El dengue es una enfermedad vrica transmitida por mosquitos que, en general, no ha existido en Norteamrica durante varios decenios.

El dengue puede transformarse en una forma mucho ms peligrosa de la enfermedad, conocida como fiebre hemorrgica del dengue. Los sntomas del dengue son: fiebre elevada, dolor de cabe a, dolor detrs de los o!os, facilidad para la producci"n de hematomas, dolor de las articulaciones, m#sculos, huesos, sarpullidos $ sangrado de encas. No ha$ una cura ni un tratamiento conocido del dengue que no sea descanso adecuado $ beber mucha agua. %ablando en general, el transmisor del virus es un tipo especfico de mosquito, Aedes aegypti. Aedes aegypti es una especie de las regiones tropicales $ subtropicales del mundo, limitada por las latitudes &'( Norte $ &') *ur, correspondiente a una isotrmica de verano de +((,. -tra limitante es la altitud, se ha registrado a .,.(( metros sobre el nivel del mar en ,olombia, donde la temperatura media anual es de +/(,, ms all del Ecuador rara ve se encuentra por arriba de los +,((( metros de altura 0Nelson, +1234. Llega a rebasar estas limitantes cuando las condiciones ambientales le son favorables, restringindola cuando cambian $ le son adversas. La especie es predominantemente domstica, prolifera en recipientes artificiales o naturales que se encuentran en las viviendas o en sus alrededores, #nicamente las hembras son hemat"fagas, se alimentan de sangre humana o de los animales domsticos que detectan por estmulos visuales, movimientos, tama5o, olor, humedad, temperatura, concentraci"n de ,-., entre otros. Esta sangre les es necesaria para desencadenar la maduraci"n de sus "vulos. Las hembras de los mosquitos Aedes aegypti son las responsables de transmitir el ma$or n#mero de enfermedades arbovirales al humano, una de estas es el dengue. 6dems de ser vectores eficientes, por sus hbitos domsticos se encuentran estrechamente relacionadas con el ser humano. *e encuentran ampliamente distribuidas en las regiones tropicales de todo el mundo. Esta especie de mosquito por mucho tiempo fue conocida como el mosquito de la fiebre amarilla, enfermedad que por siglos tuvo un papel relevante en la historia del pas. El dengue en los a5os recientes se le ha considerado la enfermedad transmitida por vector ms importante del mundo, que afecta al ma$or n#mero de humanos, este padecimiento tiende a tornarse a cuadros ms severos con episodios hemorrgicos con choque, presenta letalidad promedio del '7 en el mbito mundial. Las hembras son atradas por los humanos aunque se alimentan de otros animales vertebrados8 pican ma$ormente durante el da, su conducta es sutil $ astuta: se acercan al husped desde la sombra cuando el viento sopla a su favor $ pican generalmente alrededor de los tobillos, los machos llegan a presentar comportamiento similar sin tener la capacidad de picar ni de alimentarse de sangre. Las partes bucales del macho no estn adaptadas para chupar sangre, se alimentan de carbohidratos de cualquier fuente accesible como frutos o nctar de flores que satisface sus requerimientos energticos, las hembras tambin se alimentan de esta misma fuente como complemento indispensable. La cantidad de huevos que producen las hembras por cada ovipostura est directamente en relaci"n con el volumen de sangre que ingirieron, regularmente /. horas o menos son necesarias para que los ovocitos estn listos para fecundarse, la

hembra grvida busca un sitio con agua en donde poner los huevos, $ as se cierra el ciclo de vida. Ingeniera Gentica en Aedes aegypti: %o$ no existe una vacuna o tratamiento para la fiebre del dengue, que es endmica en los tr"picos $ tiene una particular prevalencia en 6sia, 6mrica del *ur $ el oeste del 9acfico. La enfermedad, que provoca sntomas similares a los de una gripe severa $ puede causar la muerte, se propaga mediante la picadura de un mosquito hembra infectado, llamado Aedes aegypti. :e acuerdo a las estimaciones, cada a5o se producen '( millones de casos de dengue. 6lrededor de .'(( millones de personas, es decir, dos quintos de la poblaci"n, estn en riesgo, sobre todo en 6frica $ el sudeste asitico, seg#n la -rgani aci"n ;undial de la *alud 0-;*4. 9ara la erradicaci"n del dengue se han creado diferentes tcnicas entre las cuales se encuentra la tcnica de insectos estriles 0*<=4, la cual se ha utili ado para el control de plagas en reas extensas. >ste es un mtodo de supresi"n o erradicaci"n de plagas, biol"gico $ amigable con el medio ambiente adecuado al enfoque de control de plagas preventivo $ en reas extensas 0Esteva, .((34. ?sicamente *<= es una tecnologa de control de la natalidad, un mtodo autocida de control de plagas que aprovecha el comportamiento natural de apareo de los insectos. Los insectos, $a sean pupas o adultos, sometidos a esta tcnica se vuelven sexualmente estriles mediante radiaci"n gamma 0Esteva, .((34. ,uando un macho estril es liberado en una poblaci"n silvestre $ se aparea con una hembra silvestre frtil, los huevos que produce no eclosionan debido al da5o gentico en los espermas del macho con el que se apare". La falta de descendencia resulta en una disminuci"n de la poblaci"n. En los programas *<= los trminos esterilidad@ o Ainsecto estril@ generalmente no indican que los individuos no generen esperma o que el esperma no funcione para producir huevos, sino que se refiere, en un sentido ms amplio, a la transmisi"n de mutaciones letales que eliminarn la progenie. ,omo se mencion" anteriormente, la esterilidad en esta tcnica se logra mediante la radiaci"n la cual genera al a ar mutaciones letales dominantes en los gametos afectados, por lo que los huevos puestos por las hembras inseminadas de machos estriles mueren temprano en la embriognesis. *<= se ha utili adocon xito durante ms de '( a5os para el control $Bo eliminaci"n de varias plagas de importancia agrcola $ vectores de enfermedades, inclu$endo la mosca del ;editerrneo, el gusano barrenador volar $ la mosca =sets 09huc et al, .((/4. *in embargo, esto tiene un costo inevitable en trminos de la aptitud de los insectos irradiados $ los costos financieros de la construcci"n $ funcionamiento de la instalaci"n de radiaci"n. 9or lo tanto, se ha dise5ado una variante de la =cnica del <nsecto Estril 0*<=4 que ha sido utili ado con xito en la erradicaci"n de otros insectos vectores en el pasado, aunque los machos estriles son creados por transgnesis $ no por irradiaci"n. -xitec es una empresa biotecnol"gica britnica que forma parte de un consorcio de organi aciones que traba!an en un pro$ecto denominado ;osqCuide, cu$o ob!etivo es

Ddesarrollar $ validar las guas de me!ores prcticas relativas a la gama de requisitos para la implementaci"n de mosquitos genticamente modificados 0C;4 0-xitec, .(++4. La tcnica desarrollada por -xitec implica la liberaci"n de mosquitos de Aedes aegypti transgnicos machos portadores de un gen letal que al aparearse con las hembras silvestres, su descendencia no logra sobrevivir. Esta empresa cre" los mosquitos -E'+&6, mosquitos genticamente modificados portadores de un gen letal dominante 0tecnologa Fidl4 mediante la microin$ecci"n a los embriones del constructo L6'+& 0figura +4 0-xitec, .(++4.

Figura 1. Estructura del constructo L6'+&.

Fuente: 9huc, .((/.

El rasgo Fidl fue creado usando el transpos"n pigg$?ac originalmente aislado de un cultivo de clulas del gusano falso medidor, $ se ha utili ado ampliamente en ingeniera gentica de insectos. El vector pigg$?ac impide la replicaci"n independiente del cromosoma mediante la eliminaci"n de la en ima transposasa que es la en ima que permite multiplicarse $ moverse entre los cromosomas de las clulas que infecta. El mosquito macho transgnico que se liberar se le incorpora un gen marcador que produce una protena fluorescente ro!a para facilitar su identificaci"n. 9ero el gen clave que confiere el rasgo letal dominante es el t=6G, que codifica un activador de una protena que reprime la transcripci"n de tetraciclina, impulsado por el promotor tet- de un gen de Drosophila que traba!a con choque de calor. En presencia de tetraciclina, se forma un comple!o t=6GH tetraciclina $ este comple!o no se une el promotor tet-, por lo que no ha$ expresi"n del gen t=6G. 9ero en ausencia de tetraciclina, existe un circuito de retroalimentaci"n positiva en la que se produce una uni"n t=6G I tet-, conduciendo a una ma$or expresi"n del gen t=6G. La producci"n excesiva de t=6G es t"xica $ mata a los insectos. 9ero no se sabe por qu la excesiva presencia de t=6G es letal. En resumen, Fidl es un sistema letal que se reprime con la tetraciclina 09huc et al, .((/4. ,omo se mencion" anteriormente, los mosquitos -E'+&6 fueron desarrollados por la empresa llamada -xitec $ su posterior liberaci"n fue supervisada por la ;F,J 0Jnidad de <nvestigaci"n $ ,ontrol de ;osquitos4 en las islas ,aimn, un territorio britnico en ultramar. 6unque -xitec Limited fue el desarrollador que reali " la ma$ora del traba!o de base para los insectos genticamente modificados, el pro$ecto

no era #nicamente su$o. La fundaci"n de ?ill $ ;elinda Cates, la -rgani aci"n ;undial de la *alud, las Kundaciones Kilantr"picas 9EL $ algunas agencias gubernamentales en Estados Jnidos, <nglaterra, ;alasia, $ otras participaron en el desarrollo $ la promoci"n de los mosquitos modificados genticamente 09huc et al, .((/4. El macho dominante letal desarrollado por el Fidl es sexualmente ms atractivos para las hembra que los machos dominantes letales producidos por la radiaci"n 09huc et al, .((/4. 6provechando esta caracterstica, los insectos estriles son entonces liberados al medio ambiente en grandes cantidades con el fin de aparearse con los insectos nativos que estn presentes en el medio ambiente. Jna hembra silvestre que se aparee con un macho estril producir huevos, pero los huevos no eclosionan. *i ha$ una suficiente elevado n#mero de insectos estriles entonces la ma$ora de las cruces son estriles, $ al paso del tiempo el n#mero de insectos nativos disminu$e $ la proporci"n de insectos estriles aumenta, lo que conduce a la extinci"n de la poblaci"n nativa, esto mediante la tcnica de liberaci"n de insectos estriles 0*<=4. En ambas tcnicas, Fidl $ *<=, parte o la totalidad de la progenie de los e!emplares liberados mueren como consecuencia de la herencia de uno o ms genes letales dominantes, por lo que la poblaci"n tiende a declive. BIBLIOGRAFA: 9huc, %.8 6ndreasen, %.8 ?urton, F.8 Gass, ,.8 Epton, ;.8 9ape, C.8 Ku, C.8 ,ondon, M.8 *caife, *.8 :onnell$,,.8 ,oleman, 9.8 Lhite, %.8 N 6lphe$, L. .((/. LateH acting dominant lethal genetic s$stems and mosquito control. ?;, ?iolog$ ':++,+H++p. -xitec. .(++. Aedes aegypti -E'+&6. :isponible en: http:BBOOO.oxitec.comBourH productsBleadHaedesHstrainB. P+' ;a$o .(++Q. Esteva, L.8 N Rang, %. .((3. ,ontrol of :engue Gector b$ the *terile <nsect =echnique ,onsidering Logistic Fecruitment. =ema =end. ;at. 6pl. ,omput., /, No. ., .'1H.32.

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Preparation in advance of microinjection

Blood feed mosquitoes: for injection from Monday to Friday feed females on the previous Thursday. Prepare glass needles using program 3 or 2 see Materials!.

"aying tu#e for the em#ryos is $rosophila culture vial. %et cotton &ool in the #ottom' &ith a &et dis( of filter paper covering it. Prepare plastic cover slip #y stic(ing dou#le)side tape to one end. Trim tape to cover slip so that it ends at edge of cover slip. Prepare oil for desiccation see Materials! *+, ml plastic #ea(er &ith a &et cotton &ool in the #ottom' covered &ith a &et dis( of filter paper -,mm %hatman! to (eep em#ryos after injection.

Set up of forced laying

.ollect /)*, #lood fed females &ith the use of an aspirator and transfer them to the $rosophila culture vial &ith &et cotton and filter paper. Put the mosquitoes #ac( into insectory conditions in the dar(' and allo& to lay eggs for *h and *+min. "et adults fly into the cage and remove the filter paper dis( &ith em#ryos. To line up eggs' do so under dissecting scope. 0sing fine forceps 1o. + or a fine paint#rush' pic( gray to dar(ish)grey em#ryos and arrange in line on square of 3MM %hatman paper soa(ed &ith &ater. 2ll em#ryos must #e in the same orientation' as injection has to #e at the posterior pole. The anterior end of the em#ryo is slightly &ider than the posterior. $ry the filter paper &ith em#ryos #y pressing dry filter paper to it &et things &on3t stic( to tape!. To transfer the eggs' invert the slide containing the dou#le)sided tape and gently press against the eggs. The posterior end of the eggs have to #e very close to the edge of the dou#le sided tape. $esiccate the em#ryos a#out * min. at room temperature. They start to dimple slightly as they dry. .over desiccated em#ryos &ith halocar#on oil to prevent further desiccation.

Microinjection of the embryos

The most important aspect of good injection is the quality of the needle see Materials!. Fill a needle &ith the $12 solution to #e injected #y using a microloader. 4ery little injection solution is needed: * to 2 5l. .onnect the needle to the Transjector' &hich controls the injection time Manu! and pressure /,,!' and the #ac(pressure 2+,!. Microinjection is performed using a microscope &ith a moving stage "eica! at 6 *, magnification and micromanipulator. 7f necessary' a raised microscope stage may #e prepare #y stac(ing 8)+ microscope slides. Place the cover slip carrying the em#ryos onto raised stage. 7nject em#ryos hori9ontally to prevent tearing of the endochorion: penetration should #e at the posterior

pole. For injection' 7 (eep the needle stationary and move the stage of the microscope.

7nject ,.2),.+ nl of solution' corresponding to appro6imately *)+; of the em#ryo volume. .ontrol the injection volume #y adjusting the injection pressure and time. The slightly #o&ed' desiccated em#ryos should regain their turgid appearance follo&ing injection. Pic( em#ryos from the cover slip using fine forceps or a fine #rush' and place them in a plastic #ea(er &ith &et cotton and &et filter paper. .over #ea(er &ith tissue paper. <eep in place &ith elastic #and around the rim and return to insectary conditions for 8 days.

Post-injection

Four days after' carefully place em#ryo paper' em#ryo)side do&n' on the &ater in large plastic #o6 &ith a small amount of food. =m#ryos hatch over a very long period: don3t thro& out the culture until at least 8)+ &ee(s post) injection.

Notes
DNA for injection Plasmid $12 solution for injection &as isolated using =ndoFree plasmid (it. .onstruct and >elper plasmid mi6 together in right concentration' precipitated &ith i9opropanol. The pellet &as &ashed &ith ?,; ethanol #efore resuspending in injection #uffer. Before injection' clean $12 using Mille6)@4 column.

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2557089/?tool=p bme!

Kig. .. 9henot$pe of -E&3(S, crossed Oith -E&'/3 0tFEH:sFed.4 and reared in the absence of tetrac$cline. 064 Kunctional elements of -E&3(S. &( J=F sequences and pigg$?ac ends have been omitted for clarit$. 9rotein coding regions are as folloOs, from left to right: 0i4 t=6G under the control of a promoter fragment from 6e6ctS. -E&3(S, has an engineered translation initiation codon 06=C4 '( to the alternativel$ spliced intron of 6e6ctS 06e6ctS8 Kig. +4, so this intron is Oithin the t=6 open reading frame8 0ii4 G9+3 under control of tFE, and hence responsive to t=6G protein8 and 0iii4 fluorescent marTer 0:sFed.4 under control of the %r'H<E+ promoter. 0?4 late fourthHinstar female larvae. Lhite 0,4 and fluorescent 0:4 light micrographs of male and female pupae from -E&3(S, alone 0=op4 and -E&3(S, U tFEH:sFed 0?ottom4. ;ale and female adults 0-E&3(S, U tFEH:sFed4 under Ohite 0E4 and fluorescent light 0K4. *trong red fluorescence is visible in the <K;s of females, but not of males. *ome bacTground red fluorescence is visible from the transformation marTers, especiall$ the punctate overall fluorescence in ?, the developing <K;s are the bright pair of spots in each thorax 0for one larva these are indicated b$ Ohite arroOs4.

http:BBOOO.!ove.comBdetails.phpVidW.+1 El ciclo de vida del mosquito 6e. aeg$pti comprende huevo, cuatro estadios larvales, uno de pupa $ adulto.

http:BBOOO.ncbi.nlm.nih.govBpubmedB2(32&S1 http:BBOOO.ncbi.nlm.nih.govBpubmedB+21/1(+/ http:BBOOO.ncbi.nlm.nih.govBpmcBarticlesB9;,.''/(21BVtoolWpubmed