La Bacteriologa es una disciplina de la Microbiologa, que ha estado presente a lo largo de la historia de la humanidad.

Las bacterias son responsables de millones de muertes de personas a nivel mundial. Entre algunas enfermedades infecciosas bacterianas, causantes de grandes epidemias que han mermado la poblacin, se encuentran: La difteria, clera, tuberculosis, sfilis, ttanos, tos ferina, y fiebre tifoidea. Sin embargo, tambin existen infecciones bacterianas que aunque estn asociadas en menor frecuencia como causa de muerte, son un problema de salud pblica en pases en vas de desarrollo como el nuestro, entre las que podemos mencionar: diarreas (causadas por Shigella o Escherichia coli), infecciones de vas urinarias, faringoamigdalitis, gonorrea y brucelosis. MORFOLOGA BACTERIANA Las bacterias que tienen forma esfrica u ovoide se denominan cocos. Y si se tien de azul con el Gram, se les llama grampositivos. Cuando los cocos se agrupan en cadenas, se les denomina estreptococos y cuando lo hacen en racimos, se les llama estafilococos; tambin se pueden agrupar en pares que reciben el nombre de diplococos. Las bacterias en forma de bastn reciben el nombre de bacilos. Si al teirlos con el Gram quedan de color rojo, se les denomina gramnegativos. Los bacilos curvados que presentan espirales se llaman espirilos, rgidos; algunas bacterias en espiral presentan formas fcilmente reconocibles, como las espiroquetas, semejantes a un tornillo o sacacorchos, flexibles. Pared celular: Con la tincin de Gram, una proporcin importante de bacterias puede dividirse en dos grandes grupos: grampositivas (se observan de color azul - debido al colorante cristal violeta) y gramnegativas (pierden el cristal violeta y conservan la safranina - se aprecian de color rojo o rosado). La tcnica se basa en las diferencias fsicas fundamentales de la pared celular y emplea colorantes catinicos (cristal violeta y safranina), que se combinan con elementos cargados negativamente. INTRODUCCIN A LA COLORACIN DE ZIELH-NEELSEN Las paredes celulares de ciertos parsitos y bacterias contienen cidos grasos(cidos miclicos) de cadena larga. Este grueso material creo, los provee de una cubierta impermeable de cristal violeta y otros colorantes bsicos. Una vez teidos, poseen la propiedad de resistir la decoloracin con solventes orgnicos fuertes, como el alcohol cido, llamados por ello Microorganismos Acido Alcohol Resistetes.

FUNDAMENTO DE VITEK

VITEK
es un sistema que utiliza tarjetas con reactivos colorimtricos, las que son inoculadas con la suspensin de un cultivo puro microbiano y el perfil de

desarrollo es interpretado de forma automtica. Existen 4 tipos de tarjetas reactivas disponibles para la identificacin de diferentes clases de organismos: 1.GN -Bacilos Gram negativos fermentadores y no fermentadores 2.GP -Cocos y bacilos no formadores de esporas Gram positivos 3.YST Levaduras y organismos levaduriformes 4.BCL Bacilos formadores de esporas Gram positivos

MEDIOS UTILIZADOS MS COMNMENTE EN BACTERIOLOGA

MacConkey II Agar: es un medio de diferenciacin selectivo para el aislamiento y la diferenciacin de Enterobacterias y diversos otros bacilos gram negativos a partir de muestras clnicas. BD BiGGY Agar: (agar BiGGY BD) es un medio de diferenciacin parcialmente selectivo para el aislamiento y la diferenciacin de las especies de Candida a partir de muestras clnicas. Sangre Agar Base: Medio para propsitos generales, para el aislamiento y cultivo de numerosos microorganismos. Con la adicin de sangre, el medio es til tanto para el aislamiento y cultivo de microorganismos aerobios y anaerobios nutricionalmente exigentes a partir de una gran variedad de muestras, como para la observacin de reacciones de hemlisis. Agar Chocolate: Este medio permite el crecimiento de microorganismos exigentes en sus requerimientos nutricionales, por ejemplo especies de Streptococcus, Haemophilus y Neisserias patgenas. BD Salmonella Shigella Agar: (agar SS) es un medio selectivo y de diferenciacin para el aislamiento de bacilos entricos patgenos, en especial los pertenecientes al gnero Salmonella, a partir de muestras clnicas BD Mannitol Salt Agar: se utiliza para el aislamiento selectivo de estafilococos y para la deteccin de Staphylococcus aureus a partir de muestras clnicas. CHROMagar :Candida es un medio selectivo para el aislamiento e identificacin presuntiva de levaduras y mohos filamentosos y diferenciacin de Candida albicans, Candida tropicalis y Candida

krusei. Debido a las diferencias en morfologa y color de las colonias de levaduras, este medio facilita la deteccin de mezclas de cepas de levaduras en la muestra analizada. Tambin puede ser usado como un medio selectivo para el aislamiento de otras levaduras o mohos filamentosos en lugar de Agar Sabouraud Dextrosa. PRUEBAS BACTERIOLGICAS Prueba de Catalasa: La catalasa es una enzima que poseen la mayora de las bacterias aerobias. Descompone el perxido de hidrgeno en agua y oxgeno. El desprendimiento de burbujas procedentes del oxgeno indica que la prueba es positiva. MTODO: 1.Colocar una gota de agua oxigenada sobre un portaobjetos con ayuda de una pipeta Pasteur. 2. Suspender la bacteria. 3. Detectar la formacin de burbujas. PRUEBA DE OXIDASA: es una prueba usada en microbiologa para determinar si una bacteria produce alguna de las citocromo c oxidasas.1 La prueba hace uso de discos impregnados con el reactivo N,n,n,ntetrametil-p-fenilendiamina (o TMFD) o N,N-Dimetil-p-fenilendiamina (o DMFD), el cual tambin es un indicador redox. El reactivo pasa de azul oscuro a granate al ser oxidado, y se vuelve transparente al ser reducido. Las bacterias oxidasa positiva poseen citocromo oxidasa o indofenol oxidasa (una hemoprotena).2 Ambas catalizan el transporte de electrones de compuestos donantes (NADH) a receptores de electrones (por lo general el oxgeno) MTODO: 1.Se escoge un campo bateriano de acuerdo a su morfologa 2.Con el asa bacteriolgica se transfiere una gran masa de bacteria pura al disco 3.Se observa el disco por tres minutos, en ese tiempo el rea de inoculacin debe pasar entre azul oscuro y granate o incluso negro, entonces los resultados son positivos. Si no hay cambio en esos tres minutos, la prueba es negativa. PRUEBA DE OPTOQUINA: Discos embebidos en clorhidrato de etilhidrocuprena (optoquina) til para diferenciar Streptococcus pneumoniae (sensible) de Streptococcus viridans (resistente). Fundamento Las colonias de Streptococcus pneumoniae son inhibidas por 5 g de optoquina contenida en un

disco de papel de filtro aplicado sobre la superficie de una placa de agar sangre. Las colonias de S. pneumoniae son mucoides o crateriformes. Colocar un disco de optoquina sobre el inculo. Incubar toda la noche en CO2 5-10% a 35C. Examinar la placa para observar cualquier zona de inhibicin alrededor del disco de optoquina. Medir el dimetro de la zona de inhibicin incluyendo el dimetro del disco. MTODO: 1. Colonia pura 2. 2.Medio: Sangre 3. 3. Sensidisco de optoquina INOCULACION DIRECTA: Tomar con asa, la colonia nica, Estriar toda la placa de agar sangre con el asa en las 4 direcciones, tomar el disco de optuquina con las pinzas esterilizadas y colocarlo en la parte dentral del medio. Dejar incubar. PRUEBA DE LA COAGULASA: Cerebro Corazn Infusin. Medio lquido adecuado para el enriquecimiento y cultivo de bacterias aerobias y anaerobias, de microorganismos exigentes como estreptococos, neumococos y otros microorganismos de difcil desarrollo. Con el agregado de 20 Ul de Penicilina y 100 g/ml de amicacina, se utiliza este medio para el cultivo de hongos patgenos.

Fundamento
Es un medio muy rico en nutrientes, que proporciona un adecuado desarrollo microbiano. La infusin de cerebro de ternera, la infusin de corazn vacuno y la peptona, son la fuente de carbono, nitrgeno, y vitaminas. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico y el fosfato disdico otorga capacidad buffer. Los nutrientes de este caldo son muy apropiados para los hemocultivos, ya que en esta infusin desarrollan todas las especies de estreptococos excepto los tiol y piridoxal dependientes. Los estafilococos que crecen en esta infusin suelen dar mejores reacciones en la prueba de la coagulasa. Con el agregado de 20 Ul de Penicilina y 100 g/ml de amicacina, se inhibe la flora bacteriana cuando se utiliza este medio para el cultivo de hongos patgenos. MTODO: Un tubo lleno de infusin cerebro corazn se le agregar plasma Llenar varios tubos con aprox 3 mililitros del liquido Tomar con el asa, el campo elegido, segn la muestra, recordar rotular tubos con los nmeros de las cajas, esterilizar asa y tomar colonia, pasarlo al tubo y revolver hasta observar que el contenido est en el tubo.

Incubar y observar al otro da si form un cogulo, esta es +, sino, es

BACTERIOLOGA: Toma de muestras. En el rea de bacteriologa se tuvo que tomar muestras diversas de muestras para cultivo bacteriolgico como es : Exudado farngeo, Para el diagnstico de faringitis estreptococcica, se utiliza como siempre, un rea estril, un abate lenguas estril y un medio de transporte, la tcnica consiste en tocar con el hisopo en todas partes con exudado, membranas o inflamacin, frotando criptas tonsilares y la faringe posterior sin tocar mucosa oral, lengua y dientes. Medios en el que son sembrados: medios de enriquecimiento como sangre o chocolate, el medio selectivo MConkey, Sal y manitol y Agar Biggy EXUDADO NASAL Esta muestra solo se utiliza para buscar portadores de S.aureus o en el diagnstico etiolgico de imptigo. No es til para el diagnstico etiolgico en casos de rinitis, rinosinusitis ni en casos de otitis media ni cuadros respiratorios altos prolongados Recordamos que alrededor del 30% de la poblacin es portadora de este microorganismo a nivel nasofarngeo por lo cual su hallazgo no tiene habitualmente significancia clnica salvo en situaciones especiales. En el personal de salud slo se realizar la bsqueda de portadores en el caso de brotes de infecciones en los que no se ha encontrado otra fuente de infeccin. Este tipo de investigacin se realizar en coordinacin con el Comit de Infecciones Hospitalarias, quien determinar la oportunidad de su realizacin. A. MATERIAL NECESARIO. - Hisopo de algodn con medio de transporte, portaobjetos con datos B. TCNICA. Tomar muestra profunda de ambas fosas nasales con el mismo hisopo, sembrar en los portas (para citologa Nasal)y dejarlo en su medio de transporte. MEDIOS UTILIZADOS: Agar Sal y Manitol, Agar Chocolate, Agar Sangre(anaerobiosis), Agar Biggy y Agar McConkey ( estra cruzada: Capaces de aislar lo mas posible a una bacteria en particular) MUESTRAS DE ODO Solo se utiliza para conocer la etiologa en caso de otitis externa. Suele tratarse de muestras de mala calidad y en ningn caso resultan representativas de los microorganismos existentes en el odo medio.

MATERIAL NECESARIO.

- Hisopos de algodn con medio de transporte B. TCNICA. Primero limpiar posibles restos de pus o secreciones del conducto auditivo externo con hisopo humedecido Y descartar. Luego tomar muestra del odo indicado o de ambos por separado frotando con nuevo hisopo contra las paredes. MEDIOS UTILIZADOS: Agar Sal y Manitol, Agar Chocolate, Agar Sangre(anaerobiosis), Agar Biggy y Agar McConkey ( estra cruzada: Capaces de aislar lo mas posible a una bacteria en particular)

MUESTRAS OCULARES Por vecindad estas muestras se estudian con las del tracto respiratorio superior.

EXUDADO CONJUNTIVAL Este tipo de muestras sirve para el diagnstico de conjuntivitis de causa bacteriana. Estas son amenudo unilaterales. De todas maneras se solicita que se haga la toma de muestra de ambos sacosconjuntivales por separado, de manera de poder valorar la flora normal. Siempre que sea posible serealizar la toma de muestra en el Laboratorio de Microbiologa. A. MATERIAL NECESARIO. - Hisopos con medio de transporte TECNICA. - Debe obtenerse la muestra antes de la instilacin de los analgsicos locales, colirios o antibiticos.- Con un hisopo mojado en suero fisiolgico frotar sobre la conjuntiva tarsal inferior y el frnix deafuera hacia adentro.- Para la investigacin de Chlamydia trachomatis , everter el prpado y frotar con una torunda lasuperficie conjuntival con hisopo provisto por el laboratorio para investigacin de Chlamydias. MEDIOS UTILIZADOS: Agar Sal y Manitol, Agar Chocolate (anaerobiosis), Agar Sangre, Agar Biggy y Agar McConkey ( estra cruzada: Capaces de aislar lo mas posible a una bacteria en particular)

EXUDADO VAGINAL La mayora de las situaciones clnicas que pueden ser objeto de estudios

microbiolgicos para el aislamiento visualizacin del agente etiolgico son: 1. Vulvovaginitis: cuyos agentes etiolgicos ms frecuentes son Candidaspp (principalmente C.albicans), Trichomonas vaginalisy virus herpes simple. En nias pequeas y en algunos casos de mujeres adultas tambin pueden ser causantes de vaginitis patgenos respiratorios como Haemophilus sp, Streptococcus pneumoniae o Streptococcus pyogenes. Asimismo la presencia de un cultivo puro de otros microorganismos observados en una tincin de Gram con leucocitos puede tener significacin. 2. Vaginosis: estado caracterizado, desde el punto de vista microbiolgico, por la ausencia o franca disminucin de Lactobacillus spp y abundante flora mixta compuesta por Gardnerella vaginalis, anaerobios (Mobiluncus, Bacteroides, Cocos anaerobios...) y Mycoplasma hominis. 3. Deteccin de portadoras de Streptococcus agalactiae (SGB). 4. Infeccin gonoccica: La endocervicitis gonoccica aunque cursa con leucorrea, el exudado vaginal no es la muestra adecuada para su diagnstico siendo recomendable la obtencin de un exudado endocervical. TIPOS DE ESTUDIOS MICROBIOLGICOS -Cultivo bacteriano. -Cultivo de levaduras. -Cultivo de tricomonas. -Despistaje de Streptococcus agalactiae. -.Cultivo de virus herpes simple BACILOSCOPIA TCNICA Reactivos: Fucsina Fenicada ( colorante bsico) Alcohol cido Azul de Metileno PREPARACIN DE EXTENDIDOS Debe tener portaobjetos nuevos y rotulados con lpiz punta de diamante, entrar al rea estril y prender mechero,y extractor, la persona debe tener su marcara de miosh, rotulados y puestos en orden, tomarlos y abrir frasco con esputo, tomar aplicador, partirlo x la mitad y picar 3 veces sobre flema, extender excntricamente y de manera ovalada. Repetir pasos hasta completar extendidos (2 por muestra). Esperar a que sequen x si solos Ya secos, tomar el mejor extendido, poner puente de tincin y sellarlos con el mechero( el mejor de cada muestra) y ponerlos en el puente, tomar torundas con alcohol, tomar pinzas, agregar a los

extendidos fucsina fenicada, tomar la torunda con las pinzas y prenderla con el mechero, humear x debajo del puente x 1 minuto y apagar, en siguiente minuto no flamear, el siguiente si, el otro no, el siguiente si y el otro no. Despus de ello, enjuagarlos con agua y agregarles alcohol cido por un minuto, si se nota que tiene mucho colorante, agregar mas por otro minuto. Pasado el minuto, enjuagar y agregar azul de metileno 1 minuto, enjuagar y dejarlos secar en su respectiva gradilla. MEDIOS UTILIZADOS: Agar Sal y Manitol, Agar Chocolate (anaerobiosis), Agar Sangre, Agar Biggy y Agar McConkey ( estra cruzada: Capaces de aislar lo mas posible a una bacteria en particular)

HEMOCULTIVOS Un hemocultivo es un cultivo microbiolgico de la sangre. Es un mtodo diagnstico en medicina empleado para detectar infecciones que se trasmiten a travs de torrente sanguneo (Bacteriemia). Mtodo Por lo menos se toman 10 ml de sangre a travs de venopuncin y se conserva en mnimo dos frascos que contienen un medio de cultivo especfico para organismos aerobios y anaerobios. Se necesita que los frascos no estn contaminados con bacterias de los pacientes o de la misma gente que realizara el examen. Con ese fin, a la piel del paciente se le aplica alcohol etlico desnaturado y antisptico en el punto donde se obtendr la muestra. Adems de eso, se usan guantes esterilizados para minimizar cualquier contaminacin. Si se incrementa a cantidad de cultivos, la probabilidad de descubrir un organismo patgeno en la sangre incrementa y reduce la probabilidad de tener un cultivo positivo debido a contaminantes provenientes de la piel.

BHC
El analizador hematolgico automatizado Sysmex XT-1800i utiliza el poder de las tecnologas de citometra de flujo fluorescente y tecnologas de enfoque hidrodinmico. Utilizando un exclusivo lser con tecnologa de vanguardia, la citometra de flujo fluorescente de Sysmex proporciona la sensibilidad necesaria para medir y diferenciar tipos celulares en muestras de sangre total y de fluidos corporales. La tecnologa de fluorescencia y enfoque hidrodinmico, permite al analizador XT-1800i diferenciar consistentemente poblaciones normales de leucocitos, eritrocitos y plaquetas de las anormales disminuyendo as el nmero de intervenciones manuales. La tecnologa del XT-1800i proporciona parmetros reportables clnicamente relevantes.

Estndar Conteos reportables de leucocitos y eritrocitos para todos los tipos de muestras de fluidos corporales comunes (lquido cefalorraqudeo, sinovial y serosos) Opcional El conteo de granulictos inmaduros (IG% y #) ofrece resultados reportables y cuantitativos de metamielocitos, mielocitos y promielocitos Reduce las tasas de falsos positivos y falsos negativos Obtenga resultados consistentes reduciendo las variaciones entre tecnlogos al reportar diferenciales manuales VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN GLOBULAR (VSG) La VSG es la precipitacin de los eritrocitos (glbulos rojos) en un tiempo determinado, que se relaciona directamente con la tendencia de los glbulos rojos hacia la formacin de acmulos as como a la concentracin plasmtica de protenas(globulinas y fibringeno).La capacidad y la velocidad de formar estos acmulos dependen de la atraccin de la superficie de los glbulos rojos.Si las protenas del grupo de las globulinas est elevado con respecto a la albmina lavelocidad se eleva. Tambin una alta proporcin de fibringeno puede provocar esta elevacin.El valor de la tcnica no es muy sensible y adems poco especfica, por s sola tiene poco valor y se debe asociar a otros estudios para poder orientar un diagnstico. MTODO Cargar una pipeta de Wintrobe y en el momento de llegar a la marca 0, poner en marcha el cronmetro. Asegurarse que la pipeta sta en una posicin de 90 respecto la superficie, exenta de vibraciones o cualquier factor que modifique la VSG.c. Transcurridos 60 y 120 minutos exactos, leer la sedimentacin eritrocitaria, que se expresa en mm/hora y comparar los resultados obtenidos con los resultados normales.i. Hombres: 1- 13mm/h. Mujeres: 1- 20 mm/h TOMA DE MUESTRAS SANGUNEAS ATENCIN DEL PACIENTE: Todas las muestras deben ir acompaadas de una solicitud debidamente formulada. La solicitud debe contener la siguiente informacin: a)La identificacin completa del paciente: Nombre completo Sexo Nmero de cdula o seguro social

Datos para su localizacin Sala y nmero de cama si est hospitalizado Nmero de telfono si es ambulatorio b)Mdico solicitante: Nombre completo Especialidad Registro c)Pruebas que se realizarnEs deseable que la solicitud incluya informacin clnica de utilidad Diagnstico Ingestin de drogas Restricciones especiales LA PREPARACIN DEL PACIENTE: La primera impresin y las observaciones inmediatas pueden ser tiles para el flebotomista. Ayudarn a establecer el tipo de paciente, el sitio de la puncin, las precauciones necesarias y la forma correcta para el trato del paciente. El paciente espera de usted un trato profesional, corts y de comprensin, ya que l est frente a usted porque le aqueja su salud. La comunicacin afectiva es determinante en la relacin con el paciente.Hable con el paciente. Explique el procedimiento a seguir PREPARACIN DEL EQUIPO

Tubos de coleccin:
Los tubos estn predeterminados para llenarse con un determinado volumen de sangre por vaco. El tapn de caucho est codificado por color, de acuerdo a su uso o sus aditivos. TUBO CON TAPN ROJO USO:Qumica, Inmunologa, Banco de sangre ADITIVO:Ninguno TUBO CON TAPN ROJO USO: Qumica ADITIVO:Gel

-Separador TUBO CON TAPON MORADO USO: Hematologa ADITIVO: Anticoagulante EDTA TUBO CON TAPN CELESTE USO: Pruebas de Coagulacin ADITIVO: Anticoagulante Citrato de sodio

Agujas: Estn Enumeradas dependiendo de su calibre. Para coleccin de sangre para hemogramas, se recomienda una aguja de un dimetro de 0.8 mm (21G) para evitar dao a las clulas. Las agujas de 0.9 mm a 1.1 mm de dimetro (20G 19G) se utilizan normalmente para puncin venosa en adultos. Jeringuillas: De 3, 5, 10 y 20 cc Adaptador para tubos Vacutainer: Se utilizan para tubos al vaco. Torniquete: Recomendable de 2 tamaos para adultos y nios. Alcohol: Etlico o Isoproplico al 70%. Algodn Gasa Guantes Curita o venda adhesiva
EL PROCEDIMIENTO DE LA FLEBOTOMIA

La muestra debe tomarse correctamente y bajo las condiciones ms favorables para evitar errores. Esto incluye la absoluta identificacin del paciente, el sitio a puncionar y el v olumen a colectar. El paciente debe estar en posicin cmoda, de preferencia en una silla especial para venopuncin con descanso para los brazos y si est en cama, preferiblemente acostado.

SELECCIN DEL SITIO A PUNCIONAR:

Al proceder a seleccionar el sitio a puncionar, evite reas con hematoma, fstulas, quemaduras, escoriaciones de la piel o cicatrices. Si se trata de un paciente hospitalizado evite tomar muestra de un brazo que se est utilizando con venoclisis o del costado en que se ha realizado una mastectoma reciente.
LA PALPACIN:

Antes de proceder a puncionar, se debe escoger la vena. La mejor manera es realizando una palpacin de las mismas para esa decisin. Para ello coloque el torniquete 3 a 4 pulgadas por arriba del sitio seleccionado, para visualizarlas mejor. Debe tener presente en no mantener el torniquete por ms de 3 minutos, para evitar la hemoconcentracin.
LA DESCONTAMINACIN:

Una vez que se ha decidido por la vena a puncionar, debe proceder a descontaminar el rea con alcohol etlico o isoproplico al 70% utilizando algodn y con movimientos circulares del interior al exterior. Debe tener presente que una vez realizada la descontaminacin, no debe volver a tocar el rea venosa. EXTRACCIN CON VACUTAINER Una vez hecha la puncin, sostenga firmemente el vacutainer con una mano y con la otra inserte, llene y retire cuantos tubos requiera. RESULTADO: COMO RESULTADO TENEMOS MAYOR HABILIDAD RESPECTO A ESTAS DOS REAS QUE SON BACTERIOLOGA Y BIOMETRA HEMTICA, EL APRENDIZAJE DE NUEVOS METODOS PARA DETECTAR DIVERSAS BACTERIAS Y LA HABILIDAD PARA LA EXTRACCIN DE SANGRE. CONCLUSIONES:LA CONSTANTE REPETICION DE ESTAS DOS REAS HACEN CONCLUIR QUE ES POR ELLO LA HABILIDAD, QUE HACIENDO BIEN CADA UNO DE LOS TRABAJOS, LOS RESULTADOS SERAN LOS DESEADOS, QUE LA EXPLICACIN PROPIA DE LA GENTE QUE EST A CARGO AYUDA SOBRESALIENTEMENTE A LA CAPACIDAD.