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LA INGENIERA DE BIOPROCESOS
Fernando Mrida
Ingeniero Qumico, Universidad de San Carlos de Guatemala MSc. Ingeniera Qumica, Universidad de Puerto Rico
AGENDA
1. Introduccin y definiciones 2. Estructura y funcin celular 3. Base bioqumica 4. Enzimas y cintica enzimtica 5. Cintica de fermentacin 6. Bioseparaciones 7. Procesos bioqumicos industriales
INTRODUCCIN
Ciencias biolgicas
Bioqumica - Ingeniera Bioqumica - Bioingeniera - Biotecnologa Ingeniera Qumica - Ing. Bioprocesos - Ing. Biolgica
Ciencias qumicas
Ingeniera
INTRODUCCIN
Penicillium notatum
Bilogos + Ingenieros
Staphylococcus aureus
!1939: 1 ppm penicilina !Tanques sumergidos !1945: 100 mil pacientes/ao !Merck: Ing. Qumico + Microbilogo Produccin industrial de penicilina en la 2 guerra mundial !2000: 50 g/L penicilina
Ingeniero de Bioprocesos
Qumica Biologa
Operaciones Unitarias
(Extraccin, Filtracin, Centrifugacin)
Cromatografa Intercambio inico Seguridad Industrial Control de Produccin Diseo de Plantas Empaque
DEFINICIONES
Biotecnologa:
Cualquier aplicacin tecnolgica que usa sistemas biolgicos, organismos vivos o derivados de ellos, para hacer o modificar productos o procesos para un uso especfico.
Aplicacin de los principios de Ingeniera para hacer frente a los retos en los campos de Biologa y Medicina. Ingeniera Biolgica: nfasis en plantas y animales
Bioingeniera:
DEFINICIONES
Ingeniera Bioqumica:
Rama de la Ingeniera Qumica o Ingeniera Biolgica que trata principalmente con el diseo y construccin de equipos que involucran organismos vivos y/o biomolculas.
Fusin entre biotechnologa y nanotecnologa. Uso de biomolculas para aplicaciones en nanotecnologa. Tecnologa sinttica basada en las rutas y principiios qumicos de los organismos vivos.
Bionanotecnologa:
MOTIVACIN
Qu hace un Ingeniero de Bioprocesos?
!Investigacin para la Industria Farmacutica Alimentos Cosmticos Biocombustibles Pinturas Agricultura Investigacin aplicada
North Carolina Community College Systems
!Ing. Qumicos -Bioprocesos!Eva Nelly Rubio: Universidad de Puerto Rico, Biotecnologa Industrial.
!Vitaminas, antibiticos, queso, pan, vino, tinta, cosmticos, shampoo, pinturas, etc.
DIVERSIDAD BIOLGICA
Reinos
Plantae
Animalia
Procariotas
Eucariotas
!0.5 3 m dimetro !Bacteria y Archea !Nucleoide !ADN circular en citoplasma !No organelos !Ejemplo: Escherichia coli
!5 20 m dimetro !Protista, fungi, plantae y animalia !Ncleo con membrana !ADN en ncleo y organelos !Organelos especializados !Ejemplo: S. cerevisiae
Insulina Humana
Bebidas Alcohlicas
Clulas eucariotas
Micrografa de la clula de una hoja de rbol, amplificada 14,000 veces (organelos proyectados)
Organelos Eucariotas
NCLEO: NUCLEOLO:
Material gentico (ADN) ! Cromosomas Sntesis de ribosomas y rARN
Rugoso Liso
RETCULO ENDOPLSMICO:
Complejo de membranas incrustadas en el citoplasma. Rugoso: Ribosomas en superficies interiores Liso: Sntesis de Lpidos
APARATO DE GOLGI: Secrecin de protenas y glicosilacin. Sistema de transporte de molculas LISOZOMAS: Vesculas. Reparacin organelos. RIBOSOMAS: Sntesis de protenas
LOS VIRUS
!Agentes o partculas biolgicas !No son organismos vivos !No son clulas ni constan de ellas !Infectan clulas procariotas y eucariotas
Ensamblaje
Absorcin o fijacin
BACTERIAS EN LA INDUSTRIA
PRODUCCIN DE INSULINA HUMANA
Fermentacin
!Tanques sucesivos !Protena de fusin !Disrupcin celular !Centrifugacin !Lavado con agua
!Solucin de urea !Cistena !Adsorcin/Desorcin !Propanol !Cromatografa doble !Cristalizacin !Re-disolucin !Re-cristalizacin !Secado por congelacin
FUNGI EN LA INDUSTRIA
PRODUCCIN DE CERV CERVEZA RV RVEZA
a) PREPARACIN DEL INCULO DE LEVADURA
Saccharomyces cerevisiae
b) PROCESO DE PRODUCCIN
ANIMALIA EN LA INDUSTRIA
PRODUCCIN DE VACUNA CONTRA INFLUENZA
Clulas MDCK: Clulas epiteliales de rin canino Clulas VERO: Clulas de rin de mono verde africano
!Cultivo de clulas MDCK en matraces !Escalamiento en botellas de lab. !Inculo: 2E5 cel/mL !Biorreactores de 5 a 20 L !Medio con nutrienets y microcarriers !Cultivo y lavado de clulas !Adicin de virus Instituto Max Planck (Alemania) !Produccin de la vacuna
VIRUS EN LA INDUSTRIA
PRODUCCIN DE SPRAY CON BACTERIFAGOS !Intralytix Inc: nica compaa aprobada por la FDA !Bacterifagos lticos !Seguridad alimenticia !Controles ambientales !Terapias en medicina veterinaria y medicina humana
!Uno de los virus utilizados para la erradicacin de E. coli O157:H7
!6 diferentes fagos !Listeria monocytogenes !Salchichas, jamones, etc. !Rociar directamente !Superficies de trabamo
!3 diferentes fagos !Escherichia coli O157:H7 !Salchichas, jamones, etc. !Solucin salina fosfatada
AMINOCIDOS
!Bloques constructores de protenas !Amino, Carboxilo y tomo de Hidrgeno !Residuo diferente en cada aminocido !Polaridad, ionizacin, aromaticidad o funcin especial
Curva de titulacin de lisina Enlace peptdico
!Slo L-aminocidos en protenas !D-aminocidos son raros (pared celular, celular antibiticos)
Hidrgeno
Amino
Residuo Carboxilo
AMINOCIDOS ESENCIALES
Glutamato: Mejorador de sabor
PROTENAS
!Polmeros hechos de aminocidos !Dos aminocidos: Dipptido !Tres aminocidos: Tripptido !Polipptido: Peso molecular <10,000 !Protena: PM>10,000 (miles de aminocidos)
Dipptido Nonapptido Protena
Funciones: Catlisis,
defensa, transporte, movilidad y regulacin
PROTENAS: Estructura
Primaria: Secuencia lineal de los
aminocidos
Secundaria:
Extensin de la cadena. Resultado de puentes de Hidrgeno entre los residuos cercanos. Pueden formar lminas plegables y hlices
CARBOHIDRATOS
MONOSACRIDOS: Los ms simples. !Almacenamiento de energa y estructura Contienen de 3 a 9 carbonos !C:H:O ! 1:2:1 Frmula: (CH2O)n
Ismeros estructurales y pticos
C6H12O6
CARBOHIDRATOS (cont..)
DISACRIDOS: Condensacin de dos
monosacridos formando enlace !-1,4glicosdico.
POLISACRIDOS: Ms de dos
monosacridos formando enlace glicosdico tipo !-1,4
Celulosa Amilopectina
LPIDOS
!Insolubles en ambientes acuosos !Presentes en membrana plasmtica celular !Mayores componentes: cidos grasos
Esteroides
Triglicridos
Fosfolpidos
CIDOS NUCLICOS
NUCLOTIDO Estructura tridimensional
Puentes de hidrgeno entre pares de !Enlace fosfodister bases nitrogenadas !C-5 ! C-3 en azucar
!Formado por transcripcin de ADN !Sntesis de peptidos y protenas !Molcula larga no ramificada !ARN en clula es 6 veces ADN !Varias especies de ARN: t, m, n
!Estructura 3D en doble hlice !Bases nitrogenadas: Info gentica !Dimetro de hlice: 2 nm !Adenina se une siempre a Timina !Guanina se une siempre a Citosina
El modelo llave-y-cerradura
k1
+ E + S
k2
ES
ENZIMAS
!HOLOENZIMAS: Apoenzima + Co-factor
Protena con ms de una subunidad polipeptdica
Zinc: Cofactor
Anhidrasa carbnica
Glucoquinasa
Glucosa
Hexoquinasa
ENZIMAS (cont..)
Fosforilacin de glucosa por hexoquinasa
1. Oxidoreductasas: Transf de electrones. Ej. Alcohol deshidrogenasa Transf grupos funcionales Ej. Glucoquinasa Reacciones de hidrlisis Ej. Sacarasa Adicin o eliminacin de grupos para formar o romper doblesenlaces. Ej. Piruvato descarboxilasa Reacc. de isomerizacin Ej. Glucosa isomerasa Formacin de enlaces C-C, C-S, C-O, C-N Ej. DNA polimerasa
2. Transferasas:
3. Hidrolasas:
4. Liasas:
5. Isomerasas:
6. Ligasas:
Cambio de conformacin de la enzima (Se cierra hacia los lados)
CINTICA ENZIMTICA
E + S
k1 k-1
ES
k2
E + P
Postulados:
!Sustrato limita la velocidad de reaccin ![S] bajas ! V aumenta linealmente ![S] altas ! V aumenta muy lentamente !Vo nunca llega a su valor mximo !Km: Valor al cual Vo es ! de su mximo Constante de Michaelis-Menten
[S]: Concentracin de sustrato V: Velocidad de reaccin Vm: Velocidad mxima de reaccin Km: Constante de saturacin
Paso 1: Anlisis del complejo enzima-sustrato Velocidad de formacin de [ES] = Velocidad de ruptura de [ES] = Paso 2: Equilibrio rpido
PARMETROS CINTICOS
El plot del doble-recproco
Grfico de Lineweaver-Burk
y = m x + b
VENTAJAS Y LIMITACIONES DEL MTODO !Buena estimacin para Vm !No es la mejor estimacin para Km !Se basa en mediciones a concentraciones bajas de sustrato: No es tan exacto
Km es funcin de T y pH
y=
b +
m x
y=
b +
m x
SUMARIO DE Km y Vmax
"!Km da una idea del rango de [S] al cual la reaccin ocurre. Mientras ms alta sea Km, ms dbil ser la anidad del sustrato para unirse a la enzima.! "!Vmax da una idea de qu tan rpido ocurre la reaccin bajo circunstancias ideales.! "!k2 / Km da una idea prctica de la eciencia cataltica, por ejemplo, qu tan a menudo una molcula de sustrato que est unida, reacciona para dar productos.!
INHIBICIN ENZIMTICA
COMPETITIVA NO COMPETITIVA UNCOMPETITIVA
MODELOS COMPLEJOS
Inhibicin competitiva Inhibicin No competitiva
Vm,ap Km,ap
!Incremento en Km,ap !Reducc de velocidad !Solucin: Alta [S]
Inhibicin Uncompetitiva
Km,ap
!Reduccin en Vm !Reducc de velocidad !Alta [S] no es solucin !Reducc en Vm y Km
ENZIMAS ALOSTRICAS
Determinacin de n:
n = Coef de cooperatividad
m x
EFECTOS DE pH & T
VARIACIONES DE pH
!Grupos inicos en sitios activos !Cambios en actividad de enzima !El sustrato tambin puede ionizarse
E- + H+ K2 EH + S Km EHS k2 EH + PZ
VARIACIONES DE TEMPERATURA
!Grupos inicos en sitios activos !Cambios en actividad de enzima !El sustrato tambin puede ionizarse
+
H+ K1 EH+2
Desnaturalizacin
ENZIMAS INMOVILIZADAS
!Restriccin de la enzima en un espacio cerrado !Reutilizacin de la enzima (Ahorro) !Recrear reacciones enzimticas biolgicas !Eliminar etapa de purificacin !La cintica enzimtica cambia por los efectos de difusin
Sustrato
Glucosa
Enzima
Glucosa isomerasa #-glucosidasa Termolisina Lipasa
Producto
Isomerizacin de glucosa a fructosa Monoterpenos Aspartame Aceites ms ligeros
Bio-sensores
BIOENERGTICA
Catabolismo: Degradacin de una molcula compleja a una ms simple. Produce energa
RUTAS METABLICAS
Secuencia de reacciones bioqumicas, catalizadas eficientemente por una enzima especfica.
Catabolismo aerbico de glucosa
1.! Gluclisis o Ruta Embden-Meyerhof-Parnas (EMP) 2.! Ciclo de Krebs (Ciclo del cido ctrico o TCA) 3.! Fosforilacin oxidativa o Respiracin
Otras rutas
! Gluconeognsis (mas o menos lo contrario a Gluclisis) ! Fotosntesis
GLUCLISIS
Macronutrientes:
Concentraciones mayores de 10-4 M !Carbono ! Fotosntesis, azcares, molculas orgnicas
!Nitrgeno ! Amonio, urea, aminocidos, protena !Oxgeno ! O2 o aire !Hdrgeno ! Carbohidratos !Fsforo ! Fosfatos inorgnicos
Micronutrientes:
Concentraciones menores de 10-4 M (elementos traza) !Fe, Zn, Mn ! Cofactores de enzimas intracelulares
!Cu, Co, Mo, Ca, Na, Cl, Ni, Se ! Cofactores !B, Al, Si, Cr, V, Sn, Be, F, Ti, Ga, Ge, Br, Zr, W, Li, I ! son raramente requeridos. (Txicos a ms de 10-4 M ) !Vitaminas y hormonas
!S + X
!P + nX
Substrato P1 P2
ESTRUCTURADO:
No Estructurado
Estructurado
No segregado
COMPLEJIDAD
Soluto de un solo componente Caso + idealizado Un solo componente, Clulas heterog e individuales REALIDAD
Segregado
Hemocitmetro
Conteo en plato
Contador de partculas
Citometro de flujo
Mtodo gravimtrico
Densidad ptica
!OD no discrimina entre clulas viables y no viables !Inculo pobre ! Fase de adaptacin larga !Inculo: 10% del volumen total de fermentacin
Fase Exponencial
Fase Estacionaria
Fase de Muerte
!No estructurado No segregado !Dependencia de un nico sustrato !El sustrato limita velocidad de X !Cintica de saturacin !Similar a Michaelis Menten
Substrato 2
Substrato 1
Modelo Ciberntico
!Aproximacin muy simple !Pobre cuantificacin !No toman en cuenta la dinmica intracelular
!Simultneamente con el crecimiento celular !Formacin es directamente proporcional a g!Ejemplo: Produccin de etanol
!Resultado de mantenimiento intracelular !Toma lugar en la etapa estacionaria, donde g=0 !Ejemplo: Metabolitos secundarios, antibiticos
!Etapa estacionaria o previa a ella !Ejemplo: cido Lctico, Xantanos, Metabolitos secundarios
TEMPERATURA
! disminuye por encima de la T optima ! se duplica aprox a cada $T=10C !Afecta tambin formacin de producto
pH
!pH ptimo para cada tipo de clula !Fluctuacin aceptable de pH 1 a 2 !Cercano a 7.00 !Control importante por medio de buffers
Oxgeno disuelto
!Fermentacines aerbicas !Baja solubilidad de O2 !Concentracin depende de agitacin !Velocidad de transferencia !Velocidad de consumo
Frmula celular
Un mol de material biolgico se define como la cantidad que contiene 1 gramo-tomo de C, por ejemplo CH1.8O0.5N0.2
Carbohidrato
Material celular
Balances molares
Reflejan la cantidad de producto (P) clulas (X) formadas por unidad de substrato (S) consumido por las clulas. $S = $S(clulas) + $S(producto) + $S(energia) + $S(mantenim)
Molar
YX/S = mol C-equiv en cel producidas mol-C equiv en subs consumido = 1
Msico
YX/S = masa cel producidas masa subs consum = -$X
!
%
$S
= -$P
!
%
$S
$P
$X
Proceso catablico de oxidacin incompleta total o casi totalmente anaerbico, cuyo producto final es un compuesto orgnico
Clulas
Muerte celular
Substrato
Formacin de producto Crecimiento celular Mantenimiento
Producto
Asociado a crecimiento
@ t = 0, X(0) = Xo
@ t = 0, S(0) = Xo
@ t = 0, P(0) = Po
!Predecir el comportamiento de X, S, P !Optimizacin !Control del proceso y diseo de plantas Sistema diferencial no lineal de primer orden
Resolucin del sistema por mtodos numricos, por ejemplo, Runge-Kutta 4 orden
-Yeast Y ! Yeast east Extract: -!Peptone: -!Malt Extract: -!MgSO4: -!(NH4)2SO4: -!KH2PO4: -!Sugar: pH=5.5
3 5 3 2 3 2 25
HPLC
YSI
Cells
Medio Cultivo
Cultivo semilla
Inoculacin
Fermentacin
Anlisis
Modelaje
Entrada - Salida + Generac Consumo = Acumulacin Tasa de Dilucin (D) D = Fv / V ! Recproco del tiempo de residencia
Clulas
!Clulas removidas a la misma tasa que su crecimiento !Velocidad de crecimiento celular = Tasa de Dilucin !Manipulacin de g como un parmetro independiente
Si se impone un factor de dilucin D > max, las clulas no se podrn reproducir lo suficientemente rpido para mantenerse. Por lo tanto se lavan o el quimiostato se vaca (washout)
Substrato
Entrada - Salida + Generac Consumo = Acumulacin
Producto
Entrada - Salida + Generac Consumo = Acumulacin
Recordar que:
A diferencia del sistema batch, las ecuaciones que representan X, S y P ahora son algebricas, lo que hace ms facil la resolucin del sistema y su correspondiente simulacin matemtica.
Si aplica el modelo de Monod, despreciando metabolismo endgeno y formacin de productos extracelulares, la productividad ser el factor de dilucin por la concentracin de clulas: DX
Dilucin que maximiza la produccin de clulas se obtiene derivando DX respecto a D y luego igualar a cero: !Ks<<So ! Dop(X) se convierte en D=max !D=max sucede en el punto de wash-out !Usualmente D es menor que Dop(X) ya que es dificil lograr D=max
!Adicin de nutrientes frescos !Reduce inhibicin por substrato !El volumen no es constante en toda la operacin !Habr concentraciones iniciales, intermedias y finales Etapa 1: (Carga)
Etapa 1:
Variacin de las concentraciones, velocidad de crecimiento y volumen en funcin del tiempo para el primer ciclo de un fed-batch
Etapa 2: Realimentacin
Cultivo Batch
1." Preparacin: Limpieza, proceso de esterilizacin, llenado. 2." Sembrado: Inoculacin y perodo de induccin. 3." Crecimiento exponencial 4." Recuperacin de producto
Tiempo ciclo para completar ciclo batch
Cultivo Continuo
! Esterilizacin continua ! Suspensin celular se retira a la misma tasa que la alimentacin de nutrientes ! Volumen se mantiene constante
Concentracin celular ptima:
Usualmente, Xm/Xo es 10 20
SISTEMAS BATCH
!Etanol celulsico !Antibiticos !Insulina a partir de Escherichia coli !Cerveza !Extracto de levadura (fed-batch) !Acetona-Butanol a partir de C. acetobuylicum
Gases
SISTEMAS CONTINUOS
!Protenas !Procesos con enzimas inmovilizadas !Etanol !Productos a gran escala: cido Lctico
Balance de clulas
ENTRADA SALIDA + GENERACIN CONSUMO = ACUMULACIN
Balance de substrato
ENTRADA SALIDA + GENERACIN CONSUMO = ACUMULACIN
Dado que:
Usando Monod:
Despejando S:
!Separar crecimiento celular y formacin de productos. !Produccin de metabolitos secundarios, por ejemplo antibiticos. !Fijar diferente pH, T, concentracin de nutrientes, etc en cada uno de los tanques. !Crecimiento desbalanceado: Modelo no estructurado no es el ms apropiado
Ejemplo tpico: Cultivo de clulas modificadas genticamente Primer quimiostato: Produccin de clulas sin promotor Segundo quimiostato: Produccin de la protena (agregando el promotor)
Primer quimiostato
INMOVILIZACIN CELULAR
!Altas concentraciones celulares !Re-utilizacin celular !Elimina el problema de wash-out a altos D !Altas productividades volumtricas !Minimiza dao celular por esfuerzo cortante Inmovilizacin activa: Fuerzas fsicas y/o qumicas
Atrapamiento en matrices
!Agar !Alginato !Carragenina !Pliacrilamida !Quitosano !Gelatina !Colageno
Cscara de naranja con S. cerevisiae
Cscara de naranja
Encapsulacin
Matrices porosas
Material de la cpsula
Ligamiento a soporte
ADSORCIN: ! Contacto directo entre nutrientes y el material de soporte. !Obtencin de altas cargas celulares ! Proporcin recomendada de dimetros poro/clula: 4 a 5
Soportes
!Vidrio poroso !Slica porosa !Alumina !Gelatina !Carbn activo !Biruta de madera !Resinas de Int. Ionico
Unin covalente !Ms fuerte que la adsorcin: Mas estable ! Necesita un soporte que sea rgido, qumicamente inerte y unir a las clulas firmemente.
!Aldehdos !Aminas !Grupos epoxi !Grupos halocarbonilo !xido de zinc !xido de titanio
Soportes
2. Columnas de burbujas
!Fluidos newtonianos de baja viscosidad !Mejor transferencia de oxgeno !Ambiente con bajo esfuerzo cortante !Desventaja: Coalescencia de burbujas !Desventaja: Rango estrecho flujo de gas.
Produccin de extracto de levadura
3. Biorreactores Loop
!El mezclado y la circulacin de lquido es inducido por la inyeccin de un gas, una bomba mecnica o ambos. !El ms comn: air-lift !Fludos viscosos, no coalescencia !Creacin de microburbujas
Produccin de etanol celulsico
4. Biorreactores Trickle-bed
!Reactores donde coexisten las 3 fases !Lecho empacado de catalizador y un gas esparcindose en el lquido !Alta rea de superficie en el lecho !Fciles de construir !Deventaja: Baja utilizacin del catalizador
!Tratamiento de aguas !Elaboracin de vinagre
VENTAJAS: !Reduccin de contaminacin !Volumen pequeo = Reducc. costos !Fcil separacin de productos !Eficiencia energtica DESVENTAJAS: !Naturaleza heterognea de la mezcla !Pobre control de pH, oxgeno, T
PRODUCTOS PRINCIPALES: !Salsa soya !Miso (arroz y soya) !Hamanatto (soya y trigo) !Enzimas (A. oryzae)
!Downstream es el conjunto de etapas del bioprocesamiento industrial que sigue a la fermentacin. !Estas etapas varan dependiendo del producto final
1." Separacin de productos insolubles 2." Aislamiento primario 3." Purificacin 4." Producto final
a) Coagulacin y Floculacin
Coagulacin: Formacin de pequeos flculos a partir de coloides. Coagulantes: cidos, Bases, iones multivalentes, carbn activado.
Floculacin: Aglomeracin de los flculos en agregados ms grandes. Floculantes: CaCl2 y otros polielectrolitos
b) Filtracin
!El mtodo ms costo-efectivo para separacin !Filtros rotatorios de vaco, los ms utilizados !Separacin de micelios en produccin de antibiticos !Filtracin cruzada se usa con bacterias y levaduras
c) Centrifugacin
!Separacin de partculas 0.1-100 m por accin de fuerza centrfuga. !Flujo del medio de fermentacin es el parmetro ms importante
!Cuando el producto deseado es intracelular las clulas necesitan someterse a la ruptura de su membrana (y pared, si aplica) Mtodos mecnicos
Vibracin ultrasnica !Usados para bacterias (pared celular) !Ruptura de bacilos mayor que cocos !No efectivo para hongos !Desventaja: Desnaturalizacin
Mtodos no mecnicos
!Shock osmtico !Ruptura con cristales de hielo !Shock trmico !Liofilizacin despus de tratamiento qumico (acetona, butanol y buffers. !Lisozima: pared celular de bacterias gram-positivas !Productos liberados pueden oxidarse con el aire!! ! Agregar agente reductor con agente quelante (EDTA) !Asepsia rigurosa!!!
Homogenizadores con perlas !2000 kg/h ! 340 dw/h levadura !Las perlas rompen a las clulas !Mejor control de la temperatura
!Productos se degradan con la temperatura !Asepsia durante todo el proceso de downstream !Concentraciones altas (productos de alta pureza) Extraccin Lquido-Lquido
! Acetato de amilo o isoamilo como solvente extractor ! Extraccin a T ambiente ! Solvente: No txico, selectivo, barato, inmisicible con el caldo ! Aplicacin: Antibiticos ! Separacin posterior: Centrifugacin o Decantacin
Precipitacin
Precipitar protenas ! ! Adicin de sales inorgnicas Adicin de solventes orgnicos a baja temperatura Desventaja: Solventes pueden causar desnaturalizacin de protenas.
Adsorcin
! Fsica: Fuerzas Van der Waals ! Qumica: Inicos fuertes ! Resinas intercambio inico ! Lecho empacado, lecho fluido
Membranas
! Dilisis ! Osmosis Inversa ! Ultrafiltracin ! Microfiltracin
Electroforesis
! Separacin de biomolculas segn su tamao y carga. ! Matriz de gel poliacrilamida ! Protenas cubiertas con surfactante aninico ! Deteccin por tintura
Separacin de mezclas en sus componentes puros, utilizando una fase mvil y una fase estacionaria. Cromatografa de Elucin
Cristalizacin
!Bajas temperaturas !Minimiza degradacin trmica !Bajo costo en equipo !Factores de separacin altos !Cristales de alta pureza
Cristalizador Nutsche
Secado
!Remocin del solvente utilizado !Producto sensitivo al calor !% humedad final !Parmetros que afectan el secado: a) Propiedades fsicas b) Propiedades del soluto c) Condiciones del secado d) Parmetros de transf de calor
Liofilizador
BIOETANOL MAZ
PRODUCTOS ALMIDONCEOS
!Un paso extra: Hidrlisis de los enlaces en amilosa y amilopectina. !Actualmente el proceso que produce la mayor cantidad de etanol en el mundo
BIOETANOL LIGNOCELULOSA
Celulosa
Hemicelulosa
Pichia stipitis
Lignina
Pichia stipitis
BIODIESEL DE MICROALGAS
Ventajas del proceso
Chlorella vulgaris
!No compite por utilizacin de espacio !Ms del 70% de biomasa utilizable !Buen reemplazo para soya y canola !Abundancia de especies celulares !No contamina el ambiente
Reactores usados
Reaccin de Esterificacin
Estanques abiertos
Fotobiorreactores tubulares
Mezcla de protenas (o clulas secas) extradas de cultivos puros o mezclados de algas, levaduras, bacterias u hongos, y son usados para suplementos alimenticios humanos o para animales Substratos utilizados
!Hidrocarburos lquidos y gaseosos !Alcoholes !Productos de desecho: Plantas, madera, almidones, lcteos, etc.
Microorganismos utilizados
Desventaja principal:
!Acumulacin de cidos nuclicos
BIOETANOL
BIOETANOL
BIOETANOL
BIOETANOL
BIOETANOL
BIOETANOL
BIOETANOL