Cartilla Polilla Guatemaltecaenlapapa

USO DE LOS COMPUESTOS VOLTILES DE LA PAPA EN EL CONTROL DE LA POLILLA GUATEMALTECA
Proyecto
Bsqueda y caracterizacin de compuestos voltiles de papa para la atraccin y captura de hembras y machos de Tecia solanivora como nueva estrategia de control
Junio de 2012 Colombia
Cotes, A.M.; Lpez-vila, A.; Bosa Ochoa, C.A.; Zuluaga, M.V.; Rincn, D; Valencia, E.; Clavijo Mc Cormick, A.; Aragn, S.M.; Borrero, F.; Camargo, C.; Cuadros, D.; Witzgall, P; Bengtsson, M; Karlsson, M; Birgersson, G. / Uso de los compuestos voltiles de la papa en el control de la Polilla guatemalteca. Bogot: CORPOICA, 2012. 48 p. Palabras clave: TECIA SOLANIVORA, PAPA, SOLANUM TUBEROSUM, CONTROL DE PLAGAS, CONTROL DE INSECTOS, HISTORIA, RELACIONES HUSPED PARSITO, CONTROL BIOLGICO, COMPUESTOS ORGNICOS VOLTILES, COLOMBIA.
Editores Felipe Borrero Echeverry, MSc Hugo Fernando Rivera Trujillo, I. A. Alba Marina Cotes, PhD Investigadores Corpoica Alba Marina Cotes, PhD Aristbulo Lpez-vila, PhD Carlos Felipe Bosa Ochoa, MSc Mara Victoria Zuluaga, I. A. Diego Rincn, BSc Edison Valencia PhD Andrea Clavijo Mc Cormick, MSc Sandra Milena Aragn, MSc Felipe Borrero, MSc Carolina Camargo, BSc Diego Cuadros, BSc Lnea de atencin al cliente: 018000121515 atencionalcliente@corpoica.org.co www.corpoica.org.co ISBN: 978-958-740-096-0 CA: PN25100050 CUI: 1350 Primera edicin: Junio de 2012 Tiraje: 500 ejemplares Diseo: Javier Nieto Produccin editorial: Diagramacin, impresin y encuadernacin www.produmedios.org Tel: 8937719 Bogot, Colombia
Investigadores Universidad Agrcola de Suecia -SLU- (Swedish University of Agricultural Sciences) Peter Witzgall, PhD Marie Bengtsson, PhD Miriam Karlsson, PhD Gran Birgersson PhD Asistentes de investigacin Hugo Crdenas Julio Daz
La presente publicacin ha sido elaborada con la cofinanciacin del Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural (MADR) y Asohofrucol, con recursos del FNFH. El contenido de la misma es responsabilidad exclusiva de los investigadores y en ningn caso debe considerarse que refleja los puntos de vista del MADR y Asohofrucol.
Contenido
PRESENTACIN CAPTULO I 5 10
Historia y problemtica de Tecia solanivora en el cultivo de la papa en Colombia
CAPTULO II
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Bsqueda de la planta hospedera por parte de larvas y adultos de la polilla guatemalteca
CAPTULO III
Anlisis de los olores de la planta de papa y su efecto en la atraccin de la polilla guatemalteca
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CAPTULO IV
Comportamiento de adultos de Tecia solanivora frente a dos compuestos voltiles de la planta de papa
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Presentacin
Felipe Borrero Echeverry Hugo Fernando Rivera Trujillo
La papa es uno de los principales productos de la canasta familiar debido a su valor alimenticio y bajo valor adquisitivo. A nivel mundial, por produccin, Colombia ocupa el puesto nmero 24 y el tercer puesto en Suramrica despus de Per y Brasil respectivamente (Faostat, 2008). En cuanto a importancia por rea sembrada, en Colombia la papa ocupa el puesto nmero cuatro con 128.701 ha y una produccin total de 2.272.772 t, con un rendimiento de 18 t/ha (Agronet, 2010; MADR, 2009), lo que la constituye en la principal fuente de trabajo de familias campesinas ubicadas sobre la zona Andina. El cultivo de la papa es afectado por diferentes plagas; hoy en da se considera que la principal plaga limitante es Tecia solanivora (Povolny, 1973), conocida comnmente como la polilla guatemalteca (Lpez-vila y Espitia, 2000). Este insecto plaga es un lepidptero de la familia Gelechiidae originario de Centroamrica, que ingres al pas a principio de los aos 80 por el Norte de Santander y se estableci en todas las zonas paperas en un periodo aproximado de 10 aos. El dao econmico es causado por la larva de T. solanivora, la cual tan pronto eclosiona penetra el tubrculo formando galeras por las que va dejando excrementos que propician, junto con patgenos secundarios, la pudricin del tubrculo (Arias et al., 1996). En Colombia se han llegado a reportar prdidas en campo hasta de un 25% y en almacenamiento de un 100% sin el manejo adecuado de la plaga (Nio, 2004). Las intensivas aplicaciones de plaguicidas tipo calendario para el control de la polilla guatemalteca desencadenan una serie de problemas ambientales, sociales y econmicos e incluso inconvenientes de salud pblica. Las intoxicaciones causadas por plaguicidas son un importante problema
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en la salud de los agricultores, por la diversidad de principios activos de los plaguicidas y las mltiples aplicaciones en prcticamente todas las actividades de la vida diaria (Hurtado y Gutirrez, 2005). Ante el ICA estn registrados los insecticidas Pirestar 38 EC, Orthene 75% SP, Lorsban 4 EC, Trapper EC y Curacron 500 EC, como nico mtodo de control de T. solanivora cuyos ingredientes activos son clorpirifos, permetrina y profenofos de categora toxicolgica I y II, los cuales corresponden a las categoras extremada y altamente txicas para el hombre, respectivamente (Arvalo y Castro, 2003; Lin, 1997). Adems, es importante considerar que la continua exposicin de T. solanivora a los mismos ingredientes activos puede llegar a generar resistencia por parte de los insectos a estas molculas, como por ejemplo la mosca blanca Bemisia tabaci, insecto capaz de afectar gran diversidad de especies vegetales de inters econmico, el cual desarroll resistencia a insecticidas a base de organofosforados y piretroides mediante la expresin de genes de resistencia relacionados con el canal de sodio de las neuronas del insecto (Boykin et al., 2007). En Colombia el uso de plaguicidas ha sido y es el principal mtodo para controlar la polilla guatemalteca; sin embargo, se ha incursionado en otros mtodos de control con el propsito de disminuir la dependencia a los plaguicidas. Lpez-vila y Espitia en el 2000 propusieron un manejo agronmico adecuado del cultivo, en donde se incluye la recoleccin manual de pupas, el uso de trampas de feromona como atrayentes y la recoleccin de residuos vegetales. Adems se ha orientado la investigacin en la bsqueda de controladores biolgicos como es el caso del parasitoide Trichograma lopezandinensis (Cifuentes et al., 2003) o el uso de baculovirus, un bioplaguicida (CIP, 2000) que actualmente es producido por el Laboratorio de Control Biolgico del Centro de Biotecnologa y Bioindustria de la Corporacin Colombiana de Investigacin Agropecuaria Corpoica (Villamizar et al., 2008). A la fecha no se ha logrado establecer un mtodo de control biolgico efectivo que supere o iguale el umbral de accin de los productos qumicos. Por lo anterior, surge la necesidad de buscar nuevas alternativas de control biolgico que permitan la eficacia en el control de la plaga y hagan parte de un paquete tecnolgico ambiental y econmicamente sustentable para el cultivo de la papa en Colombia. Una nueva alternativa para el control de adultos de insectos plaga en cultivos es el uso de los compuestos voltiles producidos por las plantas, dispuestos en trampas, para la atraccin o repelencia de machos y hembras con el fin de reducir los niveles de poblacin. Las plantas producen una
gran cantidad de compuestos que son liberados al ambiente y arrastrados por las corrientes de aire. Cada especie vegetal emite una combinacin de compuestos voltiles especfica, que puede variar debido a diferencias genticas, el estado fenolgico de la planta o a factores externos como la herbivora por parte de insectos o el ataque de patgenos. Algunos de estos compuestos pueden ser altamente especficos, como por ejemplo los compuestos azufrados producidos en plantas de cebolla u otros como el linalool que puede ser producido por muchas especies vegetales (Harborne, 2001). La mayora de los insectos no tienen buena visin, la cual, en el mejor de los casos, les sirve para detectar colores y formas generales mas no detalles finos; es por esta razn que utilizan en gran medida el olfato, para analizar el mundo que los rodea y guiarse a grandes distancias. La mayora de los insectos utilizan los compuestos voltiles para encontrar sus plantas hospederas, ya sea para la oviposicin o la alimentacin, y en algunas oportunidades para ambas situaciones. En muchas ocasiones los compuestos son indicadores honestos de la calidad de la planta y les proveen informacin a los insectos sobre la calidad del hospedero, en particular a las hembras, que deben seleccionar la planta que ofrezca las condiciones ms favorables para depositar all sus huevos y garantizar la supervivencia de su progenie (Murlis et al., 1992). Algunas de estas sustancias pueden ser producidas de manera artificial en un laboratorio con el fin de atraer y capturar insectos para monitoreo o para ser usadas como repelentes o como atrayentes en trampas. Un aspecto importante que se debe tener en cuenta cuando se trabaja con compuestos voltiles es que los resultados siempre se van a reflejar en el comportamiento de los insectos. Por esto es necesario tener un buen conocimiento del comportamiento de la especie que se est estudiando antes de comenzar a desarrollar una estrategia de control a base de compuestos voltiles. Los insectos no van a reaccionar de la misma forma a los mismos compuestos en diferentes concentraciones y mezclas a lo largo del da y en ciclo de vida. Para desarrollar una estrategia de control utilizando compuestos voltiles es necesario seguir una serie de etapas de investigacin. El primer paso es asegurarse de que la atraccin o repelencia de un insecto hacia la planta se deba al conjunto de compuestos voltiles producido por esta y no a un estmulo visual, tctil o a compuestos voltiles producidos por otros organismos. Este paso es muy importante, ya que cuando se trabaja con compuestos voltiles es muy difcil aislar el sistema completamente de otros compuestos que pueden estar en el aire. El siguiente paso es colectar el total de los compuestos voltiles que produce la planta mediante el uso de bolsas de poliacetato y comprobar
que el extracto de voltiles obtenido tenga el mismo efecto sobre el comportamiento del insecto que la muestra original, para despus determinar cules son los compuestos qumicos que componen este extracto y en qu proporciones se encuentran de forma natural. Mediante cromatografa de gases y espectrometra de masas se puede llevar a cabo la separacin e identificacin preliminar de estos compuestos, la cual puede ser refinada mediante tcnicas ms complejas de anlisis qumico. Las plantas pueden producir una mezcla de docenas de compuestos voltiles de los que solo una fraccin va a ser de importancia biolgica. Determinar cules son estos compuestos no es de gran dificultad con tcnicas de laboratorio como el uso de indicadores de calcio y la electroantenografa, la cual se basa en medir el impulso nervioso que se genera en la antena del insecto cuando entra en contacto con un compuesto qumico especfico. Al exponer una antena a los compuestos que produce la muestra de forma individual se puede determinar cules causan respuestas nerviosas y cules no. De esta forma se descartan todos los compuestos que el insecto no puede percibir y reducir el nmero de compuestos con los que se debe trabajar. Es muy importante tener en cuenta que el hecho de que un compuesto genere una respuesta nerviosa no significa que este vaya a producir una respuesta comportamental, dado que esta puede depender de una mezcla de compuestos o los compuestos pueden tener un efecto que no se refleja en el comportamiento. El ltimo paso, y el ms dispendioso antes de poder hacer evaluaciones en condiciones de campo, es determinar cules compuestos, en qu mezcla y en qu proporciones son responsables del efecto de atraccin o repelencia que nos interesa. Para esto se debe desarrollar un bioensayo estandarizado que nos permita evaluar de manera detallada el comportamiento de los insectos frente a diferentes mezclas. Esta es la etapa ms complicada, dado que los insectos pueden tener una respuesta nerviosa a decenas de compuestos producidos por la misma planta de los cuales algunos pueden ser atrayentes, otros repelentes y algunos cuyo efecto es difcil de determinar. Entre ms informacin se tenga sobre el comportamiento del insecto va a ser ms fcil inferir cules de estos compuestos pueden ser los de mayor importancia. Una vez se tenga una mezcla de voltiles adecuada, es necesario formularla y dosificarla en dispensadores. Estos dispensadores deben liberar la cantidad y proporcin de compuestos de forma constante, estar protegidos contra condiciones ambientales como la luz ultravioleta y la precipitacin, y ser de fcil uso para los agricultores.
En este trabajo se presentan los resultados obtenidos en el proyecto Bsqueda y caracterizacin de compuestos voltiles de papa para la atraccin y captura de hembras y machos de Tecia solanivora como nueva estrategia de control, financiado por el Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural y Asohofrucol; en este proyecto se llevaron a cabo estudios sobre el comportamiento de este insecto y se comenz el proceso de desarrollo de una trampa a base de voltiles de la papa para la captura de adultos de la polilla guatemalteca.
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Captulo 1
Historia y problemtica de Tecia solanivora en el cultivo de la papa en Colombia
Sandra Milena Aragn Hugo Fernando Rivera Trujillo
Introduccin
El cultivo de la papa presenta un gran nmero de problemas fitosanitarios que afectan la produccin y calidad del tubrculo. Entre los insectos de mayor importancia econmica se encuentran el gusano blanco Premnotrypes vorax (Coleoptera: Curculionidae), el tiroteador de la papa Naupactus spp. (Coleoptera: Curculionidae), la palomilla de la papa Phthorimaea operculella (Lepidoptera: Gelechiidae) y la polilla guatemalteca Tecia solanivora (Lepidoptera: Gelechiidae). Esta ltima ataca los tubrculos y se constituye en el principal factor de prdida en calidad de la produccin, que puede llegar hasta del 100% si las condiciones ambientales y el manejo del cultivo son favorables para su desarrollo (Lpez-vila y Espitia, 2000). Esta especie fue reportada por primera vez en Guatemala en 1956 y se disemin rpidamente por Centroamrica (Costa Rica, Honduras y Panam). En 1983 ingres a Colombia desde el estado de Tchira en Venezuela, por el departamento de Norte de Santander, y se dispers por las principales zonas paperas de Cundinamarca, Boyac y Nario. Posteriormente ingres al Ecuador en 1996 y en 1999 se report por primera vez su presencia en Europa en las Islas Canarias (Espaa). Se cree que la rpida expansin de esta especie es debido a la importacin y comercializacin de tubrculos infestados (Nio, 2004).
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La polilla guatemalteca (Figura 1) ha causado grandes prdidas econmicas en los principales municipios productores del pas. Para la zona centrooriental se han reportado prdidas en la produccin del orden de 43,3% en condiciones de campo y de 37,5% en almacenamiento (Arias et al., 1996; Benavides y Ramrez, 1996; Alarcn y Echavarra, 2002).
Figura 1. Adulto hembra de Tecia solanivora, la polilla guatemalteca. Fotografa: Jorge Olarte.
Biologa y ciclo de vida de Tecia solanivora

El adulto de Tecia solanivora es una polilla pequea de color caf oscuro a gris (Figura 1). Las hembras son de mayor tamao que los machos (12 mm de largo y 3,5 mm de ancho aproximadamente), presentando las alas anteriores ms anchas y claras, con lneas oscuras bien definidas a lo largo del ala. Los machos son ms pequeos (10 mm de largo y 3 mm de ancho aproximadamente), con alas de color ms oscuro y un abdomen visiblemente ms delgado. La longevidad promedio de los machos es de 16 das, mientras que la de las hembras es de 20 das (OEPP/EPPO, 2005). Los adultos solo son activos al amanecer o al anochecer y permanecen refugiados durante el da en lugares oscuros y sombreados, bien sea bajo el follaje o los desechos vegetales. La proporcin de machos y hembras es de 1:1, es decir, hay tantos machos como hembras en la poblacin (Rincn y Garca, 2007). Antes de la cpula las hembras producen una feromona que atrae a los machos (Figura 3). Esta sustancia puede ser percibida y rastreada por los
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Figura 2. Ciclo de vida de la polilla guatemalteca: adulto (superior); huevos sobre un tubrculo (derecha); larva (inferior); pupa (izquierda). machos a larga distancia. Se ha reportado que el apareamiento generalmente ocurre durante el segundo o tercer da despus de que los adultos emergen (Okunaga y Ochoa, 1987; Torres et al., 1997).
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Figura 3. Hembra de T. solanivora liberando feromona (el bulbo al final del abdomen es la glndula que produce la feromona). Fotografa: Jorge Olarte.
La mayora de las hembras copulan una vez durante su vida, en contraste con los machos que pueden copular en promedio cinco veces, dependiendo de la cantidad de hembras disponibles (Rincn y Garca, 2007). La hembra presenta un periodo de preoviposicin promedio de 2,81 1,28 das y un periodo de oviposicin de 11,25 3,60 das; se observa que el 90% de los huevos son puestos en los siete primeros das, con un pico mximo de oviposicin entre el quinto y sexto da (Okunaga y Ochoa, 1987). Cada hembra fecundada puede colocar entre 150 y 360 huevos, bien sea individualmente o en grupos, y la viabilidad de estos puede variar entre el 78 y el 98% (Nio, 2004). Los huevos de esta especie miden 0,5 mm de dimetro aproximadamente, son semiesfricos, cuando estn recin ovipositados son de color blanco y a medida que maduran se tornan de color amarillo (Herrera, 1998). En condiciones ambientales de laboratorio (15,5 C y 65,6 HR%), los huevos tardan en promedio 15 das en eclosionar. Una vez emergen las larvas, estas migran y penetran en el tubrculo produciendo galeras profundas y sinuosas a medida que crecen y se desarrollan, dejando orificios casi imperceptibles en su superficie. La fase larval tiene una duracin aproximada de 29 das, y est compuesta de cuatro instares. Los instares larvales se diferencian bsicamente por el tamao, que vara entre 1 hasta 14 mm, y el color, que en larvas de primer instar es blanco y va tornndose de color crema, para finalmente en el cuarto instar tornar en un color prpura en la cara dorsal y color verde en la cara ventral (OEPP/EPPO, 2005). Hay que tener claro que la caracterstica que predomina en larvas de cuarto instar es la presencia de la cpsula ceflica. Cuando la larva llega al cuarto instar sale del tubrculo e inicia la fase de pre-pupa y pupa, las cuales son fases inmviles que duran 5 y 26 das respectivamente. En estado adulto los machos tienen una longevidad de aproximadamente 16 das y las hembras de 20 das; estas ltimas tienen una tasa de oviposicin promedio de 200 huevos/hembra (Torres et al., 1997). El dao resultante (Figura 4) se puede diferenciar de aquel causado por el gusano blanco de la papa P. vorax ya que aquel de P. vorax es superficial, de mayor envergadura y no se encuentran heces; tambin se dife rencia del producido por la palomilla de la papa P. operculella en que la larva de Tecia solanivora sale del tubrculo a travs de un orificio limpio y no deja rastros de desechos de papa con apariencia de aserrn, como es el caso de P. operculella (Herrera, 1998; Nio, 2004).
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Figura 4. Dao causado por T. solanivora en tubrculos de papa. Fotografa: Felipe Borrero. Las larvas de ltimo instar abandonan el tubrculo para pupar y utilizan partculas de suelo o fibras vegetales para cubrirse antes y durante la fase de pupa (Figura 5). La pupa tiene forma de huso y mide entre 5 y 9 milmetros, es de color amarilla inicialmente y se oscurece a medida que madura, llegando a un color caf oscuro.
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Figura 5. Pupas de T. solanivora sobre un tubrculo de papa y capullos de seda cubiertos de arena. Fotografa: Laboratorio de Control Biolgico, Corpoica. Las condiciones ambientales como la precipitacin y la temperatura son factores determinantes en el desarrollo y la densidad de poblacin de esta especie. La duracin del ciclo de vida est ligada a la temperatura, variando entre 42 das a 25 C hasta 95 das a 15 C (Torres et al., 1997; Notz, 1996; lvarez y Trillos, 1999). Tambin se presenta una mayor densidad de poblacin
de la plaga durante los periodos secos, mientras que las bajas densidades del insecto estn asociadas con altas precipitaciones (Rodrguez et al., 1988; Alvarado et al., 1992; Barreto et al., 2002; Nio, 2003).
Principales dificultades en el manejo del insecto

Existen numerosas limitantes para el manejo de T. solanivora en condiciones de campo y almacenamiento (Figura 6). Uno de los principales problemas radica en que las larvas cumplen su ciclo larval dentro del tubrculo y por esta razn la accin de insecticidas de contacto es muy limitada, requiriendo el uso de insecticidas sistmicos con sus consecuentes riesgos ambientales y para el consumidor (Nio, 2004).
Controladores biolgicos tienen problemas en llegar a las larvas
Monocultivo, almacenamiento y uso de semilla de baja calidad
No se han reportado variedades resistentes de papa
Problemas de manejo en campo
Insectos protegidos contra insecticidas de contacto Problemas en salud humana y en medio ambiente
Uso indiscriminado de insecticidas
Figura 6. Principales problemas asociados al manejo de la polilla guatemalteca en condiciones de campo. Adems, las condiciones de monocultivo y el almacenamiento de semilla (Figura 7) por periodos prolongados favorecen la diseminacin y el incremento de la densidad de poblacin del insecto en poco tiempo. Por este motivo, en Colombia se han realizado estudios como la bsqueda, el reconocimiento y la evaluacin de potenciales controladores biolgicos (como hongos, virus o bacterias) para el manejo de T. solanivora (Osorio et al., 2001; Gmez et al., 2005). Actualmente existen aislamientos de virus entomopatgenos (patgenos de insectos) de la familia Baculoviridae que
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Figura 7. Tubrculos de papa almacenados en condiciones de bodega comnmente utilizadas en Colombia. Fotografa: Laboratorio de Control Biolgico, Corpoica. pueden ser utilizados en condiciones de almacenamiento (Castellanos et al., 1997; Villamizar et al., 2008) para el control biolgico de esta plaga, los cuales tambin han mostrado ser efectivos bajo condiciones de campo en ensayos preliminares (Gmez et al., 2011). Debido a las limitantes mencionadas anteriormente y al difcil manejo de T. solanivora, en la actualidad el control de esta plaga radica en el uso intensivo de insecticidas qumicos.
El uso de compuestos voltiles en el control de plagas agrcolas

En muchos casos la bsqueda de plantas hospederas por parte de los insectos plaga para la oviposicin y la alimentacin est particularmente asociada con los voltiles liberados por las plantas. Por lo general los machos solo necesitan utilizar los olores de las plantas para encontrar alimento, en el caso de los herbvoros. La situacin de las hembras es ms crtica, ya que estas deben seleccionar la planta que ofrezca mejores condiciones para depositar all sus huevos y garantizar la supervivencia de su progenie (Murlis et al., 1992). Las plantas emiten al ambiente un gran nmero de sustancias qumicas que se volatilizan en el aire, por esta razn se pueden denominar compuestos voltiles. Aquellos compuestos que sirven en la comunicacin entre especies
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se conocen como aleloqumicos. Cada especie vegetal emite una mezcla de compuestos voltiles especfica que depende no solo de los compuestos sino tambin de la proporcin y la cantidad liberada de cada compuesto (Harborne, 2001). Muchos aleloqumicos pueden ser producidos en comn por varias especies de plantas, pero otros son altamente especficos. Aquellos que son comunes pueden ser de gran inters para los insectos que se alimentan de varias especies de plantas, mientras que aquellos muy especficos van a ser de mayor importancia para los insectos que se alimentan de una o muy pocas especies vegetales. Adems, el cambio en la composicin y cantidad de los compuestos liberados por una planta puede depender de diferencias genticas entre individuos de una especie, el estado fenolgico de la planta o factores externos como la temperatura o el dao por insectos (Harborne, 2001). La identificacin y caracterizacin de algunos voltiles de plantas ha tenido resultados promisorios para el manejo de diferentes especies de polillas plaga en frutales y hortalizas (Russ, 1976; Hughes et al., 2003). Estos hallazgos demuestran que los compuestos voltiles atrayentes son una alternativa en el control de los insectos plaga. Se ha reportado que con el uso de trampas cebadas con voltiles de la planta hospedera se puede realizar la captura eficiente de hembras potencialmente reproductivas, reduciendo su nmero en la poblacin y a la misma vez la poblacin futura (Rembold et al., 1991). Los compuestos voltiles de plantas pueden ser utilizados para afectar tanto el comportamiento de adultos como el de larvas, por lo tanto, el estudio y uso de voltiles puede ofrecer nuevas y complementarias alternativas de control de insectos plaga de difcil manejo, como es el caso de Tecia solanivora.
BIBLIOGRAFA
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Captulo 2
Bsqueda de la planta hospedera por parte de larvas y adultos de la polilla guatemalteca de la papa
Carolina Camargo Gil Diego Fernando Rincn Rueda Edison Valencia Pizo Diego Cuadros Aristbulo Lpez-vila
Introduccin
Los aleloqumicos son sustancias que se encuentran relacionadas con la comunicacin entre organismos. Estos se pueden dividir de acuerdo con el efecto ecolgico que tienen. Las alomonas son aquellas sustancias cuyo efecto beneficia al emisor; las kairomonas son las sustancias cuya accin favorece al receptor; y las sinomonas son las sustancias que favorecen mutuamente al emisor y al receptor (Howse, 1998). La bsqueda de plantas hospederas por parte de los insectos fitfagos para la oviposicin y la alimentacin est particularmente asociada con la emisin de kairomonas (Ramaswamy, 1988; Renwick y Chew, 1994; Heard, 1999). Por este motivo, la identificacin y caracterizacin de las kairomonas de plantas han sido estudiadas como estrategia para el control de plagas. Se ha demostrado que tanto las larvas como los adultos de los insectos son guiados hacia plantas hospederas o plantas de mejor calidad por kairomonas (Russ, 1976; Hughes et al., 2003).
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Los tubrculos de la planta de papa constituyen la nica fuente de alimentacin para las larvas T. solanivora. Las hembras depositan los huevos sobre la superficie del suelo y alrededor del cuello de la planta de papa (Lpez-vila y Barreto, 2004) y no directamente sobre los tubrculos, lo cual significa que las larvas deben enterrarse para poder encontrar los tubrculos. Esto sugiere que es posible que las larvas de la polilla guatemalteca estn utilizando kairomonas generadas por los tubrculos para encontrarlos de forma rpida y exitosa. Otra opcin que no es excluyente puede ser que las kairomonas de los tubrculos le indiquen a la hembra que oviposite directamente encima de estos. Por este motivo, la deteccin y caracterizacin de sustancias implicadas en la localizacin de los tubrculos por parte tanto de larvas como de hembras adultas constituyen un aspecto fundamental para el desarrollo de nuevas metodologas de manejo. Aunque algunos de los aspectos bsicos del comportamiento de los adultos de T. solanivora se conocen, el comportamiento de esta hacia nicamente kairomonas de la papa es desconocido. Adems, el comportamiento de las larvas en la tierra y las seales que estas utilizan para localizar los tubrculos son ampliamente desconocidos. Los siguientes estudios trataron de vislumbrar cules son las seales qumicas producidas por las plantas que podran estar influenciando el comportamiento de larvas (Camargo et al., 2010) y adultos de la polilla guatemalteca de la papa (Rincn, 2005).
Materiales y mtodos
Cra de insectos. Los insectos utilizados en los experimentos provinieron de una cra de T. solanivora establecida en la Unidad de Cra y Produccin de Insectos del C. I. Tibaitat. Las pupas y los adultos se mantuvieron en el Laboratorio de Ecologa y Comportamiento de Insectos en condiciones controladas de temperatura (21 2 C), humedad relativa (44 6%) y fotoperiodo (12 h: 12 h). Las pupas se mantuvieron en cubetas de 20 cm de ancho, 30 cm de alto y 20 cm de fondo y los adultos en frascos de vidrio de 300 ml con un algodn impregnado con miel diluida en agua al 10% como alimento para los insectos (Figura 8).
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Plantas y tubrculos. Todas las plantas y tubrculos utilizados en los experimentos de laboratorio se mantuvieron en una casa de malla. Plantas de papa pastusa (Solanum tuberosum) fueron sembradas en materas plsticas de 30 cm de dimetro y 40 cm de profundidad. Se utilizaron plantas de 6 a 8 semanas para todos los experimentos realizados; estas plantas fueron cubiertas con mallas para protegerlas de otros insectos herbvoros, ya que la herbivora puede afectar los voltiles emitidos por las plantas (Holopainen, 2004) (Figura 9).
Figura 8. a. Cra mantenida en el Laboratorio de Ecologa y Comportamiento de Insectos; b. Detalle del mantenimiento de los adultos utilizados en los experimentos. Fotografa: Laboratorio Entomologa, Corpoica.
Figura 9. Material vegetal destinado para los ensayos de olfatometra con Tecia solanivora. Fotografa: Laboratorio de Entomologa, Corpoica. Ensayos de atraccin de larvas a olores de los tubrculos. Este experimento se llev a cabo en condiciones semicontroladas de casa de malla en las instalaciones de Corpoica, C. I. Tibaitat. En terrarios de 75 cm de alto, 50 cm de ancho y 75 cm de profundidad se enterraron 7 tubrculos de papa (Solanum phureja) a 15 cm de profundidad (Figura 10). Se colocaron 50 larvas de no ms de ocho horas de edad y sin previa alimentacin a diferentes distancias y ngulos de los tubrculos enterrados, conformndose a su vez cuatro tratamientos: el primer tratamiento consisti en colocar larvas sobre la superficie del suelo, justo en el sitio donde fueron enterrados los tubr-
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culos; en el segundo las larvas se colocaron sobre la superficie del suelo a 26 cm de la fuente de alimentacin; en el tercer tratamiento se colocaron las larvas sobre la superficie del suelo a 44 cm de la fuente de alimentacin; y en el cuarto tratamiento se ubicaron las 50 larvas sobre la superficie del suelo a 75 cm de la fuente de alimentacin (Figura 11) (Camargo et al., 2010).
Figura 10. Fotografas de los terrarios utilizados. a. Unidades experimentales conformadas en condiciones de casa de malla; b. Disposicin de los tubrculos de papa criolla dentro de los terrarios. Fotografa: Laboratorio de Entomologa, Corpoica. Despus de 15 das se contaron cuntas larvas haba en los tubrculos. Este montaje permiti determinar la capacidad de las larvas para detectar los tubrculos cuando estn a diferentes distancias de estos o si el geotropismo positivo es el comportamiento prioritario que obliga a las larvas a enterrarse y buscar el alimento.
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Figura 11. Ilustracin de los tratamientos del experimento realizado. Los puntos de liberacin de las larvas se encuentran marcados con X. Adaptado de Camargo et al., 2010. Posteriormente se llev a cabo un segundo experimento con el fin de determinar el efecto que tienen las sustancias voltiles de tubrculos de papa en
la capacidad de las larvas T. solanivora de encontrar tubrculos de papa con y sin los voltiles liberados por estos. Para tal fin se montaron dos tratamientos que consistieron en grupos de cuatro tubrculos de papa criolla (S. phureja) dentro de recipientes plsticos de 12 cm de alto y 12 cm de dimetro. En el primer tratamiento los tubrculos fueron cubiertos por una capa de suelo de 10 cm, mientras que en el segundo tratamiento los tubrculos se cubrieron con una capa de carbn activado granulado de 4 cm de espesor y 6 cm de suelo. En la superficie se pusieron 100 huevos de T. solanivora y despus de diez das se cont el nmero de larvas encontrado dentro de los tubrculos mediante un muestreo destructivo. El carbn activado se utiliz para atrapar los compuestos voltiles emitidos por los tubrculos, ya que este material es muy conocido por su capacidad de retener compuestos solubles en el aire, como lo son los voltiles producidos por las plantas (Dresselhaus, 1997).
Identificacin de las estructuras de la planta de papa que atraen hembras de Tecia solanivora
Fuentes de olor. Se utilizaron plantas de papa criolla en estado de floracin sembradas en materas como fuentes de voltiles. Para obtener los olores de las estructuras de inters de la planta, estas se dejaron descubiertas y las dems estructuras de la planta fueron cubiertas con bolsas de polietileno, ya que el corte de estas desencadena la emisin de sustancias voltiles, diferentes a aquellas de plantas sanas que pueden afectar la respuestas de las hembras de T. solanivora (Rincn, 2005). Se evalu la respuesta de las hembras hacia el olor producido por el follaje, las flores, 1 kg de tubrculos de papa enterrados a 10 cm de profundidad, y el tratamiento control que fue una corriente de aire filtrado libre de olores vegetales (Figura 12). Ensayo en olfatmetro de cuatro vas. Para determinar cules rganos de la planta de papa son los ms atrayentes se utilizaron hembras vrgenes de tres das de emergidas. Las pruebas se realizaron entre las 5 y las 8 am, ya que a esta hora las polillas son ms activas. Se coloc una hembra de T. solanivora en la parte central de la cmara principal del olfatmetro, donde fue expuesta a los voltiles emitidos por las diferentes fuentes de olor para determinar cul era su preferencia. Se realizaron 50 pruebas una a la vez con las fuentes de olor distribuidas al azar en las cmaras colectoras del olfatmetro. Todas las sesiones fueron realizadas bajo las mismas condiciones de iluminacin, pues la intensidad de la luz afecta el comportamiento de este insecto. Se registr el tiempo empleado por el insecto en cada uno de los brazos del olfatmetro, el nmero de entradas hacia cada uno de los tratamientos y la primera eleccin (porcentaje de respuestas positivas) de cada hembra (Figura 12).
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Figura 12. Montaje del olfatmetro de cuatro vas. a. Conformacin general en el olfatmetro; b. Planta de papa con las flores cubiertas con bolsas de poliacetato; c. Tratamiento control sin fuente de olor; d. Planta de papa con el follaje cubierto con bolsas de poliacetato. Adaptado de Rincn, 2005.
Resultados
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Atraccin de larvas hacia los olores de los tubrculos. En el primer ensayo se detectaron diferencias significativas (P < 0,0001) en la supervivencia de las larvas en los diferentes tratamientos. En el tratamiento 1, aquel en el que las larvas se ubicaron directamente sobre los tubrculos, se registr una sobrevivencia mayor que en los dems tratamientos (Tabla 1). En todos los dems tratamientos la supervivencia fue aproximadamente 75% menor con respecto al tratamiento 1.
Tabla 1. Promedio de la supervivencia de las larvas de T. solanivora en cada uno de los tratamientos. *Promedios seguidos de la misma letra no presentan diferencias significativas segn una prueba de Tukey (= 0,05).
Tratamiento 15 cm 26 cm 44 cm 75 cm Sobrevivencia promedio (%)* 21,83 a 5,66 b 4,16 b 6,00 b
En el segundo ensayo no se observaron diferencias significativas en la supervivencia de las larvas en los montajes con y sin carbn activado (Tabla 2). Tabla 2. Promedio de la supervivencia de las larvas de T. solanivora en cada tratamiento con y sin carbn activado. La prueba de t de Student no encontr diferencias significativas (P=0,33).
Tratamiento Sin carbn activado Con carbn activado Sobrevivencia promedio (%)* 31 15,73 25,8 14,72
Identificacin de las estructuras de la planta de papa que atraen hembras de Tecia solanivora. En los ensayos de olfatometra se observ una atraccin estadsticamente significativa por parte de las hembras vrgenes hacia las flores de la planta de papa (Figura 13). Aunque no se registraron diferencias significativas para el tiempo de permanencia en los diferentes brazos, s se pudo observar una leve preferencia hacia los tubrculos (Figura 14).
Discusin
Atraccin de larvas hacia los olores de los tubrculos. Los resultados evidencian la presencia de un fuerte geotropismo positivo (un movimiento hacia el centro de la tierra) en el comportamiento de las larvas neonatas de T. solanivora. Esto sugiere que este es una parte fundamental del comportamiento de bsqueda de hospederos de las larvas de T. solanivora. La ausencia de diferencias entre los tratamientos 2, 3 y 4 muestra que las larvas tienen una capacidad pobre para encontrar los tubrculos y resalta la importancia de la eleccin de sitio de oviposicin por parte de las hembras. Johnson y Gregory (2005) sugieren que las larvas de los insectos del suelo no utilizan
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Figura 13. Primera eleccin de hembras vrgenes de T. solanivora frente a diferentes estructuras de la planta de papa S. tuberosum. Barras con diferentes letras presentan diferencias significativas segn prueba de Tukey (P = 0,029). Adaptado de Rincn, 2005.
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Figura 14. Tiempo de permanencia de hembras vrgenes de T. solanivora en brazos del olfatmetro cebados con diferentes estructuras de la planta de papa S. tuberosum. El anlisis de Anova no encontr diferencias significativas entre los tratamientos. Adaptado de Rincn, 2005. seales visuales para encontrar su fuente de alimentacin sino seales fsicas o qumicas. Los resultados del segundo ensayo sugieren que probablemente no existe un efecto de los voltiles de los tubrculos en la orientacin de las larvas hacia estos, lo cual ha sido reportado en otras especies de insectos de suelo (Johnson & Gregory, 2005) Es posible que otras seales, tales como
seales fsicas y qumicas de contacto, estn jugando un papel importante en la localizacin de los tubrculos por parte de las larvas de T. solanivora. La disminucin en la supervivencia de las larvas s sugiere una limitada capacidad para orientarse hacia los tubrculos; sin embargo, otros factores como entomopatgenos, inanicin, depredadores y humedad, pudieron ser los responsables de la baja supervivencia de las larvas y no necesariamente la incapacidad de estas para localizar los tubrculos de papa. Es posible que las larvas neonatas de T. solanivora inicialmente sean guiadas hacia los tubrculos por un fuerte geotropismo positivo que puede ser complementado por la influencia de sustancias qumicas no voltiles provenientes de los tubrculos de papa. De acuerdo con diferentes trabajos (Bernklau y Bjostad, 1998; Horton y Landolt, 2002), es posible que las larvas neonatas de T. solanivora tengan la capacidad de detectar metabolitos secundarios producidos por la planta. Los metabolitos secundarios con frecuencia estn implicados en la identificacin de hospederos especficos a distancias cortas por parte de los insectos del suelo (Johnson y Gregory, 2005). Es necesario llevar a cabo estudios que definan el papel de otros compuestos qumicos del suelo en el comportamiento de las larvas neonatas de T. solanivora para poder desarrollar una buena estrategia de control de larvas con base a compuestos qumicos naturales de la planta de la papa. Identificacin de las estructuras de la planta de papa que atraen hembras adultas de Tecia solanivora. Es bien sabido que una de las estructuras de la planta que emite mayor nmero de voltiles son las flores. Estos voltiles juegan un papel crucial en la atraccin de insectos polinizadores, pero a lo largo de la evolucin se han convertido tambin en seales que atraen a los insectos plaga de la planta, indicndoles que esta se encuentra en un estado fenolgico ptimo ya que no posee niveles tan elevados de defensas naturales como las plntulas, ni ha perdido gran parte de sus nutrientes como en las plantas maduras; de all se deriva que el estado de floracin sea uno de los preferidos por los insectos plaga. La deteccin de estmulos qumicos es uno de los sentidos ms importantes para los insectos, debido a que est implicada en la localizacin de los recursos indispensables como el alimento, la bsqueda de pareja y los sitios de oviposicin. En el caso de T. solanivora, las hembras localizan la planta hospedera para la ubicacin de los recursos alimenticios y para llevar a cabo la oviposicin gracias a las seales qumicas que esta emite (Karlsson et al., 2009). Dado que en la planta de papa la floracin coincide con la tuberizacin y que los tubrculos son la principal fuente de alimento de las larvas, es posible que los voltiles emitidos por la flor sean una seal clave para la seleccin de la planta husped y oviposicin por parte de las hembras de T. solanivora.
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De hecho, se ha registrado que las hembras prefieren ovipositar sobre tubrculos que coinciden con el estado de floracin (Karlsson et al., 2009). De los resultados obtenidos, se observ que un alto porcentaje de las hembras evaluadas permanecieron quietas o inmviles en la cmara principal del olfatmetro, sin elegir algn brazo, lo cual llev a que no se registraran diferencias significativas. Esto posiblemente se debi a la utilizacin de insectos provenientes de la cra confinada en el laboratorio, ya que se ha reportado que hembras de diferentes especies de lepidpteros criadas en laboratorio pueden presentar una menor respuesta frente a un estmulo proveniente de su planta hospedera. Tambin es posible que debido a la complejidad de compuestos voltiles emitidos por la planta de papa (Karlsson et al., 2009) la hembra requiera de una mayor cantidad de seales para generar respuestas comportamentales de atraccin o repulsin. Igualmente, es posible que exista un efecto de estmulos tctiles o visuales asociados a la respuesta de atraccin. Otro factor que pudo influir en los resultados de olfatometra es que las plumas naturales de olor son intermitentes en el tiempo y el espacio, debido a la direccin y velocidad variable del viento que hace que estas se conviertan en filamentos discretos intercalados con corrientes de aire limpio. Esta naturaleza intermitente es importante para que los insectos se orienten a lo largo de la pluma, porque impide la fatiga sensorial e insensibilizacin de los receptores antenales. La utilizacin de hembras vrgenes en experimentos de olfatometra se debe a que con frecuencia estas utilizan a las plantas hospederas para diversos propsitos, adems de la oviposicin (Rojas, 1999). Por ejemplo, las hembras pueden utilizar a las plantas hospederas como lugares de encuentro para la cpula. Landolt et al. (1994) encontraron que hembras de Trichoplusia ni fueron atradas significativamente por el sexo opuesto en presencia de su planta hospedera (plantas de algodn); lo anterior indica que, teniendo en cuenta la baja movilidad de las hembras de T. solanivora y en especial aquellas copuladas, se puede interpretar que la respuesta de la hembra hacia los estmulos producidos por la planta va a ser diferente dependiendo si est o no copulada.
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Conclusiones
El papel de los voltiles en la atraccin de T. solanivora todava no es claro. Los compuestos voltiles no parecen ayudar a la larva a orientarse hacia la planta, pero aquellos producidos por la flor s atraen a las hembras. Esto sugiere que para plantear una estrategia de control para la polilla gua-
temalteca utilizando voltiles de la planta el trabajo se debe enfocar hacia el control de adultos hembra y no a modificar el comportamiento de las larvas.
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Captulo 3
Anlisis de los olores de la planta de papa y su efecto en la atraccin de la polilla guatemalteca
Miram Frida Karlson Gran Birgersson Alba Marina Cotes Felipe Bosa Marie Bengston Peter Witzgall
Introduccin
Los compuestos voltiles de las plantas son aquellos compuestos qumicos que son arrastrados por el aire y juegan papeles mltiples en la comunicacin con otras plantas, con microorganismos y con animales (Gershenzon y Dudareva, 2007; Schwab et al., 2008). Aunque estas funciones se entienden a grandes rasgos, cada especie de planta produce docenas de compuestos qumicos que en conjunto crean su olor caracterstico. Todava no es claro si todos estos son esenciales para la planta y biolgicamente activos o si solo son desechos biosintticos (Berenbaum y Zangerl, 2008). Los compuestos voltiles ayudan a los insectos herbvoros a encontrar sus hospederos; no obstante, dentro de los compuestos que produce la planta algunos pueden ser atractivos, otros repelentes y muchos pueden ser importantes para el insecto. El balance final entre aquellos atractivos y aquellos repelentes va a determinar si la planta es o no atractiva para el insecto. Los estudios recientes, principalmente en polillas, apoyan la idea de que la mez-
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cla de pocos compuestos son responsables de la atraccin hacia el hospedero (Piero y Dorn, 2007; Tasin et al., 2007; Knudsen et al., 2008; Cha et al., 2008). El conocimiento de los aleloqumicos que guan a la hembra a sitios adecuados para la oviposicin o alimentacin es esencial para entender las interacciones entre la planta y el insecto, y para el desarrollo de nuevas estrategias para el control de plagas agrcolas (Cook et al., 2007; Witzgall et al., 2008).
Figura 15. Dispensador de feromonas sintticos para el control de T. solanivora en la interrupcin de cpula instalado en un cultivo de papa. Fotografa: Laboratorio de Control Biolgico, Corpoica. El uso de la feromona producida por la hembra (la cual solo atrae machos) en el control de polillas, ha sido eficiente cuando se usa para la captura masiva de machos y para la interrupcin de la cpula. Esta ltima tcnica se basa en confundir a los machos y no permitir el encuentro con las hembras para copular (Figura 15) (Witzgall et al., 2010). Sin embargo, gran parte del dao en los cultivos puede deberse a las hembras previamente copuladas que migran a los cultivos, haciendo que el control exclusivo de machos no sea suficiente como estrategia de manejo. Utilizar los compuestos voltiles atractivos o repelentes de la plantas para alterar el comportamiento de las hembras vrgenes y apareadas puede convertirse en una herramienta eficaz para el control de la polilla guatemalteca. La polilla guatemalteca T. solanivora es una plaga monfaga que se alimenta nicamente de tubrculos de papa. Las polillas ponen huevos en la base de los tallos de las plantas cerca a los sitios de formacin de tubrculos (Figura 16) y sobre los tubrculos en condiciones de almacenamiento (Bosa et al., 2006).
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Figura 16. Huevo de Tecia solanivora en el suelo. Fotografa: Laboratorio de Control Biolgico, Corpoica. Teniendo en cuenta lo anterior, y dado que la polilla tiene hbitos nocturnos, se puede pensar que esta utiliza los compuestos voltiles producidos por la planta para encontrarla. Los voltiles producidos por la planta de la papa han sido estudiados de forma preliminar (Visser et al., 1979). De igual forma, el anlisis detallado de los compuestos producidos por las plantas en los diferentes estados fenolgicos aun no han sido explorados, lo cual sera interesante si se tiene en cuenta que T. solanivora prefiere ciertos estados fenolgicos de la planta de papa. El estudio resumido en este captulo (Karlsson et al., 2009) es el primer estudio que aborda este tema y que fundamentalmente es la base para el desarrollo de una estrategia de control mediada por compuestos voltiles.
Materiales y mtodos
Plantas e insectos. Para todos los ensayos se utilizaron plantas y tubrculos de papa S. tuberosum para la recoleccin de voltiles emitidos por estos materiales. Las plantas se sembraron en materas plsticas y fueron mantenidas en invernadero en condiciones de temperatura de 15 2 oC bajo un fotoperiodo de 14 horas de luz y 10 horas de oscuridad. Las plantas en etapa de germinacin tenan entre 2 y 3 semanas despus de la siembra, en etapa de inicio de tuberizacin tenan 5 semanas y 8 semanas en inicio de floracin. Los tubrculos fueron recolectados de plantas de 11 semanas, luego del comienzo de la etapa de senescencia. La polilla guatemalteca fue criada en tubrculos de papa en laboratorio. La poblacin del laboratorio se origin de insectos colectados cerca de Bogot, Colombia. Los insectos se mantuvieron en cilindros plsticos de 15 cm
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de dimetro x 20 cm con papel filtro en la base, lo anterior con el objeto de que las hembras ovipositaran sobre este y de esta forma colectar las posturas. Las posturas colectadas fueron puestas sobre tubrculos de papa en cajas plsticas de 20 x 30 x 15 cm y se mantuvieron a 22 3 oC con una humedad relativa de 55 5%, condiciones favorables para que las larvas cumplieran su ciclo en el interior de los tubrculos. Las larvas de ltimo instar salieron de los tubrculos, formaron la pupa sobre cartn corrugado, y fueron separadas por gnero (Rincn y Lpez; 2004). Las hembras y machos utilizados en experimentos electrofisiolgicos y comportamentales se mantuvieron separados en jaulas de acrlico (33 x 33 x 33 cm) y fueron alimentados con una solucin de agua-miel al 10%. Recoleccin de los compuestos voltiles. El follaje de papa en las tres etapas fenolgicas de desarrollo y los tubrculos (n=8) se guardaron en un frasco de vidrio de 2 L cerrado con una tapa esmerilada en condiciones de laboratorio y en bolsas de plstico inodoro en campo (Figura 17). Una corriente de aire (150 mL/min) filtrada por carbn activado fluy sobre el material vegetal desde la base del frasco hacia arriba y luego a travs de una trampa especial para capturar voltiles, llamada Super Q, durante 14 horas. Despus de la recoleccin de las muestras, las trampas fueron enjuagadas con hexano y se les aadi 500 ng de acetato de heptilo, compuesto que se us como testigo para el proceso de cromatografa de gases.
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c d
Figura 17. Colecta de voltiles emitidos por la planta de papa y tubrculos. a. Equipo de colecta de voltiles de campo; b. Colecta de voltiles de flores de la planta de papa; c. Instalacin de equipos para colecta de voltiles en campo; d. Colecta de voltiles producidos por tubrculos frescos. Fotografa: Laboratorio de Control Biolgico, Corpoica.
Anlisis qumico. Los voltiles colectados fueron analizados en un cromatgrafo de gases (CG) con un detector de ionizacin de llama y en un cromatgrafo de gases acoplado a un espectrmetro de masas. Este mtodo separa las molculas de los diferentes compuestos que hay en la muestra, basndose en la temperatura a la cual se despegan de un sustrato, y entran en el gas que los rodea, en este caso nitrgeno. Luego de ser separados estos se analizan uno a uno en el detector de ionizacin de llama y espectrmetro de masas, los cuales generan huellas especficas para cada compuesto, permitiendo que puedan ser comparadas con bases de datos existentes. La cantidad de cada compuesto fue estimada comparando el resultado con aquel obtenido en el control utilizado que consisti en acetato de heptilo en concentracin conocida, y despus se corrigieron comparndolos con concentraciones conocidas de compuestos similares. La cantidad de compuestos liberados por diferentes estados fenolgicos de la papa fueron comparados mediante anlisis de varianza de una va, seguido por pruebas de Tukey. Electroantenografa. La tcnica de la electroantenografa se basa en determinar la actividad de los nervios dentro de las antenas de los insectos cuando estas se exponen a diferentes compuestos qumicos voltiles. Esto se logra midiendo las descargas elctricas que se generan cuando hay un impulso nervioso. Si el insecto tiene la capacidad de detectar un compuesto, se produce una respuesta nerviosa. As, se acopl un cromatgrafo de gases (CG) a un aparato de electroantenografa (EAD) para hacer lecturas simultneas y poder saber con precisin a qu compuesto reaccionaron las antenas. Las antenas se cortaron en la base y cada punta se fij en una pipeta de vidrio con gel conductor. El gas efluente del CG fue dividido en dos: una fraccin fue enviada al espectrmetro de masas y la otra se envi a la preparacin de la antena, con el fin de tomar datos sobre la caracterizacin de los compuestos y la respuesta neuronal de forma simultnea. Las polillas que se usaron tenan 2-3 das de edad; se llevaron a cabo grabaciones de follaje (n=40) y olores de tubrculos (n=7) durante el comienzo de la noche.
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Resultados
Anlisis qumico. Las plantas de papa verdes liberaron 32 sesquiterpenos, los cuales conforman el 86, 93 y 55% de los voltiles liberados durante los estados de germinacin, tuberizacin y floracin respectivamente. Los sesquiterpenos ms abundantes fueron -cariofileno, germacreno-D-4-ol, germacreno-D, kunzeaol y (E,E)-R-farneceno. La mayora de los compuestos se encontraron en los tres estados fenolgicos, pero la tasa de liberacin increment significativamente entre la germinacin y la tuberizacin.
Las plantas en floracin liberaron, adicionalmente, grandes cantidades de metil-fenilacetato el cual tiene una fuerte fragancia floral, similar a la de la miel. Este compuesto fue liberado a una tasa de 157 52 ng/g/h. Adems, los tubrculos tambin liberaron este compuesto, aunque a una tasa menor (3 1 ng/g/h) (Figura 18). Asimismo, los compuestos liberados por los tubrculos difirieron de los del follaje porque los sesquiterpenos estn prcticamente ausentes y solo tres de ellos se encontraron en muy bajas cantidades. Los tubrculos liberaron principalmente alcoholes alifticos, aldehdos y cetonas, junto con compuestos bencenoides y monoterpenos. La mayora de estos compuestos tambin se encontraron en las hojas, sin embargo, varios de ellos como el tetradecanal, octen-3-ol, (Z)--ocimeno y el heneicosano fueron caractersticos de los tubrculos.
Figura 18. Compuestos voltiles del follaje con flores de papa (perfil superior) y tubrculos (perfil inferior) que muestra respuestas antenales en hembras de Tecia solanivora segn el anlisis de GC y EAD. Los compuestos activos en las antenas son: 1. sabineno; 2. mirceno; 3. 6-metil-5 hepten-2-ona; 4. R-cubeneno; 5. -elemeno; 6. R-copaeno; 7. -burboneno; 8. -cariofileno; 9. (E)--farneseno; 10. germacreno-D; 11. (E,E)-R-farneseno; 12. metil-fenilacetato; 13. -cadineno; 14. ledol; 15. gernacreno-D-4-ol; 16.tetradecanal; 17. -cadinol. Adaptado de Karlsson et al., 2009. Electroantenogramas. Las antenas de hembras de la polilla guatemalteca respondieron de forma consistente a dos compuestos producidos por los tubrculos, el metil-fenilacetato, tambin liberado por las plantas en
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etapa de floracin, y el tetradecanal. Es interesante resaltar el hecho que el metil-fenilacetato, componente principal del olor de las plantas con flores, tambin est presente en el olor de los tubrculos (Figura 18). Este compuesto activo del olor floral, que tiene un fuerte olor a miel, fue identificado por primera vez en la papa, produce una fuerte respuesta en la antena de la polilla guatemalteca T. solanivora, y un primer ensayo de trampas sugiere que probablemente contribuye a la atraccin de las hembras copuladas hacia plantas en estado de floracin y tubrculos. El sulcatn gener una respuesta en la mitad de las grabaciones que se hicieron con olores de los tubrculos, lo cual sugiere que puede ser importante. De los compuestos liberados por plantas con flor, 2 monoterpenos y 12 sesquiterpenos incitaron una respuesta antenal (Figura 18). Se necesitan estudios de comportamiento con mezclas de voltiles ms complejas para poder identificar la seal qumica que incita la atraccin de la polilla guatemalteca a la papa.
Discusin
Los sesquiterpenos son caractersticos del follaje de la papa, pero solo se encontraron en cantidades mnimas en los tubrculos. Los compuestos voltiles producidos por los tubrculos frescos contienen principalmente compuestos alifticos y algunos benzenoides y monoterpenos. El metil-fenilacetato, componente principal del olor de las plantas con flores, tambin estuvo presente en los voltiles de los tubrculos (Figura 18). Este compuesto activo del olor, que incit una fuerte respuesta en la antena de la polilla guatemalteca, tambin es un componente importante del olor floral de la Alhea Japonesa, Ligustrum japonicum la cual es atractiva para las mariposas del repollo Pieris rapae (Honda et al., 1998), lo cual sugiere que puede ser de importancia para otros insectos. Los sesquiterpenos son componentes esenciales de varios atrayentes de insectos basados en voltiles de plantas (Webster et al., 2008; Cha et al., 2008). El grupo de los sesquiterpenos es el principal componente del total de los voltiles de la papa, y 12 de ellos generaron una respuesta antenal en hembras de T. solanivora. Las diferencias en la produccin de estos a lo largo de la vida de la planta de papa podran permitir que la polilla guatemalteca discrimine entre diferentes estados fenolgicos de esta y sus partes. El hecho de que las hembras de la polilla guatemalteca sean atradas por plantas con flores y ovipositen en la tierra cerca de estas y no sobre sus tallos y hojas, es comparable con el comportamiento de oviposicin de la palomilla
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de la papa Phthorimaea operculella. Bajo condiciones de campo, las hembras ponen una gran proporcin de los huevos en la tierra adyacente a las plantas hospederas y no directamente sobre las hojas, a pesar de ser minadores (Fenemore, 1988); esto sugiere que puede haber alguna repelencia por parte de los voltiles producidos por las estructuras verdes y de esta forma jugar una doble funcin de atraccin a larga distancia y facilitar la eleccin del sitio de oviposicin a corta distancia al repeler a las hembras de las hojas.
Conclusiones
Este estudio mostr que de los ms de 60 compuestos producidos por la planta de papa solo 16 pueden ser percibidos por la polilla guatemalteca. Un extracto de voltiles atractivos para las polillas hembra debera tener tanto olores florales como el metil-fenilacetato. ya que estos indican sitios propicios para la alimentacin, como olores que indiquen buenos sitios de oviposicin, los cuales, en este caso, pueden ser sesquiterpenos que repelen a las hembras de las hojas y tallos de la planta. Teniendo esto en cuenta, compuestos que se encuentran en plantas con flores y los tubrculos como el metil-fenilacetato, el tetadecanal, y el sulcatn pueden ser tiles en el desarrollo de trampas que permitan el monitoreo de poblaciones y el posible control de la polilla guatemalteca en condiciones de almacenamiento y campo. Adicionalmente, los voltiles repelentes del follaje de la planta podran ser utilizados para impedir la oviposicin (Guerra et al., 2007).
BIBLIOGRAFA
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Captulo 4
Comportamiento de adultos de Tecia solanivora frente a dos compuestos voltiles de la planta de papa
Carlos Felipe Bosa Andrea Clavijo Mara Victoria Zuluaga Miriam Karlsson Alba Marina Cotes
Introduccin
Los estudios anteriores demostraron que los adultos de Tecia solanivora se ven atrados hacia los compuestos voltiles de las plantas de papa en estados de floracin y a los tubrculos. El anlisis qumico de estos olores detect dos compuestos, el metil-fenilacetato y el sulcatn, que se encuentran en altas cantidades tanto en flores como en tubrculos (Karlsson et al., 2009), por lo cual se seleccionaron estos dos compuestos como potenciales compuestos atrayentes de adultos de T. solanivora. En concordancia con esto, los siguientes experimentos tuvieron como objetivo evaluar el efecto de los compuestos de flores y tubrculos sobre el comportamiento de machos y hembras en olfatmetro y en condiciones de casa de malla.
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Materiales y mtodos
Los siguientes estudios se llevaron a cabo durante los aos 2008 y 2009 en el Laboratorio de Control Biolgico en una casa de malla del Centro de Biotecnologa y Bioindustria de Corpoica (Mosquera, Cundinamarca).
Evaluacin de los compuestos voltiles sintticos de la planta de papa en olfatmetro. Los compuestos voltiles previamente seleccionados por Karlsson et al. (2009) por producir respuestas en antenas del insecto se evaluaron mediante ensayos en un olfatmetro de cuatro brazos con el fin de determinar su efecto sobre el comportamiento de hembras recin emergidas de T. solanivora. El metil-fenilacetato y sulcatn se evaluaron en forma individual y combinada en el olfatmetro, para un total de tres tratamientos. Uno de los brazos del olfatmetro fue tratado con el compuesto voltil respectivo, y los brazos restantes constituyeron el control por los cuales circulaba aire limpio. Se evaluaron dos parmetros de medicin: a) el brazo de eleccin inicial, y b) el tiempo de permanencia de las hembras en cada brazo. En cada sesin experimental se coloc una hembra virgen recin emergida de T. solanivora en la parte central de la cmara principal del olfatmetro y se evalu durante 30 minutos su respuesta comportamental frente al compuesto respectivo o a la combinacin de estos a la concentracin de 10 nanogramos contenidos en un caucho de polietileno tipo farmacutico, el cual se ubic en el interior de la columna seleccionada al azar para cada repeticin. Se estableci un diseo completamente al azar con cinco repeticiones por tratamiento, y cada repeticin const de seis hembras. Este experimento se hizo tres veces con el propsito de obtener datos robustos que permitieran hacer un buen anlisis de los resultados. Ensayos en casa de malla. En una casa de malla de dimensiones 4 m x 8 m se evaluaron diferentes dosis del compuesto metil-fenilacetato, ya que este obtuvo las mayores respuestas en antenas del insecto (Karlsson et al., 2009). Se evaluaron concentraciones de 100 g, 1 mg y 10 mg de dicho compuesto; para ello 100 L de muestra de cada concentracin se dispens en un septo de caucho tipo farmacutico como material portador. Como tratamiento control se utiliz un septo de caucho con el solvente de dilucin (hexano analtico de 99% de pureza). Se colocaron cuatro trampas plsticas dentro de la casa de malla, consistentes en un recipiente plstico con aberturas en ambos lados y en su fondo agua con detergente, las que fueron cebadas con cada uno de los septos de caucho impregnados con las concentraciones de voltil previamente determinadas. Como control se utilizaron cuatro trampas con agua jabonosa y cebadas con cauchos con el solvente de dilucin, el hexano (Figura 19). Los diferentes tratamientos se dispusieron en un diseo de bloques completos al azar. Semanalmente dentro de la casa de malla se realiz una liberacin controlada de 150 adultos del insecto (75 hembras y 75 machos) y las trampas fueron revisadas con una frecuencia de dos veces por semana durante cuatro
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semanas para el registro de machos y hembras capturados en cada trampa por tratamiento.
Figura 19. Esquema del montaje de casa de malla. a. Disposicin de trampas en la casa de malla; b. detalle de una trampa de cada. Fotografa: Laboratorio de Control Biolgico, Corpoica. Adicionalmente, se evalu el efecto de la combinacin de los dos compuestos voltiles sobre adultos del insecto; para ello se registr el nmero de adultos capturados en trampas plsticas cebadas con septos de caucho que contenan la concentracin seleccionada en el ensayo anterior del compuesto metil-fenilacetato y su respectiva combinacin con tres concentraciones de sulcatn (100 g, 1mg y 10 mg) y solo el sulcatn a 100g. Se utilizaron tres trampas por cada combinacin, y el control estuvo constituido por tres trampas con septos de caucho cebados con hexano.
Resultados
Evaluacin de compuestos sintticos en olfatmetro. En los ensayos de olfatmetro, utilizando compuestos sintticos, se observ que 12 hembras seleccionaron el brazo del olfatmetro que contena metil-fenilacetato, en comparacin con 10 hembras que eligieron el brazo control y 8 hembras que permanecieron en la cmara central del olfatmetro (Figura 20). Para el voltil denominado sulcatn se observ que 13 hembras seleccionaron el brazo con este voltil, contra 14 hembras que prefirieron el brazo control y 3 hembras que optaron por la cmara central del olfatmetro (Figura 21). Al evaluarse la combinacin de los dos voltiles metil-fenilacetato y sulcatn, se obtuvo una preferencia de 11 hembras que escogieron el brazo con esta mezcla, en comparacin con 14 hembras que escogieron el brazo control y 5 hembras que se ubicaron en la cmara central. En este caso se
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Figura 20. Primera eleccin de hembras vrgenes de T. solanivora en los brazos del olfatmetro cebados con metil-fenilacetato. Barras con la misma letra no presentan diferencias estadsticas segn Tukey (=0,05).
Figura 21. Primera eleccin de hembras vrgenes de T. solanivora en los brazos del olfatmetro cebados con sulcatn. Barras con la misma letra no presentan diferencias estadsticas segn Tukey (=0,05). encontraron diferencias significativas para la cmara central con respecto al brazo con el voltil y brazo control, pero no entre estos dos ltimos tratamientos. Para el parmetro de tiempo de permanencia no se encontraron diferencias significativas para los compuestos voltiles metil-fenilacetato, sulcatn o para la mezcla de estos dos. Sin embargo se observ un mayor tiempo de permanencia por parte de las hembras hacia el brazo con el voltil metilfenilacetato y sulcatn evaluados en forma individual con respecto a los brazos tratados con aire limpio (control) (Figura 22). Evaluacin de compuestos sintticos en casa de malla. Al evaluar de forma individual el compuesto metil-fenilacetato en condiciones de casa de malla, se observ una mayor atraccin de machos y hembras en las trampas cebadas con la dosis de 100 g en comparacin a los dems tratamientos (Figura 23). Estos resultados permitieron seleccionar la dosis de 100 g del metil-fenilacetato para los ensayos posteriores.
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Figura 22. Tiempo de permanencia de hembras vrgenes en el brazo del olfatmetro tratado con el voltil respectivo y el brazo control.
Figura 23. Capturas de adultos en trampas cebadas con diferentes concentraciones del compuesto metil-fenilacetato en casa de malla. Las barras con la misma letra no difieren estadsticamente segn Tukey (=0,05). Durante la evaluacin de diferentes dosis y combinaciones de los compuestos voltiles en trampas, se observaron diferencias significativas para las capturas del insecto obtenidas con los diferentes tratamientos; no obstante, al discriminar las capturas entre machos y hembras, se encontr una mayor preferencia de las hembras por la dosis de 100 g del voltil metil-fenilacetato (Figura 24), resultados similares a los obtenidos anteriormente (Figura 23). Se observaron las mayores capturas de adultos del insecto con el compuesto metil-fenilacetato a la dosis de 100 g que cuando este se combin en diferentes dosis con el compuesto secundario sulcatn e inclusive cuando este ltimo se evalu en forma individual a la misma dosis (Figura 24).
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Figura 24. Capturas totales de hembras en trampas cebadas con diferentes mezclas de los compuestos metil-fenilacetato (Met) y sulcatn (Sul) en casa de malla. Las barras con la misma letra no difieren estadsticamente (Tukey, =0,05).
Discusin
Evaluacin de compuestos sintticos en olfatmetro. A diferencia de los resultados obtenidos para solo el compuesto metil-fenilacetato, cabe resaltar que cuando se evalu la combinacin de los dos compuestos voltiles es posible que se haya presentado un efecto de repelencia, ya que hubo un mayor tiempo de permanencia de las hembras en el brazo tratado con aire (control) que en el tratado con la mezcla de los voltiles (Figura 22). Estos resultados no fueron observados cuando se evaluaron en el olfatmetro los compuestos voltiles por separado, donde en cada caso las respuestas de atraccin de hembras fueron mayores hacia los brazos tratados con cada voltil en comparacin con el brazo control (Figura 21). Se observ que un alto porcentaje de las hembras evaluadas permanecieron quietas o inmviles en la cmara principal del olfatmetro, sin dirigirse a ningn brazo, lo cual pudo llevar a que no se registraran diferencias significativas. Tambin es posible que debido a la complejidad de compuestos voltiles emitidos por la planta de papa (Karlsson et al., 2009), la hembra requiera de una mayor cantidad de seales para generar respuestas del comportamiento, bien sea de atraccin o de repulsin. Adems, otros estmulos tctiles o visuales podran estar asociados a la respuesta de atraccin de una especie. Keiichi et al. (1998) tambin identificaron el compuesto metil-fenilacetato, adems del 2-feniletanol y un benzil alcohol, como los principales constituyentes voltiles emitidos de flores de Ligustrum japonicum de la familia Oleaceae. En este estudio el metil-fenilacetato produjo respuestas intermedias del comportamiento en Pieris rapae, medidas como respuestas positivas en antenas de adultos por la tcnica de la electroantenografa
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y como extensin de la probscide, concluyendo que probablemente este compuesto floral en adicin con otros cuatro son los que contribuyen en un radio de accin corto a la atraccin del insecto hacia la planta hospedera para la bsqueda de fuentes de alimento. En nuestro estudio otro factor que pudo influir en los resultados de olfatometra es que las plumas naturales de olor de un voltil son intermitentes en el tiempo y el espacio, debido a la direccin y velocidad variable del viento que hace que estas se conviertan en filamentos discretos intercalados con corrientes de aire limpio. Esta naturaleza intermitente de una pluma de olor es importante para que los insectos se orienten a lo largo de la pluma, porque impide la fatiga sensorial y la insensibilizacin de los receptores nerviosos de la antena. La estructura temporal y espacial de la pluma proporciona informacin importante respecto a la distancia y orientacin hacia la fuente emisora (Murlis et al., 1992). En condiciones de olfatmetro, es posible que una hembra sometida a una pluma de olor continua sin paquetes de aire no exhiba ninguna reaccin, debido a que no puede identificar dichos cambios en la pluma y, en consecuencia, no se evidencia una respuesta de atraccin. La utilizacin de hembras vrgenes en experimentos de olfatometra se debe a que con frecuencia estas utilizan a las plantas hospederas para diversos propsitos aparte de la oviposicin. Por ejemplo, las hembras pueden utilizar a las plantas hospederas como lugares de encuentro para la cpula. Landolt et al. (1999) encontraron que hembras de Trichoplusia ni fueron atradas por el sexo opuesto en presencia de su planta hospedera (plantas de algodn). Esto cobra mayor relevancia, dada la poca movilidad que poseen las hembras de T. solanivora y en especial si estas se encuentran copuladas (Lpez-vila y Rincn, 2006). Evaluacin de compuestos sintticos en casa de malla. Estudios de electroantenografa utilizando antenas de hembras y machos de T. solanivora indicaron que las antenas responden a varios sesquiterpenos y monoterpenos. Unos de los compuestos que origin las mayores respuestas en antenas fue el metil-fenilacetato, el cual fue evaluado en la presente investigacin y que corresponde a un compuesto floral que es liberado en altas cantidades en las plantas en floracin y tambin liberado por los tubrculos de papa (Karlsson et al., 2009). Estos autores sugieren que posiblemente este compuesto facilita una mayor atraccin de las hembras hacia las plantas en tuberizacin y maduracin en campo, y tambin posiblemente favorece la atraccin hacia los tubrculos en condiciones de almacenamiento. Estudios adicionales de oviposicin demostraron que las hembras de T. solanivora colocan sus huevos en el suelo con presencia de plantas en floracin completa y en el suelo en plantas que se encuentran en proceso de
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maduracin de tubrculos. Estos autores reportaron que las hembras ovipositan en el suelo y no en los tallos de las plantas o en el follaje, posiblemente debido a un efecto repelente de compuestos terpenoides liberados por el follaje de las plantas, lo cual favorece que las hembras ovipositen en el suelo o en cercana de los tubrculos, mas no en el follaje o en los tallos (Karlsson et al., 2009). Los resultados indican que la mayor atraccin de adultos hacia el voltil metil-fenilacetato puede obedecer a que este fue aislado de plantas en estado de floracin, en plantas en tuberizacin e inclusive en tubrculos solos, en tanto que el compuesto sulcatn fue aislado nicamente del follaje de la planta de papa (Karlsson et al., 2009). Esto coincide con reportes de literatura que soportan que las hembras de T. solanivora ovipositan la mayora de sus huevos sobre la superficie del suelo, muy cerca de la base de los tallos de las plantas de papa; as mismo, se ha observado que las poblaciones de este insecto se incrementan con la floracin del cultivo (Soriano, 2000; Barreto et al., 2003). Esta etapa fenolgica del cultivo posiblemente representa un momento crtico para la bsqueda de lugares de oviposicin por parte de las hembras, ya que coincide con la tuberizacin de las plantas. El metifenilacetato tambin ha sido reportado como atrayente de hembras en otros insectos como el escarabajo de cuernos largos Anaglyptus subfasciatus y Fagus crenata (Kiyoshi et al., 1997; Sakakibara et al., 1998), lo cual sugiere que puede jugar un papel importante en la atraccin de hembras de muchos insectos hacia plantas hospederas. El hecho de que la concentracin ms baja de 100 g para el compuesto metil-fenilacetato hubiera sido la preferida por los machos y hembras puede estar asociada con el hecho de que los receptores nerviosos de las antenas requieren muy bajas concentraciones de un compuesto para que estos sean detectados, como es el caso de las feromonas que generalmente se emiten en cantidades del orden de los nanogramos (Witzgall et al., 2008). Para el caso de las feromona sexuales de muchas especies de lepidpteros, se sabe que altas concentraciones de los compuestos que las integran pueden generar inhibicin de su comportamiento por mecanismos de saturacin (Miller et al., 2006), y es posible que lo mismo ocurra con compuestos voltiles emitidos por las plantas hospederas. Respecto a la mayor respuesta de atraccin y receptividad de los machos al compuesto metil-fenilacetato, se sabe que la mayora de las especies de lepidpteros (incluida T. solanivora) presenta diferencias entre los sexos a nivel del sistema nervioso para la percepcin de estmulos olfativos. Estas diferencias pueden estar manifestadas en diferente nmero de receptores antenales, neuronas de extensin o arborizacin de ncleos cerebrales, lo
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cual hace que los machos sean mucho ms sensibles a un gran nmero de estmulos de su entorno de orden ambiental o sexual o que reaccionen a diferentes estmulos que las hembras (Kingan y Hildebrand, 1989). La polilla guatemalteca de la papa es una especie monfaga de este cultivo, por lo que se puede sugerir que presenta una relacin estrecha con su planta hospedera. Esto posiblemente se debe a que el insecto desde sus estados inmaduros se alimenta de los tubrculos de la planta. El comportamiento de las hembras en la localizacin de su planta hospedera ha sido objeto de estudio, con el fin desarrollar metodologas para interrumpir los procesos de oviposicin, que son vitales para la permanencia del insecto en el cultivo de papa. En este sentido, la identificacin qumica y la caracterizacin biolgica de las sustancias implicadas en la localizacin de las fuentes de alimentacin permitirn entender el comportamiento de las hembras con miras al desarrollo de nuevas alternativas de manejo de la plaga tanto en condiciones de campo como en almacenamiento de semilla de papa.
Conclusiones
Aunque el metil-fenilacetato y el sulcatn fueron unos de los compuestos liberados tanto en tubrculos como plantas en floracin en grandes cantidades, estos no mostraron ser muy efectivos por s solos, ni mezclados para la captura de hembras de la polilla guatemalteca. El hecho de que los compuestos sean liberados en grandes cantidades y que muestren una respuesta en las antenas de la polilla no significa que estos sean atractivos. En este caso es posible que estos dos compuestos no sean los responsables de la atraccin, o que sean estos en combinacin con otros compuestos. Falta investigacin adicional sobre el uso de compuestos voltiles para el control de la polilla guatemalteca. Todava hay muchas combinaciones de compuestos que deben ser evaluadas antes de poder proponer una estrategia para el manejo de esta plaga.
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BIBLIOGRAFA
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USO DE LOS COMPUESTOS VOLTILES DE LA PAPA EN EL CONTROL DE LA POLILLA GUATEMALTECA

Junio de 2012 Colombia

Historia y problemtica de Tecia solanivora en el cultivo de la papa en Colombia

Bsqueda de la planta hospedera por parte de larvas y adultos de la polilla guatemalteca

Anlisis de los olores de la planta de papa y su efecto en la atraccin de la polilla guatemalteca

Biologa y ciclo de vida de Tecia solanivora

Principales dificultades en el manejo del insecto

Controladores biolgicos tienen problemas en llegar a las larvas

Monocultivo, almacenamiento y uso de semilla de baja calidad

No se han reportado variedades resistentes de papa

Problemas de manejo en campo

Uso indiscriminado de insecticidas

El uso de compuestos voltiles en el control de plagas agrcolas

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