PRCTICA 1: DESARROLLO DE MARCADORES DEL cpDNA INTRODUCCIN: El desarrollo de marcadores moleculares para estudiar la evolucin de especies, asi como

de filogenia entre ellas es una tcnica muy importante y fiable que es usada por los genetistas de hoy en da en sus estudios de investigacin. Estos marcadores se estudian sobre material gentico que de una manera aproximada no se encuentre sujeto a evolucin, a saber, el DNA cloroplstico y el DNA mitocondrial. El cpDNA muestra una gran conservacin en tamao y estructura, mientra que el mtDNA el tamao vara considerablemente adems de la disposicin relativa de genes. Por esta razn, el uso del ADN cloroplstico es el ms adecuado ya que no presenta cambios muy evidentes y son estructuras que se mantienen en el tiempo. Esta baja tasa de cambio que presenta este tipo de ADN nos permite desarrollar unos cebadores que son tiles para todas las especies, es decir, son universales. Analizando el tamao de fragmento que queda despus de usar dos cebadores universales debera ser til para diferenciar dos especies entre s. Por esta razn, en esta prctica vamos a utilizar dos cebadores para utilizar una secuencia que nos permita, diferenciar por tamao, distintas especies entre s. Para ello cogemos ADN de hojas de diferentes especies, hacemos una extraccin y realizamos una pcr con los dos cebadores. Despus corremos un gel para ver los resultados: RESULTADOS: PONER RESULTADO (FOTOCOPIA DE LOS CLOROPLSTICO)

Se observan bandas discretas de DNA? Si, en la mayora de las plantas podemos observar una banda ms o menos marcada, que nos indica el fragmento de DNA que queda comprendido entre los genes tmD y tmT. Cul es su tamao?

Arabidopsis thaliana Tabaco Mora Ajo Amapola Vid Tomate Patata

Kb 1,5 1 0,9 0,8 >1 < 0,5 0,8 0,8

Son diferentes para cada especie? Como podemos observar por el tamao hay algunos que se diferencian muchos entre ellos, es el caso de Arabidopsis thaliana y la vid. El resto, por el contrario, presenta un tamao similar, lo que nos quiere decir que estn muy emparentados evolutivamente hablando. Describe el marcador molecular que has obtenido Hemos usado como marcador molecular un fragmento de DNA cloroplstico. Desde mi opinin, yo digo que no nos ha sido un buen marcador de diferenciacin de especies, ya que obtenemos casi el mismo tamao de fragmento para muchas especies. En este caso, sabemos que cada una de los problemas es una especie distinta, sin embargo, si tenemos muestras sin identificar es un marcador poco fiable.

Si no observas amplificacin, cul puede ser la causa? Pueden haber ocurrido dos cosas: Una de ellas es que la metodologa no ha sido seguida al 100 % y por eso hemos arrastrado problemas durante el desarrollo, que se han reflejado en los resultados finales. Otro problema, ms cientfico, es que la planta no contenga, al menos, uno de las dos secuencias que sirven para que los cebadores se unan. Esto interfiere en la amplificacin, llevndonos a unos resultados errneos.