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Manual del submdulo II del mdulo II

Aplicar tcnicas de identificacin para hongos y levaduras. Analizar cualitativamente los componentes de una muestra a travs de la aplicacin de mtodos analticos.
IQ. Rosa Elba Mitre Navarro/Leticia Rodrguez R. IQ. Jos Bernardino Barragn. M.C. QFB. Jos Francisco Valenzuela Tovar. Mtra. Leticia Guadalupe Ordua Torres.

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DATOS PERSONALES Nombre del alumno ________________________________________________________________ Plantel _______________________________________________________________ Grupo ___________ N de lista ____________ Turno______________

Nombre del Profesor (a) ________________________________________________________________

HORARIO LUNES MARTES MIRCOLES JUEVES VIERNES

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MDULO II
Realizar anlisis qumicos y microbiolgicos mediante el uso de tcnicas generales y estndares de calidad. 176 hrs.

Justificacin del mdulo En todo laboratorio de anlisis industrial es importante contar con el apoyo de un auxiliar que analice cualitativa y cuantitativamente los componentes de una muestra, y en los que se requiera de anlisis microbiolgicos, que identifique microrganismos mediante tcnicas especficas, aplicando los estndares y herramientas estadsticas con un alto sentido de honestidad, responsabilidad, seguridad, orden y limpieza. Dada la importancia de estas actividades en el mercado laboral, este segundo mdulo, permite el desarrollo de competencias a travs de tres submdulos; en el primero el alumno adquiere la habilidad de identificar microrganismos a travs del anlisis microbiolgico, en el segundo submdulo desarrolla las competencias necesarias para analizar cualitativa y cuantitativamente los componentes de una muestra y finalmente en el tercer submdulo el alumno desarrolla la habilidad y destreza para aplicar los estndares y herramientas estadsticas en los anlisis qumicos y microbiolgicos, todo ello bajo los criterios y normas de seguridad e higiene, contribuyendo al cuidado del medio ambiente. Referentes normativos para la elaboracin del mdulo. NTCL-CSEGO-190.01 Primera respuesta a emergencias que involucran materiales peligrosos. NOM-005-STPS-1998 Relativa a las condiciones de seguridad e higiene en los centros de trabajo para el manejo, transporte y almacenamiento de sustancias qumicas peligrosas. NOM-008-SCFI-1993 Sistema General de Unidades de Medida. NOM-026-STPS-1998 Colores y seales de seguridad e higiene, e identificacin de riesgos por fluidos conducidos en tuberas. NOM-052-SEMARNAT-2005 Que establece las caractersticas, el procedimiento de identificacin, clasificacin y los listados de los residuos peligrosos. NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002 Proteccin ambiental Salud ambiental - Residuos peligrosos biolgico-infecciosos - Clasificacin y especificaciones de manejo. NOM-114-STPS-2000 Exposicin laboral a presiones ambientales anormales-Condiciones de seguridad e higiene. ISO 9000 Sistemas de Gestin de la Calidad. ISO 14000 Sistemas de Gestin Ambiental. Sitios de insercin en el mercado de trabajo del mdulo. Laboratorios escolares. Laboratorios de anlisis industriales. Laboratorios de anlisis clnicos. Laboratorios de investigacin. Laboratorios de control de calidad de industrias alimenticia y aguas de consumo humano

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Resultado de aprendizaje del mdulo. Realizar anlisis qumicos y microbiolgicos generales bajo los criterios y normas de seguridad e higiene, contribuyendo al cuidado del medio ambiente con un alto sentido de honestidad, responsabilidad, seguridad, orden y limpieza.

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SUBMDULO II
A) Aplicar tcnicas de identificacin para hongos y levaduras. 1. Aplicar tcnicas de identificacin para hongos y levaduras utilizando mtodos de reproduccin, crecimiento, tincin y pruebas bioqumicas. 2. Aplicar los principios bsicos del anlisis qumico para la separacin e identificacin de los componentes de una muestra. 32 hrs.

32 hrs.

B) Analizar cualitativamente los componentes de una muestra a travs de la aplicacin de mtodos analticos.

Recursos didcticos del mdulo Los documentos, equipo y materiales seleccionados son los mnimos necesarios para apoyar el desarrollo de las competencias del mdulo: pintarrn, rotafolio, retroproyector de imgenes, can de proyeccin, computadora, tubos de ensayo, gradillas, goteros, pipetas graduadas, vasos de precipitados, varilla de vidrio, matraz aforado, vidrio de reloj, mecheros, pinzas para tubo de ensaye, campana de extraccin, escobillones, embudos de filtracin rpida, papel filtro, papel tornasol azul y rojo, centrifuga, balanza analtica, crisoles de porcelana, goteros, pipetas graduadas, vasos de precipitados, varilla de vidrio, matraz aforado, vidrio de reloj, mecheros, pinzas para tubo de ensaye, campana de extraccin, escobillones, embudos de filtracin rpida, papel filtro, papel tornasol azul y rojo, mufla, balanza analtica, estufa de aire, desecadores, pinzas para crisol, esptula, soporte universal, bureta, pinzas para bureta, matraz Erlenmeyer, probeta, plancha de calentamiento y termmetro. Estrategia de evaluacin del aprendizaje del mdulo Este mdulo se evaluar con la presentacin del portafolio de evidencias, en el que el alumno deber incluir las evidencias de desempeo, producto y conocimiento indicadas en cada una de las guas didcticas desarrolladas en los submdulos correspondientes. Gua didctica del submdulo por desarrollar
APERTURA La fase de apertura permite explorar y recuperar los saberes previos e intereses del estudiante, as como los aspectos del contexto relevantes para su formacin. Al explicitar estos hallazgos en forma continua, es factible reorientar o afinar las estrategias didcticas centradas en el aprendizaje, los recursos didcticos y el proceso de evaluacin del aprendizaje, entre otros aspectos seleccionados. Para apoyar su intervencin en el proceso de integracin y reconocimiento de sus estudiantes, le sugerimos las siguientes estrategias didcticas mnimas, las cuales podr enriquecer, modificar u omitir, o cambiar su secuencia, segn las necesidades, intereses o condiciones de aprendizaje en su contexto escolar: Promover la integracin grupal. Presentar de manera general el mdulo y submdulo de la especialidad y los sitios de insercin laboral. Establecer las formas de evaluacin para el logro de los resultados de aprendizaje. Realizar una evaluacin diagnstica para la recuperacin de los conocimientos previos para cada contenido del submdulo. La fase de desarrollo permite crear escenarios de aprendizaje y ambientes de colaboracin para la construccin y reconstruccin del pensamiento a partir de la realidad y el aprovechamiento de apoyos didcticos, para la apropiacin o reforzamiento de conocimientos, habilidades y actitudes, as como para crear situaciones que permitan

DESARROLLO

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CIERRE

valorar las competencias profesionales y genricas en el estudiante, en contextos escolares y de la comunidad. Creacin de escenarios y ambientes de aprendizaje y cooperacin, mediante la aplicacin de estrategia, mtodos, tcnicas y actividades centradas en el aprendizaje, como: Aprendizaje basado en problemas (ABP), mtodo de casos, mtodo de proyectos, visitas al sector productivo, simulaciones o juegos, uso de TICS, investigaciones y mapas conceptuales, entre otras, para favorecer la generacin, apropiacin y aplicacin de competencias profesionales y genricas en diversos contextos. Fortalecimiento de ambientes de cooperacin y colaboracin en el aula y fuera de ella, a partir del desarrollo de trabajo individual, en equipo y grupal. Integracin y ejercitacin de competencias y experiencias para aplicarlas, en situaciones reales o parecidas, al mbito laboral. Aplicacin de evaluacin continua para verificar y retroalimentar el desempeo del estudiante. Recuperacin de evidencias de desempeo , para la integracin del portafolio de evidencias. La fase de cierre propone la elaboracin de sntesis, conclusiones y reflexiones argumentativas que, entre otros aspectos, permiten advertir los avances o resultados del aprendizaje en el estudiante y, con ello, la situacin es que se encuentra, con la posibilidad de identificar los factores que promovieron u obstaculizaron su proceso de formacin. Para apoyar su intervencin en el proceso de reconocimiento y verificacin de las competencias logradas por sus estudiantes, le sugerimos las siguientes estrategias didcticas mnimas, las cuales podr enriquecer modificar u omitir, o cambiar su secuencia, segn las necesidades, intereses o condiciones de aprendizaje en su contexto escolar: Verificacin del logro de las competencias profesionales y genricas planteadas en el submdulo, y permitir la retroalimentacin o reorientacin, si el estudiante lo requiere o solicita. Verificacin del desempeo del propio docente, as como el empleo de los materiales didcticos, adems de otros aspectos que considere necesarios. Verificacin del portafolio de evidencias del estudiante

Evaluacin por competencias Desde la visin pedaggica, el proceso de evaluacin por competencias tiene que ver con la comprensin, regulacin y mejora continua de la enseanza y el aprendizaje, asociado a la acreditacin y certificacin acadmica, como funcin social del mismo proceso. En el enfoque de competencias, la evaluacin se sistematiza con la creacin de espacios, la aplicacin de instrumentos y la recopilacin de evidencias de desempeo, productos y conocimientos que el estudiante demostrar en condiciones reales o simuladas, mediante procedimientos de autoevaluacin, co-evaluacin y evaluacin del docente. Recomendaciones para la seleccin de instrumentos a acciones para evaluar el aprendizaje Para evaluar los desempeos y recuperar sus evidencias, puede construir o ensamblar guas de observacin, juego de roles y ejercicios prcticos, entre otros. Para evaluar los productos y recuperar sus evidencias, puede construir o ensamblar listas de cotejo, bitcoras, informes, programas y diagramas, entre otros. Para evaluar los conocimientos, puede construir o ensamblar cuestionarios, redes o mapas mentales, proyectos y reseas, entre otros.

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Submdulo II A) Aplicar tcnicas de identificacin para hongos y levaduras. 1. Aplicar tcnicas de identificacin para hongos y levaduras utilizando mtodos de reproduccin, crecimiento, tincin y pruebas bioqumicas. 1.1 Aplicar mtodos para la reproduccin y crecimiento de hongos y levaduras. 1.2 Aplicar tcnicas de tincin para morfologa y estructura anatmica de hongos y levaduras. 1.3 Operar tcnicas de identificacin de hongos y levaduras de acuerdo a su metabolismo. Estrategias didcticas. 1. Proponer una visita a laboratorios de investigacin para vincular el conocimiento de los mtodos de reproduccin y crecimiento de hongos y levaduras. 2. Realizar prcticas guiadas sobre tcnicas de tincin para morfologa y estructura anatmica de hongos y levaduras. 3. Realizar prcticas guiadas sobre las tcnicas de identificacin de hongos y levaduras de acuerdo a su metabolismo en forma colaborativa con orden y limpieza. 4. Proponer visita guiada a un laboratorio de anlisis microbiolgico para vincular el conocimiento de las tcnicas de identificacin de hongos y levaduras de acuerdo a su metabolismo. 5. Realizar las actividades de retroalimentacin y evaluacin correspondiente. 6. Realizar actividades, trabajando en equipo para conclusin del submdulo. Evidencias e instrumentos de evaluacin. Mtodos de reproduccin y crecimiento de hongos y levaduras aplicados (Prctica y gua de observacin). Informe sobre los mtodos de reproduccin y crecimiento de hongos y levaduras elaborado (Lista de cotejo). Tcnicas de tincin para morfologa y estructura anatmica de hongos y levaduras aplicadas. (Prctica y gua de observacin). Reporte de las tcnicas aplicadas (Lista de cotejo). Las tcnicas de identificacin de hongos y levaduras de acuerdo a su metabolismo aplicadas (Prctica y gua de observacin). Reporte de las tcnicas de identificacin de hongos y levaduras de acuerdo a su metabolismo elaborado (Lista de cotejo).

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MICROBIOLOGA
Microbiologa es el estudio de los organismos de tamao microscpico que incluyen bacterias, protozoos, virus, ciertas algas y hongos. La Microbiologa como ciencia tiene aplicaciones importantes que producen impacto en nuestra vida cotidiana en las reas: Mdica Identificacin de los diferentes microorganismos de importancia mdica. Prevencin y tratamiento de enfermedades infecciosas causadas por microorganismos en plantas y animales, incluyendo al hombre. Industrial En procesos de fermentacin en la produccin de antibiticos, cidos orgnicos, aminocidos, enzimas, disolventes y combustibles como el Metano y etanol. Recuperacin de recursos minerales, reforzada por accin microbiana. Control de calidad de productos industriales. Por ejemplo, bio-deterioro de papel, madera, textiles, pintura y corrosin de metales. De los Alimentos Deterioro microbiano de los alimentos. Mtodos de conservacin de los alimentos. Produccin de alimentos por mtodos microbiolgicos: Productos lcteos, fermentacin del pan, bebidas alcohlicas, protena de origen unicelular. Agrcola Fertilidad del suelo. Enfermedades microbianas de las plantas. Plaguicidas microbianos. Microbiologa Ambiental Ciclos biogeoqumicos (Fijacin del Nitrgeno en el suelo). Interacciones entre las poblaciones, por ejemplo la simbiosis fijadora de nitrgeno, Micorrizas, Bioluminiscencia. Los microorganismos en sus hbitats naturales de aire, agua, suelo y ambientes extremos (aguas termales y lagos salados) Reduccin de la calidad y la contaminacin ambiental. Procesos de Biomediacin. Es evidente que la Microbiologa abarca un campo muy amplio, cubriendo en particular la Microbiologa Ambiental muchos aspectos relacionados con la calidad de vida actual.

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Conocimiento previo 1. Para que sirve una caja de Petri? ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ 2. Cul es la finalidad de utilizar materiales estriles en el laboratorio? ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________

3. De qu material es el asa bacteriolgica? ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ 4. Utilidad del mechero Bunsen? ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ 5. Qu finalidad tiene utilizar el medio de cultivo? _______________________________ _______________________________ _______________________________ _______________________________ _______________________________ _______________________________ _______________________________

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@Investiga, incluyendo imgenes de la estructura (reas del Laboratorio de Microbiologa. ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________

Fuente: ________________________________________________________________________

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En el laboratorio de Microbiologa. Adems de la disciplina y precauciones generales adecuadas, deben observarse normas especficas, pues los microorganismos poseen caractersticas muy particulares. Una de ellas es que se encuentran en cantidades muy elevadas pero pasan desapercibidos. Otra es cuando se diseminan rpidamente salindose de la zona del laboratorio como el drenaje y la basura, alterando el equilibrio ecolgico. Por consiguiente se han establecido medidas de seguridad e higiene.

@Investiga las normas de seguridad e higiene. NTCL-CSEGO-190.01 Primera respuesta a emergencias que involucran materiales peligrosos. ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ Fuente: ________________________________________________________________ NOM-005-STPS-1998 Relativa a las condiciones de seguridad e higiene en los centros de trabajo para el manejo, transporte y almacenamiento de sustancias qumicas peligrosas. ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ Fuente: ________________________________________________________________

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NOM-008-SCFI-1993 Sistema General de Unidades de Medida. ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ Fuente: ________________________________________________________________ NOM-026-STPS-1998 Colores y seales de seguridad e higiene, e identificacin de riesgos por fluidos conducidos en tuberas. ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ Fuente: ________________________________________________________________ NOM-052-SEMARNAT-2005 Que establece las caractersticas, el procedimiento de identificacin, clasificacin y los listados de los residuos peligrosos. ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ COBACHSLP/ACADEMIA_SUBMOD 7

________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ Fuente: ________________________________________________________________ NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002 Proteccin ambiental Salud ambiental - Residuos peligrosos biolgico-infecciosos - Clasificacin y especificaciones de manejo. ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ Fuente: ________________________________________________________________ NOM-114-STPS-2000 Exposicin laboral a presiones ambientales anormales-Condiciones de seguridad e higiene. ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ COBACHSLP/ACADEMIA_SUBMOD 7

________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ Fuente: ________________________________________________________________ ISO 9000 Sistemas de Gestin de la Calidad. ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ Fuente: ________________________________________________________________ ISO 14000 Sistemas de Gestin Ambiental. ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ Fuente: _________________________________________________________________________

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Elabora un collage de las medidas de seguridad incluidas en la informacin previa.

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@Investiga las caractersticas del material de laboratorio que se utiliza en Microbiologa, incluye imgenes. Nombre e imagen 1. Caractersticas generales Para qu y cmo se usa?

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Nombre e imagen 1.

Caractersticas generales Para qu y cmo se usa?

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Nombre e imagen 1.

Caractersticas generales Para qu y cmo se usa?

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Fuente: ________________________________________________________________________

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MTODOS DE ESTERILIZACIN EN EL LABORATORIO QUMICO


No se puede hablar de esterilizacin sin considerar el concepto de microrganismo. Un microrganismo es un agente microscpico vivo e imperceptible a los sentidos que generalmente est agrupado en colonias, aunque bien puede estar como una unidad formadora de colonias (U.F.C.), la que se desarrolla en un medio apropiado para formar colonias perceptibles. Los microrganismos pueden ser patgenos (productores de ciertas enfermedades) o banales (los habitualmente hallados en los alimentos, el aire, el polvillo ambiental, que no perjudican al hombre. El hecho de que existan distintos tipos de grmenes en el medio ambiente, crea grandes dificultades en los estudios bacteriolgicos, cuando es necesario obtener las especies microbianas en estado de pureza, ya que tanto el instrumental como los medios de cultivo son invadidos con suma facilidad por los microbios del medio ambiente. Con el fin de subsanar estos inconvenientes se practica la esterilizacin, procedimiento que consiste en destruir todos los grmenes vivos que existan sobre los objetos o sustancias que se desean libres de ellos (aspticos). Los microrganismos pueden clasificarse en: Criorresistentes, que son los resistentes al fro. Termo resistente o resistente a las altas temperaturas, aunque la clasificacin ms comn es por la temperatura a la que se reproducen. Si se toma en cuenta la temperatura a la que se reproducen, se clasifican en: Crifilos (-5 a 14 C) Mesfilos (25 a 47 C) Termfilos (50 hasta 113 C) Investiga las semejanzas, diferencias y ejemplos de la clasificacin de los microrganismos. Microrganismos Semejanzas Crifilos Mesfilos Termfilos

Diferencias

Ejemplo

Conclusiones

Fuente: _________________________________________________________________________

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Por ejemplo, muchos hongos se destruyen con la temperatura, pero sus esporas an son viables y cuando encuentran un medio apropiado, rico en nutrientes y humedad, se reproducen. Por tal motivo la tecnologa para su destruccin debe considerar stas variables. Esterilizacin Esta operacin comprende todos los procedimientos fsicos, mecnicos y qumicos, que se emplean para destruir, inactivar o retener grmenes en general y patgenos en particular. A travs de esta, los materiales de laboratorio para determinados diagnsticos y los elementos quirrgicos y la piel del enfermo alcanzan un estado de desinfeccin que evita la contaminacin operatoria. A) Mtodos fsicos Calor. La utilizacin de este mtodo y su eficacia depende de dos factores: el tiempo de exposicin y la temperatura. Todos los microrganismos son susceptibles, en distinto grado, a la accin del calor. El calor provoca desnaturalizacin de protenas, fusin y desorganizacin de las membranas y/o procesos oxidantes irreversibles en los microorganismos. Fuego Directo. Este procedimiento consiste en exponer a la llama de un mechero de Bunsen el objeto que se desea esterilizar. Cuando ste es de metal se deja permanecer en el rea de reduccin de la llama hasta que se ponga al rojo (asas de cultivo y algunas agujas). Si es de vidrio se deja un tiempo prudencial, procurando que la llama llegue a todos lados. Antes de utilizar el objeto esterilizado es necesario dejarlo enfriar en un sitio asptico. Este procedimiento tiene limitaciones debido a que deteriora los objetos y si son de gran volumen, la esterilizacin nunca es perfecta.

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Calor Seco. El calor seco produce desecacin de la clula, esto es txico por niveles elevados de electrolitos y fusin de membranas, residuos que quedan adheridos al objeto estril. Estos efectos se deben a la transferencia de calor desde los materiales a los microorganismos que estn en contacto con stos. Aun as se sigue utilizando el calor seco en todos los laboratorios para la esterilizacin de placas de Petri y pipeteros (recipientes metlicos para alojar pipetas para la siembra de sustancias lquidas). La accin destructiva del calor sobre protenas y lpidos componentes o nutrientes de los microorganismos, requiere mayor temperatura cuando el material est seco o la actividad de agua del medio es baja. Ventajas No es corrosivo para metales e instrumentos. Permite la esterilizacin de sustancias en polvo y no acuosas, y de sustancias viscosas no voltiles. Desventajas Requiere mayor tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo, debido a la baja penetracin del calor. Recorta y pega la imagen del horno de Pasteur Estufas. Para esterilizar por intermedio del aire caliente es necesario colocar los objetos en aparatos especiales llamados estufas. Y llevar el aire interior a una temperatura entre 150C y 190 C. Uno de los primeros aparatos utilizados para este fin fue el horno de Pasteur, que luego se sustituy por estufas de aire caliente. Estas constan de una doble cmara, el aire caliente generado por una resistencia elctrica circula por la cavidad principal y por el espacio entre ambas cmaras, a temperaturas variables, siendo la ms aconsejada la de 1700C para el instrumental metlico y a 1400C para el contenido de los tambores. Se mantiene una temperatura estable mediante termostatos de metal denominados de par bimetlico, consistente en dos metales de distinto coeficiente de dilatacin. Cuando uno se dilata, el otro no lo hace y se arquea. Uno de los extremos de ste dispositivo se halla en contacto con un interruptor que corta la alimentacin de la resistencia calefactora. Un avance en el control de temperatura. En la actualidad la mayora de las estufas de esterilizacin o de cultivo se termo regulan por medio de un termostato hidrulico que consiste en una ampolla metlica con gas en su interior, hermtica, unida por medio de un capilar de metal a un tambor que vara su volumen cuando aumenta la temperatura. Este tambor est en contacto con una llave COBACHSLP/ACADEMIA_SUBMOD 7

interruptora, de manera que si el gas interior del tambor se dilata por el calor, la llave a la que est unido interrumpe el fluido elctrico a la resistencia, manteniendo as la temperatura de la cmara. Modernizacin en el dispositivo de control de temperatura. Se ha logrado controlar la temperatura mediante un circuito electrnico que utiliza el microprocesador 555, utilizando como sensor una termo resistencia. Esta baja la resistencia a la corriente al aumentar la temperatura y la seal es enviada al procesador, el que corta un rel que alimenta la corriente de la resistencia de calefaccin. Tanto ste como otros dispositivos electrnicos ofrecen extrema sensibilidad de control, ya apto mas para estufas de cultivo que para esterilizacin. Calor Hmedo. El calor hmedo produce desnaturalizacin y coagulacin de protenas. Estos efectos se deben principalmente a dos razones: 1. El agua es una especie qumica muy reactiva y muchas estructuras biolgicas son producidas por reacciones que eliminan agua. 2. El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho ms elevado que el aire.

Autoclave. Se realiza la esterilizacin por el vapor de agua a presin. El modelo ms usado es el de Chamberland. Esteriliza a 120C a una atmsfera de presin (estas condiciones pueden variar) y se deja el material durante 20 a 30 minutos. Consta de una caldera de cobre, sostenida por una camisa externa metlica, que en la parte inferior recibe calor por combustin de gas o por una resistencia elctrica. La caldera se cierra en la parte superior por una tapa de bronce sujetada por bulones, mariposas o charnelas. Esta tapa posee tres orificios, uno para el manmetro, otro para el escape de vapor en forma de robinete (tambin llamado espita) y el tercero, para una vlvula de seguridad que funciona por contrapeso o a resorte. Funcionamiento y mtodo para esterilizar adecuadamente en Autoclave. Se coloca agua en la caldera, procurando que su nivel no alcance a los objetos que se disponen sobre una rejilla o canasta de metal. Se cierra asegurando la tapa, ajustando los bulones y se da calor, dejando Recorta y pega la imagen de la autoclave

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abierta la vlvula de escape hasta que todo el aire se desaloje y comience la salida de vapor en forma de chorro continuo y abundante. Se cierra la espita de vapor y se espera hasta que llegue a la temperatura adecuada. A partir de all se cuenta el tiempo de esterilizacin, luego del cual se debe esperar al descenso de la temperatura para abrir la espita de purga y la tapa de la autoclave nuevamente. Atmsferas 0 1/2 1 1 1/2 2 Grados Centgrados ( C ) 100 112 120 128 135

Este proceso de esterilizacin es con el que obtiene mejores resultados en microbiologa. El vapor de agua a fuerte presin acta a mayores temperaturas. Tiempos de esterilizacin en autoclave. Generalmente los datos presin y temperatura usados en la esterilizacin son fijos, y el nico factor que se vara es el tiempo. Los materiales necesitan diferentes tiempos de esterilizacin dependiendo de su textura, porosidad, y otras caractersticas propias de cada material. Algunos materiales como el hule, necesitan poco tiempo, mientras otros como el metal quirrgico necesitan ms. Los siguientes datos han sido tomados para una temperatura de esterilizacin de 250F (121C) a 15-20 PSI. Material Guantes de Caucho (Hule) Sondas (base tejida) Sondas (ltex) Frascos de Vidrio, Cristalera en General Agua en frascos Jeringas de Vidrio Bandeja Equipo de transfusin Paquetes de maternidad Ropa Torundas Paquete quirrgico Instrumental de acero inoxidable Recomendaciones Tiempo (min) 15 minutos 15 minutos 15 minutos 20 minutos 20 minutos 20 minutos 30 minutos 30 minutos 30 minutos 30 minutos 30 minutos 45 minutos 45 minutos

1. Cuando se esteriliza se deben hacer paquetes bien cerrados y bien ordenados, para que haya buena penetracin de vapor en el material. 2. No incluir dentro del mismo paquete material con diferentes tiempos de esterilizacin. 3. El mtodo utilizado para envolver los paquetes deber garantizar el mantenimiento de las condiciones de esterilidad de los materiales durante su almacenamiento. Como Cargar el Autoclave

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a) Se deben acomodar los bultos o paquetes de tal forma que haya una libre circulacin de vapor entre ellos (no tratar de llenar el autoclave hasta sobrecargarlo). b) Colocar de lado las botellas, frascos y cualquier clase de recipiente no poroso de material seco. Esto permite un pronto desplazamiento del aire y un rpido contacto del vapor con las superficies de las vasijas y su contenido. Tambin facilita el secado. c) Esterilizar los lquidos separndolos de otros materiales. d) Cuando se esterilizan lquidos, debe hacerse con los recipientes destapados. e) La cristalera deber esterilizarse colocando los recipientes boca abajo u horizontales (nunca con la boca hacia arriba). Tyndalizacin. Esterilizacin por accin discontinua del vapor de agua, se basa en el principio de Tyndall Las bacterias que resisten una sesin de calefaccin, hecha en determinadas condiciones, pueden ser destruidas cuando la misma operacin se repite con intervalos separados y en varias sesiones. Se efecta por medio de la autoclave de Chamberland, dejando abierta la vlvula de escape, o sea funcionando a la presin normal. Puede tambin realizarse a temperaturas ms bajas, 56C u 80C para evitar la descomposicin de las sustancias a esterilizar, por las temperaturas elevadas. Ventajas del calor hmedo Rpido calentamiento y penetracin Destruccin de bacterias y esporas en corto tiempo No deja residuos txicos Hay un bajo deterioro del material expuesto Econmico Desventajas No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metlicos. Ebullicin. Durante mucho tiempo se hirvieron los utensilios y materiales quirrgicos o jeringas hipodrmicas para esterilizarlas. El agua a 100C no garantiza una adecuada esterilizacin, no obstante posee la propiedad de desprender las colonias o los microorganismos y destruir aquellos que son susceptibles a sta temperatura. Un claro ejemplo de ello fue el sistema utilizado hasta hace pocos aos para esterilizar jeringas de vidrio y agujas hipodrmicas de nquel con embocadura de bronce en el mejor de los casos, platino, hirvindolos en agua. Filtracin. Este procedimiento es aplicable a la esterilizacin de lquidos y gases, especialmente los primeros. Cuando el lquido a filtrar no puede resistir, sin descomponerse, la accin del calor, se aplica la tcnica de filtracin, la que puede efectuarse mediante presin o aspiracin. Se basa en el pasaje de lquidos a travs de sustancias porosas que detienen a los microbios. Los antiguos COBACHSLP/ACADEMIA_SUBMOD 7

filtros se fabricaban en forma de bujas que son cilindros huecos abiertos por una extremidad y cerrados por otra, de paredes de espesor variable. La filtracin se reconoci como tcnica de esterilizacin a partir de las observaciones de Koch en 1893, con la epidemia de clera y la presencia del vibrin en el agua. Esta observacin fue ilustrada en la epidemia Hamburgo-Altona en 1892. El agua del ro Elba, que contena Vibrio como pasaba a las caeras de agua de Hamburgo. Solo aparecieron unos pocos casos de clera en el suburbio de Altona, donde el agua del Elba era filtrada por arenas (ntese el plural, refirindose tal vez a varios grados de arena), antes de su distribucin. Los filtros de porcelana se llaman de Chamberland y los de tier ras infusorias calcinadas se denominan Berkefield En la actualidad se usan membranas filtrantes con poros de un tamao determinado. El tamao del poro depender del uso al que se va a someter la muestra. Los filtros que se utilizan no retienen virus ni micoplasmas, estos ltimos estn en el lmite de separacin segn el dimetro de poro que se utilice. La filtracin se utiliza para emulsiones oleosas o soluciones termolbiles. Su usa para esterilizar aceites, algunos tipos de pomadas, soluciones oftlmicas, soluciones intravenosas, drogas diagnsticas, radiofrmacos, medios para cultivos celulares, y soluciones de antibiticos y vitaminas.

Comenta en plenaria la siguiente informacin Historia de la microbiologa Se ha definido a menudo la microbiologa como la ciencia que estudia los organismos y agentes que son demasiado pequeos para poder ser observados por el ojo humano a simple vista, es decir, la ciencia que estudia los microorganismos: virus, bacterias, muchas algas y hongos y los protozoos. Antes de que se observaran los microorganismos, algunos investigadores ya sospecharon de su existencia y responsabilidad en el desarrollo de algunas enfermedades. El filsofo romano Lucrecio (98-55 a.C.) y el mdico Girolamo Fracastoro (1478-1553) propusieron que las enfermedades estaban causadas por criaturas vivas invisibles. La primera persona que observ y describi microorganismos rigurosamente fue el microscopista aficionado Antony van Leeuwenhoek (1632-1723). Este comerciante holands pasaba la mayor parte de su tiempo libre construyendo microscopios sencillos, compuestos por lentes de vidrio biconvexas, que colocaba entre dos placas de COBACHSLP/ACADEMIA_SUBMOD 7 metal. Sus microscopios podan aumentar de 50 a 300 veces el tamao del contenido de sus muestras. Desde 1673, Leeuwenhoek remiti cartas a la Royal Society de Londres, describiendo con detalle sus descubrimientos. A partir de ellas queda claro que lo que observ fueron tanto bacterias como protozoos. Desde haca muchos aos, la gente crea en la generacin espontnea, es decir, los organismos vivos podan originarse a partir de materia no viva. Pero el mdico italiano Francesco Redi (1626-1697) intent rebatirlo llevando a cabo una serie de experimentos muy curiosos. Coloc en tres recipientes carne putrefacta: uno descubierto; otro, cubierto con papel, y el tercero, cubierto con una gasa fina para evitar que pasasen las moscas. Estas depositaron los huevos en la carne descubierta y en el recipiente cubierto por la gasa y se desarrollaron gusanos. Sin embargo, no aparecieron en el trozo de carne cubierto con papel. Concluy que la generacin de gusanos a partir de la carne putrefacta se produjo con para presencia de huevos de moscas, pero la carne no gener los gusanos espontneamente.

El descubrimiento de los microorganismos por Leeuwenhoek reanud la controversia sobre la generacin espontnea. Algunos investigadores propusieron que los microorganismos se desarrollaban de esta forma pero los organismos mayores no. Durante muchos aos continuaron los intentos para explicar este fenmeno. En 1748, el sacerdote ingls John Needham (1713-1781) public los resultados de sus experimentos, en los que hirvi caldo de cordero y luego cerr los matraces donde lo guard. Al cabo de un tiempo, muchos de los matraces estaban turbios y contenan microorganismos. Unos aos ms tarde, el tambin sacerdote y naturalista italiano Lazzaro Spallanzani

hermticamente cerrados). Propuso que era el aire el que transportaba los grmenes al medio de cultivo. Los partidarios de la generacin espontnea continuaron sosteniendo que el calentamiento del aire en los matraces cerrados hermticamente destrua su capacidad para mantener la vida. Pero fue Louis Pasteur (1822-1895) el que zanj definitivamente este asunto. Pasteur filtr primero aire a travs de un algodn y observ que haban quedado atrapados objetos semejantes a esporas de plantas. Si se colocaba este trozo de algodn en un medio estril, se produca crecimiento bacteriano. Despus, decidi introducir soluciones de nutrientes en matraces y calent sus cuellos dndoles formas curvadas

(1729-1799) mejor el diseo del experimento anterior cerrando primero hermticamente matraces de vidrio con agua y semillas. Si estos matraces se introducan en agua hirviendo durante tres cuartos de hora, no se produca crecimiento microbiano (siempre que permanecieran COBACHSLP/ACADEMIA_SUBMOD 7

de manera que quedaran abiertos a la atmsfera. Luego hirvi las soluciones unos minutos y las dejo enfriar. No se produjo crecimiento, aunque los matraces continuaban abiertos, y Pasteur sealo que esto haba ocurrido porque el polvo y los grmenes haban quedado atrapados en las

paredes de los cuellos curvados. Si se rompan los cuellos, comenzaba el crecimiento inmediatamente. Con este experimento, Pasteur logr dos objetivos. El primero fue zanjar de una vez por todas el asunto de la generacin espontnea. El segundo, demostrar cmo mantener las soluciones estriles. Tras la visualizacin del mundo microscpico de Leeuwenhoek y la eliminacin de toda duda sobre la generacin espontnea por parte de Pasteur, lo que todava no estaba claro era el papel de los microorganismos en el desarrollo de las enfermedades. Aunque Girolamo Fracastoro (1478-1553) y otros mdicos e investigadores haban sugerido que organismos invisibles ocasionaban las enfermedades, la mayora todava pensaban que stas se deban a fuerzas sobrenaturales, vapores venenosos o desequilibrios de los humores que formaban parte del cuerpo humano (sangre, flema, bilis amarilla -clera- y negra -melancola-). El apoyo a la teora de los microorganismos como causa de las enfermedades comenz a aumentar durante el siglo XIX. Agostino Bassi (1773-1856, derecha) demostr que una enfermedad del gusano de seda estaba causada por una infeccin mictica. En 1845, M. J. Berkeley demostr que la roya de la patata de Irlanda estaba causada por un hongo. El gobierno francs encarg a Pasteur la investigacin de la enfermedad de la pebrina del gusano de seda que estaba arruinando a la industria de la seda. Tras varios aos de trabajo, demostr que la enfermedad estaba causada por un protozoo parsito. El cirujano ingls Joseph Lister (1827-1912) aport pruebas indirectas sobre la idea de que los microorganismos eran agentes de enfermedades humanas, lo hizo a travs de estudios sobre la prevencin de infecciones en las heridas. Desarroll un mtodo de ciruga antisptica para as evitar que los microorganismos entrasen por las heridas: los instrumentos quirrgicos se esterilizaban con calor y se trataban los vendajes y el COBACHSLP/ACADEMIA_SUBMOD 7

campo quirrgico con fenol (un tipo de alcohol). Este mtodo tuvo resultados muy satisfactorios y transform el mundo de la ciruga tras su publicacin en 1867. El fenol se encargaba de destruir las bacterias y evitaba infecciones en las heridas. Pero la primera demostracin directa del papel de las bacterias como agentes causantes de enfermedades se debi a la investigacin del carbunco por parte del mdico alemn Robert Koch (1843-1910). Para lograr establecer una relacin entre el Bacillus anthracis y el carbunco, Koch inyecto material de animales enfermos a ratones sanos que enfermaron. Ha partir de ah, Koch escribi sus postulados: El microrganismo causante de la enfermedad debe estar presente en los organismos enfermos, pero ausente en los organismos sanos. Hay que aislar y desarrollar en cultivo puro al microrganismo sospechoso. Al inocular el microrganismo aislado en un husped sano, se debe desarrollar la misma enfermedad. El mismo microrganismo debe aislarse de nuevo a partir del husped enfermo. La demostracin de Koch tambin fue confirmada, de forma independiente, por Pasteur. Observ que, tras enterrar animales muertos, las esporas del carbunco sobrevivan y eran transportadas a la superficie por los gusanos de tierra. Una vez all, podan ser ingeridas por animales sanos que enfermaban. Durante las investigaciones de Koch sobre las enfermedades, se hizo necesario aislar los agentes patgenos bacterianos sospechosos. Fannie Eilshemius (1850-1934), esposa de Walter Hesse (1846-1911), uno de los ayudantes de Koch, propuso una solucin. Si se utilizaba agar como agente solidificante sobre el que crecieran las bacterias, estas no lo podan digerir y adems no se funda hasta alcanzar los 100 0C. Otro de los ayudantes de Koch, Richard Petri (1852-1921), desarroll la placa que lleva su apellido como recipiente para los medios de

cultivo slidos. Estos dos avances permitieron el aislamiento de cultivos puros que slo contenan un tipo de bacteria y Koch tambin desarroll medios adecuados para cultivar bacterias aisladas del cuerpo: extractos de carne, productos proteicos, el caldo y el agar nutritivo. En 1882, Koch emple estas tcnicas para aislar el bacilo responsable de la tuberculosis. A continuacin, sigui una poca dorada (de entre 30 y 40 aos) en la que se consiguieron aislar los principales agentes patgenos bacterianos. Paralelamente, Charles Chamberland (18511908), uno de los colaboradores de Pasteur, desarroll un filtro bacteriano de porcelana con el que logr descubrir los virus y su papel en las enfermedades. El primer virus patgeno que se estudi fue el responsable de la enfermedad del mosaico del tabaco. Tambin durante estos aos, se progres en el estudio de la resistencia de los animales a las enfermedades y en el desarrollo de tcnicas para proteger a los seres humanos y animales de ganadera frente a los agentes patgenos. Pasteur y mile Roux (18531933), durante sus estudios sobre el clera en los pollos, observaron que, incubando sus cultivos durante intervalos de tiempo largos, las bacterias perdan su capacidad para causar la enfermedad, se atenuaban. Si estas bacterias atenuadas se inyectaban en aves sanas, permanecan en ese estado y adems desarrollaban la capacidad de resistir a la Elabora una lista de datos importantes

estimularon el progreso en el conocimiento de todas las reas de la bacteriologa. enfermedad. Pasteur denomin a este tipo de cultivo atenuado vacuna, en honor a Edward Jenner (1749-1823), que muchos aos antes haba utilizado esta tcnica sin saberlo para proteger a personas frente a la viruela. Tras esto, Pasteur prepar una vacuna frente a la rabia pero de un modo algo distinto. Atenu el agente patgeno en otro husped no natural para l, el conejo. Cuando los conejos murieron, extrajo y sec el cerebro y la mdula espinal. Mientras estaba realizando este estudio, le llevaron a un nio de nueve aos que haba sido mordido por un perro con rabia. Como la muerte del muchacho estaba asegurada al no haber un tratamiento, decidi intentar la vacunacin. El nio recibi 13 inyecciones en 10 das con preparados cada vez ms atenuados y sobrevivi. En agradecimiento a Pasteur por el desarrollo de estos sistemas de vacunacin, personas de todo el mundo contribuyeron para construir el Instituto Pasteur en Pars. Una de sus funciones iniciales fue la produccin de vacunas. Fuente: http://cienciasstecnologia.blogspot.com/201 2/01/historia-de-la-microbiologia-iv.htm

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Existen tres tipos bsicos de filtros 1. Filtros profundos o Filtros de profundidad. Consisten de un material fibroso o granular prensado, plegado, activado, o pegado dentro de los canales de flujo. En este tipo de filtros la retencin de las partculas se produce por una combinacin de absorcin y de retencin mecnica en la matriz. 2. Membranas filtrantes. Tienen una estructura continua, y la retencin se debe principalmente al tamao de la partcula. Partculas ms pequeas al tamao del poro quedan retenidas en la matriz del filtro debido a efectos electrostticos. La firma Millipore ha desarrollado membranas de 0.45 cm y 14 cm de dimetro, con un soporte de papel siliconado para su proteccin debido a la fragilidad de la misma, la que debe ser monada en un soporte estril y que permita el ingreso del lquido a esterilizar a presin. 3. Filtros de huella de nucleacin (Ncleoporo). Son pelculas muy delgadas de policarbonato que son perforadas por un tratamiento conjunto con radiacin y sustancias qumicas. Son filtros con orificios muy regulares que atraviesan la membrana verticalmente. Funcionan como tamices, evitando el paso de toda partcula con un tamao mayor al del poro. Elabora una caricatura de los microbios.

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B) Mtodos qumicos Estos mtodos provocan la perdida de viabilidad de los microorganismos. En comparacin con los procedimientos fsicos, estos mtodos tienen una importancia secundaria. Los antispticos son considerados venenos protoplasmticos que, al actuar sobre los grmenes, los destruyen. Algunos de ellos ejercen su accin nociva sobre todas las clulas, por lo cual se les considera venenos generales, por el contrario otros actan sobre algunas especies bacterianas, mostrndose como venenos especficos. Este mtodo es ptimo para la antisepsia de las manos del operador, de locales, de mesas de trabajo, de jaulas de animales, y para destruir grmenes que puedan caer en lugares de trabajo. Agentes qumicos Antispticos: Alcoholes, iodo, agentes catinicos y anfteros, rgano mercuriales, clorados. Desinfectantes y/o esterilizantes: Cloro y compuestos clorados, aldehdos, xido de etileno, compuestos fenlicos, cidos y lcalis. Alcohol de 70 a 95%. Produce desnaturalizacin de las protenas bacterianas y puede emplearse como desinfectante cutneo. Yodo y cloro. Estos halgenos son buenos desinfectantes por sus poderes oxidantes. Cloroformo. Puede usarse al 0.25%, se puede eliminar por calentamiento a 560C. Es usado principalmente en la preservacin y esterilizacin del suero que se emple en los medios y para preservar los medios de cultivo en general. xido de etileno. Este gas diluido con algunas sustancias inertes como bixido de carbono, es un buen esterilizador de material quirrgico, en especial del plstico que no puede esterilizarse al calor. Si su concentracin pasa de 10 % en el aire, es explosivo. Azida de sodio al 1 por 1 000, usada como preservador de suelos. La desventaja es que una vez aadida contina su accin. Glicerol 50%. Destruye las bacterias pero no los virus y por lo tanto tiene aplicacin especial en la preservacin de vacunas. Jabones y detergentes. Son agente tenso activo Mertiolato al 1 por 10 000 es usado como preservador en sueros. Precloruro de mercurio al 1 por 1000, rara vez se utiliza, salvo como desinfectante de las manos. Fenol y cresol (lisol 3%). Son usados para descontaminacin, desnaturalizan las protenas bacterianas Aldehdos. Son agentes que actan sobre las protenas, provocando una modificacin irreversible en enzimas e inhiben la actividad enzimtica. Estos compuestos destruyen las esporas. Por ejemplo el glutaraldehdo, el mtodo consiste en preparar una solucin alcalina al 2% y sumergir

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el material a esterilizar de 20 a 30 minutos, y luego un enjuague de 10 minutos. Este mtodo tiene la ventaja de ser rpido y ser el nico esterilizante efectivo fro. Puede esterilizar plstico, goma, vidrio y metal. Formaldehdo. Se utilizan las pastillas de paraformaldehdo, las cuales pueden disponerse en el fondo de una caja envueltas en gasa o algodn, que despus pueden ser expuestos al calor para una rpida esterilizacin (accin del gas formaldehdo). Tambin pueden ser usadas en Estufas de Formol, llamadas tambin de formalina, que son cajas de doble fondo, en cuya base se colocan las pastillas y se calienta hasta los 60 C y pueden esterilizar materiales de ltex, goma y plsticos. Las pastillas de formalina a temperatura ambiente esterilizan en 36 hs. Estufas de esterilizacin por oxido de etileno. Destruye todos los organismos y microorganismos conocidos, incluso esporas y virus. Esteriliza sin deterioro artculos de goma, plstico, metal, madera, lana, piel, papel, productos farmacuticos. Esterilizacin con embalajes. A este gas son permeables sustancias como polietileno, nylon, celofn. El tiempo de esterilizacin que requiere el material depende de mltiples variables, el vaco que se produce, la humedad, la concentracin del gas y la temperatura, es decir que reduciendo la temperatura aumenta el tiempo de exposicin requerido. El gas se adquiere en botellas metlicas o cartuchos que se vaporizan, cambian de lquido a gas a 10C. Todos los artculos debern airearse por 6 hs. despus de una esterilizacin.

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El Oxido de etileno es un agente que se une a compuestos con hidrgenos lbiles como los que tienen grupos carboxilos, amino, sulfhidrilos, hidroxilos. Es utilizado en la esterilizacin gaseosa, generalmente en la industria farmacutica. Destruye todos los microorganismos incluso virus. Sirve para esterilizar material termo sensibles como el descartable (goma, plstico, papel), equipos electrnicos, bombas cardiorrespiratorias, metal. Es muy peligroso por ser altamente inflamable y explosivo, y adems cancergeno. Neutralizacin. La cristalera nueva puede haberse contaminado en los paquetes con las esporas resistentes, y debe hervirse con detergentes; en seguida se enjuaga cuidadosamente con agua corriente y luego con agua destilada antes de esterilizarla. La cristalera de mala calidad, produce lcalis libres y debe colocarse en HCl al 1% durante algunas horas antes de enjuagarla y secarla. El PH de los medios es un factor importante en el crecimiento de las bacterias. Por lo tanto es fundamental asegurarse de que la cristalera por utilizarse sea neutra, y evitar toda posible contaminacin por produccin de lcalis. Los frascos de tapn de rosca de algunos fabricantes reciben un tratamiento neutralizador en la fbrica y en estos casos, no es necesario otro tratamiento. Equipo estril desechable de plstico. Este equipo existe en el comercio y est hecho de poliestireno biolgicamente inerte. Esterilizado en la fbrica, se presenta bajo diversas formas: cajas de Petri, tubos de ensayo y pipetas. Este equipo evita la preparacin inicial, y la descontaminacin es mucho ms simple. Descontaminacin. Despus de terminar el estudio, toda la cristalera contaminada debe dejarse en lisol al 3% o en hipoclorito de sodio al 1%. No slo se destruyen as lentamente los microrganismos, sino que tambin est protegido el tcnico, pues los microrganismos debajo de una superficie lquida tienen menos probabilidades de pasar a la atmsfera o al piso. Si se sospecha la presencia de hongos de micosis profundas, se requiere un cuidado especial pues estos microrganismos resisten mucho a la descontaminacin. La cristalera se pasa a la autoclave, y luego se hierve con un buen detergente. Radiacin. Su accin depende del tipo de radiacin, el tiempo de exposicin y la dosis. Radiaciones Ionizantes. Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los cidos nucleicos, estructuras proteicas y lipdicas, y componentes esenciales para la viabilidad de los microorganismos. Tienen gran penetrabilidad y se las utiliza para esterilizar materiales termolbiles (termo sensible) como jeringas descartables y sondas. Se utilizan a escala industrial por sus costos. Rayos Ultravioleta. Afectan a las molculas de DNA de los microorganismos. Son escasamente penetrantes y se utilizan para superficies, se utilizan para la esterilizacin en quirfanos. Rayos Gamma. Su empleo esta basado en los conocimientos sobre la energa atmica. Este tipo de esterilizacin se aplica a productos o materiales termolbiles y de gran importancia en el campo industrial. Puede esterilizar antibiticos, vacunas y alimentos

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Elabora un cuadro sinptico de los mtodos de esterilizacin

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CONTROL DE CALIDAD
Los programas de control de calidad en el laboratorio de Micologa tienen como misin asegurar que la informacin generada por el laboratorio sea precisa, fiable y reproducible. La consecucin de estos objetivos se logra valorando la calidad de las muestras clnicas recibidas, controlando la realizacin de los procedimientos diagnsticos, los reactivos, medios e instrumentos utilizados, as como la formacin y conocimientos del personal del laboratorio. Tambin es necesario revisar y validar los resultados obtenidos. El inters global podra apartarse un poco de detalles rigurosos, incluso puntillosos, de los controles de calidad a favor de una evaluacin ms amplia de la certificacin de calidad en la atencin del paciente. Puede ser ms importante asegurarse que los informes lleguen a tiempo al mdico peticionario y sirvan como gua esencial para la atencin del paciente que preocuparse, por ejemplo, que se controle una tincin cotidiana de azul de lactofenol. La precisin y la utilidad clnica de un informe elaborado por un laboratorio de Micologa dependen de una serie de factores: Calidad de la muestra clnica. Validez del mtodo de procesamiento. La forma en que se realiza este mtodo de procesamiento. Reactivos, medios, instrumentos y grado de preparacin del personal. Realizacin del informe final de los resultados obtenidos. Un programa de Control de Calidad monitoriza continuamente todos estos factores e identifica las posibles reas de mejora. Recogida y transporte de muestras. El control de calidad en esta fase hace referencia a normas generales sobre la recogida de muestras de un paciente. Se deben realizar pruebas de cribado de las muestras recibidas como, por ejemplo, contar las clulas epiteliales en una muestra respiratoria. Como regla no se deben procesar muestras inaceptables a no ser que no puedan ser recogidas de nuevo. En este supuesto se debe hacer constar la calidad de la muestra en el informe. Nunca se debern procesar las siguientes muestras: Torundas reutilizadas. Lquido cefalorraqudeo en cantidad menor a 0.3 ml para la deteccin de antgeno criptoccico. Suero hemolizado o lipmico para la realizacin de tcnicas serolgicas fngicas. Normas de procedimientos estandarizados. Las normas de procedimientos estandarizados deben basarse en trabajos previamente publicados en libros, revistas y manuales reconocidos, que deben ser citados y estar disponibles siempre durante el horario de trabajo. Las normas deben incluir las fases del procedimiento, los lmites de tolerancia, los criterios de aceptabilidad de las muestras clnicas para ese procedimiento, la preparacin de reactivos, la forma de realizar los informes y los controles de calidad necesarios y recomendados. Deben ser revisadas anualmente, consignndose y fechndose los cambios realizados en estas revisiones, as como la persona responsable de dichos cambios. Como norma general, hay que realizar los controles de calidad y mantenimiento con la frecuencia que sea necesaria para garantizar el correcto funcionamiento del instrumental, siguiendo normalmente las indicaciones del fabricante. Se recomiendan los controles propios de cualquier laboratorio de Microbiologa. COBACHSLP/ACADEMIA_SUBMOD 7

Equipo Refrigeradores Congeladores Estufas

Control de calidad de los equipos de uso comn en Micologa Procedimiento Periodicidad Registro de temperatura* Diario o continuo Registro de temperatura* Diario o continuo Registro de temperatura* Diario o continuo

Baos de agua Autoclaves pHmetros Centrfugas Campana de seguridad

Registro de temperatura* Prueba con la tira de esporas Soluciones calibradoras de pH Revisin de revoluciones por minuto

Diario Semanalmente Con cada uso Mensualmente Cada 3-6 meses

Medicin de la velocidad de aire a travs de la apertura frontal * Cada termmetro debe ser calibrado con un termmetro patrn.

Lmites de tolerancia 2 C a 8 C 8 C a 20 C 60 C a 80 C 45 C 1 C 35.5 C 1 C 30 C 1 C 36 C a 38 C 55 C a 57 C Ausencia de crecimiento 0.1 unidades de pH del estndar Dentro del 5% del ajuste del mando. 1.52 m cbicos de aire/min. 0,152 m cbicos /min

El material de vidrio reutilizable debe ser limpiado y esterilizado, almacenndose cubierto con papel de aluminio etiquetado con la fecha de esterilizacin. Hay que utilizarlo antes de tres semanas. Se deben conservar todos los documentos e informes relativos a un equipo durante toda la vida til del mismo. Medios elaborados en el propio laboratorio. Como control de esterilidad, se debe probar un 5% (escogidos al azar) de cada tanda de medios preparados en el propio laboratorio. Se incuba la mitad del 5% a 35 C y la otra mitad a 25 C durante 72 h, inspeccionndolos diariamente. Slo es aceptable el lote elaborado si el porcentaje encontrado de contaminaciones entre los medios incubados es inferior al 5%. Los lotes de medios se deben etiquetar con el nmero de lote, fecha de caducidad, mtodo de esterilizacin utilizado y la cantidad de medio realizado en ese lote. Medios comerciales. Los medios adquiridos comercialmente deben ser observados para comprobar el color, el grado de sequedad y presencia de contaminaciones, procediendo como en el caso anterior a realizar controles de esterilidad. Estos medios comerciales estn exentos de comprobar su capacidad de proporcionar los resultados esperados, siempre que los fabricantes hagan constar en la etiqueta que cumplen las normas de calidad del NCCLS (documento M22-A). Los medios de cultivo elaborados en el propio laboratorio y los comercializados que no cumplan las normas M22-A debern ser comprobados utilizando cepas de control de calidad con morfologa, fisiologa y propiedades bioqumicas conocidas. Tinciones y reactivos. Todas las soluciones de tincin y los diferentes reactivos debern estar etiquetadas con su nombre, el nmero de lote, la fecha de caducidad y las condiciones de almacenamiento. Los productos comerciales debern ser fechados a la recepcin y en el momento de la apertura para su uso. Las soluciones preparadas en el laboratorio debern tener una etiqueta con la fecha de preparacin y el nombre de la persona que ha elaborado el colorante. Los procedimientos de preparacin de los colorantes y realizacin de las tinciones debern estar escritos y disponibles mientras est abierto el laboratorio.

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Calcoflor Candida albicans . . . . . . . . . . . . . . . . . Color azul brillante o verde manzana Control negativo. . . . . . . . . . . . . . . . . . KOH mezclado con el blanco de calcoflor Comprobar cada vez que se use Tinta China Cryptococcus albidus. . . . . . . . . . . . . . Presencia de cpsula hialina Comprobar cada vez que se use y que la tinta china no est contaminada Hidrxido Potsico. . . . . . . . . . . . . . Combinar el reactivo antes de su uso utilizando una muestra de esputo para confirmar que se disuelve y que est libre de bacterias y de elementos fngicos. Lactofenol-azul de algodn Penicillium spp. . . . . . . . . . . . . . . . . . . Se observar la pared celular de color azul intenso Comprobar tambin la esterilidad del colorante. Elaboracin de informes. El proceso de identificacin de un agente causal de una infeccin fngica debe finalizar con un informe elaborado segn normas de calidad previamente establecidas entre el Laboratorio y los distintos Servicios peticionarios. Estas normas de calidad deben incluir los siguientes puntos: El Servicio y el mdico peticionarios deben quedar indicados de una manera clara e inequvoca, as como el diagnstico de sospecha principal y las caractersticas clnicas y evolutivas necesarias para una investigacin etiolgica precisa. Debe habilitarse una forma rpida de informe preliminar para cuando la relevancia del diagnstico lo requiera. La forma habitual es la telefnica, que nunca debe sustituir al formato en papel posterior. En este informe definitivo debe indicarse que hubo un informe preliminar telefnico, quin lo dio, quin lo recibi y cundo fue dado. Se deben sealar de forma conveniente los resultados inusuales, para que puedan destacar del resto. El laboratorio debe suministrar informacin relativa a los intervalos de valores normales o interpretar los valores encontrados en trminos acordados (sensible, resistente). Tambin, en su caso, debe hacer referencia a las limitaciones de las tcnicas, en caso de existir. Si una identificacin, total o parcial, o una determinacin de sensibilidad no se realiza en el propio laboratorio, se debe consignar en el informe definitivo dnde se ha enviado para el diagnstico final y adjuntar el informe del laboratorio

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Elabora el esquema PNI del tema Control de calidad POSITIVO NEGATIVO INTERESANTE

Procedimientos estandarizados 1. Derramamientos. La persona que va a intervenir en el derramamiento deber portar bata, guantes y lentes. Adems, utilizar un germicida que debe colocar alrededor del sitio en cuestin y toallas de papel empapadas en el rea derramada 20 minutos cuando menos para asegurar su accin. Los materiales derramados se juntan y se destinan a la autoclave. 2. Descontaminacin de desechos infecciosos. Las cajas de Petri, tubos de cultivo, instrumentos, vidriera y lquidos corporales pueden descontaminarse en autoclave a 121C, el tiempo vara segn el tipo de desecho, cantidad de agua y tipo de autoclave. 3. Cuidado de la superficie de trabajo. Se recomienda que se descontamine las superficies de trabajo antes y despus de trabajar. El amonio y alcohol al 70% son apropiados para agentes infecciosos de bajo riesgo, se lleva a cabo atomizando el rea, se deja actuar por lo menos 3 minutos y despus se pasa una toalla de papel. 4. Lavado de las manos. El protocolo es el siguiente: a) Abrir el grifo del agua y se mojan las manos. b) Colocar el jabn en las manos. c) Extender el jabn hasta entre los dedos. COBACHSLP/ACADEMIA_SUBMOD 7

d) Frotar vigorosamente durante 10 minutos. e) Enjuagar comenzando de las muecas hacia los dedos. f) Secar las manos con papel y cerrar el grifo usando el papel con el que se sec.

A qu conclusin llegaste? ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________

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Elabora un cuadro sinptico de la informacin anterior.

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SEGURIDAD, REGLAS Y RECOMENDACIONES DE LABORATORIO


Es obligatorio el uso de la bata dentro del laboratorio. No comas, bebas, fumes o guardes alimentos o bebidas dentro del laboratorio. Lava tus manos despus de cada sesin de laboratorio. Como los jabones en barra llegan a contaminarse, es recomendable que se usen jabones lquidos. S tus manos llegan a contaminarse con microorganismos, lvalas inmediatamente, no esperes hasta que termine la sesin. Todos los medios que se desechan no deben de lavarse, si no que primero deben de ser autoclaveados. No realices experimentos no autorizados por el personal correspondiente (tcnico). No utilices equipo sin las instrucciones correspondientes. Revisa cada prctica un da antes de realizarla. Trata de ser puntual para una realizacin total y convincente de la prctica correspondiente a cada sesin. Procura traer el material que se te pide para la realizacin de alguna prctica ya que no es posible a veces proporcionar todo lo necesario. No olvides limpiar los lentes de los microscopios y lupas que utilices y retirar las preparaciones que utilizaste al terminar la sesin de laboratorio.

MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD
NUNCA oler un cultivo de un hongo. Los hongos difieren de las bacterias en que muchos de ellos producen gran nmero de espora, que pueden diseminarse en el aire y ser inhaladas. No destapar las cajas y tubos que contienen colonias de hongos por fuera de la cmara de seguridad. No comer en el laboratorio. Usar guantes para la toma y el procesamiento de las muestras. Desinfectar el material contaminado con la muestra del paciente o el material proveniente de medios de cultivo como tubos, guantes, puntas o lminas, con hipoclorito de sodio al 0.5% u otro desinfectante antes de ser lavado o eliminado.

DESINFECCIN DEL REA DE TRABAJO


Elimina los restos de polvo. Lava con abundante agua y un detergente acuoso Los desinfectantes ms tiles son: hipoclorito de sodio, alcoholes y los yodoformos.

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Elabora una historieta donde se exprese la importancia de aplicar las medidas de seguridad en el laboratorio

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Renanse en el laboratorio elaborar el esquema QQQ Qu veo? Qu no veo? Qu infiero?

Elabora tu propuesta para mejorar el ambiente de aprendizaje (laboratorio)

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Antes de comenzar el tema de los Hongos y Levaduras, construye el significado del tema en tres momentos basados en una pregunta Respuesta anterior RA (Contesta con tus conocimientos previos) Pregunta P Respuesta posterior RP (Contesta con base al texto)

Cul es la diferencia entre un hongo y una levadura?

Cuntos pasos se llevan a cabo en la reproduccin sexual? Explica un poco.

En cuntos reinos se ubican los hongos y cules son?

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APLICA TCNICAS DE IDENTIFICACIN PARA HONGOS Y LEVADURAS UTILIZANDO MTODOS DE REPRODUCCIN, CRECIMIENTO, TINCIN Y PRUEBAS BIOQUMICAS
HONGOS Y LEVADURAS Los hongos son organismos ampliamente distribuidos en la naturaleza. Se pueden encontrar en el aire, el agua, la tierra y los desechos orgnicos. Abarcan casi 500 000 especies y hay cerca de 100 patgenos para mamferos. Tambin hay fitopatgenos (patgenos de plantas) y entomopatgenos (patgenos de insectos). Los hongos macroscpicos se conocen como setas o championes. Los hongos cumplen un papel beneficioso en el ciclo natural del carbono y en la nutricin de las plantas. Tienen importantes aplicaciones a nivel industrial, como en la produccin de bebidas (vino, cerveza), alimentos (pan, queso) y gran cantidad de productos qumicos, entre ellos los antibiticos. Caractersticas fundamentales Hetertrofos: Se alimentan a travs de la absorcin de materia orgnica preformada como fuente de energa y de carbono. Eucariotas: Poseen ncleo diferenciado con membrana bien organizada. Pared celular: Formada por polisacridos, polipptidos y quitina. La pared es rgida y le impide fagocitar, por lo tanto, desintegran los polmeros que le servirn de nutrientes mediante despolimerasas y posteriormente los absorben. Aerobios estrictos o anaerobios facultativos. No mviles.

Caractersticas nutricionales Ausencia de clorofila: No realizan fotosntesis. Nutricin a partir de materia orgnica ya elaborada. Saprofitos o saprotrofos: Descomponen organismos muertos o sus productos. Parsitos: Obtienen nutrientes de otros organismos vivos u hospederos. o Parsitos patgenos: Cuando ocasiona enfermedad. Simbiosis: Se asocian con otros organismos para nutrirse mutuamente. Por ejemplo, o Lquenes= Hongos + algas o Micorrizas= Hongos + Races de plantas

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@Investiga la frmula qumica de la clorofila y explica brevemente el proceso de la fotosntesis.

fotosntesis.

Clasificacin morfolgica Hongos filamentosos Caractersticas macroscpicas: Crecen formando colonias filamentosas, algodonosas, pulverulentas o aterciopeladas. Presentan pigmentacin de colores vistosos que se pueden apreciar por el revs de la caja de Petri o tubo. Caractersticas microscpicas: Multicelular. Las estructuras caractersticas son: hifa y micelio. Hifa Estructura bsica unicelular, de forma tubular. Pared celular rgida, dimetro de 130 m. Puede ser: septada (con divisiones) o aseptada. Forma: Espiral, raqueta, raz (rizoide), pectiniforme, candelero.

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Micelio Conjunto de hifas. Tiene dos partes: Micelio vegetativo: Encargado de la nutricin. Penetra en el sustrato del medio de cultivo. Micelio reproductor: Contiene estructuras de reproduccin. Parte area.

Hongos no filamentosos: Levaduras Caractersticas macroscpicas: Crecen formando colonias blandas, cremosas, hmedas, sin crecimiento areo. Crecen en condiciones aerobias a 37 C. Las hay de diferentes colores como blanco, crema, rojo o rosado o color oscuro de negro a caf. Caractersticas microscpicas: Son unicelulares, con pared celular y citoplasma. La mayora se reproducen de forma asexual por gemacin (nica o simple) dando origen a los que se conoce como blastoconidios. Algunas levaduras tambin se reproducen de forma asexual por fisin. Presentan formas redondeadas, ovaladas o alargadas, conocidas estas ltimas como cuerpos en cigarro. Tamao 4 - 40 m. Algunas presentan cpsula. Las gemaciones sucesivas de una levadura producen una estructura denominada pseudomicelio. La formacin de tubo germinal en Candiada albicans, levadura de importancia mdica, produce un micelio verdadero, similar al de los hongos filamentosos. Dimorfos o dimrficos Son los hongos que tienen la propiedad de crecer en forma de hongo filamentoso o no filamentoso (levadura) bajo diferentes condiciones ambientales como temperatura, concentracin de CO2 y tipo de nutrientes. Por ejemplo, crecen en forma de hongo filamentoso a 26C (temperatura ambiente) y en forma de no filamentoso (levadura) a 37C. Generalmente, la forma filamentosa es la forma infectante para el humano y el mecanismo de transmisin puede ser por inhalacin o inoculacin directa. Reproduccin Fases de reproduccin Fase sexual: teleomorfo. Fase asexual: anamorfo. Hongos que presentan ambas fases de reproduccin: holomorfos.

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Reproduccin sexual Permite el intercambio gentico, dando como resultado una alta incidencia de recombinacin y la formacin de nuevos genotipos, que permiten la adaptacin de los hongos a diferentes ambientes. La reproduccin sexual consta de tres pasos: Plasmogamia: unin de dos clulas haploides (gametos). Los ncleos se encuentran en un mismo citoplasma. Los gametos se originan a partir de clulas diferenciadas multinucleadas conocidas como gametangios que pueden ser masculinos o femeninos. Cariogamia: fusin de los dos ncleos. Se forma la estructura diploide. Meiosis: se generan clulas con ncleos haploides. Durante la reproduccin sexual se producen esporas que estn relacionadas con un Phylum diferente. Hay cuatro tipos de esporas en la reproduccin sexual: 1. Zygosporas La zigospora se desarrolla al interior de un zigosporangio formado como resultado de la fusin completa de dos gametangios iguales o diferentes.

2. Ascosporas Las ascosporas se encuentran almacenadas en una estructura en forma de saco denominada asco.

3. Basidiosporas Las basidiosporas se desarrollan sobre estructuras especializadas conocidas como basidios.

4. Oosporas En este grupo de hongos la reproduccin sexual incluye la fertilizacin de un vulo grande. Las estructuras de reproduccin sexual incluyen los oogonios y las oosporas. Muchos autores cuestionan su relacin filogentica con los otros hongos y sugieren clasificarlos taxonmicamente aparte. Estos hongos son de importancia en la agricultura como fitopatgenos.

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Taxonoma y clasificacin La clasificacin taxonmica se basa en tres criterios. Criterios morfolgicos Estructuras de reproduccin sexuada Biologa molecular Los taxones o unidades reconocidas de clasificacin que son utilizadas para denominar a los hongos son los siguientes, los cuales se identifican por su terminacin latina, de esta manera: Reino Phylum SubPhylum Clase Sub-Clase Orden Familia Gnero Especie La palabra que designa al reino no tiene una terminacin especfica Terminacin en mycota Terminacin en mycotina Terminacin en mycetes Terminacin en mycetidae Terminacin en ales Terminacin en aceae No tiene terminacin especial No tiene terminacin especial

Los organismos que se conocen como hongos estn ubicados en dos reinos y un grupo. Los dos reinos con sus Phylum principales son los siguientes:

Reproduccin asexual Como se vio anteriormente, las estructuras de reproduccin sexual contribuyen en la clasificacin taxonmica de las especies. Las estructuras de reproduccin asexual se emplean corrientemente para la identificacin de los hongos y son las que generalmente se observan en las muestras COBACHSLP/ACADEMIA_SUBMOD 7

clnicas. La reproduccin asexual no involucra la unin de dos ncleos compatibles y es la responsable de la formacin de un gran nmero de individuos que permiten una buena colonizacin de un ambiente determinado. Los propgalos asexuales o unidad de propagacin formada a partir de la reproduccin asexual, son los encargados de la dispersin del hongo.

Mecanismos de reproduccin asexual 1. Fisin: ocurre por elongacin de la clula a medida que el ncleo se duplica. Al final del proceso se forma un septo en una ubicacin diferente al centro de la clula, lo cual permite la separacin de las dos clulas. Esta forma de reproduccin la presentan algunas levaduras.

2. Gemacin: Es el tipo de reproduccin de la mayora de las levaduras y da como origen a los blastoconidios. Consiste en la aparicin de un brote o yema en la pared, el cual crece hasta alcanzar el tamao de la clula madre, momento en el cual se produce un septo que permite la separacin de las dos clulas. De acuerdo con el lugar de la clula por el cual se produce la gemacin, sta puede ser: unipolar (gemacin por un mismo punto) bipolar (gemacin por dos puntos) multipolar (gemacin por puntos diferentes). De acuerdo con la cantidad de gemaciones, el tipo de gemacin puede ser: simple (una sola clula hija unida a la clula madre) mltiple (varias clulas hijas unidas a la clula madre)

Formacin de esporas asexuales: Es la formacin de propgalos o unidades de propagacin, por segmentacin del protoplasma de una estructura multinucleada especializada que se conoce como esporangio. Los propgalos que se originan en este tipo de reproduccin asexual se denominan esporangiosporas. La hifa especializada que sostiene uno o ms esporangios se denomina esporangiforo, el cual puede ser simple o ramificado. COBACHSLP/ACADEMIA_SUBMOD 7

Las zoosporas son clulas flageladas de reproduccin asexual de los hongos pertenecientes al Phylum Chytridiomycota. Estas esporas se encuentran dentro de una estructura denominada zoosporangio.

3. Conidiacin: Es la produccin de conidios. Los conidios son estructuras de origen mittico (mitospora), no mviles, que no se forman dentro de una estructura en forma de saco, se desprenden fcilmente de la clula que les da origen y no se originan por segmentacin del citoplasma. La coniodiognesis es el proceso de formacin de un conido. Los conidios se desarrollan directamente de la hifa especializada (conidiforo), la cual puede ser simple o ramificada, o a partir de clulas especializadas (clula coniodigena). Un tipo de clula conidigena es la fialide. En ocasiones el conidiforo es la misma clula conidiogna. En algunos hongos los conidios son producidos en estructuras multihifales, conocidas con el nombre de conidioma, de las cuales existen varios tipos como: sinema, esporodoquio, acervulo y picnidio. Los conidios pueden originarse de dos formas: Blstico: en el cual hay un desarrollo inicial marcado del conidio, antes de ser delimitado por un septo. Tlico: en el cual el cambio o aumento de tamao del conidio ocurre despus de ser delimitado por un septo. En el desarrollo tlico se puede producir la fragmentacin de la hifa y este desarrollo se denomina artrico, anteriormente conocido como artrosporas. Si los conidos toman el color azul al hacer una lmina con azul de lactofenol, se denominan hialoconidios. Si toman un color caf o carmelito, es decir, no toman el color azul, se denominan faeoconidios. Si el hongo produce dos tipos de conidios de tamaos diferentes, a los de mayor tamao se les denomina macroconidios y a los de menor tamao microconidos. Tanto los macro como los microconidos pueden estar formados por ms de una clula, pero en general los microconidos solo presentan una clula. Segn el nmero de clulas que presente el conidio se denomina: Ameroconidio. Si tiene una sola clula (sin septo) Didimoconidio. Si tiene dos clulas (un solo septo) Dictioconidio. Si tiene septos transversales y horizontales (Moriforme) Fragmoconidio: si tiene septos horizontales.

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Hay un tipo especial de propgulo, la clamidiospora, de origen tlico, que por su ubicacin a lo largo de la hifa puede ser terminal (si se ubica en la punta) o intercalar (si se ubica en la mitad), puede tener septos o formar cadenas. Caractersticamente posee pared gruesa, citoplasma condensado, no se desprende fcilmente del micelio y funciona como espora de reposo o resistencia.

Diagnstico por laboratorio Los procedimientos de laboratorio dirigidas al diagnstico de las infecciones por hongos, incluyen la demostracin del microrganismo en tejido por microscopa directa y cultivo y el uso de diferentes tcnicas para el estudio de la respuesta inmune. Por ejemplo, la deteccin de anticuerpos especficos contra antgenos fngicos o metabolitos derivados de los hongos, se hace usando diferentes pruebas serolgicas en muestras provenientes de fluidos corporales o tejidos. Todos estos procedimientos ayudan a confirmar un diagnstico clnico y a establecer o descartar una etiologa fngica. Las pruebas de laboratorio tambin permiten seleccionar y evaluar el tratamiento farmacolgico administrado y ofrecen datos sobre la evolucin clnica del paciente, pues permite confirmar la resolucin de la infeccin mictica. El principal objetivo del laboratorio de Micologa debe ser la deteccin y recuperacin rpida y eficiente del hongo a partir de muestras clnicas. Para cumplir este objetivo, el laboratorio debe recibir en forma correcta y oportuna la muestra que va a ser estudiada, acompaada de la informacin clnica del paciente, la cual incluye un resumen de historia clnica. Es importante conocer dentro de los antecedentes el uso de agentes antimicrobianos, de drogas citotxicas o inmunosupresoras, la ocupacin del paciente, la historia de viajes a zonas endmicas, el contactos con animales y la realizacin de exmenes adicionales como rayos X, baciloscopias, citoqumicos, entre otros. Es importante registrar de forma clara la fecha de toma de la muestra y se debe conocerse si existe algn riesgo biolgico asociado con el manejo de la muestra, como infeccin por VIH o hepatitis B. Toma y manejo de muestras clnicas El aislamiento del agente causal en las infecciones micticas depende de la toma de una muestra apropiada para cultivo. Muchas veces la muestra no contiene solamente el agente etiolgico, sino que puede estar contaminada por otros hongos no patgenos, o por bacterias de rpido crecimiento, lo cual inhibe el desarrollo del agente causal que es ms lento. Los diferentes tipos de muestras son las siguientes: Escamas. Se obtienen por raspado cuidadoso de los bordes de la lesin, antes de administrar cualquier tipo de tratamiento. La lesin se limpia con agua estril, se seca y se raspa con un bistur estril y las escamas se recogen en cajas de Petri o directamente en la lmina portaobjetos. Pelos. Se obtienen con depilador con el fin de tomar el bulbo piloso. COBACHSLP/ACADEMIA_SUBMOD 7

Uas. Se obtiene por raspado o cortando la ua, lo cual es mejor ya que permite observar ms fcilmente las estructuras del hongo en una preparacin directa. Secreciones. Esputo, lquido cefalorraqudeo, sangre, mdula sea, pus, material proveniente de puncin de quistes o abscesos. La muestra se recoge en tubos de ensayo, frascos o cajas de Petri estriles para ser transportadas o se puede hacer un frotis con escobilln si la muestra es procesada de inmediato. Si la muestra se debe enviar a lugares distantes, es mejor hacerlo en su respectivo medio de cultivo o fijarla en formol en caso de requerirse estudios histopatolgicos.

Ilustra los diferentes tipos de muestras.

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Mtodos diagnsticos 1. Examen directo. Para examinar escamas, pelos, uas o secreciones se utiliza KOH del 10 al 30% segn el grosor de la muestra, con el fin de aclarar el material y poder observarlo al microscopio. Generalmente se emplea KOH al 10%, al que se le puede agregar tinta para mejorar el contraste. Una vez hecha la preparacin de la lmina, se debe calentar ligeramente al mechero para facilitar la accin del reactivo. Cuando se sospecha infeccin por levaduras se colorea con Gram y Giemsa. Para microorganismos capsulados, se utiliza la tcnica de tinta china diluyendo una gota de la secrecin con una gota de tinta, se cubre con una laminilla y se observa en el microscopio, permitiendo la observacin de la cpsula gruesa del hongo. 2. Aislamiento e identificacin en medios de cultivo. Para la identificacin de las especies se tienen en cuenta tanto las caractersticas macroscpicas como las microscpicas. Es importante el color de la colonia, la textura, la duracin del crecimiento, la temperatura de incubacin que presenta en el medio de cultivo y entre las caractersticas microscpicas se tiene en cuenta la forma de las estructuras tanto de reproduccin sexual como de la asexual, la forma como se origina y la disposicin general de las estructuras. Los hongos pueden crecer en infinidad de materiales, dependiendo de la especie. Los medios de cultivo ms frecuentemente empleados en micologa mdica son: Agar Sabouraud y agar Mycosel; sin embargo, hay un grupo muy grande de medios que se emplean con diferentes propsitos en el laboratorio. As, hay medios para estimular la produccin de pigmento, la reproduccin sexual, para la identificacin mediante pruebas de asimilacin de azcares o para visualizar alguna enzima como por ejemplo el fenol oxidasa o la ureasa. El tiempo y la temperatura de crecimiento de los hongos es variada; en el estudio de los hongos de importancia mdica se incuban los cultivos generalmente a 27 C (temperatura ambiente) y a 37 C (semejante a la temperatura corporal humana). El tiempo de crecimiento puede ser de unos pocos das a semanas. Medios para aislamiento primario Agar glucosado de Sabouraud. Se emplea para el aislamiento primario de la mayora de los hongos patgenos para el hombre, lo mismo que para el mantenimiento de los cultivos. Contiene glucosa como fuente de carbono y peptona como fuente de nitrgeno. Mycosel (Agar glucosado de Sabouraud ms antibiticos). Es un medio selectivo para el aislamiento de hongos patgenos. La cicloheximida inhibe el crecimiento de hongos saprofitos y el cloranfenicol inhibe el crecimiento bacteriano.

Medios de identificacin PDA (agar dextrosa papa). til para estimular la esporulacin, pues es un medio pobre en glucosa. Contiene papa y glucosa. Agar maz (cornmeal agar). Se emplea para diferenciar algunos dermatofitos, por ejemplo T. rubrum produce un pigmento caracterstico lo cual permite diferenciarlo de T. mentagrophytes. Agar arroz, agar urea, agar agua ms hojas de clavel, entre otros.

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3. Identificacin microscpica de los hongos. El estudio microscpico de las colonias de hongos se realiza generalmente con azul de lactofenol; sin embargo, se puede hacer el montaje con agua. Segn el color de las estructuras observadas en el medio de montaje, los hongos pueden dividirse en hialinos y demticeos o pigmentados; los hialinos presentan estructuras incoloras en agua o teidas de azul en el colorante azul de lactofenol y los pigmentados o dematiceos presentan estructuras de color caf a negro tanto en agua como en el colorante azul de lactofenol. Tcnicas empleadas para el estudio microscpico de los hongos Tcnica de dos agujas. Colocar una gota de azul de lactofenol sobre una lmina portaobjeto. Remover con una aguja de diseccin una pequea porcin de la colonia (cerca del centro) y colocarla sobre la gota de colorante. Extender la porcin de colonia, con la ayuda de otra aguja de diseccin, previamente flameada. Colocar una laminilla y examinar la preparacin al microscopio. Es la ms frecuentemente empleada, tanto para observar colonias de lavaduras como de mohos. Tcnica de la cinta pegante. Colocar una gota de azul de lactofenol sobre una lmina. Cortar un pedazo de cinta pegante transparente o diurex (2 a 3 cm) y fijarlo a una aguja de diseccin. Colocar la cinta sobre la superficie de la colonia de moho, haciendo presin. Colocar la cinta sobre la lmina, cubrir la laminilla, observar al microscopio. Es un mtodo rpido para observar microscpicamente los mohos sin alterar el arreglo de sus conidios. Micro cultivos. Esta tcnica permite observar las caractersticas de esporulacin de los hongos sin ninguna alteracin, manteniendo los arreglos caractersticos de cada estructura. Consiste en realizar el cultivo del microrganismo a estudiar en una pequea porcin de medio de cultivo colocado entre lmina y laminilla. La temperatura y el tiempo de incubacin dependen del hongo que se est estudiando. Una vez que se ve microscpicamente la esporulacin se elimina el medio de crecimiento y se montan tanto la lmina como la laminilla (en donde qued pegado el hongo) con azul de lactofenol.

4. Caractersticas bioqumicas. Se utilizan para la identificacin de las levaduras, verificando la actividad fermentativa, proteoltica e indolgena que pueden presentar algunas de ellas. 5. Inoculacin en animales. Se utilizan cobayos, conejos y ratones los cuales se inoculan por va venosa, parenteral o intratesticular segn el hogo que se est estudiando. Despus de algunos das se encontrar la formacin de abscesos con presencia de hongos en los rganos infectaos. 6. Biopsia. Se realiza a partir de muestras tomadas ya sea directamente del paciente o de los animales inoculados. La muestra se puede colorear con PAS, gomori, ndigo carmn. 7. Pruebas cutneas. Permiten demostrar la sensibilidad especfica en pacientes con infeccin mictica activa o que han estado en contacto anteriormente con el COBACHSLP/ACADEMIA_SUBMOD 7

microrganismo. Estas pruebas consisten en inoculaciones intradrmicas de productos de origen mictico (filtrados y polisacridos). Estas pruebas tienen gran utilidad epidemiolgica ms que diagnstica. Algunas de ellas son la sporotriquina y la histoplasmina. 8. Reacciones serolgicas. La confirmacin del diagnstico de la infeccin mictica se basa en el aislamiento e identificacin del agente etiolgico especfico, sin embargo, hay circunstancias en que es difcil obtener cultivos y se deben utilizar otro tipo de pruebas como son las reacciones sexolgicas, de las cuales las ms usadas son: Fijacin del complemento: Es de utilidad en el diagnstico de histoplasmosis, paracoccidioidomicosis, coccidioidomicosis y blastomicosis americana. Precipitacin: Se utiliza inmunodifusin en agar y es til en el diagnstico de coccidioidomicosis, histoplasmosis, paracoccidioidomicosis y esporotricosis. Inmunofluorescencia: Este tipo de tcnica se divide en dos grupos: las que utilizan una sustancia fluorescente bajo luz ultravioleta para teir directamente el hongo y las que utilizan un procedimiento de marcado de anticuerpos con sustancias fluorescentes que permiten visualizar la reaccin antgeno-anticuerpo. Contesta el esquema de preguntas gua referido a los hongos.

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Habilidad Conoce los diferentes medios de cultivo empleados para el aislamiento y mantenimiento de los hongos y levaduras. Actitudes Mantiene una actitud respetuosa hacia la interculturalidad y la diversidad de creencias, valores, ideas y prcticas sociales. Muestra disposicin al trabajo metdico y organizado de manera individual y colaborativa, respetando los diferentes puntos de vista y privilegiando el dilogo Sigue instrucciones y procedimientos de manera reflexiva Participa en la realizacin de actividades experimentales, atendiendo los reglamentos establecidos para ello con acciones responsables.

Sustancias Medios para aislamiento primario Agar Sabouraud. Agar Mycosel. Observa la inhibicin del crecimiento del hongo contaminante en el medio de Mycosel Fusarium spp. Medios de identificacin Agar PDA. Observe el crecimiento de Trichophyton mentagrophytes y de Trichophyton rubrum en el medio de PDA. Esterilizacin del agua para preparar el medio de cultivo Coloca en un matraz Erlenmeyer 1000 ml agua destilada o bidestilada sllalo con una torunda (tapn de algodn y gasa) y colcalo en la autoclave. Calienta la autoclave (olla de presin domstica) en una hornilla o tripi y espera a que salga todo el aire atrapado dentro y en el momento que empiece a salir vapor de agua procede a cerrarla en forma hermtica, continua el calentamiento a 15 lb de presin durante 15 min. Preparacin de medios de cultivo CALDO SABOURAUD

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Pesa X cantidad (segn instrucciones del fabricante) del medio, disuelve en 300 ml de agua libre de bacterias, calienta a fuego lento hasta completa disolucin y se afora a 1000 ml, se tapa con una torunda o tapn y se esteriliza en la autoclave (autoclavar) a 121 0C por 15 min. Nota Descarga alcuotas de 7.5 ml en tubos de vidrio estril con tapa rosca. Almacena a 4 0C AGAR SABOURAUD DEXTROSA Se le emplea para el aislamiento primario, identificacin y mantenimiento de la mayora de los hongos patgenos. Para mejorar la inhibicin bacteriana se puede adicionar cloramfenicol 0.5 g/L. Pesa: Peptona 10 g Glucosa 20 g Agar 20 g Mide: Agua destilada 1000 ml Disuelve los ingredientes en el agua destilada, controla el pH a 5.6., esterilizar a 121 0C por 15 minutos, vaca en tubos o placas. AGAR PAPA DEXTROSA Permite la observacin de las levaduras a diferentes temperaturas. Pesa: Papa 200 g Dextrosa 10 g Agar 20 g Mide: Agua destilada 1000 ml Pelar y cortar la papa en trozos pequeos. Disolver la dextrosa en agua y agregar los dems ingredientes. Hervir 30 minutos y filtrar con gasa. Completar el volumen. Esterilizar a 121 0C por 15 minutos. AGAR MICOSEL O MICOBITICO Permite distinguir la susceptibilidad a la cicloheximida o actidione. Sigue las indicaciones proporcionadas por el fabricante. Autoclavar a 121 0C por 15 minutos. Descarga en tubo de vidrio estril y colcalos en forma de plano inclinado. Almacena a 4 0C Esterilizacin de las cajas de Petri, frascos con tapa y pipetas Lava muy bien el material de vidrio con detergente, djalo escurrir hasta secar, envulvelo con papel estraza y colcalo en la estufa a 100 0C durante 24 horas. Almacnalo en una caja de cartn. COBACHSLP/ACADEMIA_SUBMOD 7

Material 1 matraz Erlenmeyer de 1000 ml para el agua 1 matraz Erlenmeyer de 1000 ml para el medio de cultivo Algodn y gasa para torunda (tapn) Papel de estraza para envolver Cinta de masking para sellar Marcador para etiquetar Esptula para pesar 6 Cajas de Petri libre de bacterias (una por mesa de trabajo) 6 pipetas de 2 ml estriles (una por mesa de trabajo) Frasco de vidrio con tapa estril para muestra slida Agitadores de vidrio Guantes Cubreboca Aparatos Balanza granataria Autoclave u olla de presin domstica. Estufa o tripi Mecheros

Muestra Lquida: 1 ml (directo) Slida: Coloca en un frasco estril la muestra, agrega 10 ml de agua libre de bacterias, agita y de ah toma la muestra lquida. NOTA Un da anterior se esteriliza el material. El medio de cultivo se prepara el da de la prctica, para todo el grupo. Cada mesa de trabajo prepara su muestra slida. Desarrollo Coloca 2 mecheros en la mesa de trabajo, encindelos a fuego fuerte para esterilizar el ambiente, despus de 2 minutos, comienza la prctica. Coloca en la caja de Petri 1 ml de muestra, agrega el agar, agita con movimiento giratorio, deja solidificar la mezcla, tapa la caja de Petri, etiqutala y sella con cinta masking. Lleva la muestra a incubar en la estufa (37 0C) durante 48 horas. Scalas de la estufa y observa el crecimiento de hongos.

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Resultados Agar Sabouraud. Cuenta los hongos y reporta con el nmero por campo

Observaciones macroscpicas

Conclusin

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Resultados Agar PDA. Cuenta los hongos y reporta con el nmero por campo

Observaciones macroscpicas

Conclusin

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Resultados Agar Mycosel. Cuenta los hongos y reporta con el nmero por campo

Observaciones macroscpicas

Conclusin

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Habilidad Conoce la morfologa de las estructuras somticas y reproductoras de las levaduras y de los hongos filamentosos Identifica las caractersticas macroscpicas de colonias de hongos filamentosos. Actitudes Mantiene una actitud respetuosa hacia la interculturalidad y la diversidad de creencias, valores, ideas y prcticas sociales. Muestra disposicin al trabajo metdico y organizado de manera individual y colaborativa, respetando los diferentes puntos de vista y privilegiando el dilogo Sigue instrucciones y procedimientos de manera reflexiva Participa en la realizacin de actividades experimentales, atendiendo los reglamentos establecidos para ello con acciones responsables. GUA Caracterstica macroscpica Color Hongo filamentoso Hongo no filamentoso (levadura) Colonia Reverso Pigmento del medio Dimetro Correosa Aterciopelada Algodonosa Polvorienta Cremosa

Tamao de la colonia Apariencia

Hongos filamentosos Aspergillus flavus Rhizopus spp Cladosporium spp Trichophyton mentagrophytes

Morfologa macroscpica Colonias de color verde limn, que son inicialmente algodonosas y se tornan granulares con el tiempo. Colonias algodonosas de color blanco a crema que se tornan grises por la presencia de propgulos de color negro en la superficie. Colonias aterciopeladas de color caf a negro. Morfologa macroscpica: colonias aterciopeladas de color blanco, crema a amarillo.

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Hongos no filamentosos (Levaduras) Rhodotorula spp Candida spp Hongos dimrficos Sporothrix schenckii

Morfologa macroscpica

Este hongo presenta generalmente colonias lisas, hmedas de color rosado. Presenta colonias cremosas, hmedas de color blanco a beige.

Morfologa macroscpica
Vara de acuerdo con la temperatura a la cual se incube el medio de cultivo Morfologa macroscpica fase filamentosa, medio de cultivo (Agar Sabouraud). Temperatura y tiempo de incubacin: ambiente, 2 a 5 das. Presenta colonias blancas a crema, rugosas y ligeramente hmedas. A trasluz la colonia se observa filamentosa.

Hongos filamentosos de aspecto mucoide Geotrichum spp

Morfologa macroscpica
Medio: Agar Sabouraud. Temperatura y tiempo de incubacin 3537C, 2 a 5 das. Aspecto mucofilamentoso. Generalmente presenta colonias blancas polvorientas a algodonosas.

Materiales Microscopio, laminillas, cubre y portaobjetos. Cultivo Mohos Cuerpos fructferos de Macromicetes. Cultivos de Levaduras. Portaobjetos y Cubreobjetos. KOH Lugol Diurex, agujas y navajas de diseccin. Mecheros Glicerina 10% Dimetilsulfxido 40% Preparacin del hidrxido de potasio Pesa Hidrxido de potasio 10 g Mide Agua destilada 100 ml Mezcla para disolver totalmente el KOH. Guarda a temperatura ambiente en frasco de color mbar. Se puede agregar glicerina al 10% para tener preparaciones de mayor duracin reduciendo la evaporacin. Tambin se puede agregar Dimetilsulfxido (DMSO) al 40% para reducir o eliminar la necesidad de calentar el preparado.

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Desarrollo Parte 1 1. Coloca una gota de cultivo de levadura activada en un portaobjetos y aade una gota de Lugol, coloca un cubreobjetos y observa al microscopio con los objetivos de 10X y 40X. Dibuja lo observado 10x

Dibuja lo observado 40x

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Contesta lo siguiente: a) Cmo es el talo de estos hongos? ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ b) Investiga el proceso de la gemacin que llevan a cabo las levaduras. Elabora un resumen. ______________________________________________ ______________________________________________ ______________________________________________ ______________________________________________ ______________________________________________ ______________________________________________ ______________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ Fuente: ____________________________________________________________________ Conclusin ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________

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Parte 2 1. Identifica las caractersticas de hongos filamentosos mediante la observacin de caracteres macroscpicos. a) Registra las caractersticas macroscpicas de las colonias en los cultivos de mohos para cada uno de los mohos (enumera las cajas de Petri) Color del anverso y reverso de la colonia. Aspecto: liso, polvoso, velloso, pulverulento, algodonoso, zonada, mucilaginoso, aterciopelado, brilloso, plegado. Puede haber combinacin de alguno de estos aspectos. Observa las imgenes que se presentan.

Color ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________

Aspecto ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ COBACHSLP/ACADEMIA_SUBMOD 7

2. Con los cultivos de mohos realiza una preparacin para cada uno de ellos Sita en la punta de la aguja de diseccin un cuadrito de cinta diurex que tenga el pegamento hacia el exterior de la aguja y colcalo sobre el moho hasta lograr que el diurex quede impregnado del moho, posteriormente pon una gota de Lugol sobre un portaobjetos y deposita el cuadrito de cinta diurex, observa al microscopio con los objetivos de 10X y 40X.

Dibuja lo observado 10x

Dibuja lo observado 40x

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Contesta lo siguiente a) Cmo es el talo de estos hongos y como son las hifas? (septadas o aseptadas, es decir cenocticas) ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ b) Qu tipo de mecanismo de reproduccin se observa? ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ c) Hay presencia de cuerpos fructferos? ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ d) Qu tipo de esporas producen? ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ Parte 3 1. Anota las observaciones de los cuerpos fructferos de los Macromicetes y compralos con los de los Micromicetes. ________________________________ ________________________________ ________________________________ ________________________________ ________________________________ ________________________________ ________________________________ ________________________________ ________________________________ ________________________________ ________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________

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Dibuja lo observado

2. Realiza cortes del himenio y estpite de los cuerpos fructferos, lo ms delgado posible, coloca cada corte en un portaobjetos y cbrelo con una gota de KOH, despus pon el cubreobjetos y haz un ligero squash con la goma de un lpiz, observa con el objetivo 10x, 40x y 100x. Dibuja lo observado 10x

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Dibuja lo observado 40x

Dibuja lo observado 100x

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Contesta lo siguiente. a) Cmo es el talo de estos hongos y como son las hifas? (Septadas o aceptadas, es decir cenocticas) ________________________________________________________________________________ b) Cmo esta estructurado el cuerpo fructfero? ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ c) Qu tipo de esporas producen? (ascosporas o basidiosporas) ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ Para reafirmar el conocimiento 1. Menciona las estructuras de reproduccin asexual y sexual que se observaron. ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ Qu hongos crees que tengan mayor grado de organizacin estructural en sus cuerpos fructferos? ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ 2. Todos los hongos observados presentan micelio? Explica. ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ 3. Completa la matriz de las caractersticas de las colonias observadas. Color del anverso de la colonia Color del reverso de la colonia Aspecto de la colonia Tipo de hifa Cuerpo fructfero Cenoctica o septada y tipo de espora

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4. Ubica a los hongos observados de acuerdo con las caractersticas de las hifas y esporas ms comunes de algunos de los phylla de hongos filamentosos, que se presentan en la siguiente tabla. Phylum Zigomicota Ascomicota Caractersticas de las Hifas Cenocticas Septadas Tipos de Esporas Esporangiosporas Conidiosporas Ascosporas Conidiosporas Basidiosporas

Basidiomycota

Septadas

Para reafirmar el conocimiento 1. Por qu los medios para cultivar mohos deben de contener azcar? ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ 2. Investiga los nombres cientficos de los hongos observados en cada parte de la prctica y la importancia econmica que tienen. ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ 3. Que tipos de tejidos se presentan en los hongos y cules son las caractersticas de cada uno?

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Habilidad Aplicar tcnicas de identificacin para hongos y levaduras. Realiza una descripcin (microscpica) detallada. Actitudes Mantiene una actitud respetuosa hacia la interculturalidad y la diversidad de creencias, valores, ideas y prcticas sociales. Muestra disposicin al trabajo metdico y organizado de manera individual y colaborativa, respetando los diferentes puntos de vista y privilegiando el dilogo Sigue instrucciones y procedimientos de manera reflexiva Participa en la realizacin de actividades experimentales, atendiendo los reglamentos establecidos para ello con acciones responsables. GUA Caracterstica microscpica Micelio Hongo filamentoso hialino dematiceos Pared Lisa Rugosa Hongos filamentosos Aspergillus flavus Rhizopus spp Cladosporium spp Trichophyton mentagrophytes Morfologa microscpica Presenta hifas hialinas y septadas. Conidiforo de parad rugosa, gruesa. Las conidias se disponen en forma radiada. Adems presenta vesculas y fialides. Se observan hifas septadas de 6 a 15 m de dimetro, esporangiforo, hifas en forma de raz (rizoides), esporangio y esporangiosporas. Presenta hifas septadas dematiaceas. Se observan conidias de forma elptica y cilndrica, son de color caf oscuro o plido y estn dispuestas en cadenas ramificadas. En el gnero Trichophyton, se observan hifas hialinas septadas, artroconidias, micro y macroconidias. Tambin se pueden producir clamidiosporas. Las microconidias son numerosas clulas redondeadas de forma piriforme, que pueden estar solas o en grupos y son en ocasiones la forma asexual predominante del gnero Trichophyton. Las macroconidias son multicelulares (dos o ms clulas), de pared suave, gruesa o delgada y de forma cilndrica o Septado Aseptado Ancho Delgado Delgada Gruesa Hongo no filamentoso (levadura) Formacin de pseudomicelio

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en cigarro. Las macroconidias habitualmente no se forman o son muy escasas. En Trichophyton mentagrophytes a 37 C es raro encontrar macroconidias, las cuales presentan 2 a 5 clulas y paredes delgadas en forma de cigarro. Las microconidias son numerosas, de formas globosas, solas, agrupadas o dispuestas a lo largo de la hifa. Hongos no filamentosos (Levaduras) Rhodotorula spp Candida spp Morfologa microscpica

Se observan blastoconidias de levaduras de forma elongada y globosa. La blastoconidia puede ser encapsulada. Muestra diferentes variaciones de acuerdo con la especie. Todas las especies producen blastoconidias de levadura solas o agrupadas, las cuales pueden ser redondas o alargadas y fragmentos de pseudomicelio. Algunas cepas producen micelio verdadero a partir de la formacin de tubo germinal y clamidiosporas terminales. Morfologa microscpica Se observan hifas hialinas septadas, conidiforos y conidias dispuestas en forma de margarita. Al inocular animales de experimentacin, producen los tpicos cuerpos en cigarro, que son levaduras de forma alargada. Morfologa microscpica Se observan artroconidias e hifas gruesas. Las artroconidias miden de 612x36 m, son hialinas, se disponen encadenas y resultan de la fragmentacin de la hifa. La artroconidia puede ser de forma rectangular o redondeada, semejando un barril. Geotrichum spp. No posee blastoconidias.

Hongos dimrficos Sporothrix schenckii

Hongos filamentosos de aspecto mucoide Geotrichum spp

Materiales Microscopio, laminillas, cubre y portaobjetos. Cultivo Mohos Cuerpos fructferos de Macromicetes. Cultivos de Levaduras. Portaobjetos y Cubreobjetos. Azul de lactofenol Lugol Agujas y navajas de diseccin. Mecheros

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Preparacin del colorante Azul de lactofenol Es empleado para examinar muestras obtenidas a partir de los cultivos. El fenol mata al hongo, el cido lctico es un agente aclarante que preserva la estructura del hongo, la glicerina previene la desecacin y el azul de algodn colorea la quitina y celulosa del hongo. Solucin A, pesa y mezcla: Fenol (cristales) 20 g Acido lctico 20 g Glicerina 40 ml Solucin B, pesa y mezcla: Azul de algodn 0.05 g Agua destilada 20 ml Mezcla las soluciones A y B. Conserva a temperatura ambiente hasta por seis meses. Desarrollo Tcnica de dos agujas. Colocar una gota de azul de lactofenol sobre una lmina portaobjeto. Remover con una aguja de diseccin una pequea porcin de la colonia (cerca del centro) y colocarla sobre la gota de colorante. Extender la porcin de colonia, con la ayuda de otra aguja de diseccin, previamente flameada. Colocar una laminilla y examinar la preparacin al microscopio. Es la ms frecuentemente empleada, tanto para observar colonias de lavaduras como de mohos. Tcnica de la cinta pegante. Colocar una gota de azul de lactofenol sobre una lmina. Cortar un pedazo de cinta pegante transparente o diurex (2 a 3 cm) y fijarlo a una aguja de diseccin. Colocar la cinta sobre la superficie de la colonia de moho, haciendo presin. Colocar la cinta sobre la lmina, cubrir la laminilla, observar al microscopio. Es un mtodo rpido para observar microscpicamente los mohos sin alterar el arreglo de sus conidias. Microcultivos. Esta tcnica permite observar las caractersticas de esporulacin de los hongos sin ninguna alteracin, manteniendo los arreglos caractersticos de cada estructura. Consiste en realizar el cultivo del microrganismo a estudiar en una pequea porcin de medio de cultivo colocado entre lmina y laminilla. La temperatura y el tiempo de incubacin dependen del hongo que se est estudiando. Una vez que se ve microscpicamente la esporulacin se elimina el medio de crecimiento y se montan tanto la lmina como la laminilla (en donde qued pegado el hongo) con azul de lactofenol.

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Observaciones

Matriz de observaciones

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Comentario de sentido comn ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ Ejercicio en plenaria 1. Cules son las caractersticas fundamentales de los hongos? __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ 2. Qu fases de reproduccin tienen los hongos y cul es la importancia de cada uno de ellos? __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ 3. De acuerdo con su morfologa, cmo se clasifican los hongos? __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ 4. Qu es un hongo dimrfico? __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ 5. Mencione un medio de cultivo utilizado para el aislamiento primario de los hongos. __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ 6. Con qu reactivo se examina al microscopio las escamas, pelos, uas o secreciones del paciente cuando se sospecha una infeccin por hongos? __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________

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APLICAR LOS PRINCIPIOS BSICOS DEL ANLISIS QUMICO PARA LA SEPARACIN E IDENTIFICACIN DE LOS COMPONENTES DE UNA MUESTRA
EQUILIBRIO QUMICO En la mayora de las reacciones qumicas los reactivos no se consumen totalmente para obtener los productos deseados, sino que, por el contrario, llega un momento en el que parece que la reaccin ha concluido. Podemos comprobar, analizando los productos formados y los reactivos consumidos, que la concentracin permanece constante. Significa esto que realmente la reaccin se ha parado? Evidentemente no. Una reaccin en equilibrio es un proceso dinmico en el que continuamente los reactivos se estn convirtiendo en productos y los productos se convierten en reactivos; cuando lo hacen a la misma velocidad nos da la sensacin de que la reaccin se ha paralizado. Es decir, el equilibrio qumico se establece cuando existen dos reacciones opuestas que tienen lugar simultneamente a la misma velocidad. Asimismo, es el estado al que se llega al final de cualquier sistema qumico. La expresin matemtica que representa al Equilibrio Qumico, se conoce como Ley de Accin de Masas (LAM) y se enuncia como: Es un proceso elemental, el producto de las concentraciones en el equilibrio de los productos elevadas a sus respectivos coeficientes estequiomtricos, dividido por el producto de las concentraciones de los reactivos en el equilibrio elevadas a sus respectivos coeficientes estequiomtricos, es una constante para cada temperatura, llamada constante de equilibrio. As, la relacin del producto de las actividades (actividad igual a concentracin en soluciones diluidas) elevadas los coeficientes estequiomtricos en la reaccin de productos y reactivos permanece constante al equilibrio. Factores que afectan el equilibrio qumico Para comprender los factores que afectan o causan el desplazamiento del equilibrio qumico, hay que partir del principio de Le Chtelier que Fue formulado por el qumico francs Henry Louis Le Chtelier en el ao de 1888 y que establece lo siguiente: Si un sistema en equilibrio es sometido a una perturbacin o una tensin, el sistema reaccionar de tal manera que disminuir el efecto de la tensin. De acuerdo a este principio, puede haber variaciones de concentracin, cambios de temperatura o presin. Concentracin Cuando la concentracin de una de las sustancias en un sistema en equilibrio se cambia, el equilibrio vara de tal forma que pueda compensar este cambio. Por ejemplo: Si se aumenta la concentracin de uno de los reaccionantes, el equilibrio se desplaza hacia la derecha o hacia el lado de los productos. Si se agrega ms reactivos (como agregar agua en el lado izquierdo del tubo) la reaccin se desplazar hacia la derecha hasta que se restablezca el equilibrio.

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Si se remueven los productos (como quitar agua del lado derecho del tubo) La reaccin se desplazar hacia la derecha hasta que se restablezca el equilibrio. Temperatura La variacin de equilibrio causada por un cambio de temperatura depender de si la reaccin tal como esta escrita es exotrmica, o endotrmica. Reacciones Exotrmicas Si la reaccin es exotrmica se puede considerar al calor como uno de los productos, por lo que al aumentar la temperatura el equilibrio se desplaza hacia la izquierda.

Si se disminuye la temperatura, el equilibrio se desplazar hacia la derecha. Reacciones Endotrmicas Si la reaccin es endotrmica, el calor se considera como un reactivo.

Por lo tanto, si se aumenta la temperatura se favorece un desplazamiento del equilibrio hacia la derecha y si se disminuye, hacia la izquierda. En la temperatura se debe de considerar su entalpa (H) Si H es positiva, la reaccin es endotrmica. Si H es negativa, la reaccin es exotrmica Presin Es importante hacer notar, que la presin slo afecta a aquellos productos o reactivos que se encuentran en fase gaseosa. Si se aumenta la presin de un sistema en equilibrio, el equilibrio se desplazar de forma que disminuya el volumen lo mximo posible, es decir, en el sentido que alivie la presin. Como ejemplo, considrese el efecto de triplicar la presin en el siguiente equilibrio:

Al existir dos volmenes de gas del lado de los productos, implica que hay una mayor cantidad de molculas de NO2 y al aumentar la presin se favorece un mayor nmero de colisiones entre molculas en el lado de los productos, por lo que el equilibrio se desplaza hacia la izquierda. De acuerdo con la ley general del estado gaseoso PV=RnT que implica que a mayor nmero de moles, mayor presin. Aplicacin del Principio de Le Chtelier en una reaccin genrica: COBACHSLP/ACADEMIA_SUBMOD 7 A+B C+D

A medida que la reaccin progresa, disminuye el nmero de molculas A y B, y aumenta en nmero de molculas C y D. Como las sustancias C y D, no reaccionan entre s, la reaccin continua hasta que las molculas A y B se consumen. Este tipo de reaccin se denomina irreversible (avanza en una sola direccin). Por ejemplo, la accin del cido clorhdrico sobre el Zinc. 2HCl + Zn ZnCl2 + H2 (g) Si en cambio la molculas C y D pueden reaccionar entre s, la reaccin avanzar hacia la derecha mientras la concentracin de las molculas A y B sea importante, a medida que comiencen a formarse molculas C y D, la velocidad de reaccin disminuir hasta que la concentracin de las molculas C y D sea tal que la reaccin comenzar a desplazarse hacia la izquierda, hasta que se establezca un punto de equilibrio, donde ambas velocidades se equilibran, y en el cual coexistirn molculas A, B, C y D. Este tipo de reacciones se denominan reversibles y se representan con flecha de ida y vuelta: A + B C + D Un ejemplo de este caso es el cido etanico + metanol etanoato de metilo + agua CH3-COOH + CH3OH CH3-CO-O-CH3 + H2O Hay reacciones reversibles que, segn como se realicen, pueden convertirse en irreversibles, por ejemplo, si calentamos carbonato de calcio (CaCO3) en un recipiente cerrado, en un principio, la reaccin se desplazar hacia la derecha, produciendo dixido de carbono y cal (CaO), pero cuando la presin aumente por formacin de CO2, la velocidad de reaccin hacia la derecha, comenzar a disminuir e ir aumentando la velocidad hacia la izquierda, hasta que quede en equilibrio (reversible). CaCO3 CO2 + CaO En cambio, si se procede en un recipiente abierto, el dixido de carbono producido, se escapar a la atmsfera, sin dar lugar a la reaccin inversa, y continuar hasta la total descomposicin del carbonato de calcio (irreversible). CaCO3 CO2 (g) + CaO Principio de Le Chtelier sobre un sistema en equilibrio: A+B C+D

1. Los efectos de la concentracin: el aumento de las concentraciones de A y B, produce ms C y D para contrarrestar el aumento de A y B. Ocurre lo mismo en el caso inverso. 2. Los efectos de la presin: en el caso de que A o B sean gases, el aumento de presin, el sistema reaccionar disminuyendo su volumen para contrarrestar el aumento de presin, con lo cual la reaccin se desplazar hacia la derecha. 3. Los efectos de la temperatura: si la reaccin entre A y B libera calor (exotrmica), y retiramos las caloras producidas, el sistema reaccionar produciendo ms calor para contrarrestar la prdida, con lo cual la reaccin se desplazar hacia la derecha. Si por el contrario, le entregamos caloras, el sistema contrarrestar la modificacin desplazndose hacia la izquierda. El aumento de temperatura retarda los procesos exotrmicos y acelera los endotrmicos . Ante una reaccin reversible, para lograr el mximo rendimiento, es decir que la reaccin se desplace lo todo posible hacia la derecha, tenemos las siguientes opciones: COBACHSLP/ACADEMIA_SUBMOD 7

1. Aumentar la concentracin de uno de los reactivos, por ejemplo, duplicando A, para contrarrestar este exceso, aumentaran las concentraciones de C y D, desplazando la reaccin hacia la derecha. 2A + B C + D 2. Disminuir la concentracin de uno de los productos de reaccin, por ejemplo, retirando la mitad de C, para contrarrestar este exceso, disminuirn las concentraciones de A y B, desplazando la reaccin hacia la derecha, esto se logra retirando C a medida se produce. A + B C + 0.5 D 3. Si A y/o B son gases, aumentando la presin (en un recipiente cerrado), logramos desplazar la reaccin hacia la derecha. A(g) + B(g) C + D 4. Si C y/o D son gases, disminuyendo la presin (en un recipiente cerrado), logramos desplazar la reaccin hacia la derecha. A + B C(g) + D(g) 5. Si la reaccin entre A y B es exotrmica, una vez alcanzada la energa de activacin, conviene refrigerar el sistema para favorecer la produccin de C y D. A + B C + D + cal 6. Si la reaccin entre A y B es endotrmica, se deber entregar calor para alcanzar la energa de activacin, y continuar calentando para favorecer la produccin de C y D. A + B C + D - cal

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Observa el video de la pgina de @ para contestar. http://www.youtube.com/watch?v=dbruKxpaj3o Contesta las preguntas relacionadas con la informacin del video 1. Qu estados de agregacin tenemos en el ejemplo del agua? __________________________________________________________________________ 2. Qu predomina en un equilibrio qumico? __________________________________________________________________________ 3. Qu tipo de sistema tenemos en el ejemplo? Justifica la respuesta. _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________

Escribe la reaccin y explcala con tus palabras. ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________

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Observa el video de la pgina de @ internet para complementar el formato tradicional de una prctica de laboratorio: Ttulo, objetivo, material, reactivos, desarrollo o procedimiento, resultado, reaccin y observaciones, esquemas. Fuente: http://www.youtube.com/watch?v=8UiE9xCaLlo&feature=related

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Esquemas

Elabora el esquema cognitivo QQQ, de la prctica guiada. Qu veo? Qu no veo? Qu infiero?

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ANLISIS QUMICO Permite conocer los elementos y entidades que forman parte de la sustancia. El anlisis qumico presenta dos etapas. En primer lugar se realiza el ANLISIS CUALITATIVO que sirve para determinar cules son los elementos y entidades presentes en la muestra. Posteriormente conviene realizar el ANLISIS CUANTITATIVO para determinar el contenido exacto de cada elemento o entidad. El resultado de este estudio permite obtener la frmula qumica de la sustancia. Es importante sealar que los caracteres analticos no corresponden al conjunto de las entidades que forman la sustancia, sino a cada una de ellas por separado. Por ejemplo, el anin cloruro presenta las mismas caractersticas analticas independientemente de la sustancia en que se encuentre (salvo interferencias), pero las distintas sustancias que contienen cloruros no deben presentar ms caracteres analticos comunes. ANLISIS QUMICO CUALITATIVO El Anlisis Qumico Cualitativo o Anlisis Cualitativo permite conocer los elementos o las entidades inicas presentes en una sustancia. Esta etapa del anlisis es necesaria para realizar la determinacin cuantitativa correcta. Para realizar un Anlisis Qumico de cualquier sustancia slida, es conveniente conocer algunas de las caractersticas fsicas que nos pueden orientar sobre su naturaleza. Esto puede abreviar considerablemente una serie de ensayos en el laboratorio. Dependiendo de la naturaleza de la muestra y de los datos que se tienen sobre ella, hay varias formas de realizar un Anlisis Cualitativo: COBACHSLP/ACADEMIA_SUBMOD 7

Cuando "se sospecha" la composicin, se puede recurrir directamente a los ensayos especficos para las probables entidades. Hay que tener en cuenta que si dos o ms entidades pueden tener comportamientos qumicos parecidos ante un determinado ensayo (se interfieren), hay que separarlos antes del anlisis propiamente dicho. Cuando se tienen grandes dudas sobre la composicin o se ignora totalmente, hay dos posibilidades: Realizar una serie de ensayos de tipo general, tanto por va seca, como por va hmeda y deducir, a partir de ellos, los elementos probables. Posteriormente se van realizando los ensayos especficos de tales elementos. Realizar marchas analticas (va hmeda) que permitan separar en grupos todas las posibles entidades y comprobar, en cada uno de esos grupos, la presencia o no de las entidades correspondientes. Existen marchas analticas para cationes (la de los sulfuros y la de los carbonatos) y tambin para aniones. La realizacin de marchas analticas requiere ms trabajo y mejores medios que la opcin anterior. Una de las ventajas de las marchas analticas es que se evitan las interferencias, pero deben ser realizadas con gran cuidado para que cada entidad aparezca en el grupo que le corresponde y no se pierda en otros, de tal manera que nunca se llegara detectar.

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Completa el diagrama radial con conceptos y frases.

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ENSAYOS VA SECA La eleccin de los mtodos que el qumico analtico y la de los sistemas de trabajo con que ha de ponerlos en prctica est condicionada por factores muy diversos tales como nmero de muestras que ha de analizar, tiempo que para ello dispone, es decir, urgencia en la entrega de resultados, rentabilidad econmica en la que interviene el precio de reactivos y la cantidad que se usa de ellos, tiempo que se consumen en el anlisis de una muestra, instrumental que dispone, precisin y exactitud que se le exige. Pero muy especialmente la eleccin del procedimiento conveniente est condicionado por: La naturaleza de las sustancias que acompaan en la muestra a la que se desea identificar, con objeto de evitar interferencias. Cantidad de muestra que se dispone para el anlisis. Contenido relativo de sus constituyentes en la misma. La va seca, tuvo importancia extraordinaria en los inicios del anlisis cualitativo, especialmente de minerales, ofrece hoy una serie de ensayos sencillos rpidos y seguros que se utilizan de ordinario slo como previos y orientadores acerca de la naturaleza de la sustancia a investigar, pero en ocasiones pueden ser definitivos para la identificacin de ciertos componentes. Entre ellos se encuentran los ensayos de coloracin a la llama para metales alcalinos y para Ca, Sr y Ba; las fusiones coloreadas (perlas) con brax o con sal de fosforo para muchos iones metlicos, la fusin con la mezcla de carbonato sdico y nitrato potsico para el reconocimiento de manganeso o de cromo mediante el color verde (Mn) y amarillo (Cr) que respectivamente producen pequeas cantidades de dichos elementos; el calentamiento en tubo cerrado para el reconocimiento de materia orgnica fija por su carbonizacin. En los recuadros, dibuja la imagen correspondiente. Se incluyen en este apartado una serie de ensayos que se realizan por la accin ms o menos directa del fuego (ensayos pirognsticos). Es importante sealar que estos ensayos son orientativos, ya que no todos los minerales responden necesariamente a todos ellos. Los ensayos ms usados son los siguientes: Ensayos a la llama Las sales de ciertos cationes (alcalinos, alcalino-trreos, metales de transicin) y de ciertos aniones (halogenuros) dan coloraciones caractersticas cuando se colocan a la llama de un mechero de gas. Otras sales dan luminiscencia a la llama. Los nitratos y los cloratos deflagran (avivan la llama al desprenderse oxgeno). Los sulfuros y los halogenuros decrepitan (estallan en pequeos trozos emitiendo sonidos). Otros llegan a fundirse. El uso de la llama para observar el color emitido por algunos elementos es, en ciertos casos, muy orientativo. El mtodo consiste en mezclar el mineral pulverizado con unas gotas de cido clorhdrico y formar una pasta que se toma con un alambre de platino (o de nicromo, aleacin de nquel y cromo) y se coloca a COBACHSLP/ACADEMIA_SUBMOD 7

la llama oxidante de un mechero de gas. Si se observa algn color caracterstico, puede indicar la presencia de determinados elementos. Hay que decir que este ensayo, al igual que otros de la va seca es slo orientativo y muchos elementos no dan nunca colores caractersticos y otros necesitan mucha concentracin para ser observados. Ensayos en tubo cerrado Se realizan colocando la sustancia en el fondo de un tubo de vidrio que se somete a un intenso calentamiento. Como consecuencia pueden observarse cambios de color, fusiones, decrepitaciones, desprendimiento de agua (que condensa luego en las paredes ms fras del tubo) o desprendimiento de otros gases con olores y colores caractersticos. Son muy interesantes los sublimados que pueden aparecer en las paredes del tubo y que se relacionan con elementos tales como azufre, arsnico, antimonio o mercurio. Una vez terminado el calentamiento, es conveniente comprobar si el residuo que permanece en el fondo del tubo es magntico, sobre todo si sospechamos la presencia de elementos tales como hierro, cobalto, nquel o titanio. Tambin puede realizarse el mismo ensayo mezclando previamente el mineral con algn fundente, como el bisulfato potsico (previamente seco) que ayuda a descomponerse a ciertos sulfuros. Ensayos en tubo abierto Se emplea un tubo acodado y abierto por ambos lados. Se coloca el mineral pulverizado en el mismo codo y se calienta dejando una rama casi horizontal, mientras que la otra permanece inclinada, a modo de chimenea. Con ello se favorece el paso de aire por el mineral caliente (al contrario de lo que ocurre en el tubo cerrado). Las reacciones que tienen lugar son, en muchos casos, similares a las que se dan en tubo cerrado, pero en otros casos, el aporte de oxgeno da lugar a procesos de oxidacin que conducen a diferentes resultados. Por ejemplo, un mineral ferroso pasa a magnetita en tubo cerrado, mientras que en tubo abierto pasa a hematites. Es conveniente observar tambin el proceso de enfriamiento, ya que puede haber reacciones reversibles.

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Ensayos a la perla Los ensayos a la perla se suelen realizar mezclando el mineral pulverizado, bien con brax o bien con otras sales. El fundamento de estos ensayos se encuentra en la formacin, por medio del calor, de sales ms o menos complejas, en las que se integran los cationes de los minerales, dando lugar a coloraciones caractersticas. Al igual que los dems ensayos de va seca no todos los elementos dan coloraciones. El ensayo a la perla se puede realizar con hilos (idealmente de platino) o sobre soportes de escayola. El tipo de llama empleado influye, ya que se verifican procesos de oxidacinreduccin. La llama del mechero ha de ser siempre reductora, pero segn se use el soplete se obtendr un dardo oxidante o reductor y los colores de las perlas pueden ser diferentes en cada caso. Tambin puede ocurrir que los colores de las perlas, una vez formadas, evolucionen a medida que se van enfriando y por ello conviene observarlas en caliente y en fro. Ensayos sobre carbn Se trata de uno de los ensayos ms clsicos y requiere una especial destreza por parte del operador. Se considera que este ensayo es orientativo sobre la presencia de determinados elementos, en su mayora metales de transicin y semimetales tales como arsnico, antimonio, bismuto, selenio y teluro. Sin embargo, otros elementos no presentan comportamiento caracterstico. El ensayo puede realizarse calentando el mineral slo sobre el carbn o mezclado con ciertos reactivos, como yoduro potsico, cromato potsico, carbonato sdico y azufre. Es importante observar el residuo obtenido como consecuencia de la reduccin efectuada por el carbn y tambin el aspecto de la aureola que rodea al residuo. Modernamente se realiza este ensayo usando un soporte de escayola mezclando el mineral con carbn.

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Elabora el mapa cognitivo de aspectos comunes, de los ensayos por va seca

Laboralmente el analista habr de saber conjugar estos factores y elegir como consecuencia el mtodo y el sistema de trabajo que le permita obtener resultados fieles con respecto al objetivo que persigue tanto si este consiste en establecer la composicin real de una muestra (cualitativo) como si es dirigido a conocer la cuanta de los componentes (cuantitativo).

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Habilidad Aplicar tcnicas cualitativas de ensayos por va seca para identificar cationes de los grupos II y III Actitudes Mantiene una actitud respetuosa hacia la interculturalidad y la diversidad de creencias, valores, ideas y prcticas sociales. Muestra disposicin al trabajo metdico y organizado de manera individual y colaborativa, respetando los diferentes puntos de vista y privilegiando el dilogo Sigue instrucciones y procedimientos de manera reflexiva Participa en la realizacin de actividades experimentales, atendiendo los reglamentos establecidos para ello con acciones responsables.

Los ensayos por va seca son practicados sobre muestras slidas o sobre los productos obtenidos al evaporar la solucin problema en bao mara. En estos ensayos se emplea poco tiempo, as como poca cantidad de muestra, pudiendo obtener informacin valiosa. Los ensayos por va seca en general son realizados directamente sobre la muestra, sin requerir ninguna transformacin previa. Los ensayos por va seca estn basados en diferentes propiedades de las substancias que se relacionan con su fusibilidad, volatilidad, poder de coloracin a la flama, poder de oxidacin y reduccin, descomposicin trmica y reactividad entre slidos. Material y aparatos Alambres de platino Mechero de bunsen Vidrios de reloj Sopletes de boca Pipetas graduadas de 5ml. Vasos de precipitados de 50ml Frasco gotero mbar de 60 ml Pinzas de crisol Balanza granataria

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Investiga algunas propiedades de los reactivos. Reactivos Brax (tetraborato de sodio decahidratado) Propiedades

Cloruro de hierro (III) FeCI3

Nitrato de nquel (II) Ni (NO3)2

Nitrato de cromo (III) Cr(NO3)2

Nitrato de manganeso (III) Mn (NO3)2

Nitrato de cobre (II) Cu (NO3)2

Nitrato de cobalto (II) Co (NO3)2

Nitrato de potasio KNO3

Carbonato de sodio Na2CO3

Nitrato de zinc Zn (NO3)2

Nitrato de magnesio Mg(NO3)2

Nitrato de aluminio Al (NO3)3

Carbn vegetal de 12 x 5 x 4 cm

Agua destilada

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Perlas de Brax. Al ser fundidas determinadas sustancias en el extremo de un alambre de platino o equivalente se produce una masa vidriosa llamada perla que al estar en contacto con una pequea cantidad de sustancia y ser introducida en la flama de un mechero de bunsen ya sea en la zona oxidante o en la reductora, produce una coloracin caracterstica. Las perlas pueden ser divididas en: cidas y alcalinas. Las perlas cidas, son obtenidas con el tetraborato de sodio decahidratado Na2B407.10 H2O, conocido como brax; o bien, empleando la sal de fsforo llamada microcsmica: NaNH4HPO4.4 H2O. Al fundir el brax por medio de un alambre, en la flama del mechero se observa primeramente, la fusin acuosa y, posteriormente la gnea segn la reaccin qumica siguiente: Na2B4O7 < -======= >B2O3 + 2NaBO2 Con la perla transparente, y an caliente, se toma un poco de sustancia para analizar y se calienta en la flama hasta llegar a la total disolucin. Las observaciones pueden realizarse, tanto en la zona oxidante como en la reductora de la flama del mechero. A continuacin se muestra una tabla con las coloraciones obtenidas para las perlas de brax, en la zona oxidante y en la reductora de un mechero de bunsen, para diferentes elementos qumicos. Coloracin de la perla Zona oxidante Zona reductora Amarilla Verde botella Parda Gris Azul Azul Verde Verde esmeralda Azul Roja Violeta Rosa Amarillo pardo Verde Elemento Hierro Nquel Cobalto Cromo Cobre Manganeso Molibdeno

Las perlas alcalinas o bsicas. Son obtenidas con carbonato de sodio Na2CO3 de potasio K2CO3, son opacas en fro. Se emplean especialmente para investigar el cromo y el manganeso en la flama oxidante o aadiendo unos cristales de KNO3. Las reacciones que se producen para ambos elementos son: Manganeso y Oxido de cromo (III) MnO2 + O + Na2CO3 --------------- > Na2MnO4 + CO2 verde. Cr2OY + 30 + 2Na2C03 --------------- > 2Na2 Cr04 + 2CO2 amarillo. El nitrato de potasio es un oxidante que acta como muestra la siguiente ecuacin qumica: KNO3 ---------------- KNO2 + O Actividad 1 Verifica la coloracin que se muestra en la tabla anterior, de la perla en las zonas oxidante y reductora. COBACHSLP/ACADEMIA_SUBMOD 7

Perlas de brax Limpie un alambre de platino o equivalente en la flama del mechero de Bunsen. Puesto al rojo el extremo del hilo de platino, se toca con una pequea cantidad de brax pulverizado (que se encuentra en un vidrio de reloj) hasta que se funda en la llama del mechero. Esta accin es realizada girando constantemente el asa del alambre. Una vez formada la perla transparente de brax se toma un poco de sustancia problema (pulverizada) y se vuelve a calentar en la flama hasta la fusin total. La observacin se realiza tanto en la zona oxidante como en la reductora de la flama del mechero. Realice sus observaciones empleando sales de: Sales FeCI3 Ni NO3)2 Cr(NO3)3 Cu(NO3)2 Mn(NO3)2 Co(N03)2 Colorea el espacio segn el resultado obtenido Otras observaciones

Perlas alcalinas En forma similar a la formacin de las perlas de brax identifique cualitativamente al manganeso y el cromo en la flama oxidante del mechero de Bunsen empleando Na 2C03 en la realizacin de las perlas y una pequea cantidad de KNO3. Sales Cr(NO3)3 Mn(NO3)2 Colorea el espacio segn el resultado obtenido Otras observaciones

Ensayo al carbn Este ensayo por va seca no requiere ms que de un trozo de carbn apropiado, en el cual se ha realizado una cavidad pequea, un mechero de bunsen, un poco de muestra problema confunde (Na2CO3) y un soplete de boca. Cuando el carbn se emplea solamente como soporte infusible, se utiliza la flama oxidante y fundente, pero si adems se aprovechan sus propiedades reductoras, se pueden observar los siguientes fenmenos: Deflagracin (debido al desprendimiento de oxigeno al ser calentada la muestra). Decrepitacin (por rotura violenta de cristales que contienen -agua de interposicin). COBACHSLP/ACADEMIA_SUBMOD 7

Formacin de botones o glbulos metlicos, o aureolas, o ambas simultneamente. Formacin de reacciones caractersticas: Reaccin hpar (la producen todos los compuestos de azufre) y reaccin con nitrato de cobalto, que produce masas coloridas sobre el carbn, como son las reacciones de azul de Thenard con las sales de aluminio o verde Rinmann con las sales de zinc.

Actividad 2. Verifica la coloracin (tabla) de las diferentes sales por el ensayo sobre carbn vegetal reaccin con Co(N03)2 Haciendo uso de un mechero de Bunsen, un soplete de boca o una pipeta graduada de 5 ml y un pedazo de carbn, en el que se ha realizado una cavidad, donde se har la prueba, se coloca la substancia problema una pequea cantidad de Na2C03 que ser empleado como fundente, en la cavidad del carbn y se sopla con ayuda del soplete de boca o pipeta graduada sobre el carbono. Se humedece la sustancia problema con una gota de solucin de nitrato de cobalto al 10%. Una vez realizada la operacin anterior, la sustancia observada al carbn se calcina fuertemente. Resultado obtenido Se produce una masa de color azul llamada azul de Thenard. Se produce el llamado verde de Rinmann, Se produce una masa rosa, infusible de magnesio.

Sales Con las sales de aluminio Con las sales de zinc Con las sales de magnesio

Para los ensayos se utilizan sales de Al (NO3)3, Zn(N03)2 y Mg(N03)2 , haga sus anotaciones. Sales Al (NO3)3 Zn(N03)2 Mg(N03)2 Colorea el espacio segn el resultado obtenido Otras observaciones

Investiga para contestar el cuestionario. 1. Por qu razones el brax disuelve los xidos metlicos al ser fundido en el mechero de Bunsen? __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ 2. Qu tipo de informacin se obtiene al hacer una perla de brax con un xido o sal que contenga un metal no identificado? __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________

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3. Por qu razones el anlisis a la perla de brax primero se realiza en la flama oxidante y posteriormente en la reductora? __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ 4. Las perlas de brax de sales frricas y ferrosas, son de colores similares en la flama de oxidacin y reduccin? __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ 5. Las sales de compuestos de cromo en las perlas de brax tanto en flama de oxidacin como de reduccin producen una coloracin verde esmeralda debida a la formacin de: __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ 6. Las sales de manganeso al ser fundidas con Na2C03 y en presencia de KNO3 nos producen una masa de un color ______________ debido a la siguiente racin: 3Mn(OH)2 + 4KMn04 + Na2C03 2KMnO4 + Na2 MnO4 + 4H2O+ CO2 + 3H2O. 7. Las sales de cromo al ser fundidas con una perla alcalina de Na2C03 nos producen una coloracin _____________debida al a reaccin: Cr2O3 + Na2C03 + KNO3 2Na2CrO4 + 3KNO2 +2 CO2
8.

Masa infusible obtenida al hacer reaccionar un compuesto de zinc con carbonato de sodio en carbn y con unas gotas de nitrato de cobalto se llama:________________

9. Al hacer reaccionar una sal slida de aluminio con Na2C03 y una gotas de solucin de cobalto sobre un trozo de carbn se obtiene una coloracin _______________ debida a la reaccin : Al2O3 + CoO Co(AlO2) Aluminato de cobalto II. 10. Mencione qu caractersticas son deseables que posea el carbn que habr de emplearse en el ensayo con nitrato de cobalto.

____________________________________________________________ ____________________________________________________________ ____________________________________________________________ ____________________________________________________________

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Habilidad Aplicar tcnicas cualitativas de ensayos va seca Actitudes Mantiene una actitud respetuosa hacia la interculturalidad y la diversidad de creencias, valores, ideas y prcticas sociales. Muestra disposicin al trabajo metdico y organizado de manera individual y colaborativa, respetando los diferentes puntos de vista y privilegiando el dilogo Sigue instrucciones y procedimientos de manera reflexiva Participa en la realizacin de actividades experimentales, atendiendo los reglamentos establecidos para ello con acciones responsables.

La coloracin a la flama es uno de los ensayos por va seca, que se aplica a muestras slidas para su identificacin. Esta se realiza al volatilizar la sustancia y producir una coloracin caracterstica en la flama de un mechero de Bunsen. Este ensayo emplea un mechero de Bunsen, un alambre de platino (o equivalente) de 10 cm de largo y 1 mm de dimetro, que puede engarzarse en un tramo de varilla de vidrio como soporte o bien empleando un asa. Para realizar este ensayo, se limpia el alambre de platino con una solucin de cido clorhdrico 7.5 N, y se introduce en la flama del mechero de Bunsen hasta que ya no se observe ninguna coloracin. Posteriormente la sustancia problema se coloca en el alambre de platino (humedecido previamente con el HCl. Se coloca el alambre de platino en la base de la flama y se observa el color producido identificando, de esta manera, los componentes de la muestra.

Material y equipo Balanza granataria Alambres de platino o nicromel con asa Mechero de bunsen Vidrios de reloj Varilla de vidrio Pipetas graduadas de 5ml. Vasos de precipitados de 50ml Vidrio de cobalto Alambre de cobre delgado Puntas de grafito

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Reactivos HCl cido clorhdrico CaCl2 Cloruro de calcio SrCI2 Cloruro de estroncio BaCl2 Cloruro de bario LiCl Cloruro de litio NaCl Cloruro de sodio KCl Cloruro de potasio Agua destilada

Desarrollo Introduzca el alambre de platino (o equivalente) en una solucin de HCl 7.5 N (disuelva 62.3 ml de HCl concentrado en 100 ml de agua), hasta que ya no se observe coloracin alguna en la flama del mechero. Una vez realizada la operacin anterior, humedezca el alambre con HCl y pngalo en contacto con la sustancia a identificar. La muestra slida humedecida con el alambre, se lleva a la base de la flama del mechero de Bunsen. Observe la coloracin de la muestra Realice sus observaciones y anote sus resultados.

Notas: Cada vez que se analiza una muestra diferente, deber limpiarse el alambre con HCl hasta que ya no se obtenga respuesta en la flama del mechero de Bunsen.

Con tus observaciones, completa la siguiente tabla Grupo de cationes IV Ca Sr Ba Li Na K catin Coloracin observada a la flama del mechero de Bunsen Roja anaranjada Roja carmn Verde amarillento Roja carmn Amarilla intensa Violeta plido

El profesor prepara una muestra problema para el ensayo a la llama Catin identificado: ________________________________ Para reafirmar el conocimiento, contesta correctamente el cuestionario. 1. Qu ventajas se obtienen al emplear los ensayes por va seca? ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ COBACHSLP/ACADEMIA_SUBMOD 7

2. Por qu se produce una coloracin slo cuando en la flama del mechero de bunsen se encuentran sustancias voltiles? _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ 3. Qu utilidad reporta el ensayo de la coloracin a la flama en el anlisis de minerales? ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ 4. Por qu al analizar los elementos de los grupos IV y V de cationes se prefieren sales en forma de cloruros? ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________

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ENSAYOS VA HMEDA Opera con la sustancia problema disuelta, generalmente, en agua o en cido y emplea reactivos igualmente en solucin. Constituye la base del anlisis qumico cualitativo clsico actual. Los principales proceso y tipos de reaccin que utiliza entre los cuales a veces hay muchos puntos de contacto, son los siguientes: Precipitacin. La precipitacin (compuestos insolubles coloreados) de una solucin requiere de un reactivo; generalmente ste se agrega a la muestra en solucin con la pipeta, y en los casos donde se agrega reactivo gota a gota se puede usar la bureta. Adems, se lleva a cabo en un tubo de ensayo, en placa de porcelana o sobre papel filtro segn la tcnica seguida. Este tipo de reaccin lo utilizan un sinfn de ensayos, usados tanto para la separacin de iones entre s, como para su identificacin; la variacin apropiada de los factores que en ella influyen pH del medio, formacin de complejos, procesos redox y adicin de disolventes orgnicos. Permite un amplio juego de posibilidades a las que se debe principalmente la actual sistematizacin del anlisis de cationes y aniones mediante su separacin en grupos y el logro de muchos ensayos especficos. La precipitacin se controla con el fin de agregar en la solucin nicamente la cantidad indispensable del reactivo. El control se efecta de la siguiente manera: la solucin precipitada se deja reposar un rato y luego se agregan unas gotas de reactivo a la solucin, cuidadosamente para no remover el precipitado del fondo del recipiente. En el caso de que la solucin permanezca transparente se considera que la precipitacin fue completa. De no ser as, se agrega otra pequea cantidad de reactivo. Completa la siguiente tabla

BaCl2 + H2SO4 Mg Ca Sr FeCl2

REACCIN BaSO4 + 2HCl

COLOR Y NOMBRE DEL PRECIPITADO Sulfato de bario, precipitado blanco

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Habilidad Aplicar tcnicas cualitativas de precipitacin Actitudes Mantiene una actitud respetuosa hacia la interculturalidad y la diversidad de creencias, valores, ideas y prcticas sociales. Muestra disposicin al trabajo metdico y organizado de manera individual y colaborativa, respetando los diferentes puntos de vista y privilegiando el dilogo Sigue instrucciones y procedimientos de manera reflexiva Participa en la realizacin de actividades experimentales, atendiendo los reglamentos establecidos para ello con acciones responsables. Actividad 1 Material Vaso de precipitado de 400 ml Pipetas Bureta Vidrio de reloj Sustancias Cloruro de amonio Acido clorhdrico diluido Hidrxido de amonio 1:1 Solucin de alizarina Muestra Solucin de Al2 (SO4)3 y NaCl Desarrollo 1. Mide con una bureta 20 ml de la muestra, colcalos en un vaso de precipitado, diluye a 150 ml con agua destilada (como no es una anlisis cuantitativo, se puede utilizar agua de la llave). 2. Acidula con 5 ml de cido clorhdrico diluido y agrega media cucharadita de cloruro de amonio y unas gotas de solucin de alizarina. 3. Precipita en fro con hidrxido de amonio 1:1 agitando constantemente hasta que el color amarillo de la alizarina vire a rojo. 4. Tapa el vaso con un vidrio de reloj y deja reposar el precipitado un rato y luego agrega unas gotas de hidrxido de amonio 1:1 cuidadosamente para no remover el precipitado del fondo del recipiente. Anota las observaciones. COBACHSLP/ACADEMIA_SUBMOD 7

Esquematiza las observaciones de cada uno de los pasos.

Actividad 2 Material Vaso de precipitado de 400 ml Pipetas Bureta Vidrio de reloj Mechero Soporte universal con aro metlico y tela de asbesto Sustancias cido clorhdrico 1:1 cido ntrico concentrado Cloruro de amonio al 10% Hidrxido de amonio 1:1 Nitrato de plata al 1% Muestra FeSO4 FeCl2 COBACHSLP/ACADEMIA_SUBMOD 7

Desarrollo 1. Mide 50 ml de la muestra en solucin y diluye a 100 ml con agua destilada. 2. Acidula con unas gotas de HCl y calienta hasta ebullicin. 3. Oxida la solucin con cido ntrico concentrado hasta que aparezca humo rojizo (conserva el vaso tapado para evitar irrigar la muestra). 4. Agrega 10 ml de cloruro de amonio y precipita con la solucin diluida de hidrxido de amonio. La precipitacin es completa cuando se percibe olor a amoniaco. Esquematiza la reaccin de precipitacin

Actividad 3 Material Vaso de precipitado de 400 ml Pipetas Bureta Vidrio de reloj

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Sustancias Cloruro de amonio al 10% Oxalato de amonio al 5% Rojo de metilo al 1% Hidrxido de amonio 1:1 Oxalato de amonio al 10% Cloruro de amonio al 10% Muestra CaCl2 Desarrollo 1. Pesa 0.2 g de cloruro de calcio. 2. Agrega 10 ml de cloruro de amonio al 10%, diluye con agua destilada hasta completar 100 ml 3. Ajusta el pH de la solucin hasta neutro, para ello agrega unas gotas de indicador (cidorojo, bsica-amarillo). En caso de ser cida agrega hidrxido de amonio. 4. Calienta la solucin hasta ebullicin y precipita con oxalato de amonio al 10% gota a gota. Esquematiza las observaciones de cada uno de los pasos.

Conclusin

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Coloracin y decoloracin. Fundadas en la aparicin y desaparicin de un color, se llevan a cabo en un tubo de ensayo, placa de porcelana o papel filtro, y menos frecuentemente sobre fibras textiles. En algunos casos se trata de las mismas reacciones de precipitacin en las que debido a la dilucin no se produce ms que una coloracin sin que llegue a rebasarse el producto de solubilidad del precipitado coloreado. En general pueden utilizarse los ms diversos procesos qumicos, de algunos de los cuales son ejemplo los siguientes: Formacin de un compuesto coloreado mediante un proceso redox, reconocimiento de Mn2+ oxidndolo a MnO-4 de color violeta.

Formacin de complejos de distintas clases con reactivos orgnicos, como la coloracin roja del Fe2* con o-fenantrolina o inorgnicos como la tambin roja de Fe3+ con tiocianato.

Formacin de lacas con diversos colorantes. Por ejemplo, los que origina el Mg2+ al reaccionar con amarillo de titanio en medio bsico.

Decoloraciones, as la del permanganato por muchos reductores para el reconocimiento de estos.

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Cambios de color, como los que muestran los indicadores cido-base (fenolftalena, rojo de metilo) al variar le pH de medio operativo.

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Habilidad Aplicar tcnicas cualitativas para coloracin y decoloracin Actitudes Mantiene una actitud respetuosa hacia la interculturalidad y la diversidad de creencias, valores, ideas y prcticas sociales. Muestra disposicin al trabajo metdico y organizado de manera individual y colaborativa, respetando los diferentes puntos de vista y privilegiando el dilogo Sigue instrucciones y procedimientos de manera reflexiva Participa en la realizacin de actividades experimentales, atendiendo los reglamentos establecidos para ello con acciones responsables. Actividad 1 Material Vaso de precipitado de 100 ml Bureta Balanza granataria Matraz volumtrico de 250 ml Embudo Matraz Erlenmeyer Mechero Soporte universal con aro metlico y tela de asbesto Termmetro Sustancias cido sulfrico Muestra Solucin de KmnO4 Solucin de H2C2O4 Desarrollo 1. Pesa o.8 g de permanganato de potasio, virtelo con embudo a un matraz volumtrico de 250 ml, agrega poca cantidad de agua, agita hasta disolucin y afora, guarda esta solucin por 14 das en un lugar oscuro. 2. Prepara 250 ml de solucin de cido oxlico, pesando 1.570 g y afora con agua destilada. 3. Llena la bureta con la solucin de permanganato de potasio. 4. Mide 15 ml de cido oxlico y colcalos en un matraz Erlenmeyer. 5. Calienta a 900C, retira y titula inmediatamente. 6. Al principio agrega la solucin lentamente y espera a que decolore (se decolora debido a que los iones de Mn+2 catalizan la reaccin) agita constantemente durante la titulacin COBACHSLP/ACADEMIA_SUBMOD 7

7. Continua la titulacin hasta que adquiera un color rosa con una sola gota. Esquematiza el proceso

Conclusin

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Desprendimientos gaseosos. Un considerable nmero de ensayos se basan en la posibilidad de producir, mediante la adicin de un reactivo, el desprendimiento de un gas cuyo olor o color es caracterstico o cuya reaccionabilidad permite su caracterizacin por uso de una solucin o papel reactivo; as el reconocimiento de NH +4 por el desprendimiento de NH3 que origina el tratamiento con hidrxido sdico, amoniaco que se puede caracterizar por su olor, por su reaccin alcalina al papel indicador de pH o por la mancha negra que produce en un papel filtro humedecido con sal mercuriosa; o los numerosos desprendimientos que tienen lugar al tratar por un cido fuerte las sales de cidos dbiles y voltiles y que permiten el reconocimiento de los gases desprendidos; sulfuro de hidrgeno de olor tpico, de los sulfuros; anhdrido carbnico y sulfuroso, de carbonatos y sulfitos; vapores nitrosos y pardos de los nitritos. Catlisis. Este proceso, en el cual una pequea cantidad de una sustancia acta modificando la velocidad de una reaccin se utiliza con frecuencia para la identificacin de la sustancia que provoca el fenmeno, es decir del catalizador o de la de los productos de la reaccin formados. Induccin. Proceso en el que un compuesto (inductor) a travs de una reaccin (inductora) provoca o acelera otra reaccin (inducida) mediante la que se identifica el inductor. En toda reaccin de induccin existe un actor que es el compuesto comn a las d os reacciones, un inductor que es la sustancia que al reaccionar con el actor induce la segunda reaccin (la inducida) y un aceptor que es el reactivo que a consecuencia de su reaccin con el actor es inducido. Tanto la catlisis como la induccin tienen de comn el que provocan una alteracin de la velocidad de reaccin y una diferencia esencial; en la catlisis, si el catalizador experimenta una modificacin, esta es transitoria, mientras que en la induccin la transformacin del inductor es permanente. Enmascaramiento. Tambin denominado ocultamiento, secuestro o inmovilizacin, este proceso se aplica en sustitucin de la separacin por precipitacin y filtracin siempre que interese rebajar la concentracin de un ion de modo tal que ste no interfiere en el resultado de la reaccin que interesa llevar a cabo. Ello se logra principalmente por los siguientes procedimientos: Transformacin de iones coloreados interferentes en complejos incoloros, estables, cuando se va a efectuar una reaccin coloreada o cuando se desea impedir la precipitacin del ion enmascarado, si la reaccin es de precipitacin. Por ejemplo el enmascaramiento de Fe3+ mediante adicin de fluoruro alcalino, para dar el complejo incoloro, que evita la interferencia de aquel en la identificacin Co2+ mediante SCN. Por procesos de oxido reduccin, como en la reduccin de Fe3* a Fe2+ por adicin de SnCl2 que impide la interferencia de aqul en el mencionado reconocimiento de Co2* mediante SCN. Por formacin de una especie insoluble, como en la identificacin de Ce3+ con persulfato en medio alcalino y extraccin del Ce(NO3)4 amarillo, tras acidificar con fosfato de tributilo, en la que la interferencia de Mn2+ se evita debido a que precipita como MnO2.

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Extraccin. Utiliza disolventes orgnicos, no miscibles con agua, para extraer, de soluciones acuosas sustancias solubles en aquellos; o disolventes miscibles o no, cuando se trata de extraer sustancias en estado slido. Por ejemplo se usa etanol absoluto para separar nitrato clcico anhidro de sus mezclas con los nitratos de estroncio y bario.

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Habilidad Aplicar tcnicas cualitativas a los diferentes tipos de reacciones Actitudes Mantiene una actitud respetuosa hacia la interculturalidad y la diversidad de creencias, valores, ideas y prcticas sociales. Muestra disposicin al trabajo metdico y organizado de manera individual y colaborativa, respetando los diferentes puntos de vista y privilegiando el dilogo Sigue instrucciones y procedimientos de manera reflexiva Participa en la realizacin de actividades experimentales, atendiendo los reglamentos establecidos para ello con acciones responsables. Material Tubos de ensaye mediano Pinzas para tubos de ensaye Mechero Soporte universal con aro metlico y tela de asbesto Moneda o llave de cobre Alambre de cobre Popote Cerillos Vaso de precipitado Reactivos xido de calcio Carbonato de calcio Cloruro de amonio Papel tornasol Nitrato de mercurio I cido clorhdrico Cloruro de sodio

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Actividad 1 Reaccin de sntesis. En un tubo de ensayo coloque 0.1 g de oxido de calcio y agregue 5 ml de agua, agite con fuerza y observe, decante el lquido pasndolo a otro tubo de ensayo; en este tubo introduzca hasta el seno del lquido un popote y proceda a soplar, observe lo que ocurre. Pregunta Qu ocurre al poner en contacto el xido de calcio y el agua? Respuesta Esquema

Qu gas se pone en contacto con el agua de cal al soplar en esta?

En funcin de las propiedades qumicas

sus

Qu tipo de compuestos son los reactantes y los productos de las reacciones?

Actividad 2 Reaccin de anlisis. En un tubo de ensayo coloque 0.5 g de carbonato de calcio; tome el tubo con las pinzas y proceda a calentar hasta que haya algn cambio, observe lo que ocurre. Acerque un cerillo a la boca del tubo. En un tubo de ensaye coloque 1 g de cloruro de amonio y caliente hasta que observe algn cambio, aprecie el aroma y acerque un papel tornasol rojo, luego uno azul. Pregunta Cul es el factor necesario, en las condiciones de operacin para que estas reacciones ocurran? Respuesta Esquema

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Actividad 3 Reaccin de simple sustitucin. En un vaso de precipitados vierta 10 ml de solucin de nitrato de mercurio I e introduzca una moneda o llave de cobre previamente limpia con cido clorhdrico concentrado. En un vaso de precipitados vierta 10 ml de nitrato de plata, agregue un trocito de alambre de cobre y observe lo que ocurre. Pregunta Qu ocurre en este tipo de reacciones? Respuesta Esquema

Actividad 4 Reaccin de doble sustitucin. En un tubo de ensayo coloque 3 ml de solucin de nitrato de plata y agregue 2 ml de la solucin de cloruro de sodio, observe lo que ocurre. Pregunta Qu ocurre en este tipo de reacciones? Respuesta Esquema

Completa la siguiente tabla. NOMBRE cido clorhdrico (diluido) cido sulfrico (diluido) Hidrxido sdico o potsico Hidrxido amnico (solucin acuosa de amoniaco) Carbonato sdico Carbonato amnico Ferrocianuro potsico Cloruro de bario Nitrato de plata Sulfuro de sodio o cido sulfhdrico Cianuro potsico (slo en medios no cidos) Perxido de hidrgeno Yoduro potsico COBACHSLP/ACADEMIA_SUBMOD 7 FRMULA HCl

Completa las reacciones siguientes:

Qu aprend y en qu tipo de laboratorio o empresa se aplica?

__________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________

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REACCIONES A LA GOTA DE LOS GRUPOS II Y III DE ANIONES Y CATIONES

Habilidad Aplicar tcnicas cualitativas por va hmeda (marcha analtica) para iones que se encuentran en solucin. Aplicar tcnicas cualitativas de anlisis semimicro mediante ensayos a la gota. Actitudes Mantiene una actitud respetuosa hacia la interculturalidad y la diversidad de creencias, valores, ideas y prcticas sociales. Muestra disposicin al trabajo metdico y organizado de manera individual y colaborativa, respetando los diferentes puntos de vista y privilegiando el dilogo Sigue instrucciones y procedimientos de manera reflexiva Participa en la realizacin de actividades experimentales, atendiendo los reglamentos establecidos para ello con acciones responsables. Los ensayos se realizan en iones que se encuentran en solucin, cuyo peso est entre 0.01 y 0.1 de gramo y 10 y 1 mililitro de volumen empleado. Los ensayos a la gota, por lo tanto, corresponden a los mtodos de anlisis semimicro y se efectan sobre una placa de porcelana o vidrio que se llama placa de toque, que puede variar en su nmero de excavaciones y su capacidad de 0.1 a 1.0 ml. En el fondo se distinguen los colores de los precipitados y los productos de las reacciones. Tambin existen placas de toque con fondos de color oscuro para poder distinguir precipitados blancos o de poco color. Las sustancias analizadas y los reactivos se gotean sobre la placa de toque utilizando goteros o micro pipetas. Material Tubos de ensayo Placas de toque Micropipetas Agitadores de varilla de vidrio Vaso de precipitado Reactivos NH4OH (Hidrxido de amonio concentrado) KOH (Hidrxido de potasio) HNO3 (cido ntrico concentrado) CH3COOH (cido actico concentrado) HCOO (CHOH)2COOH (cido tartrico) NaBiO3 (Bismutato de sodio) Dimetilglioxima COBACHSLP/ACADEMIA_SUBMOD 7

SnCl2 (Cloruro de estao) K4Fe(CN)6 (Ferrocianuro de potasio) CH3CH2OH (Etanol) HCl (cido clorhdrico) NH4SCN (Sulfocianuro de amonio) Pb(BiO3)2 (Bismutato de plomo)

Muestra Se prepara la solucin problema con sustancias que contengan los iones de los ensayos Desarrollo Catin Caractersticas y anin Bi3+ Incoloro, bastante cido, con poca acidez se hidroliza fcilmente, con precipitacin de sales bsicas. Desarrollo

Cu2+

Cu2+

Sn2+

Fe2+

Fe3+

En una placa de porcelana, aade 1 gota de la muestra problema, 3 gotas de KOH 2N, 3 gotas SnCl 2. La mezcla debe ser alcalina en presencia de Bi3+ se obtiene un precipitado negro. La reaccin se conoce como reduccin con estanito. Concentracin lmite 100 ppm. Catin azul plido. Forma Adicione a unas gotas de la solucin problema, 2 gotas sales coloridas si estn de NH4OH concentrado. Se obtiene un precipitado hidratadas. verde de sal bsica, que se disuelve fcilmente en Blancas o amarillas si son exceso de reactivo originando un color azul celeste. anhdridas. cido. Hidrxido azul claro. Catin azul plido. Forma En Medio neutro, o dbilmente cido, con ferrocianuro sales coloridas si estn de potasio y con cido actico precipita ferrocianuro hidratadas, o blancas o cprico de color pardo rojizo. amarillas si son anhdridas. cido. Hidrxido azul claro. Catin incoloro. cido. Sus Mezcle en una placa de toque una gota del problema hidrxidos son solubles en con otra del reactivo azul de metileno (al 0.10 % en HCl exceso de iones OH, 1 N). El color del indicador desaparece en presencia de originando estanitos y Sn2* al cabo de unos instantes. La concentracin lmite estanatos; es bastante es de 40 ppm para Sn2+ reductor. Catin verde plido. Inestable Se mezcla una gota de la solucin problema y un se oxida en el aire a Fe3+ pequeo cristal de cido tartrico en la placa de toque; se introduce una gota de dimetilglioxima al 1% (alcohlica) y dos gotas de solucin de amonaco. Se produce color rojo. Incoloro o ligeramente La muestra a analizar es clocada en la placa de toque, violeta, excepto en agregando una gota de ferrocianuro de potasio soluciones sulfricas o K4Fe(CN)6 al 10%. Un precipitado de color azul de Prusia clorhdricas, en las que forma o Berln es producido indicando Fe3+ complejos de color amarillo

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Ni2+

rojizo. Forma iones de color rojo intenso con los SCNCatin de color verde, cido; forma compuestos verdes parecidos al cobre con el NH3 aunque menos intensos.

Co2+

Mn2+

S2-

NO2-

I-

SCN-

En una placa de toque deposite unas gotas de solucin problema una de dimetilglioxima, y otras de NH 4OH hasta alcanzar una ligera alcalinidad obteniendo un precipitado de color rosa o rojo que indica Ni2+ La solucin de dimetilglixoima es preparada en etanol al 1%. Concentracin lmite 3ppm. Catin de color rosado, Sobre una placa de toque se mezcla una gota de ligeramente cido; forma solucin a analizar y 5 gotas de solucin saturada de compuestos no muy estables NH4SCN en acetona. Un color azul intenso del con el amonaco porque son disolvente orgnico, indica Co2+ oxidados por el oxgeno atmosfrico. Catin de dbil color rosa; En una placa de porcelana agregar 2 gotas de muestra estable en medio cido o problema y 2 de bismutato de sodio. neutro se oxida a MnO4(violeta) en presencia de oxidantes fuertes como el per sulfato o el bismutato. Precipita en forma de PbS en En una placa de porcelana agregar 2 gotas de muestra presencia de sales de plomo. problema y 2 de bismutato de plomo. La solucin que lo contiene es alcalina. Anin incoloro dbilmente Investiga el procedimiento bsico, reductor y oxidante. La solucin es neutra, alcalina o ligeramente cida. La solucin es cida, neutra o Investiga el procedimiento alcalina. Reductor. Se oxida por la presencia de Fe3+ Cu2+ y NO2Ion incoloro, neutro y Investiga el procedimiento reductor. Es destruido por otros reductores como Zn en medio cido, produciendo H2S y HCN. Las soluciones que los tienen pueden ser cidas, bsicas o alcalinas.

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Observaciones y resultados Catin y anin 1. Bi3+ Observaciones adicionales Reaccin

2. Cu2+

3. Cu2+

4. Sn2+

5. Fe2+

6. Fe3+

7. Ni2+

8. Co2+

9. Mn2+

10. S2-

11. NO2-

12. I13. SCN-

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Contesta el siguiente cuestionario 1.- Cul es la importancia de las reacciones a la gota en el anlisis qumico cualitativo? ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ _______________________________________ _______________________________________ _____________________________________ 2.- Indique la razn por la cual se agrega generalmente el reactivo sobre el problema y no al revs, en el ensayo a la gota. _______________________________________ _______________________________________ _______________________________________ _______________________________________ _______________________________________ _______________________________________ _______________________________________ 3.- Si se requiere calentar la mezcla de reaccin en una placa de toque, Qu procedimiento utilizara? _______________________________________ _______________________________________ Comentario de la experiencia en el laboratorio. _____________________________ _____________________________ _____________________________ _____________________________ _____________________________ _____________________________ _____________________________ _____________________________ _____________________________ _____________________________ _____________________________ _____________________________

_____________________________ ________________________________________________________________________________ _____________________________ ________________________________________________________________________________ _____________________________ ______________________________________________________________________________ _____________________________ 4.- Una vez realizado el anlisis a la gota, Cmo lleva a cabo la limpieza de la placa de toque? ________________________________________________________________________________ ________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ 5.- qu procedimiento empleara para observar enturbiamiento y colores dbiles en una placa de toque de vidrio transparente? ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________

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Para reafirmar, colorea los crculos segn el resultado de los ensayos.

1 Precipitado negro

Qu aprend y en qu tipo de laboratorio o empresa se aplica? ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________

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Habilidad Aplicar tcnicas cualitativas por va hmeda (marcha analtica) para iones que se encuentran en solucin. Aplicar tcnicas cualitativas de anlisis semimicro mediante ensayos sobre papel filtro Actitudes Mantiene una actitud respetuosa hacia la interculturalidad y la diversidad de creencias, valores, ideas y prcticas sociales. Muestra disposicin al trabajo metdico y organizado de manera individual y colaborativa, respetando los diferentes puntos de vista y privilegiando el dilogo Sigue instrucciones y procedimientos de manera reflexiva Participa en la realizacin de actividades experimentales, atendiendo los reglamentos establecidos para ello con acciones responsables. El papel filtro se emplea, frecuentemente, para realizar la identificacin cualitativa de aniones y cationes. El papel filtro es un medio poroso que aumenta la sensibilidad de las reacciones qumicas debido a los fenmenos de capilaridad y adsorcin, a diferencia de otros medios no porosos. Las caractersticas que debe reunir el papel filtro sobre el que se efectan las reacciones son las siguientes: Pureza Textura Grosor Generalmente se utiliza el papel filtro utilizado para fines cualitativos (Whatmann N 542) de 2 x 6 cm, 4 x 6 cm, en forma de tiras. Los papeles ms conocidos son llamados los papeles indicadores, que se emplean para la determinacin del pH de las soluciones. El papel reactivo, al hacer contacto con las substancias analizadas, da las coloraciones especficas que nos permiten identificarlas. La calidad y espesor del papel son muy importantes ya que, de no ser as, las gotas se extienden demasiado. Algunos de los papeles reactivos tienen una larga existencia mientras que otros deben ser usados inmediatamente despus de haber sido preparados. Materiales 2 crculos Papel filtro Whatmann 542 1 Mechero de Bunsen 1 Pinzas para crisol 8 Tubos de ensayo de 13x100 mm. 2 Vidrios de reloj de 9 cm. 1 gotero. 4 tubos capilares.

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Reactivos NaOH NH4OH Indicador de fenolftalena alcohlica al 5% Kl 0.5N Almidn HNO3 1:1 Nitromolbdico Bencidina acetato de plomo al 10% Muestra Disolucin de cloruro de amonio Disolucin de xido de mercurio Solucin de yodo Disolucin de sal de fosfato Disolucin de sulfuro de sodio Nota: Se prepara la solucin problema con sustancias que contengan los aniones y cationes de los ensayos Desarrollo Empleado papel filtro Whatmann 542 o equivalente, crtelo en tiras de 2x6cm, 4x6 cm; tenga, adems, la precaucin de no tomar con los dedos si no valindose de unas pinzas. Para realizar su secado, previa impregnacin de reactivo, ponga las tiras de papel alejado y por encima e una flama pequea del mechero de gas. Las reacciones deben efectuarse acercando dicho papel reactivo a un tubo de desprendimiento. Reaccin para amonio NH4+ A un mililitro de muestra problema, en un tubo de ensayo, se le aade NaOH en ligero exceso, hasta reaccin alcalina y se acerca un papel reactivo impregnado de indicador de fenolftalena alcohlica al 5% que al ser expuesto a los vapores que emergen del tubo de ensayo cambia de color rojo violceo. Reaccin para mercurio (II) Impregne el papel filtro con Kl (0.5N) y espere a que se encuentre seco. En presencia de estos iones se produce un color verde que disminuye cuando hay un exceso de reactivo.

Reaccin para yodo Coloque una gota de solucin problema sobre el papel filtro de almidn. Un color azul indica la presencia de yodo.

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Reaccin para fosfatos Sobre una tira de papel filtro, exento de substancias reductoras coloque una gota de la solucin problema; encima aada una gota de HNO3 1:1 y 2 gotas de reactivo nitromolbdico, calentado por encima de la llama del mechero. Aada una gota de bencidina y exponga la tira de papel a los vapores de amoniaco. Una mancha azul indica la presencia de fosfatos. Reaccin para sulfuros Moje las tiras de papel en el acetato de plomo al 10%; una vez impregnadas y secas, valindose de un tubo de desprendimiento, realice la reaccin produciendo H 2S que con el acetato de plomo produce una coloracin negra indicando la presencia de sulfuros. Contesta el siguiente cuestionario 1.- Por qu razones al realizar reacciones sobre el papel filtro, el papel que se emplea debe ser de buena calidad? ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ 2.- Qu espesor de papel filtro es recomendado para realizar las reacciones? ________________________________________________________________________________ 3.- A que se debe el aumento de sensibilidad de las reacciones, al emplear el papel reactivo, con respecto a otros medios no porosos? ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ 4.- Explique en forma breve la tcnica del secado de las tiras de papel empleando la corriente de aire. ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ Esquematiza el resultado

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Habilidad Aplicar tcnicas cualitativas para investigar aniones, mediante la accin del cido sulfrico o clorhdrico. Actitudes Mantiene una actitud respetuosa hacia la interculturalidad y la diversidad de creencias, valores, ideas y prcticas sociales. Muestra disposicin al trabajo metdico y organizado de manera individual y colaborativa, respetando los diferentes puntos de vista y privilegiando el dilogo Sigue instrucciones y procedimientos de manera reflexiva Participa en la realizacin de actividades experimentales, atendiendo los reglamentos establecidos para ello con acciones responsables. Los mtodos usados para la investigacin de aniones no son tan sistemticos como los de los cationes. Uno de estos mtodos es utilizando cidos (HCI o H 2SO4). El cido sulfrico es un reactivo muy til en los ensayos previos y se puede usar diluido o concentrado. Generalmente se pone en contacto la muestra primero con cido sulfrico diluido y despus con cido concentrado. Muchas sales reaccionan desprendiendo gases caractersticos, los cuales se identifican por su olor, color, o por reacciones especficas. Los resultados que se obtengan de la accin del cido sulfrico diluido y concentrado sobre la sustancia, suministran una abundante informacin que puede ser til para posteriores reacciones, en especial para la investigacin de algunos aniones.
ANION CARBONATO SULFURO OBSERVACIN Se desprende con efervescencia gas incoloro; el gas es inodoro y enturbia la solucin de hidrxido de bario. Se desprende gas incoloro olor de huevos podridos, ennegrece el papel filtro humedecido con solucin de acetato de plomo. Se desprende gas incoloro con olor sofocante; enturbia la solucin de cloruro de bario y decolora la solucin de yodo. Se desprende gas incoloro con olor picante y que forma niebla en el aire hmedo humos de NH4CI en contacto con una varilla de vidrio humedecida con solucin NH4OH. Se desprende un vapor con olor picante, de color rojizo y que forma nieblas en el aire hmedo. Se desprende vapores violetas acompaados con vapores picantes cidos y con frecuencia de SO2 y de H2S. Olor picante a vinagre GAS CO2 H2S COLOR OLOR

Huevo podrido Picante

SULFITO

SO2

CLORURO

HCI

Picante

BROMURO YODURO ACETATO

Br2 HBr I2 HI cido Acti co

Rojizo Violeta

Picante Picante Vinagre

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Material Tubos de ensaye de 13 X 100 mm 1 Gradillas 1 Esptula 1 Mechero de bunsen 1 Pipetas graduadas de 10 ml. 1 Vidrio de reloj. 2 Pinzas para tubo de ensaye 1 Agitadores de vidrio. 1 Perillas de hule. 1 gotero. 1 Vaso de precipitados de 50 ml 1 Balanza granataria. Reactivos 5 ml. cido sulfrico Q.P. 20 ml. Hidrxido de bario al 10% 10 ml. Acetato de plomo al 5% 10 ml. Solucin de yodo al 10% 10 ml. Cloruro de bario al 10% 20 ml. cido sulfrico diluido (1:1) 0.5 g. Carbonato de sodio 0.5 g. Sulfuro ferroso Q.P. 0.5 g. Sulfito de sodio Q.P. 0.5 g. Cloruro de sodio o de potasio Q.P. 0.5 g. Yoduro de sodio o de potasio Q.P. 0.5 g. Bromuro de sodio o de potasio Q.P. 0.5 g. Acetato de sodio Q.P. 1 L. Hidrxido de Amonio 6M. Desarrollo Coloque alrededor de 0.1 g de sal slida, que contiene el anin por analizar, en un tubo de ensaye y roci cada muestra por separado con 2 ml de cido sulfrico diluido (1:1) en frio y analice las muestras; en caso de que stas no reaccionen en frio, calintelas y de nuevo examnelas. Completa las siguientes reacciones y la tabla

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ANION

OBSERVACIN

En fro o en caliente

GAS

COLOR

OLOR

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Investiga en @ el cido sulfrico para contestar la pregunta y completar la tabla. Cules son las precauciones que se deben tener al usar el cido sulfrico concentrado? ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ______________________________ ______________________________ ______________________________ ______________________________ ______________________________ ______________________________ ______________________________ ______________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ PROPIEDAD Peso molecular (g/mol) Estado fsico Punto de ebullicin (0C) (760 mmHg) Punto de fusin (0C) Punto de vapor (mmHg) Gravedad especfica (agua=1) VALOR

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Actividades complementarias Trabajo individual: Ensayos Hipertextos Mapas mentales

Trabajo en equipo (integrantes de las mesas de trabajo): Dramatizacin de alguna de las prcticas. Foros y debate acerca de las medidas de seguridad, enfermedades causadas por los hongos. Por ejemplo queratosis actnica. Elaboracin del video de la prctica realizada. Historieta de alguna prctica. Cmic. Mnemotecnia Trptico de alguna prctica que incluya el campo laboral. Cartel o collage del campo laboral donde se pueden insertar los alumnos que han cursado la Capacitacin de Laboratorista Qumico. lbum fotogrfico de las sesiones del semestre en el aula o laboratorio (fotos tomadas mientras se lleva a cabo las prcticas). Etiqutenlas, con respeto. Mapas mentales Peridico mural Proyectos

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