COOMBS DIRECTO E INDIRECTO

Se fundamenta en la separacin, a travs de un matriz de microsferas, de eritrocitos aglutinados y de eritrocitos libres. Las reacciones se basan en la deteccin de hemates sensibilizados con Ig y/o fracciones del Complemento mediante un reactivo de antiglobulina humana polivalente. COOMBS DIRECTO: Dilumos 1 ml de suero de coombs (suero de conejo con antiglobulina humana, anti Rh) con 10 UI de sangre del paciente (tubo de hematimetra). Identificar dos pocillos de una tarjeta de coombs con los datos del paciente. Dispersar en los pocillos 50 UI de la dilucin. Centrifugar durante 10 min. Interpretar: Si el tapn de hemates se encuentra en el fondo del pocillo, significa que no ha aglutinado, por lo que el Coombs es negativo. Si aglutina (Coombs Directo positivo), el paciente presenta una anemia hemoltica, genera sus propios Ac. COOMBS INDIRECTO: Nos sirve para identificar si el suero de mujeres con Rh negativo, poseen Ac capaces de fijarse a los eritrocitos del feto, si la embarazada est sensibilizada. Identificar con los datos del paciente una tarjeta de Coombs y una salina. Aadimos en cada pocillo una gota de reactivo de hemates 1 y una gota de hemates 2+ 50 UI de suero o plasma. Incubar la tarjeta de Coombs a 37C durante 15 min. La tarjeta salina se debe incubar a T ambiente durante 15 min. Interpretar: Hemates control + suero paciente = Hemates sensibilizados. Hemates sensibilizados + suero coombs = Aglutinacin.

PRUEBA DE COOMBS
Sinonimia: prueba de antiglobulina, PAG. Mtodo: suero antiglobulina Muestra: prueba de Coombs directa: sangre prueba de Coombs indirecta: suero Valores de referencia: negativo Significado clnico: La prueba de antiglobulinas (PAG) se basa en el principio de que los anticuerpos antiglobulina humana inducen la aglutinacin de los eritrocitos revestidos con globulina. Cuando la PAG se utiliza para detectar anticuerpos fijados en eritrocitos in vivo, se llama prueba directa de antiglobulinas o de Coombs (PCD). Cuando la PAG se emplea para detectar anticuerpos en el suero por sensibilizacin de los eritrocitos in vitro, se conoce como prueba indirecta de antiglobulinas o de Coombs (PCI). Los sueros antiglobulinas que se obtienen de conejos inmunizados pueden ser de amplio espectro (con anticuerpos contra inmunoglobulinas humanas y componentes del complemento) o pueden ser monoespecficos (anti IgG, anti-IgM, anti-IgA, anti- C3+C4, anti C3b, anti-C3d, anti-C4b y anti C4d). Aunque la PAG de una prueba muy sensible, una prueba negativa no excluye la presencia de anticuerpos en los eritrocitos (se calculan en 100 a 500 molculas de IgG fijadas a los eritrocitos para que sean detectadas). Prueba directa falsa positiva: algunas drogas incluyendo penicilinas pueden causar PDC positiva: -metildopa, levodopa, quinidina, mefenmico, sulfonamidas, tetraciclinas. Los anticuerpos contra predominantemente Observacin no son estrictamente falsos positivos ya que estas drogas anemias hemolticas autoinmunes. y cefalosporinas insulina, cido metildopa son IgG. pueden provocar

entera

anticoagulada

con

EDTA

Na2

Causas de falsos positivos en PCD: 1- material mal lavado. 2-restos de detergentes. 3-muestra conservada en la heladera y no procesada de inmediato (hay activacin del complemento. 4-exceso de refrigeracin. 5- lavado inadecuado de los hemates de sangre de cordn (gelatina de Wharton). Causas de falsos positivo en PCI dem 1,2,4, 5-Solucin fisiolgica inapropiada, pH, resina de intercambio etc.
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6-restos de componente monoclonal por lavado insuficiente. Prueba indirecta falsa positiva: la metildopa provoca aproximadamente el 25% de PIC positivas en pacientes hospitalizados. La levodopa y el cido mefenmico tambin causan reaccin positiva. Utilidad clnica: La prueba indirecta de Coombs se utiliza en los siguientes casos: Screening de anticuerpos desconocidos en el suero usando hemates conocidos. Se utiliza principalmente para el screening de anticuerpos pre-transfusionales y en el primer trimestre de embarazo. Evaluacin de anemias hemolticas. Esta prueba se usa en paneles, en titulaciones y en cross-matches. Evaluacin de antgenos: Muchos antgenos eritrocitarios se detectan con esta prueba: Fy, K, k, S, s, como tambin antgenos poco frecuentes como: Lua, Coa, Kpb o variantes dbiles de antigenos : Du, DVI, Cw. La prueba directa de Coombs se utiliza en los siguientes casos: Diagnstico de hemlisis autoinmune. Diagnstico de enfermedad hemoltica del recin nacido. Diagnstico de hemlisis inducida por drogas. Evaluacin de reaccin hemoltica aguda y retardada. Variables por enfermedad: Prueba positiva: PIC: brucelosis, malaria, algunos pacientes con linfoma de Hodgkin, 20% de pacientes con leucemia linfoctica crnica, 33% de pacientes con leucemia mieloctica crnica, prpura trombocitopnica idioptica con anemia hemoltica, convalecencia de infeccin por Mycoplasma pneumoniae, lupus eritematoso sistmico, eritroblastosis fetal (debido a anticuerpos Rh, Kel, Kidd, Duffy). PDC: lupus eritematoso sistmico. Prueba negativa: PIC: mieloma mltiple, eritroleucemia, abetalipoproteinemia, macroglobulinemia de Waldenstrm, esferocitosis hereditaria, eliptocitosis hereditaria, hemoglobinuria paroxstica nocturna, poliarteritis nodosa, enfermedad hemoltica del recin nacido debida a incompatibilidad ABO. Nota: tener en cuenta que de acuerdo a la concentracin del componente monoclonal puede haber falsos positivos Variables por drogas: Prueba positiva: PIC: asparaginasa, carbromal, metildopa, rifampicina. PDC: cido aminosalcilico, ampicilina, ciclofosfamida, insecticidas, isoniazida, cido mefenmico, meticilina, metildopa, penicilina G, quinina.

PRUEBA DE COOMBS DIRECTA E INDIRECTA

Prueba de Coombs se refiere a dos anlisis de sangre clnicos utilizados en inmunohematologa e inmunologa. Las dos pruebas de Coombs son la prueba de Coombs directa y la prueba de Coombs indirecta. La prueba de Coombs directa se utiliza para poner a prueba para la anemia hemoltica autoinmune, es decir, una condicin de un recuento bajo de glbulos rojos causado por lisis sistema inmune o ruptura de las membranas de glbulos rojos que causan destruccin de glbulos rojos. En ciertas enfermedades o condiciones de la sangre de un individuo puede contener anticuerpos IgG que pueden unirse especficamente a los antgenos en la membrana de la superficie de glbulos rojos, y sus glbulos rojos circulantes puedan cubrirse de aloanticuerpos IgG y/o autoanticuerpos IgG. Las protenas del complemento pueden posteriormente unirse a los anticuerpos unid os y causar la destruccin de glbulos rojos. La prueba de Coombs directa se utiliza para detectar estos anticuerpos o protenas del complemento que estn enlazados a la superficie de las clulas rojas de la sangre, una muestra de sangre se toma y los glbulos rojos se lavan y despus se incub con antiglobulina humana. Si esto produce la aglutinacin de los glbulos rojos, la prueba de Coombs directa es positiva, una indicacin visual de que los anticuerpos se unen a la superficie de las clulas rojas de la sangre. La prueba de Coombs indirecta se utiliza en la prueba prenatal de las mujeres embarazadas y en las pruebas de sangre antes de una transfusin de sangre. Se detecta anticuerpos contra los glbulos rojos que son no unido presente en el suero del paciente. En este caso, el suero se extrae de la muestra de sangre tomada del paciente. Entonces, el suero se incuba con los glbulos rojos de antigenicidad conocida, es decir, los glbulos rojos con valores de referencia conocidos de otras muestras de sangre de pacientes. Si se produce la aglutinacin, la prueba de Coombs indirecta es positiva. Mecanismo Las dos pruebas de Coombs se basan en el hecho de que los anticuerpos anti humanos, que se producen mediante la inmunizacin de las especies no humanas con suero humano, se unirn a los anticuerpos humanos, comnmente IgG o IgM. Anticuerpos anti-humanos en animales tambin se unirn a los anticuerpos humanos que pueden ser fijados a antgenos en la superficie de las clulas rojas de la sangre, y en las condiciones de tubos de ensayo apropiados esto puede conducir a la aglutinacin de los glbulos rojos. El fenmeno de la aglutinacin de los glbulos rojos es importante aqu, debido a la aglutinacin de los glbulos rojos resultante puede ser visualizado; formacin de grumos cuando se ve la prueba es positiva y cuando la aglutinacin no se ve la prueba es negativa.
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Aplicaciones clnicas ms comunes de la prueba de Coombs incluyen la preparacin de la sangre para transfusin en pruebas cruzadas, la deteccin d e anticuerpos atpicos en el plasma de la sangre de las mujeres embarazadas como parte de la atencin prenatal y la deteccin de anticuerpos para el diagnstico de las anemias hemolticas autoinmunes. Prueba de Coombs se realizan en el suero de muestras d e sangre venosa, que se han tomado de los pacientes por venopuncin. La sangre venosa se lleva a un laboratorio, donde el personal tcnico cientfico capacitado hacer las pruebas de Coombs. La importancia clnica de los resultados es evaluado por el mdico que solicit la prueba de Coombs, tal vez con la ayuda de un hematlogo en laboratorio. Prueba de Coombs directo La prueba de Coombs directa se utiliza para detectar si los anticuerpos o factores del sistema del complemento se han unido a los antgenos d e superficie de glbulos rojos in vivo. El DAT no se requiere actualmente para las pruebas de pre-transfusin pero puede ser incluido por algunos laboratorios. EJEMPLOS DE ENFERMEDADES QUE DAN UNA PRUEBA DE COOMBS DIRECTA POSITIVA La prueba de Coombs directa se utiliza clnicamente cuando se sospecha anemia hemoltica inmune mediada. Una prueba de Coombs positivo indica que un mecanismo inmune est atacando propia glbulos rojos del paciente. Este mecanismo podra ser la autoinmunidad, alloimmunity o u n mecanismo inmune mediada inducida por frmacos. Ejemplos de hemlisis aloinmune Enfermedad hemoltica del recin nacido o Rh D la enfermedad hemoltica del recin nacido o Enfermedad hemoltica ABO del recin nacido o Enfermedad hemoltica anti-Kell del recin nacido o Rh c enfermedad hemoltica del recin nacido o Rh E la enfermedad hemoltica del recin nacido o Otros incompatibilidad de grupo sanguneo Reacciones transfusionales hemolticas aloinmune Ejemplos de hemlisis autoinmune/hemlisis inmunohemolti ca Anticuerpos Warm anemia hemoltica autoinmune o Idioptica o El lupus eritematoso sistmico o Sndrome de Evans Anticuerpos Cold anemia inmunohemoltica o Idioptica fro sndrome hemaglutinina o La mononucleosis infecciosa o Hemoglobinuria paroxstica fra
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Inducida por medicamentos hemlisis inmune mediada Metildopa Penicilina Quinidina MTODO DE LABORATORIO Las clulas rojas de la sangre del paciente se lavan y luego se centrifuga con antiglobulina humana. Si inmunoglobulina o complemento factores se han f ijado sobre la superficie de glbulos rojos in vivo, la globulina anti -humana se aglutinan los glbulos rojos y la prueba de Coombs directa ser positivo. . Prueba de Coombs indirecta La prueba de Coombs indirecta se utiliza para detectar in vitro reaccio nes anticuerpo-antgeno. Se utiliza para detectar concentraciones muy bajas de anticuerpos presentes en el plasma de un paciente/suero antes de una transfusin de sangre. En la atencin prenatal, el IAT se utiliza para evaluar a las mujeres embarazadas para detectar anticuerpos que pueden causar la enfermedad hemoltica del recin nacido. El TAI tambin se puede utilizar para pruebas de compatibilidad, la identificacin de anticuerpos, fenotipificacin de RBC, y estudios de titulacin. EJEMPLOS DE USOS CLNICOS DE LA PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA Transfusin de sangre preparacin Artculos principales: la transfusin de sangre y pruebas cruzadas La prueba de Coombs indirecta se utiliza para la deteccin de anticuerpos en la preparacin de la sangre para la transfusin de sangre. El donante y el receptor de la sangre debe ser ABO y Rh D compatible. La sangre donada para transfusiones tambin se analiza para detectar infecciones en procesos separados. Deteccin de anticuerpos Una muestra de sangre del receptor y una muestra de sangre de cada unidad de sangre de los donantes son examinados para anticuerpos con la prueba de Coombs indirecta. Cada muestra se incuba contra una amplia gama de los glbulos rojos que juntos exhiben una amplia gama de antgenos de super ficie. Cruce a juego La prueba de Coombs indirecta se utiliza para probar una muestra de suero del receptor frente a una muestra de glbulos rojos del donante de sangre. A veces se denomina prueba cruzada de sangre. Deteccin de anticuerpos prenatal La prueba de Coombs indirecta se utiliza para evaluar a las mujeres embarazadas para detectar anticuerpos IgG que pueden pasar a travs de la placenta a la sangre fetal y causar la enfermedad hemoltica del recin nacido.

MTODO DE LABORATORIO El IAT es una prueba de dos etapas. . Primera etapa Las clulas rojas de la sangre de ensayo lavadas se incubaron con un suero de prueba. Si el suero contiene anticuerpos frente a antgenos en la superficie de glbulos rojos, los anticuerpos se unirn a la superfi cie de los glbulos rojos. Segunda etapa Los glbulos rojos se lavaron tres o cuatro veces con solucin salina isotnica y despus se incubaron con antiglobulina humana. Si los anticuerpos se han unido a los antgenos de superficie de glbulos rojos en l a primera etapa, los glbulos rojos se aglutinan cuando se incuban con la globulina anti -humana en esta etapa, y la prueba de Coombs indirecta sern positivos. Titulaciones Mediante dilucin de un suero que contiene anticuerpos de la cantidad del anticuerpo en el suero se puede medir. Esto se hace mediante el uso de diluciones dobles del suero y la bsqueda de la mxima dilucin de suero de ensayo que es capaz de producir la aglutinacin de los glbulos rojos pertinentes. Reactivo de Coombs Reactivo de Coombs se utiliza tanto en la prueba de Coombs directa y la prueba de Coombs indirecta. Reactivo de Coombs es globulina antihumana. Est hecho mediante la inyeccin de globulina humana en animales, que producen anticuerpos policlonales especficos para las inmunoglobulinas humanas y factores del sistema del complemento humano. Reactivos de Coombs ms especficas o anticuerpos monoclonales pueden ser utilizados. Mejora de los medios de comunicacin Tanto los anticuerpos IgM e IgG se unen fuertemente con sus antgenos. Anticuerpos IgG son ms reactivos a 37 C. Anticuerpos IgM se detectan fcilmente en solucin salina a temperatura ambiente como anticuerpos IgM son capaces de puente entre los glbulos rojos debido a su gran tamao, la creacin de manera eficiente lo que se ve como aglutinacin. Anticuerpos IgG son ms pequeos y necesitan ayuda para salvar lo suficientemente bien como para formar una reaccin de aglutinacin visual. Los reactivos utilizados para mejorar la deteccin de IgG se denominan como potenciadores. Los glbulos rojos tienen una carga negativa neta denominada potencial zeta que los lleva a tener una repulsin natural entre s. Potenciadores reducen el potencial zeta de las membranas de glbulos rojos. Potenciadores comunes incluyen soluc in de fuerza inica baja, albmina, polietilenglicol, y enzimas proteolticas. Historia de la Prueba de Coombs La prueba de Coombs fue descrita por primera vez en 1945 por Cambridge inmunlogos Robin Coombs, Arthur Mourant y Rob Race. Histricamente, se
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llev a cabo en tubos de ensayo. Hoy en da se hace comnmente mediante microarrays y la tecnologa de gel.