AUTORES: Vctor Ontiveros i Julio Uribe, M11 PRCTICA: Anlisis del contenido en azcares de un suplemento para caldo de marisco

comparando el mtodo DNS versus un enfoque refractomtrico. 1-Introduccin

Los carbohidratos o sacridos, denominados tambin azucares, son las molculas orgnicas ms abundantes en la biosfera. Existen diferentes clases de sacridos: los monosacridos (por ejemplo, glucosa, fructosa o xilosa), los disacridos (por ejemplo, sacarosa, lactosa o maltosa), los oligosacridos y los polisacridos. Los carbohidratos son uno de los tres macronutrientes (adems de las protenas y las Grasas) que suministran energa al organismo. Para que el cuerpo humano pueda usar esta energa, captada y almacenada bsicamente en el proceso de fotosntesis, los carbohidratos se deben metabolizar. Los polisacridos complejos son elementos estructurales en las paredes de las clulas de plantas y bacterias, almacenados para alimento y funcin de soporte estructural. Adems, la ribosa y la desoxiribosa forman parte de la estructura del ADN y del ARN. El anlisis qumico de los alimentos es una temtica de gran inters y utilidad durante los procesos de control de calidad en la Industria. Los alimentos no son compuestos estticos, sino dinmicos y consecuentemente las ciencias alimentarias deben estudiar la composicin de los mismos y los efectos que sus componentes provocan en el curso de los diferentes procesos a que estn sujetos. Debido al amplio uso y a la gran importancia de los carbohidratos, su determinacin es tambin de sumo inters para la investigacin biolgica, medio ambiental, clnica y medica. Para llevarlo a cabo existe una gran variedad de mtodos, basados en distintos principios. A continuacin se exponen algunos mtodos concretos para la cuantificacin de azucares libres. METODOS FISICOS METODOS QUIMICOS METODOS BIOQUIMICOS Enzimticos

Solubilidad.

Propiedades Reductoras. Reacciones de Condensacin

Gravedad especfica. ndice de refraccin.

Microbiolgicos

Reacciones de Substitucin. Rotacin ptica. Polarimetra.

2-Objetivos
A partir de la realizacin de esta prctica se pretende asumir principalmente el siguiente objetivo: Determinacin de la CANTIDAD de azcares presentes en un suplemento para caldo mediante mtodos de anlisis enzimticos.

Para poder satisfacer dicho objetivo principal se debe adems cumplir con los siguientes objetivos: Finalmente se deber: Evaluar el mtodo utilizado, revisar i remarcar deficiencias y sealar las ventajas observadas frente a alternativas posibles Refractometra vs Espectrofotometria. Separar los azcares presentes en la muestra, en este caso un suplemento para caldo, obteniendo una disolucin de azcares incolora. Realizar una recta de calibrado con patrones de concentracin conocida.

A continuacin se ofrece un procedimiento normalizado de trabajo propuesto para la prctica donde s eincluye el material y el quipo necesario. PNT: Prctica de biotecnologa, procedimiento normalizado de trabajo propuesto para la determinacin de azcares redactes en suplementos para caldo.

Orden 0

Operaciones Medir la temperatura ambiental y encender el bao termosttico del refractmetro para que se vaya estabilizando su lectura. Pesada de todos los cubitos presentes en un paquete grande (12 unidades) de suplemento para caldo. Cortar en pequeos fragmentos diversas pastillas . Organizar el experimento para poder realizar cmo mnimo tres rplicas (o bien realizando varias disoluciones o, a partir de una misma disolucin madre, realizar tres mediciones). Independientemente de la opcin, el procedimiento siguiente ser idntico. Introducir los fragmentos en un vaso de precipitados limpio de 600 ml, pyrex . Se debe procurar no dejar restos de suplemento en el cuchillo o el envoltorio. Aadir aproximadamente 300 ml de agua destilada. Introducir el agitador magntico y calentar la disolucin (potencia

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3 de la manta) sin llegar a ebullicin. Cuando hayan desaparecido todos los grumos, dejar reposar la disolucin y enfriar hasta temperatura ambiente. Si el color no es homogneo (marrn claro) o precipitan de nuevo los fragmentos aadir 50 ml de agua destilada extra y volver a calentar. Montar el dispositivo de filtracin al vaco. Comprobar con DNS o con la reaccin de FEHNLING la posible presencia de azcares reductores como contaminantes en el papel de filtro (anlisis de posibles interferencias). Introducir el papel de filtro (procurar que este limpio y no tenga polvo) en el embudo, fijar con un poco de agua destilada procurando que se cubran todos los poros . Encender la bomba de vaco y aadir de forma controlada (poco a poco) la disolucin de suplemento. Conservar las aguas de lavado y el material filtrado. Verter las aguas madres en un embudo de decantacin (vigilando que la vlvula est cerrada) y afianzarlo en un pi con aro. Medir 60 ml de etanol absoluto con una bureta de 100ml y aadirlos al embudo. Tapar el embudo y agitar vigorosamente verificando el contacto entre los componentes. Dejar reposar hasta que se diferencien dos fases extrayendo siempre la inferior repitiendo varias veces el proceso para mejorar su eficacia. Aadir un coagulante de protenas o una disolucin defecante de zinc. Esta etapa est todava pendiente de perfilar por completo.!!! Reirar las diversas fracciones y dejar reposar hasta que estn todas a temperatura ambiente mientras se observa que no aparezca turbidez, cogulos, etc. En cuyo caso se desechar esa extraccin si no es posible filtrarla o decantarla de forma efectiva. Extraer alcuotas de 1ml usando una micropipeta y realizar las diversas lecturas refractomtricas. Preparar una curva de calibrado con disoluciones de 10g de masa total con concentraciones en peso de glucosa del 0,005% 0,01%, 0,1%, 1% y 1,5% y medir su ndice de refraccin (la segunda versin del informe puede ver modificados estos valores ya que se realizar una simulacin para predecir , usando las diluciones, rendimientos de cada operacin , etc, qu concentraciones se debern utilizar. Se repetir el mismo proceso usando anlisis de ndice de refraccin pero usando muestras tratadas con DNS. Esto se realiza para comparar la efectividad del mtodo DNS pero en vez de usar el clsico anlisis espectrofotomtrico a 540 nm se usar el refractmetro.

Bibliografa
C. Andrs, A.I. Castellanote, R. Codony, F. Guardiola, R. Lamuela, C. Lpez, M. Riu PRCTIQUES DANLISIS DALIMENTS, Ed. 1 , , edicin ,Larisa M.P. Pina, P. Garca, L. Lzaro, A. Milera, PRCTICAS DE PROCESOS DE SEPARACIN, Ed.1 , , edicin Lareda-Burgal.

Webgrafa
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Carbohidr atos-General_23034.pdf ftp://ftp.fao.org/docrep/fao/009/y4705s/y4705s02.pdf Carbohidratos (UNAM) Mtodos de anlisis Interesante, http://partners.metrohm.com/GetDocument?action=ge t_dms_document&docid=1116501 alternativa a la presentada en este guin Marzo de 2014

Marzo de 2014 Marzo de 2014