Mtodos rpidos alternativos a la ISO 6579 para el anlisis de Salmonella

Alfredo Corujo Fernndez Project Manager Food Safety Nutreco Espaa

TEMAS
Mtodos rpidos: Consideraciones generales Sistemas basados en pruebas ELISA: ELFA VIAS DIFUSIN

Sistemas basados en, pH (movilidad) Sistemas basados en separacin Inmunomagntica Sistemas basados en Bacterifagos Sistemas basados en Hibridacin Sistemas basados en PCR Sistema serotipado basado en microarrays Sistema serotipado/genotipado por REP-PCR Tendencias futuras en la deteccin de patgenos: Biosensores

Mtodos Rpidos: Consideraciones generales

Se puede decir que mtodo rpido es aquel que es ms rpido, sencillo o confiable que lo convencional. Clasificacin en reas de acuerdo a lo que se busca:
Sistemas para facilitar la toma de muestras Mtodos para ayudar al procesamiento de las muestras Sistemas de cuantificacin microbiolgica Mtodos para identificacin y cuantificacin de microorganismos Sistemas especiales para anlisis de muestras de aguas, ambientales y superficies Sistemas de identificacin mediante mtodos moleculares Mtodos inmunolgicos para deteccin y/o cuantificacin de microorganismos Otros mtodos miscelneos

Mtodos Rpidos: Consideraciones generales

CARACTERISTICAS DE UN MTODO RPIDO IDEAL Preciso Rpido y productivo Econmico Aceptable Realizacin simple Entrenamiento Reactivos comunes Reputacin de la compaa Buen servicio tcnico Requerimientos de espacio y utilidad ptimos

Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS ELISA

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Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

Valores para el control negativo: OD 0.030 Valores para el control positivo: OD 0.900-1.700. Se considera la muestra POSITIVA: OD 0,200.
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Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

ASSURANCE GOLD SALMONELLA EIA
Resultados el da siguiente Para alimentos procesados. Alimentos crudos & altamente contaminados necesitan incubacin adicional de un da al otro. Dos opciones para resultados del test: lectura de los

Los resultados pueden ser ledos visualmente o por instrumentos con lectora de microplaca.

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Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS ELISA (Lateral Flow)

REVEAL (Neogen)

Reveal

Reveal SE

Reveal 2.0

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SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS ELISA (Lateral Flow)

Singlepath (Merck)

Matrices: Ingredientes Alimentos Muestras ambientales

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SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS ELISA (Lateral Flow)

VIP (Biocontrol)

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SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS ELISA (ELFA)

Sistema VIDAS (Biomerieux) Salmonella Matrices: Ingredientes Alimentos Muestras ambientales (Calzas, Heces....)

Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS VIA Sistema TECRA (Biotrace) Salmonella Matrices: Ingredientes Alimentos Muestras ambientales L+D

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Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN INMUNOCONCENTRACIN + ELISA (ELFA)

Sistema VIDAS (Biomerieux) Salmonella Matrices: Ingredientes Alimentos

Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS ELISA (difusin)

1-2 TEST (Biocontrol) Salmonellas mviles Matrices: Ingredientes Alimentos Muestras ambientales

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SISTEMAS BASADOS EN, pH (MOVILIDAD)

OSRT (OXOID) Salmonellas mviles Matrices: Ingredientes Alimentos Muestras ambientales

Cada test contiene 2 tubos : Tubo A (Azul) contiene Rappaport- Vassiliadis modificado como medio selectivo, y Lysine Iron Cystine Rojo neutro como medio indicador. Tubo B (Rojo) contiene Lysine Deoxycholate modificado medio selectivo y Brilliant Green modificado como medio indicador.
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SISTEMAS BASADOS EN SEPARACION INMUNOMAGNETICA

Sistema DYNAL BIOTECH (Dynabeads) Salmonella spp+ Matrices: Ingredientes Alimentos Muestras ambientales L+D

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SISTEMAS BASADOS EN SEPARACION INMUNOMAGNETICA

Sistema Pathatrix

Matrices: Ingredientes Alimentos Muestras ambientales L+D

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SISTEMAS BASADOS EN BACTERIOFAGOS

CONFIRMACIN

VIDAS UP SALMONELLA

Matrices: Ingredientes Alimentos Muestras L+D

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SISTEMAS BASADOS EN BACTERIOFAGOS

RapidCheck Select S.enteritidis (SDIX) Matrices: Ingredientes Alimentos Muestras ambientales

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SISTEMAS BASADOS EN BACTERIOFAGOS

RapidCheck confirmacin S.enteritidis (SDIX)

Confirmacin de cepas S. enteritidis

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SISTEMAS BASADOS EN HIBRIDACIN HybriScan Salmonella (Sigma- Aldrich)

Muestras con OD% < 10 son consideradas negativas. Muestras con OD% > 10 < 20 son consideradas dudosas. Muestras con OD% 20 son consideradas positive.
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Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN HIBRIDACIN Lumiprobe 24 (EUROPROBE)

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SISTEMAS BASADOS EN HIBRIDACIN GeneQuence (NEOGEN)

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SISTEMAS BASADOS EN PCR

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SISTEMAS BASADOS EN Real Time PCR (BAX System)

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Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN RT- PCR

MX3005P (STRATAGENE) LIGTHCYCLER (ROCHE) iQ-CHECK ABI PRISM 7900HT (APPLIED BIOSYSTEMS) (BIORAD)

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SISTEMAS BASADOS EN PCR (Assurance GDS)

Sistema Multiplex (Biocontrol): Matrices: Ingredientes Alimentos Muestras ambientales Combina concentracin de muestra y deteccin de DNA

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Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN PCR (Led Active Blue)

Sistema Fotoactivacin ( ib-Applied science): EMA:Ethidium bromide monoazide PMA: propidium monoazide

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Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS SEROTIPADO BASADO EN MICROARRAYS

PREMITEST SALMONELLA CHECK- POINTS

AT READER

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Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

Sistema serotipado/genotipado por REP-PCR
Muestra positiva

REP-PCR

Identificacin cepas de Salmonella. Indentificacin de fuentes de contaminacin ambiental

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Tendencias futuras en la deteccin de patgenos

SISTEMAS BASADOS EN BIOSENSORES
Staphylococcus aureus Salmonella spp. E. coli Yersinia enterocolitica, Bacillus cereus Clostridium perfringens Listeria monocytogenes Shigella spp. Vibrio spp. Campylobacter

Oligonucleotidos especficos de virulencia E.coli O157:H7 (hly A, eae A) Salmonella spp (inv A, agf B)

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CONCLUSIONES
Existen diferentes mtodos alternativos ms rpidos que la ISO. La eleccin del mtodo depender de la matriz a analizar. El mtodo seleccionado debera estar validado para la matriz problema. Para matrices muy contaminadas se recomiendan protocolos de 48 horas. Existen pocos mtodos alternativos para matrices procedentes de la produccin primaria, se necesitan mtodos rpidos para este tipo de muestras. Las industrias procesadoras de alimentos deberan implementar mtodos alternativos validados de cara a cumplir la legislacin futura en cuanto al control de Salmonella en producto final.

MUCHAS GRACIAS

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