existe mayor porcentaje de hemoglobina? Por qu?

10.- Menciona los factores que contribuyen a dar un mal resultado de cuantificar la concentracin de hemoglobina.