25 de enero de 2006

! Destilacin
! Tcnica de separacin basada en las diferencias en volatilidad.
! Calentando en forma gradual podemos preferencialmente llevar a fase gaseosa el
componente ms voltil de una mezcla luego se puede aumentar la temperatura y colectar
las fracciones subsiguientes.
! Mientras mas marcada sea la diferencia en volatilidad de los componentes que queremos
separar mayor grado de pureza vamos a conseguir en cada fraccin que se vaya a recoger.
! Componentes con volatilidades parecidas tendern a evaporarse y recogerse
simultneamente ya que no se lograra una buena separacin.

! Recristalizacin
! Lo fundamental es que separa por diferencias en solubilidad entre materiales slidos en un
disolvente dado.
! Se escoge el disolvente de tal forma que permita disolver ambos pero que no se disuelvan
tal fcilmente de manera que requiera un poco de calentamiento para llevarlo a solucin. De
tal forma que cuando se empiece a enfriar podamos en forma selectiva precipitarlo.
! Coger aquellos slidos menos solubles en el medio.

! Sublimacin
! Tcnica de separacin basada en las diferencias de presin de vapor (otra medida de
volatilidad) de slidos directamente.
! Bajo condiciones de vaco, podemos llevar slidos a la fase gaseosa sin pasar por la fase
liquida y los atrapamos mas abajo en una superficie fra o los volvemos a condensar
directamente a la fase slida en una superficie fra. De esta forma selectiva o
preferencialmente podemos recoger el slido mas voltil.

! Extraccin
! Tcnica en la que se separa por diferencias en solubilidad entre dos disolventes no miscibles.
! Dos lquidos que cuando mezclados no se disuelve totalmente uno en el otro sino que se
separan por diferencias en densidad (el mas denso abajo).
! Se observan claramente dos fases liquidas no miscibles.
! Se puede introducir a ese medio una mezcla de compuestos que quisiramos separar,
observaremos que se separan los compuestos yndose a aquella fase con la que tenga mas
afinidad o donde sea mas soluble.
! Luego en un embudo de separacin, podemos separar las fases y quedarnos con aquella fase
liquida en la que se encuentra el material soluble. Dejando atrs el otro compuesto que no
era soluble.


**Estas tcnicas no son prcticas para mezclas con 30 compuestos o ms ya que ser difcil conseguir
las condiciones para discriminar selectivamente para algn compuesto. Siempre se terminara con
mezclas formidables cuando se separan mezclas complejas.

! Por que se desea separar componentes de mezclas?
! Para analizar mezclas separndolas e identificando sus componentes cualitativa y
cuantitativamente. Para poder identificar el componente, debemos conocer que es lo que se
desea identificar para poder seleccionar la tcnica apropiada. Adems tenemos que conocer
las propiedades qumicas y fsicas de ese componente para saber si no existe algn otro
compuesto con esas mismas propiedades que pueda interferir en la identificacin. Si existe
esa interferencias pues se favorece que antes de identificar se lleve a cabo la separacin.

! Separaciones
! El 95% de las separaciones se concentran en el tcnica cromatogrfica.
! Necesito aislar en el espacio las partculas ya que ese es el principio de la analtica.
! La cromatografa es el aislamiento antes de la separacin.
! Hay que separar antes de identificar porque cada compuesto tiene propiedades
caractersticas.
! Para poder identificar el compuesto con certeza se pueden utilizar cualquiera de estos
mtodos: destilacin, Recristalizacin, sublimacin o extraccin.
! Analizar es identificar que hay en una muestra.
! La tcnica de separacin ms verstil y utilizada es la cromatografa

! Cromatografa de Columna

! Tubo de vidrio con algn control en la salida o llave que controlara la salida de cualquier
fluido que pueda salir.
Fase
Estacionaria
Fase
Movil
Llave
Se deposita la mezcla
de compuestos

! Se a va llenar con la fase estacionaria (grnulos finos), la cual podra salirse sino detenemos
su salida. Para eso se le coloca un vidrio poroso o bolita de pelo de ngel que solo permite la
salida de lquido.

! La mezcla de compuestos se deposita en la parte superior de la columna y se hace pasar una
fase mvil (un lquido). Al existir espacios entre los grnulos de la fase estacionaria, estar
actuando la gravedad sobre ella y estar la llave abierta habr la fuerza motriz para que esto
percole o se mueva a traes de la columna.
! Se puede controlar la velocidad con la que fluye la fase mvil por la columna dependiendo de
cuan abierta este la llave.
! El disolvente solvata la mezcla, interaccionando ntimamente con los componentes de esta.
! Dependiendo de la naturaleza qumica de la fase estacionaria y de la fase mvil es que se a
va decidir cuan bien se separa la mezcla de compuestos.
! Se debe escoger una fase mvil de tal forma que los componentes de la mezcla que
queremos separar tengan alguna afinidad parcial por ella.
! No deseamos demasiada o poca afinidad. Ya que si tiene poca afinidad no fluir y se quedara
pegado a la fase estacionaria.
! Los que tengan ms afinidad por la fase mvil se transportaran a travs de la columna.
! Se selecciona una fase estacionaria con afinidad parcial por los componentes de la mezcla.
Ya que si hay mucha afinidad los componentes se quedaran atados a la fase estacionaria y la
fase mvil no podr quitrselos para trasportarlos ya que termodinmicamente los
componentes preferirn estar enlazados a la fase estacionaria ya que sus enlaces
electroestticos son ms estables con la fase estacionaria. Y si hay poca afinidad los
componentes se fluirn todos juntos y no habr separacin.
! Las afinidades relativas varan de compuesto en compuesto es por esto que se pueden
separar ya que aquellos compuestos mas afines por la fase estacionaria tardaran mas en
bajar que aquellos que son mas afines por la fase mvil.
! En el grado en el que conozco las propiedades qumico-fsico de mi analito entonces podr
escoger mejor la combinacin de mvil y estacionaria para establecer la situacin de
afinidades parciales tan necesarias para lograr la separacin.
! Situacin: Tienes una mezcla de compuestos orgnicos y agua como fase mvil Que
ocurrir? No fluir ni se separara la mezcla ya que no existe afinidad por la fase mvil. El
agua choca con la mezcla pero pasara por el lado ya que no hay afinidad.
! Situacin: Tienes una mezcla de compuestos bien solubles en la fase mvil pero sin afinidad
por la fase estacionaria Que ocurrir? La mezcla fluir a travs de la columna sin separarse
ya que no hay ninguna afinidad por la fase estacionaria.
! El principio fundamental de toda tcnica cromatogrfica es esa competencia entre una fase
mvil que tiende a desplazarlos por la columna y una fase estacionaria que tiende a
retenerlos. Como consecuencia de ese montaje establecido, logro que los compuestos se
desplacen en el espacio ms rpido que otros y lograr la separacin.
! En el caso que los componentes tengan color, se observaran unas bandas segn avanzan a
travs de la columna. Y puedo recoger la fraccin deseada.-

! Pero cuando no hay color no podemos detectarlos pero en este caso cambio secuencialmente
el envase de recorrido este recogiendo una banda o no ya que no lo se. Luego analizare cada
envase para saber en cual se encuentra el componente de inters.

! Tipos de cromatografa:
! El criterio de establecer categora de tcnicas cromatogrficas a utilizarse depende de la
naturaleza qumica y fsica de las fases envueltas.
1. Cromatografa Lquido-Slido
a. Al ser granular la fase estacionaria se expone mas superficie, y mas la sienten los
analitos para cuando les toque pegarse a ella.
b. Es granular para que pueda pasar la fase mvil cuando sea atrada por la gravedad.
c. Existes una gama de fases mviles y estacionarias para poder seleccionar la mejor
combinacin de fases para lograr la variabilidad de afinidades que necesitamos
establecer.
2. Cromatografa Lquido-Lquido
a. Se usa granulo, en el cual esta fijado la fase estacionaria lquida, de manera que
cuando este bajando una molcula de analito abrazada por la fase mvil, la fase
estacionaria se la quite a la fase mvil.
b. As he inmovilizado al analito en el espacio atndola con un enlace covalente al granulo
o soporte de la fase mvil.
c. Porque se llama lquido-lquido? Se llama as ya que el granulo o soporte no juega
ningn papel en las afinidades parciales.
d. Hay limites por reactividad y a veces por no hacer buen uso de ellos
3. Cromatografa Gas-Slido
a. Es un sistema cerrado con presin que obligue al gas a pasar por la columna que va a
transportar el compuesto.
b. Al ser la fase mvil un gas pone una limitacin grande en trminos de que compuestos
se pueden determinar ya que para que se pueda dar la separacin la mezcla debe
poderse transportar en la fase mvil. Ya que seria como no tener afinidad por la fase
mvil ya que no esta en el mismo estado y no se van a encontrar.
c. Solo un 15% de los compuestos pueden volatilizarse sin descomponerse por lo que la
mayora de los compuestos no son compatibles con las tcnicas cromatogrficas de
gas.
d. Porque existe la cromatografa de gas a pesar de esta limitacin? Por las siguientes
ventajas: tiempo de anlisis; mejor limite de deteccin; facilidad de montaje;
establecimiento de condiciones; costos; mejor separacin; menos complicaciones; mas
rpida; entre otras. Todo esto siempre y cuando se pueda volatilizar la mezcla.




30 de enero de 2006
! Tipos de cromatografa: Continuacin.
4. Cromatografa Gas-Lquido
a. Mas probabilidad de separacin eficiente a bajo costo
b. Liquido impregnado en un soporte
5. Cromatografa de Papel
a. Es un pedazo de papel de celulosa casi pura, el cual tiene pegamentos para mantener
las fibras juntas, antioxidantes para que no se pongan amarilla tan rpido.
b. Se coloca un concentrado de la mezcla que quiero separar en la parte de abajo sin que
llegue al disolvente ya que si queda debajo se disolvera y se regara por la solucin y
no se lograra la separacin.
c. Luego de colocar el papel en la cmara, se tapa ya que la mayora de los disolventes
son voltiles entonces el disolvente subir por capilaridad.
d. Cuando el disolvente llegue a donde se encuentra la mezcla de compuesto comenzara
la competencia de afinidad por la fase mvil y por la fase estacionaria hasta que se
logra la separacin.
e. Luego se detiene la separacin y se deja que se evapore el disolvente. Si los
componentes de la mezcla tienen color, se ver un nmero de manchas que equivalen
al nmero de compuestos en la mezcla original.
f. Existe tcnica para cuantizar estas manchas conocida como densitometro con el cual se
puede determinar las densidades de molculas de cada analito y con la
proporcionalidad de esa densidades sabr la proporcionalidad en la mezcla original.
g. Puedo identificar la presencia de un compuesto siempre y cuando tenga una sospecha
o conocimiento previo ya que puedo correr una cromatografa poniendo la mezcla
desconocida y paralela a ella un poco del compuesto del cual sospecho su presencia. Si
este esta presente ver una mancha que habr corrido la misma distancia que uno de
los componentes de la mezcla ya que tendrn la misma afinidad relativa.
h. Aplicaciones preparativas - mtodo cuya finalidad va ms all de conocer el nmero de
compuestos, cuantificar. Se desea aislar un poco de uno de los componentes para
reconfirmar su identidad o realizar otro anlisis. Esto lo hago cortando la parte donde
se encuentra la mancha y con un disolvente la remuevo ya que no esta enlazada
covalentemente al papel sino que son afinidades electrnicas. Si el enlace fuera
covalente no la podra separar.
6. Cromatografa de Capa Fina



a. Anloga a la cromatografa de papel.
b. La fase estacionaria es slice (SiO
2
) o almina (Al
2
O
3
).
c. Necesito una superficie donde fijar los grnulos de la fase estacionaria, los cuales
tienden a coger esttica, o sea, densidad electrnica al pegarse a una superficie
plstica.
d. Se pegan a una superficie como plstico por esttica pero son muy delicadas ya que
con movimientos pequeos pueden salirse.
e. Las aplicaciones preparativas son ms difciles.
f. No aplica solamente a compuestos con color ya que la mayora de los compuestos no
tienen color.
g. Hay tcnicas luminiscentes, en la cual hay compuesto que emiten luz cuando son
irradiadas con radiacin ultravioleta. Meto la placa despus de eluida a una cmara
donde hay una lmpara ultravioleta y observar que brilla esos compuestos y con un
marcador puedo marcarlos e identificar la presencia de un compuesto.
h. Otra forma para impartir color es con reacciones qumicas, como por ejemplo,
metiendo la placa en una cmara de yodo ya que yodo es bien reactivo y haciendo
reacciones radicalarias reemplaza hidrogeno en los enlaces C-H impartindole color.
i. Tambin en una cmara de acido sulfrico ya que este deshidrata generando un
sistema deslocalizado que absorbe en rango visible. Y ahora le habrs impartido color.
j. Otra forma es derivatizarla, le enlazo de forma homognea en la superficie un
compuesto que flurese bajo una luz ultravioleta. Pero en los lugares donde se
encuentra los compuestos que opacan "quench (le quita la energa al cromforo). Ver
una placa que brilla menos en los sitios donde se encuentran los compuestos.

! Teora Cromatogrfica:

Fase
movil
Fase
Estacionaria

! Se utiliza como una modelo que explique las observaciones, que explicar lo que nos rodea
o que prediga y explique

! Al inyecta la muestra se comienzan a separarse los componentes debido a que tienen
velocidades diferentes y entonces comienza un intercambio entre dos fases
! En el momento en que las poblaciones relativas no cambian en trminos netos, o sea, la
molculas de analito en fase mvil y molculas en fase estacionaria. Esta situacin se
llama estado estacionario (steady state)
! Estado estacionario es una condicin de equilibrio qumico, solamente si hay un tiempo
infinito
! Constante de equilibrio: K = C
s
/C
m

! Es como una reaccin reversible
! Poder predecir si una mezcla de compuestos puede separar
1 de febrero de 2006
Quiz #1
90


Coloco en la parte inferior de una TLC de slice con un disolvente voltil A una muestra de una mezcla de
compuestos, con el propsito de identificar cuantos compuestos hay en la mezcla. Luego giro la placa de
TLC 90 y la coloco por segunda vez en una cmara pero con un disolvente B. (TLC de dos dimensiones)
Bajo qu condiciones yo realizara ese segundo paso?

Como el propsito es determinar cuantos componentes hay en la mezcla, se realizara este
procedimiento si poseo la sospecha de que hay ms de un componente en cualquiera de las manchas que
eluy en la primera corrida o para confirmar la cantidad correcta de compuestos. Observaramos manchas
nuevas en la segunda corrida si hubieran componentes que no tenan afinidad parcial por el disolvente A y
si por el B. Podran darse tantas manchas como compuestos que tuvieran afinidad por la fase mvil B. En
la segunda parte cada componente que tuviera afinidad parcial por B eluira, pero no necesariamente
obtendr la misma distancia proporcional que tuvieron en la primera, porque ahora cambian las K. Las
relatividades de C
s
a C
m
van a cambiar porque la competencia es diferente. De no haber ms de un
componente yo vera una sola mancha desplazada. De haber un componente que tuviera afinidad igual en
la primera corrida y no la tengan en B, podra yo ver dos manchas. En un examen habra que explicar que
como cambian las relatividades de la fase mvil y la estacionaria, por lo tanto cambian las K, las
afinidades relativas van a cambiar, van a eluir distancias diferentes. Es poco probable que haya un solape
en la segunda corrida.

Duda de Abraham:
Si yo coloco una muestra desconocida y uno de sus componentes recorre la misma distancia que uno de
los componentes del estndar, pero no es el mismo compuesto. Cmo puedo identificarlo?


Hay alta probabilidad de que el compuesto sea igual al del estndar, pero no puedo llegar a una
conclusin concreta con respecto a la impureza porque corri la misma distancia. Con TLC yo me baso en
la distancia, ella no me provee la informacin necesaria para decir que hay una impureza. De no estar el
compuesto de inters en la mezcla y corre la misma distancia que el estndar puedo llegar a la conclusin
incorrecta, porque lo que yo mido es la distancia. No hay forma de identificar una interferencia que corra
la misma distancia que el estndar. Solamente me llevara a sospechar que ambos compuestos son
iguales, no es absoluto.



! Teora Cromatogrfica:

Fase
movil
Fase
Estacionaria

! La constante de equilibrio (K) es nica y caracterstica para cada compuesto y ningn otro
compuesto tendr el mismo valor de K:
m
s
C
C
K !
! Pueden darse casos en que las K son diferentes, pero pueden llegar a ser tan parecidas
que en el error que siempre existe en esto mtodos, yo no las podra diferenciar. Entonces
correran juntas y se podran solapar. La K es a lo largo de toda la columna.
! Existes herramientas matemticas que nos permiten predecir si una combinacin de
compuestos en una mezcla va a separar o no por lo que si yo se eso hago menos tanteos.
! En teora, cuando veamos los fenmenos que dictan que las K sean nicas, podemos ir a
detalle qumico molecular viendo las interacciones que se estn dando para facilitar el
proceso de separacin.
! Partiendo de que los analitos solo se desplazan mientras estn en fase mvil, entre mayor
sea la poblacin en ese estado estacionario de analito en la mvil, o sea entre menor sea K
y entre ms grande sea C
m
ms rpido se mover ese analito por la columna. Por lo que,
aquellas molculas de analito que tengan mayor concentracin en la fase mvil y K ms
pequea sern los que ms rpido se van a mover.
! Mientras que a mayor K mas tiempo va a pasar ese analito en la fase estacionaria, o sea se
a va estar pegando en la fase estacionaria y mas a va tardar en salir.
! Esa fraccin de molculas en la fase mvil va a dictar cuan rpido, en trminos relativos de
uno al otro, va a eluir ese compuesto. Mientras mayor sea esa poblacin en la fase mvil
para un compuesto dado, ms veloz va a ser.

! La velocidad con la que se desplaza un analito va a tener una proporcionalidad con la
fraccin de molculas en la fase mvil ya que solo se mueven las molculas cuando estn
en fase mvil.

mbil fase la en tiempo de Fraccin mbil fase la en molculas de Fraccin Belocidad " "

! Fraccin de las molculas en la fase mvil va a ser igual al nmero de molculas en la fase
mvil entre la poblacin total de molculas.
S S M M
M M
B C B C
B C
molculas de total
mobil fase la en molculas de
mbil fase la en molculas de Fraccin
#
! !
#
#


! La velocidad de los analitos depende de la velocidad de la fase mvil (u).
$
$
%
&
'
'
(
)
#
* ! * !
S S M M
M M
C C
C
u il m fase la en tiempo de Fraccin u
V V
V
v V
! Dado que hay demasiada afinidad por la fase mvil:
0 0 + + !
S
m
s
C si
C
C
K u
C
C
u
C C
C
u
M M
M M
S S M M
M M
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#
* +
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$
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'
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(
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#
* !
0 V
V
V V
V
V

! Dado que hay demasiada afinidad por la fase estacionaria:
0 + , + !
m
m
s
C si
C
C
K 0
V 0
0
V V
V
V !
$
$
%
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'
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#
* +
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$
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'
'
(
)
#
* !
S S S S M M
M M
C
u
C C
C
u

! Hasta ahora solo podemos predecir el orden relativo de elusin, por lo que entre mayor sea
la diferencia en el valor de las Ks, mayor va a ser la diferencia en velocidad y en ubicacin
fsica en la columna. Por lo que, la velocidad solo es til a nivel terico.

! Categoras de Tcnicas Cromatogrfica:
1. TLC
! Al finalizar el anlisis los analitos terminan fijados en la fase estacionaria y no escapan de
ella.
2. Columna
L
D

! Al finalizar el anlisis los analitos no estn en la fase estacionaria ya que eluyen de la
columna y eso me permite recuperarlos. Los analitos escapan de la columna.

! El detector (D) va a contar todas las molculas de analito que salgan de esa columna
excepto las molculas de fase mvil.
Cuantia
Relativa
tiempo
linea base

! Al principio como lo que esta saliendo son molculas de fase mvil slo observare la lnea
base.
! Los compuestos tienden a separarse en bandas, y no es hasta que el componente que
tenga la K ms pequea, o sea mayor velocidad, llegue a la finalidad y salga que empieza
a contar la presencia de analito hasta que toda haya salido y haya pasado por al frente del
sensor.
! Entre medio, habr solo fase mvil hasta que vuelvan a salir molculas de otro analito de
la columna.
! El detector emitir una seal que permitir la creacin de un cromatograma. De esta
grafica podremos sacar cuantos compuestos hay presentes. Asumiendo que sus K son
suficientemente diferentes, para que sus velocidades sean diferentes y los poderlos
discernir.
! El cromatograma = perfil grfico
! Adems, me est dando informacin cuantitativa a base de las reas relativas. La banda
que tenga la mayor rea va a ser el analito que est en mayor abundancia en la mezcla
original.
! A los compuestos los caracteriza un tiempo de retencin (t
R
) que es igual a cuanto tiempo
tarda en eluir un componente.
! Van de menor tiempo a mayor tiempo
1 2


! 1 = las primeras molculas de analito que pasaron por el detector y 2 = cuando las ltimas
molculas de esa banda pasan por el frente del detector
! El cambio en voltaje en el detector puede causar variabilidades en la grafica.
! Entre mas yo amplifico la sensitividad o capacidad de contaje, ms se hace sentir
inestabilidad o ruido en la lnea base.
! El tiempo de retencin se determina en el punto mximo del pico, porque:
a. hay menos error en determinar el punto de inflexin (1,2) ya que se siente menos el
ruido de la lnea base (punto de vista practico)
b. donde ms molculas de analito estn saliendo y es el promedio (punto de vista
terico) ya que son la molculas mas representativas de ese grupo
! Lo que es til y prctico es el tiempo de retencin ya que lo puedo medir, mientras que la
velocidad no me ayuda mucho porque no la veo.
! El tiempo de retencin se define como:
$
$
%
&
'
'
(
)
# !
$
$
%
&
'
'
(
)
# !
$
$
%
&
'
'
(
)
#
*
! !
M
S
M M
S S
S S M M
M M
K
u
L
C
C
u
L
C C
C
u
L L
V
V
1
V
V
1
V V
V
V
t
R


6 de febrero de 2006
Categoras de Tcnicas Cromatogrfica:
3. Columna (Continuacin.)
El t
R
es inversamente proporcional a la velocidad del analito.
Ms rpida la fraccin de tiempo, ms rpido elua porque solo se desplaza cuando est
en fase mvil. Entre ms poblacin de molculas tenemos en la fase mvil en un
momento dado, ms rpido se est moviendo esa poblacin.
Si planteamos que una molcula tiene mucha afinidad por la fase estacionaria:

$
$
%
&
'
'
(
)
# !
M
S
K
u
L
V
V
1 t
R
como , + !
M
S
K
C
C
, +
R
t
! Al darme este trmino algo infinito, vamos a tener un tiempo de retencin bien
grande, por lo tanto no eluye la mezcla y perderamos.
! Si planteamos que una molcula tiene mucha afinidad por la fase mvil:

$
$
%
&
'
'
(
)
# !
M
S
K
u
L
V
V
1 t
R
como 0
C
C
+ !
M
S
K
u
L
t
R
+
! La velocidad de la fase mvil es constante.
! No hay nada que se pueda mover ms rpido que L/U, en trminos de analito. Este
sera el caso de un analito que estara montado en el carrito todo el tiempo. Esta sera
la velocidad lmite ms rpida que podra moverse un compuesto. De ser una mezcla
de compuestos bajo esta situacin no abra separacin. El resultado fsico final sera la

misma mezcla pero ms diluida, o sea no perdera la mezcla.
! Toda separacin depende de esa seleccin relativa de fase mvil y fase estacionaria,
que a su vez dictara K. K depende de esta distribucin de poblacin relativa. En una
corrida cromatogrfica, todos los analitos van a tener el mismo valor de L, van a la
misma velocidad constante (U), V
s
(asumiendo que no hay prdida de fase
estacionaria y que est enlazada covalentemente) es el mismo volumen para todos los
analitos.
! Lo nico que es diferente de compuesto en compuesto es K, la distribucin relativa,
porque cada analito tiene una afinidad nica por una fase u otra.
! K es la base de toda separacin cromatogrfica, ya que esto es lo que deseo
establecer cuando voy separar una mezcla de compuestos. Escoger la fase mvil y
estacionaria de manera que
M
S
K
C
C
! vare de compuesto en compuesto lo ms
posible.
! Vamos a ver a nivel molecular que son los fenmenos qumico-fsicos que causan que
los analitos tengan valores diferentes de K.
! El propsito o que hacer de la separacin es maximizar as diferencias en los valores
de K para lograr una mejor separacin entre los analitos.

! Fenmenos que dictan K a nivel molecular
1. Fuerzas electroestticas
! Las fuerzas electroestticas es el fenmeno ms fundamental en las separaciones ya
que es la atraccin entre cargas opuestas.
! En el instante en que yo establezco una carga en el espacio, instantneamente se
siente en el espacio alrededor de esa carga, unas lneas de fuerza o unas trayectorias
a travs de la cuales se atraera una carga opuesta o se repele una carga igual.
N S

! En este imn (campo magntico), estn todas las molculas o la basta mayora de
ellas alineadas como soldaditos en cierta orientacin, o sea todo el material dentro del
imn esta bien organizado.
! Por virtud de la alineacin de las molculas o de sus dipolos, reforzndose unos a los
otros surgen en el espacio unas lneas de fuerzas que atraeran material a este imn
que sea magntico. tiene una afinidad electrnica nica.
! En la tabla peridica aumenta la afinidad electrnica hacia arriba y a la derecha.


! En la misma fila horizontal, la eficiencia de apantallamiento de electrones en una
misma capa es menor que el apantallamiento o cancelacin parcial de carga nuclear
de electrones en capas interiores.
! Cada vez que yo enlazo cualquier tomo en el extremo derecho arriba de esa columna
con otro tomo a travs de un enlace covalente, donde B est ms hacia la derecha y
hacia arriba.
-#
-.
A B

! B al tener mayor afinidad electrnica, los dos electrones que traen a la mesa para
formar ese enlace covalente no se comparten por igual.
! Como B que tiene mayor afinidad electrnica va a atraer esos electrones ms
fuertemente porque su carga nuclear se siente ms efectiva en esos orbitales de
valencia. Porque los electrones que tiene la capa no cancelan con la misma eficiencia
que en la capa de A.
! Hay mtodos matemticos con los que podemos calcular el volumen en el que van a
estar los electrones en un enlace molecular, o sea donde hay la mayor probabilidad en
cualquier momento en tiempo de encontrar un electrn.
! Hay mayor probabilidad de encontrar los electrones al lado del B que al lado del A, o
sea pasan ms tiempo al lado del B, por tener carga negativa y por pasar ms tiempo
en esa regin le imparte a la molcula un carcter parcialmente negativo.
! A es parcialmente positivo, en un enlace covalente.
! Ningn enlace es perfectamente covalente o inico, porque no hay igual probabilidad
en ambos extremos ya que se crean unos dipolos. NO hay absolutos.
! Al formarse el dipolo, la molcula busca a otro enlace para compartir su carga y
estabilizarse:
-#
-.
A B
A B
-#
-.

! Quiere aliviar esa miseria y la parte que tiene exceso de carga quiere buscar otro

enlace electroesttico para donarle parte de esa densidad electrnica. Enlace opuesto
para compartir su carga, no es un enlace formal, es termodinmicamente ms estable
que las cargas por separado.
! Este volumen neto tiene una estabilidad mayor que los volmenes de dos molculas
por separado. Por lo que, mientras ms marcado es el dipolo, mayor tendencia a
agruparse.
! No tienen que ser enlaces idnticos, ya que si fuera con tomos diferentes, se dara la
siguiente asociacin:
-#
-.
A B
Y X
-#
-.

! Este prefiere un dipolo igualmente distorsionado, porque la cancelacin de carga neta
en el espacio, aunque no a nivel del enlace cuando era el mismo pero opuesto, es ms
eficiente la cancelacin de carga neta.
! Si tiene la alternativa de asociarse con el mismo dipolo de otra molcula de lo mismo
va a preferir eso porque al asociarse hay una cancelacin ms efectiva en el espacio de
separacin de cargas que con un dipolo de magnitud diferente. De aqu el secreto "like
dissolves like.
! Si mi fase estacionaria tiene dipolos cuyas magnitudes en el espacio son bien parecidas
a los dipolos de mis analitos que estoy separando va a asociarse uno con el otro, ms
eficientemente que si mi fase mvil tuviera dipolo pero de otra magnitud diferente.
! El analito va a querer ir a aquella fase donde los dipolos sean ms parecidos, porque
esta mas favorecido termodinmicamente.
! Entre ms parecido sea el dipolo a la fase estacionaria, ms difcil se le va a ser a la
fase mvil llevrselo.

2. Puentes de Hidrogeno
! Oxigeno e Hidrogeno tiene afinidades electrnicas marcadamente diferentes. Se
observa que en el enlace O-H hay mucha separacin de carga ya que el oxigeno esta
afrentado por lo electrones formando un dipolo bien fuerte por lo que se parece a un
enlace inico.
O
-#
-.
H
O

H
N
O
S

! Al haber un dipolo tan fuerte va a buscar un dipolo o un par de electrones que le done
densidad electrnica para estabilizarse.
! Cuando formo puentes de hidrgeno hay una liberacin de energa.

! Si forma puentes de hidrgeno con la estacionaria, no se mueve y se pierden los
analitos ya que la fase mvil no podr interaccionar con el analito.
! Mientras que si forma puentes de hidrgeno con la mvil se mueve rpidamente y no
se da la separacin.
! Si hay puente de hidrgeno, ese es el que va a dominar el valor de K.

3. Atrapamiento Fsico

! Los grnulos que tengo de soporte, no son perfectamente esfricos ni tienen una
superficie pulida.
! Si se observa los grnulos de la fase estacionaria con un microscopio se observa que
estos tienden a ser amorfos e irregulares.
Mas
suceptible

! Al observar se vern identaciones en la superficie, la cuales son buenas ya que
maximizan el rea de superficie del granulo. Entre mas rea mejor se van a establecer
los equilibrios entre la fase estacionaria y el analito porque esa equilibracin ocurre a
nivel de superficie.
! La molcula que esta fuera de la identacin esta ms susceptible a que la fase mvil se
lo lleve, que si estuviera en otras reas. Mientras que si estuviera en las identaciones
la fase mvil no tendra la misma facilidad para darle el golpecito y llevrselo.
! Todas la molculas que no se puedan enganchar en las porosidades de mi fase
estacionaria van a salir y luego las que si pudieron.

! Retencin Relativa (!)
! Cuando repito un experimento, U puede variar un poco por lo tanto cambia a su vez t
R
.
Tambin si cambia V
M
, cambia V
S
y el t
R
cambiara doblemente.
! V
M

est ntimamente ligado a V
S
ya que baja V
S
aumentara V
M
.
! Si cambia la temperatura y la columna esta expuesta, segn el principio de Le
Chatelier, el equilibrio se desplazara para compensar el cambio.
! Mientras ms energa cintica, ms difcil se le har a la fase estacionaria agarrar el
analito por lo que a mayor cambio en T, mayor ser el cambio en K.
! Siempre que se repiten los experimentos hay cambios en los parmetros
experimentales. Y si yo baso mis resultados en tiempos de retencin pues los

experimentos no sern muy reproducibles. Por lo que, para eso se usa la retencin
relativa.
! Si deseo confirmar la presencia del compuesto z (1) y no deseo dejarme llevar por el t
R

pues aado a la alcuota un estndar (2).
z

z
std.

(1) (2)
! La retencin relativa seria
std
z
t
t
! " . 1 / " si el estndar sale primero mientras que
1 0 " si sale despus del analito.
! El factor x por el cual se afecto el t
z
del compuesto de inters, tambin afectara
proporcionalmente el t
std.
por lo que x se cancela.
! El anlogo en TLC es el R
F
.

il mo fase
z
f
d
d
R
v
!


8 de febrero de 2006
Quiz #1
PREGUNTA: Si quiero hacer una separacin de una mezcla que contiene los siguientes
compuestos:
OH
O
O

(a) (b) (c) (d)
y lo voy a hacer por cromatografa lquida, donde mi fase mvil es lquida. Mi fase estacionaria es
no polar y mi fase mvil es polar. Digan el orden relativo de elusin de estos cuatro compuestos
bajo esa situacin cromatogrfica y explique por qu establecen ese orden.


RESPUESTA: El orden de elusin sera: b, c, d, a. Compuestos con heterotomos son mas
polares en general, ya que estn ms a la derecha y ms arriba en la tabla peridica, en
comparacin con benceno que no tiene heterotomos. De ver estos compuestos se pueden
deducir dos. Uno de ms baja polaridad, que no tiene oxgeno y uno que tiene un puente de
hidrgeno, que va a ser el dipolo dominante y va a buscar dipolos fuertes porque ah es donde va
a querer estar. Relativo a esto bien cualitativo el polar tiene los dipolos ms fuertes, ms
marcados. De ah hay que de esperarse que el fenol va a querer, de todos estos, pasarse ms
tiempo con la fase mvil que cualquiera de los otros compuestos. De ah que el que pase mas
fraccin de tiempo en la mvil, va a estar viajando ms rpido. Recuerden de la ecuacin de
velocidad que el que tuviera el C
M
ms grande era el que iba a eluir ms rpido. Por el lado
opuesto el menos polar, el que no tiene un heterotomo va a preferir estar en la fase
estacionaria menos que en la mvil, as que va a ser el ms lento en eluir. Entre la cetona y el
ter el ms polar va a ser la cetona porque tiene un dipolo ms fuerte. El ter posee atraccin en
dos direcciones y es como si se cancelaran. El dipolo en la cetona est ms marcado porque el
oxgeno est enlazado a un solo carbono, en el otro se cancelan parcialmente.
Asignacin: Por qu ese concepto de "like dissolves like? Por qu las atracciones ms
efectivas van a ser entre dipolos de magnitudes parecidas? Esto es favorecido sobre dipolos de
magnitudes marcadamente diferentes, aunque se van a atraer tambin pero no va a ser tan
favorable como dipolos parecidos.
! Eficiencia
! Los qumicos necesitamos predecir cuan bien se van a separar los componentes en una
mezcla. Ya tenemos unas herramientas poderosas para predecir ordenes relativos pero
necesitamos saber cuan bien va a ser la separacin dentro de esos rdenes relativos.
! Eficiencia = es una medida de cun bien separados estn los compuestos.
! Dos situaciones, tenemos tres compuestos en una corrida con fase estacionaria y mvil dada
en dos diferentes columnas. Cul es la ms eficiente?

I
II

! Qu gua a uno siempre en todo anlisis? El propsito
! Dependiendo del propsito, es que podremos decidir cual de ambas columnas es la ms
eficiente. Si el propsito es caracterizar los tres compuestos entonces la columna II es la ms
eficiente ya que estamos en mejor posicin para identificar sin duda y/o cuantizar los
componentes de la mezcla. Mientras que si el propsito fuese identificar o cuantizar el
compuesto 3 entonces preferira la columna I ya que no me interesa nada mas que este en la
muestra y aqu se obtuvo una separacin mayor del compuesto 3.
! Lo mejor es relativo, dependiendo de lo que yo quiero o busco por lo que se torna un poco
ambiguo cuando uno va a tomar decisiones de cual es la mejor columna en un caso as.
! Por esta razn, se desarroll una forma ms absoluta para escoger eficiencia entre los que
hacen cromatografa. El concepto que se escogi fue el de Platos tericos (N).
! Platos tericos
! Destilacin fraccionada- tiene columna de fraccionamiento para separar mas eficientemente.

! La separacin eficiente se logra al poner un exceso de energa en la parte de abajo y como
cada componente en la mezcla tiene una presin de vapor pues siempre va a evaporarse todo

lo que haya abajo. La presin parcial o la proporcin en esa fase gaseosa va a depender
ntimamente de la volatilidad de la mezcla. Entre ms voltil sea uno relativo al otro, ms va
a contribuir a la presin de vapor que est sobre ese lquido.
! Siempre va a ver de los dems, segn ese vapor sube, empieza a estar en contacto con una
superficie la cual esta a una temperatura ms baja que la del vapor por lo que se da una
transferencia de calor. Esas molculas en fase gaseosa que chocan con la pared, le
transfieren un poco de la energa cintica, en forma de calor. Entonces baja la temperatura
de la mezcla y aumenta la temperatura de la pared. Este proceso se puede ver por refraccin,
porque la luz de la lmpara al pasar por ese medio que tiene una densidad diferente, se
refracta, se dobla y por eso es que vemos esa irregularidad.
! Al reducirle la energa cintica a las molculas, baja la temperatura de la mezcla, por lo que
aquellos componentes menos voltiles tienden a agregarse y por ende a condensarse ms
fcilmente y empezaran a salir de la mezcla de vapor. Aquellos componentes que todava
tengan suficiente energa cintica para sobreponerse a las interacciones intermoleculares y no
condensarse, siguen caminando. De esta forma, voy separando mezclas donde predomina el
ms voltil en la parte superior, y los menos voltiles en mayor proporcin van regresando al
envase, hasta que de esa forma se separa.
! En general, mientras ms larga sea la columna de fraccionamiento, mejor grado de
separacin uno logra. Nunca va a ser 100% y NO es una separacin tan eficiente como la que
logramos en cromatografa.
! Para saber cuan larga tiene que ser esa columna los ingenieros qumicos han desarrollado
una nomenclatura o una clasificacin de unidad de superficie de intercambio que se est
dando en esa columna.
! A nivel microscpico vamos a ver molculas intercambindose con esa pared y la fase
gaseosa. Se est desplazando, va a ver un equilibrio. De ah que, extrapolamos de la
destilacin fraccionada el concepto de plato terico.
! Platos tericos en destilacin fraccionada es la regin mnima necesaria en mi columna de
fraccionamiento para establecer un equilibrio.
! Entre ms equilibrio yo establezco a lo largo de la columna, ms se siente ese intercambio de
energa cintica entre los menos voltiles y las paredes, relativo a los ms voltiles, mejor
separacin voy a lograr, ms discrimen voy a tener en contra de los menos voltiles en
trminos de avanzar a lo largo de la columna. En cada equilibrio, estoy haciendo un

intercambio de energa por lo que ms rpido van a salirse, o mayor cantidad de los menos
voltiles se van a quedar.
! Entre mas platos tericos mejor va a ser la capacidad de esa columna para separar. Se utiliza
N para representar el nmero de platos tericos.
! El anlogo en cromatografa, es que entre mas equilibrios se establecen mas se maximizan
las diferencias en K.
! El nmero de platos tericos, en una corrida cromatogrfica, se puede sacar directamente de
los picos, donde t
R
es el tiempo de retencin del compuesto de la banda que sea y W es el
ancho de la base. La eficiencia va a depender no de la columna sino de que pico yo escoja. El
que tenga un tiempo de retencin ms grande, por ende me va a dar una eficiencia mayor.
2
16 $
%
&
'
(
)
!
W
t
N
R
o
2
2
1
54 . 5
$
$
%
&
'
'
(
)
!
W
t
N
R

! Mientras ms se tarda un compuesto en salir de la columna, ms ancho va ser el pico y lo
que quiz est ganando el nmero de platos tericos, escogiendo uno con el tiempo de
retencin se balancea con el aumento en w. Este valor en teora, en ausencia de anomalas,
debe ser el mismo no importa el pico que yo escoja porque se va mantener esa
proporcionalidad.

! No hay un equilibrio verdadero en una columna, ya que se dan ciertas anomalas en la
columna porque no hay pureza en los fenmenos de separacin. Normalmente tengo una
mezcla de interacciones electroestticas, de atrapamiento fsico. Si yo pudiera tener las
fuerzas electroestticas y no lo otro menos problema yo tendra en escoger el pico.
! De columna en columna es mejor utilizar el mismo compuesto para determinar los platos
tericos, as mantenemos el concepto de las relatividades en cada columna.
! Si el pico es Gaussiano hay una proporcionalidad del ancho en la base y el ancho a cualquier
otra altura. Por lo que, con la formula de 5.54 minimizamos el problema de la precisin de la
medida del ancho del pico en la base. Con esto vemos, que se puede calcular el nmero de
platos tericos de una columna directamente de un cromatograma.

13 de febrero de 2006
! Platos tericos
! Eficiencia para nosotros va a ser una medida de cun bien puede separar una columna una
mezcla de compuestos. Es importante conocer estos criterios cuando uno va a escoger una
columna.
! Qu mirbamos para escoger una columna? Pues debemos evitar los extremos, mirar las
fuerzas electroestticas dictadas por los dipolos, la composicin de la fase estacionaria y fase
mvil, para tener afinidades parciales por ambas fases.
! La eficiencia depende de unos parmetros adicionales a las fuerzas electroestticas.
! Ya fuimos a una teora desarrollada, totalmente anloga al proceso fsico que se est dando
en una columna cromatogrfica. Es una teora desarrollada para la destilacin fraccionada. Se
observa que a nivel molecular en esa columna de fraccionamiento vemos una equilibracin en
la columna, que cuando hay un compuesto condensado en la pared, hay parte de los otros
compuestos que estn siendo empujados a travs de la trayectoria de esa columna por una
parte gaseosa, la presin del mismo vapor que se est evaporando. El equilibrio, o sea cuan
desplazado est en una direccin u otra para cada compuesto, va a depender de la volatilidad
de cada compuesto.
! Aquellos compuestos ms voltiles, la fraccin de ellos en la fase gaseosa en un momento
dado va a tender a ser mayor que la fraccin que est condensada en la pared. As que es
totalmente anlogo, lo nico que no estamos hablando de condensacin y evaporacin,
estamos hablando de fijarlos por afinidad en una superficie o arrastrado.
! Con la ingeniera qumica, vemos que entre ms equilibrios o platos tericos se establecen,
ms se sienten las diferencias en volatilidad de los compuestos.
! En cromatografa, tambin entre ms regiones hayan para establecer equilibrios segn se
mueve a travs de esa columna en trminos del largo, otra regin adyacente de la misma
distancia que establezca ese equilibrio anlogo, mejor se pueden discriminar las diferencias
entre fase mvil y fase estacionaria en cromatografa.
! De un cromatograma podemos sacar los parmetros crticos para la ecuacin que nos permite
calcular el nmero de equilibrios que se establecen en la columna. El nmero de equilibrios
depende del tiempo de retencin y del ancho a mitad de altura. Por lo que vemos que entre
mayor sea t
R
, mayor va a ser N y que entre menor sea el ancho del pico, en general, en la
base mayor va a ser N.

! Ya vemos dos parmetros importantes que van a afectar la capacidad de la columna para
separar. Vamos a ver un fenmeno que cuando aumenta el tiempo voy a ganar el
ensanchamiento del pico, y aunque crea que estoy ganando por el tiempo de retencin se va
nivelando con el aumento en el ancho.
! En teora se puede utilizar cualquier pico para determinar la eficiencia de la columna, siempre
y cuando tengan comportamiento ideal.
! Hay una serie de fenmenos que se dan, que causan variaciones, ya que de compuesto en
compuesto el cmputo de N no va a ser tan grande pero para poder comparar chinas con
chinas, es mejor inyectar el mismo compuesto en otra columna para determinar la eficiencia.
! Los puentes de hidrgeno nos sacan un poco del plano ideal porque no es una fuerza
electroesttica pura, es un compartimiento de densidad electrnica, por lo que se comienza a
salir un poco de la reversibilidad que necesitamos para separar.
! Los picos se salen de la forma gaussiana y empezamos a ver alargamientos en la parte de
mayor tiempo de retencin. Ya no se desprende el compuesto tan fcilmente de la fase mvil
o la estacionaria. Esto quiere decir, que las fuerzas electroestticas afectan el pico gaussiano.
Lo ideal seria el pico gaussiano.

! Mirando el ancho de la base entre dos columnas cualitativamente iguales, podemos notar
unas diferencias en eficiencia.
! Un parmetro cuantitativo para determinar la eficiencia es N y cualitativamente es W.
H
L

! H es la altura eficiente a un plato terico (HETP) y la altura o distancia mnima para que se
lleve el equilibrio dentro de la columna.
! Aquella regin en la columna donde vemos ese proceso dinmico de intercambio, donde se
iguala la velocidad de intercambio en las dos direcciones, que lleva a unas relaciones relativas

estables. No va a ver un cambio neto en la relatividad de esas poblaciones segn se mueven
por la columna.
! H tambin se utiliza para determinar eficiencia. N grande es lo mismo que decir H pequea.
H
L
N !

! Ahora tenemos tres formas de determinar la eficiencia de una columna: dos cuantitativas (N y
H) y una cualitativa (W).
! Al eluir el mismo compuesto en tres corridas diferentes, podemos ver que segn disminuye el
ancho, aumenta N.

! El caso lmite ideal sera cuando W 1 0, N 1 ,. Esta situacin no se puede dar, pero a nivel
terico es lo que uno quisiera.
! H solo lo podemos calcular si conocemos N.
! Entendiendo lo que causa que un pico se ensanche yo puedo tratar de controlarlo, para
minimizar el ensanchamiento y aumentar la capacidad de la columna de separacin. Las
columnas viejas o que hayan sufrido algn desperfecto pierden la capacidad de separacin.
Cuando veo que la capacidad de separacin de la columna est decayendo, tengo que volver
a calcularle N (a veces es necesario cortar un poco del largo de la columna).
! Factores que llevan a ensanchamiento de picos cromatogrficos o prdida de eficiencia
1. Pasos diferentes
! Cuando las molculas lleguen y se presenten al frente de esa columna, con la fase mvil
empujndola o arrastrndola a travs de la columna, la ruta que escojan va a ser una
probabilstica.
A
A'

! El carrito tiene una velocidad constante, de ah que el que escoja la ruta ms corta a una
misma velocidad va a salir ms rpido que el que escoge una distancia ms larga.

A
A'

! La realidad es que ambos extremos son de baja probabilidad, la mayora de ellos se van a
encontrar en el centro, con una ruta entre medio.
! No pueden todas las molculas tardarse exactamente lo mismo, ya que para que se diera
esto las molculas tendran que bsicamente ocupar el mismo espacio fsico para poder
estar movindose juntos a travs de la columna y esto es imposible.
! No puedo ocupar el mismo volumen con dos molculas, por ende tienen que estar
fsicamente ocupando volmenes diferentes. Por lo que, al estar fsicamente en
ubicaciones diferentes sus trayectorias a travs de una serie de barreras va a variar.
! Como siempre va a ver un ancho asociado a todo pico, no podr llegar a esa eficiencia
infinita.
! Puedo soar con acercarme, mirando de que depende ese ensanchamiento, y nosotros lo
vamos a reducir a dos factores principales:
" Homogeneidad en tamao del empaque: mientras ms homogneas sean los
dimetros de las partculas con las que he empacado la columna, sea la fase
estacionaria slida o algn soporte, menos dispersin en distancia voy a ver en la
trayectoria de las molculas que estn pasando.

" Homogeneidad en el proceso de empaque: las trayectorias empiezan a ser menos
homogneas cuando hay huecos o espacios sin llenar en el empaque ya que
habrn molculas que fluirn mucho ms rpido que otras.

2. Difusin
! Hay dos leyes que gobiernan todo en el universo: (1) todo tiende a una energa mnima; y
(2) todo tiende a una entropa mxima.

! Ejemplo: Si suelto la tiza va a caer rpidamente al piso, porque en esta posicin no es su
estado estable de esta tiza ya que tiene una energa potencial, la que se le imparte por
estarla sosteniendo con la mano. Otro ejemplo seria una botella de perfume en un saln
donde las molculas se dispersan mientras que uno nunca ve lo opuesto, que se
evaporaren las molculas y entren a la botella nuevamente.
! Este proceso de salir de una regin bien concentrada y dispersarse en el espacio se le
llama entropa, el cual ocurre a travs de la difusin.

! La difusin est en contra de nosotros en la cromatografa porque el proceso
cromatogrfico envuelve organizar, o sea coger molculas que estaban desorganizadas en
una mezcla y ponerlas en banditas especficas, lo cual no es lo que la naturaleza quiere
que se est dando. Por la naturaleza estaran todas mezcladas, regadas en el espacio no
organizadas en banditas en especfico. De ah que, como nosotros nos estamos
comportndonos mal, violando una de las leyes de termodinmica por lo que, empieza a
darse la difusin.
! Entre ms tiempo pasa ms se ha se ensanchar el pico cromatogrfico debido a difusin.
! El paso libre promedio (mean-free pass) es la distancia que tiene una molcula antes de
que choque con otra y se detenga. Dependiendo del estado de la materia, variara la
distancia entre molculas.
! En el estado gaseoso, tenemos la molculas bien separadas en trminos relativos, que en
estado lquido. Por esto, la difusin es mucho ms marcada en el estado gaseoso que en
el estado lquido.
! El grado de dispersin de una banda guarda relacin directa con el ancho del pico, por la
dinmica de cmo se est generando el cromatograma. La dinmica de distribucin de las
molculas dicta la forma de los picos.
! Cualquier forma con la que podamos disminuir la distancia que viaja una molcula de
analito antes de chocar con otra, va a minimizar la difusin por lo que se minimiza el
ancho del pico.
! La difusin que se mueve hacia arriba (#) va a ser afectada marcadamente por molculas
de fase mvil que se estn moviendo en direccin opuesta ($). Por lo que, yo puedo con
fase mvil controlar cun marcada es la difusin en esa direccin ($), afectando la

frecuencia de choque de molculas de fase mvil con molculas del analito que quieren
difundir en esa direccin.
! Si yo aumento el flujo o el nmero de molculas de fase mvil que pasan por un rea
transversal en un momento dado, aumento la probabilidad de choque. Lo que mas afecta
el ensanchamiento de una banda es la difusin que va en contra del flujo ($), ya que es
la ms que me duele porque yo me alejo del grupo y el grupo se aleja de m.
! Pareo: cromatografa de gas = difusin
3. Falta de equilibrio
Fase
movil
Fase
Estacionaria

! En el instante en que una molcula sale de la fase estacionaria a la fase mvil, la fase
mvil la mueve ms abajo. H me ha aumentado y mientras ms grande sea la velocidad
del carrito o ms rpido yo me monte en el carrito, ms atrs dejo a mis compaeros.
! Transferencia de masas, se transfieren los analitos entre las dos fases. A mayor u ms se
acenta este fenmeno.
! Ecuacin de Van Deemter:
Cu
u
B
A H # # !
! A es totalmente independiente de el flujo; mientras que B guarda una relacin inversa con
el flujo y C se acenta con el aumento del flujo. Siempre quiero que la suma de estos tres
factores me lleve a un mnimo conocido como u ptimo para que me lleve a un H mnimo.
max min
N H !

u
u ptimo
H

15 de febrero de 2006

Quiz #2
PREGUNTA: De no poder estar en u optimo, qu seria menos malo estar por encima o por
debajo? Por qu?
Cu
u
B
A H # # !
RESPUESTA: De no poder estar en u ptimo, querramos estar por encima ya que cada unidad de
cambio lleva a menor prdida en eficiencia que cada unidad por debajo y esto se ve por las
pendiente en ambos lados de la grfica.
! Eficiencia
! Si tengo una muestra conocida sabr que ha terminado la separacin cuando observo que el
componente con mayor tiempo de retencin ha eluido.
! Pero si tengo una muestra desconocida, el anlisis cromatogrfico se termina ?
! En HPLC, cuando deseo reducir el flujo de la fase mvil se pierde reproducibilidad ya que los
pistones se les hace difcil moverse lento por lo que casi nunca se puede trabajar por debajo
de u optimo en esta tcnica.
u
u ptimo
H

Cu
u
B
A H # # !

! En valores por encima de u, empezamos a ver que el valor de H de la ecuacin neta se
parece mucho a los valores del termino Cu por lo que, por encima de u empieza a dominar la
contribucin de falta de equilibrio al valor neto de H. Ya que a medida que u aumenta el
termino B/u se hace cero.
! Cmo llego a las coordenadas de u?
du
dH

! Cada uno de estos trminos (A,B,C) es un mundo aparte.
! Nunca voy a poder ir por debajo de A.
! El termino A depende de muchos factores ya que las partculas no son perfectamente
esfricas, son irregulares y varan de una a otra. Para poder calcular el trmino A, tendramos
que expresar las reas superficiales de las partculas pero como varan de una en otras hay
una serie de parmetros que toman en cuenta las diferencias en reas, la porosidad de estas
partculas, el volumen neto que ocupan en la columna. Por lo que, A es determinado por
varios trminos al igual que B.
! La velocidad de la fase mvil (u) se dice que es constante pero la realidad es que cerca de las
superficies slidas de cualquier cosa que est en la columna presenta ms friccin al fluir que
alejndome de la pared de dinmica de fluido.
! Por lo que, se puede representar de forma vectorial las velocidades a travs de una columna
que no est empacada. Se vera que la velocidad ms rpida va a ser en el centro ya que las
orillas presenta ms friccin, ms resistencia a fluir. De ah que tengo, una carcter laminar
en mis flujos.
u
u ptimo
H
H=A
H=Cu
H=B/u

! Cmo se calcula u ptimo? Visualmente, se puede hace mirando la forma del pico.
GC

! Se coge una muestra, se inyecta varias veces pero aumentando el flujo de la fase mvil y se
observa el caso en el dibujo de arriba. Por lo que, al aumentar el flujo la eficiencia aumenta
ya que W disminuye pero llega un momento que la eficiencia empieza a disminuir por lo tanto
me he pasado de u ptimo.
22 de febrero de 2006

ASIGNACION: Qu otros factores maximizan las diferencias en tiempos de retencin entre dos
analitos para aumentar la resolucin?
! Eficiencia
! Cual tcnica entre HPLC y GC es ms eficiente observando las siguientes graficas?

! En HPLC, solo se observa un cuadrante de la grafica de GC ya que tiene unas limitaciones
fsicas que no permiten tener la misma grafica que GC. A flujos extremadamente bajos hay
problemas de reproducibilidad de esas presiones mientras que los flujos extremadamente
altos son imposibles de lograr por lo viscoso de la fase mvil (liquida).
u u
GC
H H
HPLC

Cu
u
B
A H # # !
! Al llevar a grafica la suma de Van Deemter individualmente podemos apreciar que termino
es el mas determinante en cada regin. Nunca u tendr un valor de cero ya que uno de estos
factores se acercara a infinito. El concepto es minimizar la contribucin de la suma para
acercarnos a u ptimo donde logramos la mxima eficiencia de la columna.
! El valor de u ptimo se puede obtener sacando la primera derivada, igualndola a cero y
sustituyendo los valores de A, B y C. Pero aqu es donde surgen los problemas ya que A, B y
C dependen de muchos factores por lo que son difcil de determinar. Por esta razn, se
prefiere determinar u optimo cambiando el flujo de la fase mvil y observando la forma del
pico ya que sabemos que el ancho en la base es una medida de eficiencia.
! Resolucin
! Es un buen indicador de cuan bien separa una columna y, adems, nos sirve para diferenciar
entre las eficiencias de diferentes columnas y ver cual es la mejor.
! Una columna de alta eficiencia no nos asegura una buena separacin cromatogrfica:

! Esta columna es una mala situacin ya que hay muchos solapes y es casi imposible cuantizar
si nos dejamos llevar por el rea o la altura del pico ya que el pico que solapa contribuye en
estos valores.
H
tR
u
u ptimo
H
H=A
H=Cu
H=B/u

! Pero eso no quiere decir que no podamos hacer anlisis con columnas de baja eficiencia. Si la
diferencia en afinidad por las dos fases estn marcadamente diferentes entre los dos picos
podramos lograr una situacin como esta, con picos anchos pero diferencias en K tan
grandes que dan diferentes tiempos de retencin y podemos separar.

! Esto es bueno en todo anlisis siempre y cuando no haya solape. Por otro lado, la mezcla que
este separando no puede ser muy compleja porque no voy a poder ubicar unos cuantos picos
en esa lnea base sin que estn solapndose.
! Por otro lado, buena eficiencia a base del ancho del pico tampoco nos asegura que no se
solapen los picos ya que el solape se debe a las diferencias en K.


! Resolucin es una medida que combina eficiencia y cuan bien una columna discrimina entre
dos compuestos en las diferencias en K. Este concepto aplica a toda tcnica analtica donde
se obtenga en forma grafica seales de diferentes analitos.
H
tR
tR
H


2 3
2 1
1 2
2
W W
t t
R
R R
#
.
!
! Como no hay un punto en la lnea base para dejarnos llevar se tiran unas tangentes que
parten la lnea base y nos permiten medir W de un lado a otro. Esto tiene su error pero como
queremos un proceso que se pueda aplicar a cualquier situacin cromatogrfica por definicin
lo vamos ha hacer as.
! Obtener un R=1.0 indica que el rea de solape es un 2% de las suma de las reas de los
picos que se estn solapando. Este valor es aceptable pero en una farmacutica el error
mximo permitido en la determinacin del ingrediente activo es 0.5% (FDA lo dicta).
! Valores de R > 1.5 significa separacin completa sin solape. R grande es bueno.
! Resolucin es una medida mas segura, en trminos, de saber si tengo la eficiencia y
separacin cromatogrfica para el propsito que este siendo reglamentado.
! Necesito mejorar el grado de separacin, qu como qumico puedo hacer para obtener un
mayor valor de R?
! Si aumenta el numerador o disminuye el denominador aumenta R.
! Para maximizar R:
! Se aumenta las diferencias en tiempo de retencin entre los analitos:
" Maximizando las diferencias en K de los analitos alterando la fase estacionaria
o fase mvil para que discriminen mejor en las fuerzas electrostticas de los
analitos.
" Cambiando las rampas en temperatura.
W2
W1
tR2
H
tR1


! Por qu las diferencias en K se acentan ms en la segunda situacin relativa a la primera?
Al disminuir la temperatura de la columna los componentes tienen mas oportunidad de
equilibrarse y discriminar por lo que no eluyen solapados ya que puede interaccionar mejor
con la fase estacionaria.
! Si se aumenta la temperatura el equilibrio se desplaza para compensar la alteracin y como
el aumento en temperatura, aumenta la energa cintica o de movimiento de las molculas,
causando que las molculas de analito pasen ms tiempo en la fase mvil. La consecuencia
de que este mas tiempo en la fase mvil es que no se lograra una buena separacin.
! Al aumentar la temperatura se minimizan las diferencias en K por que los componentes
eluyen mas rpido.
! Para maximizar R tambin puedo:
! Disminuir la suma del ancho de los picos, disminuyendo los anchos individuales:
" Aumentando la eficiencia de la columna, acercndome a u optimo ya que estoy
en el H
min
y N
max
manifestada en un cromatograma mirando el ancho de los
picos.
! Tambin puedo alargar la columna, pero solo la puedo alargar hasta donde eso que gane en
las diferencias en t
R
se cancele con el ancho de los picos.
! Entre mas larga la columna mas difcil alcanzar el u optimo. Adems, segn se hace ms
larga la columna mas tiempo tienen los analitos para difundir lo que ensanchara los picos.
! Selectividad (!)
! Selectividad es una medida de diferencias en K. Por lo que, entre mas selectividad mejor
separacin voy a lograr.


tR
H
100
o
C
H
tR
200
o
C

24 de febrero de 2006
QUIZ #3
PREGUNTA: Cundo un anlisis cromatogrfico se ha completado?

RESPUESTA: Cuando se cumpla el propsito del anlisis. Si es una muestra desconocida esta
pregunta no tiene contestacin, entonces entraran las condiciones prcticas. Un buen primer
tanteo en una muestra desconocida es llevarlo a una condicin extrema. En un plano simple y
cmodo, asumo que todo lo que me eluya en TLC bajo estas condiciones y se llegue a ver, se
pueda ver tambin en unas condiciones que yo escoja en cromatografa de gas y que
corresponden el nmero de picos en TLC con el nmero de picos en GC, y por ende cuando
salgan los tres compuestos, partiendo de que solo hay tres compuestos en la mezcla, no debe
salir ms nada, se debe quedar en la lnea base.

ASIGNACION: Cmo sabra que los picos son de esa muestra o uno de ellos venga de la corrida
anterior?
! Cromatografa de Gas
! Lo que transporta el fluido es un gas (fase mvil).
! La limitacin ms importante es que los compuestos a separar por esta tcnica debe ser
voltiles y termalmente estables para que puedan ser separados ya que no pueden coexistir
con la fase mvil para que sean transportados.
! En GC, podemos lograr eficiencias de 100,000 mientras que en HPLC solo de 10,000.
! No siempre se toma el ancho a mitad de altura, porque a veces un pico est solapando al
otro. Por eso es que en resolucin se tiran lneas tangentes porque se necesita el ancho en la
base de cada pico
! La cromatografa de gas tiene facilidad de uso, a veces el tiempo es ms corto y tiene alta
eficiencia
! El grado de separacin depende de eficiencia y de selectividad
! Eficiencia depende del ancho de los picos y la selectividad depende de K
! El t
R
es directamente proporcional a la K, porque en la ecuacin lo nico que vara es K
! Resolucin =
eficiencia
ad selectivid





27 de febrero de 2006
ASIGNACION: Si el segundo enlace sencillo ms fuerte es Si-O, Cul es el enlace sencillo ms
fuerte? Si-F

! Cromatografa de Gas
! Por ser la fase mvil gaseosa, nos limitamos a que los compuestos a separar por esta tcnica
debe ser voltiles y termalmente estables para que puedan ser separados ya que no pueden
coexistir con la fase mvil para que sean transportados.
Detector
Inyector

! No hay mejor forma de separacin para aquellos compuestos que cumplen con lo requisitos
ya que se obtienen mejores limites de deteccin.
! Fuente de gas, un cilindro, se regula la presin con un manmetro ya que la llave que tiene el
cilindro es solo para abrir o cerrar no para graduar la presin que sale. Una vez fijada la
presin en u optimo, esta lnea por donde fluye el gas esta enlazado a un inyector en la parte
superior de GC.
! Por este inyector, el cual esta conectado a una columna donde se da la separacin, se
introduce la muestra. La columna esta conectada al detector, el cual genera el cromatograma
generando seales elctricas, las cuales individualmente son proporcionales a los analitos que
van saliendo.
! El cilindro viene de diferentes tamaos, y estos son masivos porque aguantan mucha presin
(2000-3000psi) para contener mucho gas en un volumen pequeo ya que se desee tener
suficiente para poder llevar a cabo mltiples anlisis ya que no seria prctico cambiar el
cilindro despus de cada anlisis.
! El problema de los cilindros es que, por tener una base estrecha y ser altos, tienen un centro
de gravedad alto lo que significa inestabilidad por lo que son bastantes masivos. Tienen una
codificacin de color dependiendo de la naturaleza del gas:
Gases no reactivos o inertes Anaranjados Helio
Peligrosos Rojos Hidrogeno, Acetileno
Enviromentally Friendly Verde Aire, Oxigeno

! Se usa codificacin para no utilizar incorrectamente los gases aunque esta no es la mejor
manera de identificarlos. Tambin se puede identificar por la conexin al tanque: tornillo-
tanque, rosca-manmetro o al revs. El manmetro viene hecho para cada tipo de gas.
! Qu caractersticas quiero en el gas?
" Barato - ya que no se recupera
" Pureza
" No-toxico
" Compatible con el detector
! El primer mandamiento de la cromatografa es decirle al detector que no debe ver fase mvil
ya que tapara todo y el cromatograma se saldra de escala.

! Cuando la fase mvil es gaseosa, mayormente se prefiere sea inerte (He) ya que no tiene
dipolos por lo que no compite con la fase estacionaria para establecer un equilibrio. Helio no
solvata por lo que no hacen falta los dipolos ya que esta en forma gaseosa.
! Por lo que, los valores de K se ajustan con la temperatura. Solo la fase estacionaria
interacciona con los compuestos. El Helio solo empujara los analitos a travs de la columna.
! Los gases vienen del aire, los cuales se condensan y luego se separan por destilacin.
Mientras que mucho disolventes vienen del petrleo, productos de fermentacin,
hidrocloracin de los hidrocarburos.
! La funcin principal del manmetro es controlar la presin que sale del cilindro y llega al
inyector. El primer reloj dice cuanta presin queda en el cilindro y el segundo se utiliza para
controla la presin que se entrega al sistema analtico, o sea el flujo de la fase mvil la cual
debe controlarse para no alejarme de u optimo donde obtengo la mayor eficiencia.
1 2

! El inyector es el lugar donde se introduce la muestra al equipo, este es un cilindro de acero
inoxidable (15mL), el cual tiene en la parte de arriba una conexin de lnea por donde va a
entrar el Helio o la fase mvil. Por debajo, tiene una conexin a la columna analtica. El
inyector esta encapsulado dentro de un bloque de metal (aluminio, ya que es mas fcil
trabajarlo y darle forma), el cual tiene una resistencia para poder calentar el aluminio que a
su vez calentara cilindro.
! En GC, necesitamos llevar la muestra a fase gaseosa y lo vamos a hacer con calor en el
inyector ya que no vale la pena llevarlo a la columna sin ser evaporizado ya que no podr ser

transportado. Al introducir la jeringuilla en el inyector y liberar la muestra en el estado liquido
disuelto en un disolvente voltil por lo que a temperatura alta se evapora la muestra.
! Cualquier material que no sea voltil o termalmente inestable se quedara en las paredes del
inyector.
! Debido a la limitacin grande de compuestos, los qumicos ha tratado de ampliar el rango de
compuestos que puedo analizar por GC. Analizando derivados ya que el proceso de evaporar
un compuesto es aquel que lleva mltiples pasos.
! Al llevar una molcula del estado lquido a gaseoso, esta comienza a vibrar ms y a moverse
ms (translacin). Por lo que, esa primera inversin en energa va a movimiento cintico
mientras que en el caso de molculas que estn agregadas (% alto ya que estn en estado
liquido), los dipolos estn interaccionando ntimamente por lo que al empezar a vibrar mas se
desprenden los dipolos unos de otros hasta tener suficiente grado de libertad individual o
adquirir suficiente energa cintica para sobreponerse a la presin atmosfrica.
! Es clave la parte de desprenderse de los dipolos para minimizar la energa necesaria para que
molculas puedan pasar a la fase gaseosa. Si de alguna forma se pudiera disminuir esa
atraccin dipolar, que es lo que le quita volatilidad a las molculas en un estado liquido, mas
fcil podra pasarlo a la fase gaseosa, con menos energa evaporara, mas ameno estara para
poderse analizar por GC.
! Los grupos funcionales ms culpables de quitarle volatilidad a los analitos son aquellos que
puedan formar puentes de hidrgenos (O-H, S-H, N-H). Debemos estar alerta si se
pueden dar interaccin de puentes de hidrgenos con la fase mvil o fase estacionaria para
evitar los extremos que no llevan a separacin.
! Por otro lado, se pueden modificar esos grupos para quitar interaccin dipolar formando
derivados. Por ejemplo, un cido graso forma puente de hidrgenos fuertes entre si porque
cada uno tiene un O-H y tambin tiene un oxigeno con electrones no enlazantes pero si de
alguna forma yo protejo ese grupo minimizo la capacidad de agregarse entre si.
OH
R
O
O
R
O
CH
3
acidos grasos
Se ha reducido el
dipolo y la fortaleza
CH
3 R
O
O
R
O
Si(CH
3
)
3

! Si yo sustituyera ese H por un metilo, ese enlace O-C ya no tiene un dipolo tan marcado
como O-H por lo que el grado y fortaleza de agregacin ser mucho menor. Por lo que, se
requerir menos calor para volatilizar la molculas.

! Silar es bien atractivo cuando hay oxigeno porque el segundo enlace mas fuerte covalente
sencillo es O-Si ya que se puede dar un poco "backbonding con el par de electrones "non-
bonding del oxigeno con los orbitales d del silicio y empieza a ganar carcter !.
! Aunque al Silar se aumento el peso molecular de casi 72 unidades, la molcula sigue siendo
mucho mas voltil que aquel que era mas liviano que formaba puentes de hidrogeno. Se
desea silar antes que mutilar porque este enlace esta favorecido termodinmicamente ya que
es bien estable y facilita quitar el hidrogeno y sustituirlo por silicio.
! A veces hay detectores selectivos que solo ven unos compuestos en especficos.
! Hay una interdependencia entre columnas, inyector y detectores ya que no se puede usar
cualquier combinacin de estos.
! Las columnas capilares son bien finas (0.1mm) cuyas paredes sirven de soporte ya que no
puede aadir grnulos porque no caben. Lo importantes es lo fina que es y la poca fase
estacionaria que tiene.

! Como hay poca rea superficial solo se puede inyectar bien poca muestra para no saturarla.
Se minimiza el trmino de pasos diferentes aumentando la eficiencia de la columna. Adems,
estas columnas son mas largas (50m) por lo que como N=L/H se aumenta la eficiencia.
! En las columnas empacadas, no podemos tener columnas muy largas ya que aumenta la
resistencia a fluir, por lo que no se puede alcanzar u optimo a las capacidades de presin que
funciona ese sistema ya que puede explotar.
! Las jeringuillas que ms se usan son las de 10L, divididas en porciones de 0.2L por lo que
tiene un error absoluto de 0.1L.

! Que puedo hacer yo como analtico para minimizar el error relativo a la inyeccin?
Inyectado Volumen
o v
Absoluto Error
el ati R Error ! Por lo que, se puede minimizar aumentando el volumen
inyectado pero en capilares no puedo inyectar mucha muestra. Por esta razn, se ha
introducido otra salida ("splitter o vlvula de particin) en la parte de abajo del inyector.


! Cuando la vlvula de particin esta abierta de lo inyectado parte entra a la columna y parte lo
boto. Se puede inyectar un volumen grande para minibar el error relativo, ganar
reproducibilidad y no saturar la columna porque el exceso de muestra no entra a la columna.
A la columna entrara una cantidad relativa a los flujos que yo tengan en ambas salidas.
! Si los flujos estuvieran 10:1 de las muestras, 10 partes de esta se bota y una la inyecto y as
reduzco el error relativo por un factor de 10.

1 de marzo de 2006
! Cromatografa de Gas
! El inyector con filtro de acero inoxidable, 10-15mL, es el lugar por donde se introduce la muestra
al sistema. La introduccin se logra utilizando una jeringuilla llena de mezcla de analito, en
solucin o gases. Si son gases es mejor ya estn en el estado que se necesita para la separacin.
Normalmente, se trabaja con mezclas de compuestos que no son gases por lo que se desea que
este estado semi-voltil, de 150-350, se pueda volatilizar.
! El inyector en la parte superior tiene rosca. La tapa es como una tuerca que tiene tambin una
parte con rosca por dentro y en el centro tiene un septum o una membrana de goma que se puede
perforar. Este septum no tiene una vida infinita, es por eso que debe cambiarse aproximadamente
luego de 10-15 inyecciones.
! Cada vez que uno perfora el septum se sella ya que la goma est comprimida y es flexible por lo
que sella alrededor de esa aguja, no permite salida hacia el exterior. En el momento que sale esa
aguja queda sellado ese espacio por esa goma. Llega un momento cuando se ha picado esa goma
que pierde esa capacidad de sellar y comienzan a haber prdidas de muestra.
! El calentamiento de la muestra se logra a travs de una transferencia de calor de un bloque de
metal, normalmente aluminio, ya que hay mucha masa para calentar, para tener una
transferencia de calor masa eficiente y para minimizar las fluctuaciones en temperatura. Si
deseamos cambiar la temperatura del inyector pues entonces tengo que bajar la temperatura de
toda esa masa.
! Esto es bueno y malo. Malo porque se tarda en calentar y cuando lo prenden hay que esperar par
de horas. Bueno, porque si est cambiando la temperatura a fuera, esa masa a esa temperatura
sirve como un aislante y no deja que la temperatura del inyector vare y obtengamos
reproducibilidad de anlisis en anlisis.
! Dependiendo de la columna que se utilice, se ajustaran las condiciones en el inyector para permitir
el uso de estas columnas, en especfico, en las columnas capilares. Las columnas capilares cuyo
nombre proviene de su dimetro bien fino de 1.2mm, son huecas y largas. Al hacerlas largas se
aumenta el numero de platos tericos, una relacin directa entre L y N.

! Como la columna capilar es bien fina, no cabe un soporte granular externo, por lo que tengo que
usar como soporte la misma pared interior de la columna capilar. Como el dimetro es pequeo
hay poca superficie relativa a grnulos y se limitado el volumen de fase estacionaria por unidad de
largo.
! El volumen de fase estacionaria dicta cuanta fase estacionaria tengo ah para equilibrar los
analitos que estoy separando. Al haber poca fase estacionaria, no son muchas las molculas que
pueden equilibrarse en esa superficie por lo que se limita la cuanta de muestra que puedo
introducir.
! En estos casos, es crtica la variabilidad que surge de inyeccin en inyeccin por el error absoluto
asociado a cualquier instrumento medible, en este caso la jeringuilla con la que introduzco la
muestra. Al no poder inyectar mucha muestra en la columna, la jeringuilla va a tener que inyectar
menos volumen pero se sentir mas el error relativo, que es el error absoluto (0.14L) sobre el
volumen inyectado.
! La consecuencia de esto es que existe una relacin directa entre el tamao del pico cromatogrfico
y el volumen inyectado. Si se inyecta ms volumen, hay mas muestras o sea ms molculas que
llegaran al detector por lo que ms grande ser la seal. Pero si el error relativo se acenta al
reducir el volumen porque la capilar no me permite inyectar mucho volumen, tendr una
variabilidad de anlisis en anlisis que no va a ser aceptable para la mayora de las situaciones por
lo que tengo que sobreponerme a ello disminuyendo ese error relativo.
! La forma ms efectiva de disminuir el error relativo es inyectando un volumen mayor de muestra
pero a la misma vez evitando que se sature la columna. Podramos aprovechar una opcin llamada
"splitter o vlvula divisora la cual proporcionara otra salida que tiene una llavecita en la tubera
en alguna parte que permite controlar cun fcil es fluir por esa salida o no.
! Una salida adicional al inyector, de lo que provee, la cual es una presin positiva entrando. Si esto
est completamente cerrado es como si no hubiese otra salida, y todo lo que se inyecte que pase
a fase gaseosa ser empujado por el He y entrara en la columna.
! Mientras que si lo tengo abierto y tengo otra salida, dependiendo de la resistencia a fluir relativa
por las dos aperturas, va a ser el flujo relativo por las dos aperturas. Para asegurarme de
maximizar la eficiencia de la columna mantengo el flujo a travs de la columna constante, en el u
ptimo, y no varo S es que voy a variar el de la segunda salida. A base de cuan abierta est la
llave o no, establezco el estado de particin de mi muestra de tal forma que permita entrar a la
columna la cantidad ptima que no sature la columna pero que a la misma vez lleve a una
reduccin en el error relativo aceptable para la metodologa que est llevando a cabo.

! Me veo obligado a inyectar mucha muestra, relativo a lo que la columna puede tolerar y manejar,
para evito el error relativo botando el exceso de muestra que entre a la columna, cantidad que va
a llevar a la saturacin de mi columna.
! Por qu se satura la columna? Porque cuando vienen las molculas por la columna a buscar una
silla, ya va a haber alguien sentado. Por eso es que tengo que seguir caminando por la columna,
regando la muestra a travs de una regin ms ancha creando unas bandas enormes. Vamos a
ver unos picos bien anchos, porque a pesar de que la columna tiene la capacidad de establecer
muchos equilibrios, artificialmente por saturarla, echar exceso de muestra, las bandas que
normalmente seran finitas se tornan artificialmente anchas porque se sigue moviendo hasta
encontrar una silla vaca ms abajo, para poderse pegar en la columna, debido a que estoy
inyectando demasiada muestra.
! Particiones de 10%, 1%, 0.1% no son raras dependiendo del error relativo que quiero provocar.
! Si tomamos la particin de 10%, el 90% se bota y el 10% entra. En general, boto ms de lo que
entra a la columna. Estas particiones son bien comunes dependiendo de la concentracin de la
muestra y la capacidad de equilibracin de la columna y a la vez logro la reproducibilidades en mi
inyeccin, que van a llevar a las reproducibilidades en mi cromatograma. Las columnas capilares
no pueden aguantar ms de 10ng.
! Existen pruebas cualitativas y cuantitativas. Cmo voy a aprovechar las coordenadas de mi
cromatograma para cuantizar el analito, si desde el comienzo estoy botando un gran % de la
muestra? Cmo voy a poder cuantizar si el exceso que se va por el "splitter no entra a la
columna, no va a llegar al detector y ste no lo va a poder incorporar en la cuanta que se refleja
en el tamao del pico?
! Necesito corregir con una curva de calibracin por lo que necesito un estndar del analito de
inters y por eso preparo una serie de soluciones que reflejen el rango de concentraciones de
donde podra salir mi compuesto. Inyecto siempre un mismo volumen de alcuota en mi sistema al
mismo factor de particin del "splitter, para botar la misma proporcin del exceso de mi analito.
Se grafica y cada uno de los puntos que dicta mi lnea van a estar por debajo en magnitud de la
seal en proporcin a lo que la muestra en el caso desconocido no porque no se quien es, sino
cuanto hay aqu.
Concentracion
Respuesta


! Cada uno de los puntos de la grfica sale X% por debajo de lo que hubiera salido, al igual que le
pas a z en el cromatograma, de tal forma que cuando tengo la medida de z y busco la
concentracin queda corregido por el exceso que se bot, porque se analizaron bajo las mismas
condiciones de particin que mi muestra. Al establecer la proporcionalidad de tal seal a tal
concentracin estoy corrigiendo anlogo al concepto de alfa. Al corregir por el mismo factor la
proporcionalidad de concentraciones se va a guardar. Pierdo muestra, pero no impide que no
pueda cuantizar, porque corrijo con una curva de calibracin por ese exceso que estoy botando.
! Con capilares los flujos son bien bajos. Los u ptimos estn cerca de 1mL/min, eso oblig a
ponerle un regulador ms fino al equipo, que cuando entrara el gas no dependiera del control
grueso del manmetro en el tanque, porque va a haber mucho error en el u ptimo.
! Cmo sabra si una seal es ruido o un pico real? El ruido es al azar y es afectado por la
temperatura o por variaciones elctricas. Siempre uno debe hacer un anlisis simulado, sin
muestra, ya que siempre hay interferencias en anlisis a concentraciones bajas no lo podemos
evitar por lo que debemos caracterizar las interferencias.
! Si la interferencia es del mismo analito, se trata de evitar el oxgeno. Corro varias veces mis
blancos y determino cuanta interferencia de oxigeno tengo continuamente en mis planes. Cojo mi
muestra, la analizo, y como tiene la interferencia de oxigeno crecer la seal ms de lo que se
supone, porque no va a ser solo la muestra sino tambin la interferencia de oxgeno. Pero como se
cunto es la interferencia, se la resto y entonces puedo cuantizar lo que est asociado a mi
muestra. Lo nico es que va a haber ms error ya que estar el error de la determinacin del
oxgeno asociado a la muestra y el de la determinacin de oxgeno de la interferencia por lo que
tengo el doble de la variabilidad de lo que est determinando.
! Las capilares son de flujos bajos, al tener un inyector de 10mL y un flujo en mi columna de
1mL/min, sabiendo que el He no puede ir ms rpido de 1mL/min por lo tanto no puedo vaciar
este inyector ms rpido de 1mL/min (olvidndonos del "splitter). En el instante en que inyecto la
muestra, esta se vaporiza y todo ese vapor entra en la columna. NO puedo meter ms volumen de
mi muestra que u ptimo.
! Si inyecto 10mL de volumen va a tardar un mnimo de 10min en vaciarla. Pero las primeras
molculas de analito que quedaron al frente de la columna no se quedan ah esperando, sino que
rpidamente comienzan a correr por la columna, entonces est el problema de falta de equilibrio.
Cuando vienen a entrar las ltimas de ese 1mL, ya las primeras le llevan casi 10min de ventaja.
He generado artificialmente una banda ancha de 10min sin empezar a contar los factores de Van
Deemter que van a sumrsele y hacerlo ms ancho.
! Voy a derrotar el haber ido a una capilar larga, si estoy haciendo mi H enorme por un factor
artificial por un mal diseo del inyector por lo que comnmente se reduce ese inyector. Se le
introduce un tubito de vidrio, de pared gruesa que se llama "insert. Cuando inyecto no estoy

inyectando en el cuerpo del inyector de 10mL, sino en un volumen bien reducido interno, cavidad
bien pequea que se redujo a 0.2mL o 0.4mL porque el grueso del espacio va a estar ocupada por
el grueso de la pared de vidrio. Un flujo lento, lo nico que tiene que vaciar es ese espacio interior
porque ah es donde va a estar la muestra y entra toda la muestra mucho ms rpido. Con
capilares tengo que usar los "insert porque sino me van a surgir de forma artificial picos anchos,
reduzco lo que se conoce como volumen muerto.
! Volumen muerto es todo aquel volumen por donde pasa muestra siempre y cuando no se este
llevando a cabo separacin. NO hay equilibrio en el inyector, no hay fase estacionaria as que ah
no se est llevando a cabo separacin. Ese pequeo volumen entre la salida de la columna y la
entrada al detector es un volumen muerto tambin. En cromatografa, siempre se quiere
minimizar o eliminar el volumen muerto, porque en esos lugares van a acentuarse factores como
difusin que me perjudican en la separacin.


6 de marzo de 2006
Quiz #4:
PREGUNTA: Analizas una muestra utilizando un cromatgrafo de gas, el cual tiene un horno al
cual le puedes programar la temperatura. Realizas dos corridas: en el primera, mantienes la
temperatura a 200
o
C por el tiempo de separacin, o sea, bajo una condicin isotermal; mientras
que en la segunda se fue aumentado la temperatura desde 50 a 200
o
C. Por qu se observa esta
diferencia en ambos cromatogramas?
200
o
C
Isotermal
50-200
o
C
Prog. de
Temperatura


RESPUESTA: Al observar los cromatograma, vemos que en la segunda corrida hubo una mejor
separacin para todos los compuestos, o sea se obtuvo una mayor resolucin, trmino que
incluye tanto la eficiencia como la selectividad del mtodo. Adems, en el segundo caso todos los
componentes eluyeron a tiempos de retencin ms altos. En el segundo caso, se maximizan las
diferencias en K ya que los analitos pueden interaccionar ms con la fase estacionaria relativo al
primero en el cual la energa cintica es siempre mayor y causa que los analitos estn ms
desplazados hacia la fase mvil. Entre ms tiempo a temperatura elevada ms se desplaza la
concentracin hacia fase mvil lo que lleva a tiempos de retencin reducidos. En el segundo caso,
la temperatura aumento gradualmente por lo que los analitos pueden interaccionar ms con la
fase estacionaria y provoca que se sientan las diferencias entre los dipolos de los analitos y se

acentan las diferencias en K. Entre mas baja la temperatura mas oportunidad le doy a la fase
estacionaria a aprovechar las diferencias entre los compuestos y separar.

ASIGNACION: Por qu no siempre bajar la temperatura me llevara a una mejor separacin?

! Cromatografa de Gas
! Detectores en serie, es decir que todo lo que sale de la columna entra a un detector y lo que
sale de este, entra a un segundo detector. Mientras que en detectores paralelos lo que sale
de la columna se divide 50-50 y se enva mitad a un detector y mitad a otro. Ambos mtodos
tienen la finalidad de generar dos cromatogramas simultneamente.
! Prejuicio es la propiedad en que se basan los detectores para detectar los compuestos pero
no la fase mvil. Cuan bien el detector observa esa propiedad varia de detector en detector.
Por lo que, se produce una diferencia en las seales entre compuesto y compuesto.
! Uno debe cotejar siempre que no haya ningn escape y documentar ese cotejo tirando un
control de calidad conocido.
! Dos tipos de columnas: las empacadas y las capilares. Las columnas empacadas que tienen
un soporte en forma granular y las capilares que son un tubo hueco y la pared interior sirve
como soporte.
! La capilar se puede hacer bien larga para alcanzar cientos de miles de platos tericos
mientras que las empacadas no puedo hacerla larga ya que hay demasiada resistencia a fluir
al no ser hueca y despus de par de metros la presin empieza a treparse y lo que gano en
eficiencia lo pierdo rpidamente al no poder lograr u optimo (por debajo).
! Con una diferencia en eficiencia tan marcada entre la capilar y la empacada. Por qu existen
las empacadas? Las empacadas son ms econmicas ($40-$50) y se utilizan para muestras
no tan complejas. Tambin la forma en que se preparan las capilares limitan la variedad de
fase estacionaria que se pueden enlazar covalentemente en el interior de la capilar ya que
por ser finitas se requiere mucha tecnologa para depositar de forma homognea una capa de
fase estacionaria (solo como 15 fases estacionarias).
! Tengo la capilar y aplico un vaco para adsorber la fase estacionaria en el interior de la capilar
luego se puede irradiar para inducir formacin de enlaces covalentes o aspirar una solucin
acida o bsica para activar los enlaces. Pero es difcil que quede homogneo a travs de toda
la columna es por eso que cuesta. Mientras que el la empacada hay mucho mas variabilidad
de fase estacionarias para maximizar las diferencias en K.

! Por ende, en la empacadas tengo ms probabilidad de conseguir una fase estacionaria que
me de la selectividad que necesito.
! El primer mandamiento de la cromatografa es que el detector no vea fase mvil. En todo
detector hay ciertas caractersticas deseables:
" Selectividad (d) de deteccin- es donde modificamos el mandamiento que se le da al
detector. Ej. Que solo vea halogenados.
13 de marzo de 2006
QUIZ #5
PREGUNTA: Tenemos dos situaciones, en las cuales se inyecta la misma muestra pero con
detectores distintos Cules son las diferencias y a que se le atribuyen?
D
1
D
2
1
2
3
4
5
6
1
2

RESPUESTA: Primero, podemos observar que en D
1
y D
2
hay dos compuestos que eluyan al
mismo tiempo de retencin por lo que son el mismo compuesto ya que esto es una caracterstica
nica de compuesto en compuesto. Se observa que en el D
1
se observan tres compuestos que en
el D
2
no y en el D
2
se observa un compuesto que no aparece en D
1
. Una posible explicacin para
esto es que los lmites de deteccin para los compuestos que ve el D
1
no cumplan con los lmites
de deteccin del D
2
. Otro factor, al que pudiramos atribuir esta diferencia en los
cromatogramas, es la selectividad de los detectores, por lo que podemos inferir que ninguno de
los dos detectores es universal ya que sino vera los seis compuestos. Y en el caso de los
compuestos 1 y 2 podemos concluir que estos exhiben ambas propiedades tanto para el D
1
como
para el D
2
. Por ejemplo, el D
1
podra ser selectivo a aromticos y el D
2
a halgenos, por lo que
compuestos aromticos halogenados serian detectados por ambos detectores. Tambin
observamos que no se mantienen la proporciones relativas en la reas para el compuesto 1 y 2
en ambos detectores por lo que sabemos que hay prejuicio para uno de los compuestos en cada
detector ya que cambia la naturaleza del prejuicio. Como no sabemos las cantidades relativas de
los compuestos, no podemos decir contra o a favor de quien es el prejuicio.

! Caractersticas deseables en un detector
1. Selectividad
" Se escoge de acuerdo a los compuestos que deseo observar.
2. Sensitividad

" Cuan bien un detector puede detectar en trminos de cuanta, el cual esta ligado a los
trminos de limites de deteccin.
" Para fijar los limites de deteccin tenemos que tomar en cuanta el ruido, la
inestabilidad en la lnea base.
" Para que se pueda detectar el compuesto debe sobrepasar 3! partiendo del punto
medio de los lmites de ruido del cual dependen los lmites de confianza.
" Los lmites de deteccin varan de detector en detector para los compuestos.
3. Rango lineal
" Es aquel rango de concentraciones, en una grafica o curva de calibracin, para un
compuesto donde se mantiene constante la pendiente o comportndose como lnea
recta.


" Todo detector tiene su rango lineal, parte donde la pendiente no cambia entre una
concentracin mnima y una mxima. Pero llegara un momento donde el aumento en
respuesta no guarda relacin directa con un aumento en concentracin y es, en este
momento, donde se pierde la relacin lineal.
" Es deseable en los detectores rangos lineales amplios ya que entre mayor sea ese
rango de concentracin mejor si tengo que cuantizar porque no tengo que generar una
curva de calibracin, lo que tomara mucho tiempo, para determinar la concentracin
de un desconocido cuya respuesta caiga dentro del rango.
" Solo tendra que preparar solo una solucin estndar ya que cualquier otra guardara
una relacin lineal con respecto a esta.
std
std x
x
x
x
std
std
R
C R
C
C
R
C
R
! 5 !

" Si es estrecho el rango lineal, habran mas dudas a la hora de cuantizar el desconocido
lo que nos obligara a determinar su rango lineal.
" Cuando las cuantas son muy bajas a veces no puedo relacionar las diluciones. Hay
factores que pueden llevar a falta de linealidad a concentraciones bajas como:
absorcin en las paredes ya que siempre se pierde muestras en las paredes lo que
afecta mas a concentraciones bajas; perdidas por evaporacin; reacciones qumicas,
siempre las hay aunque no fueran lo suficientemente significativas.
" Cada detector tiene una regin sensorial fija donde cuenta, la cual depende de un
volumen o rea de superficie por lo que llega un momento que meto tantas molculas
en ese volumen que pasan tan rpido que no las voy contar y la respuesta saldr

menor a la real. Esto se debe a que exced la capacidad de ese detector lo que
significa que lo sature y me saca del rango lineal.
4. Destructivo o no-destructivo
" Como el sistema no es sellado tiene que tener una salida, la cual ser por el detector.
" En el detector no-destructivo, lo que escapa al aire del laboratorio es la misma mezcla
que inyect por lo que no se altera qumicamente o se destruye el compuesto a
diferencia del destructivo que lo que sale qumicamente es diferente.
" Hay detectores que queman los compuestos y lo que sale son los productos de
descomposicin, las condiciones internas en las cuales opera ese detector son la que
determinan como saldrn los compuestos.
" Las ventajas y desventajas dependen del arreglo que tengan los detectores cuando
quiero usar dos detectores simultneamente para obtener dos tipos de informacin
qumica de una muestra. Hay varias formas de hacer esto:
! Paralelo - donde la salida de la columna se divide en dos, es decir antes de
entrar en el detector le coloco una Y que divida 50-50 la muestra. La mitad de
la muestra va hacia el detector uno y la otra mitad al detector dos. Aqu no
importa si algn detector es destructivo o ambos lo son, ya que no hay
ninguna dependencia entre los dos detectores. Cuando los limites de deteccin
son bajos se complica este anlisis ya que llega menos a los detectores y
puede que no se detecten los componentes de la muestra ya no cumpliran con
los limites de deteccin.
! Serie - Aqu si importa que D
1
sea no-destructivo ya que lo que sale de D
1
lo
necesita D
2
para generar su seal porque no divido la muestra antes de llegar
al detector.
D
1
Inyector
D
2
PARALELO

D
1
Inyector
D
2
SERIE

" Desde el punto de vista preparativo, se desea aislar componentes de inters en una
muestra para realizar otro anlisis confirmatorio (como en TLC que se extrae un
compuesto), a partir de una tcnica cromatogrfica que puede separar mezclas ms
complejas. Se puede usar un cromatgrafo de gas en forma preparativa.
" Si el detector es no-destructivo se puede conectar una trampa refrigerada, con un
capilar que se pueda conectar para que cuando el compuesto de inters este pasando
por el detector podamos condensarlo y atraparlo. Esto no se puede hacer con
columnas capilares ya que estas solo pueden aguantar cantidades de nanogramos, lo

que es muy poco para realizar cualquier otro anlisis. Por lo que, se deben usar
columnas empacadas ya que son de mayor capacidad.
D
1

D
1

" En detectores destructivos, puedo hacer una salida antes de que la muestra llegue al
detector para desviarla a la vez que se detecta, particin que ser de 1:10 o 1:100 ya
que lo que quiero es obtener la muestra para otro anlisis.
5. Respuesta Rpida
" No queremos que el compuesto cuando salga de la columna coja un turno para se
detectado ya que los componentes que vienen atrs lo van a alcanzar y el detector los
contara junto por lo que la eficiencia y resolucin que gan en la columna la perd en
el detector. Ej. Los insectos brincan cuando sienten las feromonas. "Post Column
Derivatization

15 de marzo de 2006

ASIGNACION: Por qu en el contexto de cromatografa de gas se refiere a compuestos orgnicos?

! Detectores
! Por qu tengo que utilizar ms de un detector? Porque el propsito de este experimento es
identificar ciertos componentes de cada compuesto basado en sus propiedades fsicas, cuyas
propiedades pueden ser diferentes y es por esto que utilizo dos detectores selectivos a
propiedades diferentes. Obtengo informacin cualitativa. El universal no me discrimina por
cierta caracterstica qumica en especfico, se basa en una propiedad que todos exhiben.
1. Detector de conductividad trmica
" Salida de la columna en el horno, los analitos van saliendo hacia esta cmara, un
tubo hueco con una conexin.
" Los analitos con mayor afinidad por fase mvil van saliendo primero, y tengo ah en
la entrada un detector, un filamento finito que conduce.
" Al pasar una corriente a travs de ese filamento, levantando un AV entre ellos dos
extremos, tengo un contacto con los dos voltajes ms positivo que el otro. Sistemas
de potencimetro que le meten densidad electrnica a un material que conduzca o le
restan densidad electrnica.
" Yo le meto ms electrones a u n metal que protones que hay en el ncleo de todos lo
tomos que componen ese pedacito de metal, no se cancelan las cargas y va a haber

mas carga negativa neta y por ende tiene un voltaje negativo, tiene un exceso de
electrones.
" Entre mayor es el exceso de electrones, mayor es el voltaje negativo que le impart a
ese pedazo de metal.
" De igual forma con un sistema de potencimetro puedo yo quitarle electrones a un
material que conduce, y llegar a un estado donde las suma de todos los protones de
los tomos en ese material que le quit electrones, es mayor que los electrones
asociados a ese sistema y por ende no se cancelan por el lado positivo. Entre mayor
la cantidad de electrones que quito, mayor va a ser el voltaje positivo que apliqu a
ese metal.
" En un extremo le estoy metiendo electrones y en otro le estoy quitando electrones, y
si este material tiene orbitales que permite el transporte de esos electrones, van a
moverse electrones de donde hay exceso. Va a haber un flujo o una corriente de
electrones a travs de ese material.
" Pero como ningn material conductor perfecto, que le da un paso automtico a los
electrones, porque al pasar por ah brincando de tomo en tomo va a encontrar
otras especies cargadas, que los van a atraer y repeler, se crea un intercambio de
energa que lleva a que esto se caliente.
" No es un conductor perfecto, pierde energa en el proceso de caminar por ese
alambre por virtud de tener esta fuerza motriz de exceso en un extremo y deficiente
en el otro, la fuerza motriz que lleva al movimiento.
" Pero ese movimiento no es totalmente transparente, se le quita energa en el
proceso de pasar y esa energa se manifiesta en forma de calor.
" Se calienta excesivamente, todo material al pasar la corriente a travs en mayor o
menor grado se va a calentar.
" Entre mejor conduzca, menos estorbo presente al libre movimiento de ese electrn,
menos prdida de energa va a tener.
" Entre menos conduzca, entre ms resistencia tenga a que ese electrn se mueva
libremente a travs de ese material, ms energa va a perder ese electrn en el
proceso.
" As que se calienta ese filamento, mientras la magnitud de electrones que pasan o la
corriente que fluye a travs de ese sistema sea constante, la cuanta de energa que
se pierde va a ser constante, la temperatura que llegue ese filamento va a ser
constante.
" Si no hemos inyectado muestra y lo nico que est saliendo es He, fase mvil,
todava no he llegado a un tiempo de retencin del compuesto de menor tiempo de
retencin, as que lo nico que va a estar saliendo es fase mvil.

" Este filamento se refresca un poco cuando el "abanico del helio choca con el. Le va
a bajar un poquito la temperatura cuando choca helio con el filamento relativo a la
ausencia de l, se enfra un poquito.
" La temperatura de ese filamento va a ser un poco ms baja de la que sera en
ausencia de helio. Pero como necesito fase mvil para que esto opere ese filamento
a un AV dado, va a equilibrarse a una temperatura ms baja.
" Llego a una temperatura estable, a un estado estacionario, a pesar de que le sigo
metiendo ms energa por el fluir de la corriente, He est llevndose la misma
cantidad de calor porque el flujo es constante, el nmero de choques es constante,
se llega a una temperatura estable, tengo un AV fijo.
" Empieza a complicarse, empieza a llegar muestra, llega el compuesto que menos
afinidad tiene por esa fase estacionaria, choca con ese filamento, ya no es He
solamente lo que est chocando con ese filamento, tengo una mezcla de He y
analito.
" La capacidad de enfriamiento o restarle calor a ese filamento cambia.
" Ahora tengo molculas con muchos modos de libertad (vibracional, wagging, de
traslacin), tengo ms bolsillos donde meter calor, cambia cuanto calor le quito a la
superficie.
" Cambia la temperatura del filamento a la que era cuando solamente He era lo que
estaba eluyendo.
" Al la temperatura cambiar, cambia la resistencia.
" Ya la capacidad de movimiento de los electrones a travs de ese material va a
cambiar, va a aumentar el nmero de electrones o disminuir el nmero de electrones
que llega al filamento, el voltaje no va a ser el mismo, el AV no va a ser el mismo.
" Entre ms muestra llega, ms choque de muestra con el filamento, ms diferente es
la dinmica a cuando era He solo, mayor va a ser el cambio en temperatura, mayor
va a ser el cambio en voltaje resultante.
" Yo le doy el comando de que esta respuesta guarde proporcin con el voltaje vs.
tiempo de un perfil cromatogrfico.
" Inicialmente sabemos que en esa banda, tengo poquita muestra, donde la amplitud
de las lneas son la representacin de la densidad de molculas por volumen, pocas
molculas entrando inicialmente al filamento, poco cambio en la capacidad de
enfriamiento, poco cambio en el AV y poco ascenso en mi cromatograma.
" Segn va entrndose la muestra a la cavidad del detector, mayor va a ser la
proporcin de molculas de analito que ahora estn chocando con el filamento, ms
diferente es la composicin de cuando era He solo, mayor va a ser la diferencia en
temperatura, mayor va a ser el AV, mayor va a ser el tamao del pico.

" Una vez pasado ese mximo, comienza a disminuir la cantidad de molculas, va
ahora disminuyendo la cuanta de analitos chocando con el filamento, ms se
comienza a parecer a la condicin de cuando era He solamente, va disminuyendo el
AV hasta que regreso cuando es He nada ms chocando asumiendo que tengo buena
resolucin, ms de 1.5 para que se logre esa condicin.
" Y as va a ser hasta que venga la prxima banda, que va a tener una distribucin
gaussiana, y se de un cambio de voltaje anlogo, NO IGUAL, porque los bolsillos del
compuesto B, que puedo meter calor van a ser diferentes a los de A, la capacidad de
enfriamiento por unidad de cantidad de molcula es diferente.
" Podra estar restando calor por unidad de molcula ms eficientemente o menos
eficientemente, por ende no responde igual.
" De ser equimolar, que no tendra que serlo, el que ms eficientemente quiete calor
por unidad de cantidad de molculas, mayor cambio en temperatura va a inducir,
mayor va a ser el AV que va a resultar, mayor va a ser el tamao del pico en mi
cromatograma.
" Si uno lo hace mucho mejor que el otro, ese pico va a ser mas alto que el otro, de
ser ambos equimolares va a ver un prejuicio a favor del que ms eficientemente
pueda enfriar mejor ese filamento.
" Se da la situacin, si hay un compuesto enfre el filamento igual que He, porque al
no cambiar la temperatura relativo a cuando es He nada ms, la resistencia a fluir va
a ser igual, el cambio en voltaje va a ser igual, eso se traduce a lnea base.
" Pero como a nivel terico todo compuesto tiene estructuras fsicas diferentes cada
compuesto va a tener una capacidad de asimilar calor diferente, va a depender de
los bolsillos en que puede echar ese calor, mientras ms tenga donde echar calor
ms eficientemente va a poder asimilar calor.
" Si son compuestos diferentes, tienen bolsillos diferentes quizs tan parecido que no
se puedan diferenciarlos dentro de un margen de error, en teora todo compuesto es
diferente a helio en trminos de la capacidad trmica.
" Por ende es universal porque se basa en una propiedad que todo compuesto
orgnico puede exhibir.
" Si tiene prejuicio, porque no todo compuesto enfra de forma igual.
" Mientras ms cambio en temperatura induzca, mayor va a ser el AV, mayor va a ser
el prejuicio a favor de ese compuesto.
" Es no destructivo porque no se rompen enlaces y se hacen enlaces, se mantiene la
integridad fsica de la molcula, solamente la puse a brincar un poquito ms. Siguen
siendo los mismos tomos enlazados unos a los otros, el mismo arreglo espacial.

" Esto es un media verdad, para propsitos de la clase es no destructivo, pero van a
haber unas molculas que se acercan demasiado al filamento y se achicharran y
mueren.
" Rango lineal tiene uno de 10
5
, tiene uno de los ms amplios, es excelente en ese
aspecto y eso me simplifica el trabajo del que hacer analtico, el cuantizar.
" En el pareo es Rango lineal = cuantizacin
" Respuesta rpida
" En general de los menos prejuicios que tiene, es el que mejor uniformemente ve los
compuestos en proporcin a sus cantidades. Puedo bastante bien, de ver un
cromatograma, tener una idea de las proporciones en concentracin de los
compuestos, porque responde bastante bien.
" No van a haber magnitudes de prejuicio mayores de 2 en este detector.
" El LDL (lowest detection limit) las cantidades para poder cumplir con este criterio
estn en el rango de los 4g. Para clasificarse como un detector analtico hoy en da,
tiene que llegar a los ng.
" No se puede utilizar una columna capilar porque tiene que ser cerca de 100ng, y
esta no lo es porque es en 4g, derroto el propsito de haber utilizado una capilar, no
voy a estar sacndole el mximo de platos tericos, as que normalmente es con
columnas empacadas.
" Tambin al ser no destructivo uno tiende a utilizarlo en aplicaciones preparativas.
2. Detector de ionizacin de flama
" Salida de la columna conectada al cuerpo del detector. El detector es un
instrumento con un canal a travs de el por donde va a entrar la columna, y arriba
va a haber una llama que voy a generar por la combustin de oxgeno. El aire es
quien va a suplir este oxgeno, va a ser un proceso exotrmico que libera mucho
calor, por ende vecino en el espacio donde se est dando la combustin que es una
regin de alta energa que llamo llama.
" Llama es donde se est dando ese proceso de romper enlaces O-O y recombinar
para formar O-H. Ah es donde se est liberando mucho calor, el grueso de esa
energa va a liberarse en forma termal y parte de la energa va a ser en forma de
liberacin fotnica.
" Alrededor tengo un electrodo, si lo viera de arriba viera:




V+
V-

" Para poder levantar una diferencia en voltajes, tengo que tener una aislacin, para
que el alambre donde voy a meter exceso de electrones no toque lo otro. Son
conductiva la punta y lo que hay alrededor.
" He va a ser la fase mvil, cuando inyecte la mezcla de compuestos van a comenzar
a salir por la abertura, es acedido por el aire y el hidrgeno una vez salido el
compuesto para llevarlo rpido a la llama. No queremos que coja el numerito, el
aire y el oxgeno me ayuda a esto.
" En el momento que sale el compuesto a las temperaturas altas de la llama, pongo
esos enlaces a vibrar tan rpido que rompo los en laces covalentes en los
compuestos orgnicos.
" Voy a tener radicales, si es homoltica o heteroltica la rotura dara origen a iones.
" De haber una parte de la molcula que pueda estabilizar eficientemente una carga
positiva o negativa, puede favorecer roturas heterolticas, para nuestro propsito
esta rotura es la que es relevante para el detector.
" La heteroltica va a generarse en este volumen, lo voy a estar llenando de iones en
el momento que sale un compuesto.
" Mientras no sala el compuesto tena los dos polos aislados por un aire que no est
cargado, en trminos de densidad de cargas.
" Al estar bien aislados estos electrones locos por irse afuera, no pueden hacerlo
porque hay una barrera que no los deja, no hay un paso para poder llegar.
" En el momento que sale muestra y lleno el volumen con densidad de carga se hace
inico el proceso, se hace ms conductivo el medio, y pueden pasar electrones de
donde estn en exceso a donde estn en deficiencia, se conduce electricidad.
" Inicialmente tena una diferencia en voltaje, por virtud de que no era conductivo el
medio, en el momento que el medio se hace conductivo pueden brincar electrones
para cambiar la relatividad de magnitud de diferencia en estado de cargas.
" Va a cambiar el voltaje.
" Cuando graficamos voltaje por tiempo de retencin voy a poder grabar cuando salen
compuestos.
" Poco compuesto orgnico va a entrar a la llama, pocos rompimientos heterolticos,
baja densidad electrnica, menos conductivo el medio, menos electrones pasan,
menor es la diferencia en voltaje, ms pequeo es el tamao.
" Va adentrndose ms la banda, ms compuestos entran a la llama, ms
rompimiento de enlaces logro, ms densidad de iones meto en esta regin, ms
conductivo se hace el medio, mayor es el flujo de electrones, mayor va a ser la
diferencia en voltaje, mayor va a ser el tamao.
" Lo que cambia es el fenmeno que afecta la conductividad en este caso.

" Destructivo porque se rompen enlaces, lo que sale del detector no mantiene la
integridad qumica.
" Lmites de deteccin son ng, es excelente califica como analtico.
" Prejuicio bajo, un poco ms que el TCD, dentro de los analticos es el menos
prejuicio que tiene.
" Rango lineal tambin excelente, en las magnitudes de 10
5

" Universal porque ve los compuestos que genera iones porque son compuestos
orgnicos, no ve CO
2
, H
2
O, CeS
2
.
" Mientras ms oxidado est ese compuesto al entrar, mayor va a ser su lmite de
deteccin.
" Prejuicio va a en contra de los compuestos entre mayor sea el estado de oxidacin
que tengan.
27 de abril de 2006
QUIZ #6 (Pregunta de Examen #1)
PREGUNTA: En HPLC, se hacen dos corridas pero solo cambiando el tamao (dimetro) de la fase
estacionaria A que se le atribuyen las diferencias observadas en la curva de Vam Deemter?
444m
134m
!
H

RESPUESTA: Mientras menor sea el dimetro del particulado mayor ser el rea de superficie en
la columna por lo que se puede establecer un equilibrio a una altura menor. Esto se debe a que
hay ms lugares por unidad de largo en la fase estacionaria donde los analitos pueden
equilibrarse. Por lo que, la distancia mnima para que todas la molculas de analito interaccionen
con la fase estacionaria ser menor cuando el tamao del particulado sea menor. Por lo que, a
menor H mayor numero de platos tericos y mayor eficiencia.

! HPLC ("High Performance Liquid Cromatography")


A B
G
H
I
F
C
D E

A y B - Botellas de Reserva
C - Desgasificador
D - Mezcladora
E - Bombas
F - Amortiguador de presin "damper
G - Inyector
H - Columna
I - Detector de Referencia y Muestra

6. Botellas de Reserva
" El disolvente en HPLC disuelve el analito por lo que tiene la funcin de fase mvil.
" Por que instrumentos con ms de una botella de reserva? Al tener dos disolventes
diferentes se pueden hacer gradientes de composicin, el cual es ms importante que
un gradiente de temperatura en HPLC. Como los disolventes interaccionan con los
analitos, se pueden maximizar las diferencias en K con el gradiente de composicin.
" En HPLC, no se puede calentar hasta temperatura muy altas (400
o
C) ya que se puede
volatilizar la muestra y el disolvente. Es por esta razn que no se puede exceder la
temperatura ya que se volatiliza la fase mvil. Si se genera fase gaseosa, se genera
una mezcla de fases por lo que habr fase liquida y fase gaseosa.
" En HPLC, se puede calentar hasta aproximadamente 30
o
C mientras que en GC se
puede calentar hasta 375
o
C. En HPLC, no se puede jugar mucho con los gradientes en
temperatura.
" En GC, el gradiente de temperatura facilita la separacin de los analitos en la columna
ya que se acentan las diferencias en K. Esto se logra ya que no todos los analitos se
van a desplazar igual debido a que los movimientos vibracionales van a ser diferentes.
Unos analitos se van a desplazar mas que otros, a pesar de que todos eluyen mas
rpido. No se desplazan los equilibrios en forma proporcional. No todos tienen las
mismas afinidades por la fase estacionaria. Ms rangos de temperaturas con que
jugar.
" Normal Phase: Fase estacionaria polar y Fase mvil no-polar.
" Para saber las impurezas de la fase mvil se corre un blanco primero. Efectos de
memoria, interferencias, impurezas de la fase mvil, todo eso se va a ver en el blanco.
" La seleccin de fases mviles va a depender de muchas cosas: (1) tienen que ser
miscibles; (2) tienen que ser puras (para que las impurezas no estorben en el
detector); y (3) tienen que ser compatible con el detector.

" Al detector le dimos el mandato de no ver fase mvil pero en HPLC no es tan fcil
porque las molculas de fase mvil tienen enlaces C-C y C-H as que la fase mvil
comienza a parecerse mucho a mis analitos. Por lo que, se hace ms difcil buscar una
propiedad que la tengan los analitos y no fase mvil. Con He no haba ese problema
ya que es un gas noble monoatmico que no tiene caractersticas parecidas a la de
mis analitos.
" Esta es la debilidad grande de HPLC, no hay detectores universales buenos. Hay unos
que lo simulan pero no son universales. Ninguno como el FID y el HWD.
" Hay que filtrar la fase mvil ya que se trabaja a presiones altas, y el espacio es
limitado, por lo que si le cae particulado se daa. Del aire le cae el particulado por lo
que antes de poner la fase mvil en las botellas de reservas hay que filtrarla.
" Hay dos tipos de filtros:
i. de membrana - es sinttico de tipo de plstico, tiene muchos rotitos bien
homogneos, alta capacidad para filtrar. Los hueco no se ven, estos se hace
con un lser.
ii. "mesh - son como espaguetis, los hueco no son homogneos.
" A y B son miscibles y con polaridades lo mas diferente posible. Si se
tiene uno bien polar (mxima polaridad), y otro no polar (mnimo en
polaridad), se pueden lograr todas las polaridades entre medio, dependiendo de las
proporciones. Se impactan las K de forma diferente.

7. Desgasificador
" Todos los que estamos sobre la tierra tenemos una presin atmosfrica sobre
nosotros. Por lo que, el aire llega a penetrar parcialmente el lquido y se disuelve en
l.
" Como en HPLC se trabaja presiones altas para poder lograr u optimo, la fase mvil no
puede tener burbujas ya que se perdera parte de las presiones en comprimir ese gas.
" Cuando se le pone presin, lo primero que va a ceder van a ser las burbujitas del gas.
La fase mvil se empieza a mover y le quita efectividad. Las presiones van a ser entre
2,000-4,000psi, eso es un rango normal. En GC, las presiones son de 5-50psi para
lograr u ptimo. Alta densidad, mucha interaccin por donde quiera que va a pasar,
por eso para moverla hay que darle mas presin.
" Se puede eliminar ese gas con un desgasificador, el cual le burbujea a la solucin He
para sacarle el gas que esta suspendido dentro de ella.
" La lnea del desgasificador tiene en la punta un vidrio poroso que divide el flujo en
muchas gotitas.

" Cmo puedo eliminar el gas con otro gas? El gas en solucin viene de la atmsfera
(nitrgeno, oxgeno), el cual tiene gran afinidad por el medio en comparacin con He
que se hace difcil retenerlo.
" Se necesita mantener la desgasificacin durante toda la corrida para poder
mantenerme en u ptimo. Si se baja la presin atmosfrica, baja el punto de
ebullicin.
" Hay otras formas de desgasificar: ultrasonido para anlisis cortos ya que en lo que
llevo la solucin a las botellas de reserva se vuelve a gasificar.

8. Mezcladora
" Controlo cuanto de A o de B va a entrar al sistema, controlando las aperturas. Puedo
tener flujos 100:0, 50:50, 0:100, entre otros.

29 de abril de 2006
! HPLC ("High Performance Liquid Cromatography")

A B
G
H
I
F
C
D E

A y B - Botellas de Reserva
C - Desgasificador
D - Mezcladora
E - Bombas
F - Amortiguador de presin "damper
G - Inyector
H - Columna
I - Detector de Referencia y Muestra

! Malla - se usa para filtrar, esta hecha por alambres alineados a 90 grados. Se
forma una red o huecos, dependiendo del alineamiento, de estos hueco es que
depende la filtracin, lo que pasa y lo que no pasa. "Mesh - malla consecutiva
de diferentes tamaos de huecos.

9. Botellas de Reserva
" Caractersticas de la fase mvil:
iii. Ambos disolventes deben ser miscibles para que puedan disolverse entre si
para que no hayan dos fases ya que sino va a ver mezclas. No se podra crear
una buena separacin y se pierde la reproducibilidad.
40
60
80
100
120
140

iv. Que me de los 6K apropiados, y esto lo logro mirando la naturaleza qumica de
mis analitos.
v. Hacer gradientes para acentuar las diferencias en K
vi. Uno bien polar (mxima polaridad) y otro no-polar (mnima polaridad) y puedo
lograr todas las polaridades entre medios.
vii. Compatible con el detector.
" Antes de usar la fase mvil se tiene que filtrar porque le pueden entrar impurezas. Las
partculas pueden interferir ya que se puede tapar la bomba y la columna.

10. Desgasificador
" Se necesitan altas presiones en HPLC porque la fase mvil lquida tiene ms
resistencia a fluir ya que el lquido se pega ms a las paredes porque tiene mayor
nmero de molculas por unidad de volumen.
" En GC, hay menos interacciones ya que el He no tiene dipolos permanentes que pueda
inducir. En los lquidos, hay dipolos marcados, y se pegan a las paredes. Es por eso
que hay ms resistencia a fluir, ms masa en menos volumen y por eso se requiere
ms energa para que fluya.
" En fase gaseosa, las molculas estn mas lejos por lo que interaccionan menos y no
hay tanta resistencia a fluir como en el liquido en el que hay dipolos marcados que
puede interaccionar con la paredes por lo que se requiere mas energa para que fluya.
" Por qu hay gas en el disolvente? En el disolvente hay nitrgeno, oxgeno y todos los
gases que hay en el aire, los cuales llegaron adentro de la fase mvil por la presin
atmosfrica. La presin atmosfrica se da porque hay masas y una fuerza bajndolas
por lo que se aglomeran cerca de la superficie ya que la gravedad esta atrayndolas
todo el tiempo. La fuerza gravitacional lo obliga a entrar a ese lquido.
" Es por eso que el gas en el disolvente hay que sacarlo. Por ejemplo, si pongo unos
esprines para empujar una mesa, la fuerza inicial se va en comprimir los esprines.
Anlogo a comprimir el gas en la fase mvil.
" Las altas presiones se perderan en comprimir el gas lo que causa que se pierda
reproducibilidad. El gas se comprime primero ya que antes de que el lquido pueda
empujar ms lquido se va a comprimir el gas ya que sus molculas estn ms
separadas y es ms fcil comprimirlo.
" El 95% de los problemas en HPLC son del "damper para atrs. La bomba es un gran
problema.
" Se desgasifica burbujeando He porque se retiene menos que el aire, se saca el grueso
de la burbujas pero se podra quedar un poco de He pero no afecta las presiones que
necesito.


11. Mezcladora
" Un espacio sellado excepto por tres aperturas, de las cuales
dos son para las entradas de fase mvil que van a tener unas
entraditas, y una para la salida hacia el resto del sistema. De
acuerdo, a cuan abiertas o cerradas estn la aperturas
controlo la proporcin de los dos disolventes.

12. Bomba
" Las bombas ms usadas son de pistn, el
cual se mueve en un cilindro reduciendo el
espacio.
" Hay un sistema de motor que mueve el pistn
en forma cclica, cuando disminuye el
volumen se comprime lo que este adentro
hacia las aperturas.
" Las aperturas tienen unos "check valves o vlvulas unidireccionales que permite el
flujo.
" Cuando el pistn se esta echando para atrs, crea un vaco para que se llene de fase
mvil pero esta invirtiendo el flujo de la columna por lo que le sacara la fase mvil.
Para controlar esto, se cierra la vlvula que va hacia la columna cuando estoy llenando
con fase mvil o se cierra la vlvula de la fase mvil cuando esto vaciando.
" Por que se usa helio y no un degasificador por ultrasonido? Por que se necesita la
desgasificacin durante toda la corrida. El ultrasonido es una frecuencia de vibracin,
se basa en un bao que tiene un regenerador, una pieza que vibra, el bao vibra, y la
solucin vibra, la solvatacin del medio se escapa y se fue la burbuja. Por lo que,
cuando saco la solucin del bao para ponerlo en la reserva vuelve a coger aire. Esto
se usa mas para anlisis cortos.
" La ventaja de desgasificar con He es que es continuo y sigue desgasificando todo el
tiempo y permite mantener las presiones altas.
" La bomba tiene un volumen limitado de 1mL.
" Volumen de retencin es relevante porque tengo que tomar en cuenta de que no se
me acabe la fase mvil mientras estoy en una corrida, o si voy a hacer muchas
corridas, que no se me acabe.
2 32 3 2 32 3 mL u t
mL
R R
! ! !
min
min V
" Por lo que, los flujos son de 1mL/min, si se hace una corrida de 30min debemos
asegurarnos de tener suficiente volumen para la corrida.
A
B

Fase
Mvil

Fase
Mvil
pistn
columna

"check valves

" Al vaciarse la bomba en lo que se llena, u se va a acercar a 0, por lo que B/u se hace
muy grande, H se hace bien grande y N disminuye. Esto no es lo que queremos.
" Por esto, colocamos otra bomba para evitar que el flujo se
detenga, as se mantiene el flujo. Se pone otra bomba para que
cuando una se empiece a llenar, la otra ya esta entregando, y
se mantiene el flujo constante.
" Cualquier partcula en la bomba, crea mucha presin ya que hay
poco huecos y el flujo se va al piso. Es por eso que hay que
limpiar la fase mvil.
" Si no se desgasific bien la fase mvil, van a ver burbujas de aire, y no se pueden
levantar las presiones que uno desea.
13. Amortiguador de presin
a. A pesar de que se mantiene un flujo constante a travs de la columna con el uso de la
bomba, va a variar la presin instantneamente cuando un pistn se detiene, aunque
el otro haya empezado. Cosa que se nivela rpido, pero causa pequeos cambios en la
densidad del lquido. Aumenta cuando se comprime, y cuando va para atrs, la
densidad disminuye.
b. Hay detectores que dependen de la densidad que van a
generar seales falsas por los cambios en densidad del
lquido. Esto va a afectar d en la lnea base por el ruido ya
que vamos a obtener limites de deteccin peores (ms
altos).
c. Pero yo los quiero pequeos ya que si son grandes se va a necesitar mucha mas
muestra para poder cumplir con el termino 3d. Todo por la sensitividad.
d. Es por esto que se introduce un amortiguador de presin, el cual es una cmara en
forma espiral antes de llegar al inyector. Este aumenta el volumen antes de llegar al
inyector y el volumen grande es para amortiguar los cambios en presin. Por lo que,
menor va a ser el efecto neto de los cambios en presin debido a la bomba.
e. Usamos volumen para discriminar el 6T.
f. De este amortiguador de presin, sale un flujo para el detector de referencia y otro va
a la columna que luego llega al detector de muestra.

14. Inyector
a. La muestra tiene que ser lquido y miscible en la fase mvil.
b. En HPLC no se utiliza un septum ya que este no aguanta las
altas presiones. En vez de esto se utiliza un loop el cual
"

aumenta la reproducibilidad disminuyendo el error absoluto ya que el loop tiene un
volumen constante que no cambia.
c. En HPLC, hay mucho efecto de memoria por que hay muchos sitios en donde se puede
adherir la muestra.

muestra

Fase
Mvil
columna
"waste"
LOOP




3 de abril de 2006
! HPLC ("High Performance Liquid Cromatography")

6. Inyector
d. Hay diferentes loops con diferentes capacidades de muestra.
e. Ventajas del loop:
1. Resiste altas presiones
2. Como es un volumen fijo, tiene mayor precisin o reproducibilidad de inyeccin a
inyeccin. Mayor reproducibilidad de cromatograma en cromatograma en trminos
de cuanta de los picos en comparacin con lo que se ve normalmente en GC, que
se hace con una jeringuilla.
f. Uno no tiene que inyectar siempre la capacidad mxima del loop. Uno puede inyectar
cantidades menores a la capacidad de un loop cosa que har variada la cuanta de
muestra que estoy introduciendo ya que no es prctico estar cambiando el loop porque
eso es plomera.
g. Al no inyectar la capacidad mxima del loop se pierde reproducibilidad, porque todo
instrumento que depende de la interpretacin de un usuario tiene un error inherente
absoluto que no puedo evitar. No puedo tener mayor reproducibilidad de la que el

instrumento me permite. En el loop no tenemos esto, pero si vamos a inyectar
parcialmente en el loop con una jeringuilla de una capacidad de volumen menor
caemos en el mismo problema.

7. Columna
" Corazn de todo el ejercicio, ah es que se da la separacin de los compuestos, o sea
la razn de ser de HPLC.
" Para nuestros propsitos las columnas de HPLC son empacadas. Su largo es bien
limitado, 0.3metros, esto nos da una desventaja bien grande.
" En GC, como no hay tanta resistencia a fluir se pueden hacer columnas bien largas,
capilares. Al hacerlo ms largo por la relacin N=L/H, logro N enormes, gano mucha
eficiencia, eso es bueno porque aporta a la razn del ejercicio, separar. Altos platos
tericos me dan picos finitos, en muestras ms complicadas todava puedo logras
separacin en la lnea base. Al reducir el largo de la columna voy a reducir eficiencia,
me va a limitar la complejidad de muestra que puedo analizar en HPLC. Ah es donde
GC le da mil patas a HPLC.
" Para poder hacerla ms eficiente, ya que no puedo jugar con la variable largo, juego
con el dimetro del empaque.
" Al ser el dimetro del particulado ms finito genero ms rea superficial por unidad de
largo, se reduce la regin necesaria para establecer un equilibrio por ende caben ms
de ellos, pero a cambio de ms resistencia a fluir.
" Al hacerlo el empaque ms pequeo hay menos huecos por
donde percolar la fase mvil.
" En el caso I, hay muchos huecos por donde fluir, los
caminos son ms anchos, fluye mejor.
" En el caso II, hay huecos pero mucho ms estrechos en
trminos de volumen, se reduce. Hay una mayor resistencia a fluir. Ms rea
superficial, ms chiquitos los H, mejor N a cambio de mayor resistencia a fluir,
necesidad de presiones altas para alcanzar el U ptimo. As que nos sobreponemos a
la falta de eficiencia que sera sino hiciramos el empaque ms finito.
" Hay unas columnas llamadas "micro-bore que se puede trepar a los 12,000-15,000
platos tericos. Tiene un dimetro interno de 1mm, en comparacin con las normales
de HPLC que son de 4-5mm. NO son capilares. Hay tanta resistencia a fluir
ya que el dimetro es bien chiquito y lo empaqu. El U optimo est en
14L/min. Las bombas reciprocas no funcionan ya que no pueden levantar
suficiente presin para trabajar con estas columnas micro-bore, por lo que
tengo que ir a una bomba de jeringuilla (syringe pump).
I II

" Es un pistn mucho ms fuerte, funciona con un sistema de rosca porque para lograr
reproducibilidades de flujo en los microlitros tiene que ser algo delicado y con un
desplazamiento tipo tornillo para lograr mayor reproducibilidad y mayor presin. Como
los flujos son bien bajos, con llenarlo con 10mL es ms que suficiente para alcanzar el
volumen de retencin (V
R
) del compuesto que ms se tarda en eluir.
" Debido a la limitacin grande en nmero de platos tericos, para poder sobreponerme
a ese problema de separacin porque los pico van a ser ms anchos que las capilares
en GC, me valgo de otra herramienta, entre los dos que facilitan la resolucin.
" Como en el numerador de resolucin, tenemos At
R
que es una medida de Ak, una
medida de la selectividad que esa corrida me est dando. Cuan bien la columna
discrimina o establece interacciones dipolares con cada tipo de analito en el medio. Ah
es donde est una de las maravillas de HPLC.
" La fase mvil tiene una interaccin intima con el analito. Al ser una fase condensada,
est mil veces ms cerca cada una de esas molculas de disolvente del analito,
abrazando las molculas del analito lo cual influye grandemente donde va a estar esa
molcula de analito.
" En GC, por las diferencias en presin de vapor y desprendindola de la fase
estacionaria es que yo controlaba el equilibrio.
" Aqu literalmente agarra la fase mvil y le quita a la fase estacionaria las molculas de
analito.
" Jugando con esa capacidad de solvatar, abrazar los analito de parte de la fase mvil,
impacto ms marcadamente K y ms todava el AK de compuesto en compuesto.
" Esa capacidad de agarrar y llevarse los analitos sea ms favorable para unos analitos
que para otros porque eso me va a llevar a diferencias en K mayores, diferencias en el
tiempo de retencin.
" Eso es bueno porque puedo lograr toda una gama de polaridades, si escojo bien mi
reserva, para lograr solvataciones desde los ms polares hasta los menos polares en
forma gradual lo que me lleva a obtener AK bien marcados y a la separacin.
" An as hay una limitacin, pero logro muchas ms separaciones que si no tuviera la
caracterstica de solvatacin en la fase mvil, eso es una ventaja de HPLC sobre GC.
" Hay dos modalidades:
1. Fase Normal: fase mvil no polar y fase estacionaria polar
2. Fase Inversa: fase mvil polar y fase estacionaria no polar
" Fase mvil: que me separe, que sea miscible y que no lo vea el detector.
" En HPLC, este ltimo es un problema mayor porque mi fase mvil comienza a tener
caractersticas fsico qumicas que el analito posee. Por lo que, no va a tener
detectores tan buenos porque va a ser ms difcil diferenciar entre fase mvil y
analito.


8. Detectores
" Caractersticas deseables en todo detector: Buen lmite de deteccin, rango lineal
amplio para cuantizar, respuesta rpida, selectividad en la deteccin siempre y cuando
cumpla con el propsito de solo ver los compuestos que yo quiero ver.
" El detector no va a ser completamente universal porque va a ver fase mvil.
" Hay dos detectores principales: UV-Visible e ndice de refraccin

A. ndice de refraccin











" La radiacin en el largo de onda visible proviene de la fuente. Hay una barrera con un
rotito por la cual solamente pasa la radiacin que tenga esa orientacin ya que la
radiacin sale en muchas direcciones.
" Como la luz tiene la capacidad de dispersarse, se coloca un lente colimador para que
enfoque la luz en una sola radiacin. La luz va a doblarse pero en una sola lnea. Pasa
a travs del cristal, lo refleja y sale otra vez.
" Pongo un detector que va a contar la cuanta de fotones o la intensidad de esa
radiacin que le llega. Mientras los ngulos de refraccin son constantes, la llegada al
detector va a ser constante.
" Al momento de inyectar la muestra y esta llega al paso ptico ya la
densidad en el medio no es la misma. La densidad cambia, los ndices de
refraccin en esa interfase cambian, por lo que causa que la salida cambie.
" Parte de los fotones se van a quedar enganchaos en la barrera y no van a
llegar al detector. Ese sensor ahora cuenta menos fotones, los cuales se van a traducir
a un cambio en corriente, que a su vez produce un cambio en voltaje.
" Entre ms muestra tiende a salir mayor es el cambio en el medio a cuando era fase
mvil nada ms, mayor va a ser el cambio en el ndice de refraccin, menos fotones
S
D
D Referencia
Muestra
D

llegan al detector, mayor va a ser el cambio en voltaje. Hay una relacin directa entre
cuanta y seal del detector.
" Entre ms muestra sale, ms diferente es la composicin a cuando era la fase mvil
solamente, mayor va a ser el cambio en densidad, mayor va a ser la desviacin en el
ngulo, mayor va a ser el cambio en voltaje.
" Universal porque la densidad de cada sustancia es nica.
" Prejuicio bajo, no hay muchas diferencias en densidad. LDL son psimos, unidades
en los g10, bueno si estoy por encima de los g. Los cambios en densidad no son
tan marcados como en absorcin.
" No destructivo porque no destruye la mezcla, sirve para aplicaciones preparativas.
" Desafortunadamente, estoy hablando de cantidades no analticas, estoy hablando de
los cientos de nanogramos lo que le puedo introducir sin saturarla.
" Rango lineal bastante bueno 10
4
.
" Necesitamos un detector de referencia porque cuando hacemos gradiente estamos
induciendo un cambio en densidad al cambiar la composicin de las fases mviles en
tiempo y eso va a afectar mi respuesta, esa desviacin en la refraccin debido al
cambio en la densidad del medio por inducir un cambio en la composicin. Esto va a
causar que mi lnea base cambie.
" La seal neta que voy a graficar ahora para mi cromatograma va a guardar una
proporcin de las seales de los dos detectores.

R
M
D
D
S !
" Mientras sea solo fase mvil lo que est pasando la seal de muestra y la del detector
van a ser iguales.
" Empiezo a hacer un gradiente y van cambiando las seales por el cambio en
composicin, la proporcin se mantiene constante.
" En el momento que inyecto muestra, se van a observar cambios en D
M
, los cuales se
traducen a cambios en voltaje.

B. UV/Visible


Fuente
D muestra
D referencia
Selector de
largo de onda

" El paso ptico es el lugar donde se encuentran los fotones con el flujo del sistema.
Este detector esta basado en la tcnica de absorcin.
" Absorcin es la cada en el nmero de fotones o intensidad que salen en comparacin
con los que entraron. No todo compuesto tiene la capacidad de absorber en el mismo
rango espectral, por eso es que este detector es Selectivo.
" El rango espectral esta entre 190-800nm, si no absorbe en este rango no lo puedo
ver. Este rango se modifica a 210-800nm ya que debajo de 210nm los electrones
"non-bonding absorben ya que hay una trancision de n-7*.
" Lmpara de deuterio pero a veces se usan otras lamparas con un rango espectral
amplio.
" Pongo unos selectores de largo de onda o de energa ya que no todos los fotones que
estn saliendo de la fuente van a llegar a este paso ptico, solo lo que los filtros y
monocromadores permitan pasar. Se puede escoger de tal forma que un solo largo de
onda salga al otro lado. En el momento que salga una onda, y est saliendo un
compuesto que absorba a ese largo de onda, se va a observar que I
0
> I
f
, por lo que
se dio el fenmeno de absorcin. Entre ms capacidad de absorber tenga el
compuesto, mayor el AI y ms intensa ser la seal por unidad de cantidad, ms
prejuicio a favor de ese compuesto va a haber en comparacin con otro compuesto.
" Prejuicio alto, debilidad. LDL ng10
3

" La capacidad de absorcin depende de la Ley de Beer, 8 vara tremendamente de
compuesto en compuesto lo cual es la base para este prejuicio.

5 de abril de 2006
QUIZ #7
PREGUNTA: Por qu HPLC, en general, es mas practico para aplicaciones preparativas que GC?


RESPUESTA: Un anlisis preparativo es un proceso mediante el cual se asla un componente de
una mezcla a travs de una tcnica de separacin. En la segunda categora de las tcnicas
cromatogrficas, se logran las aplicaciones preparativas obteniendo el componente en un envase
a diferencia de la primera categora en la que se queda atrapado a la fase estacionaria. En GC, se
coloca una trampa fra despus del detector para condensar el componente gaseoso deseado. Se
condensa porque se atrapa ms eficientemente el componente que si se atrapase en forma de
gas. Se hace una conexin luego del detector en el momento en que se conoce que va a salir el
componente habiendo corrido un cromatograma anteriormente. Si no sabes cual es el compuesto
que quieres aislar puedes identificarlo por adicin de un estndar ya que se observar un
aumento en el rea del pico. Mientras que en HPLC no se utiliza trampa fra ya que el
componente se obtiene en forma liquida. En resumen, en HPLC, el compuesto ya sale en solucin
en una fase condensada y no tengo que pasar por el proceso de establecer un sello por la salida
de la columna ni condensar.

ASIGNACION: Por qu la fase mvil no da seal en I
R
a pesar de que es un lquido y tiene
densidad?

! HPLC ("High Performance Liquid Cromatography")
! Las propiedades qumico-fsicas de las molculas dependen de los tomos que la componen y
de su arreglo espacial. Ciertos arreglos le imparten ciertas caractersticas en el caso de ese
detector, en especifico, otra propiedad es la capacidad de absorber de coger energa en la
forma radiativa e incorporarla como energa de la molcula tambin depende de esas
propiedades. No toda molculas tiene la capacidad de absorber las mismas energas, igual
que no toda molcula se quema en una llama o atrapa electrones con la misma eficiencia por
lo que depende de la propiedad que le imparte este arreglo de tomos.
! La capacidad de absorber depende de unos arreglos, hay molculas que lo hacen ms
eficientemente que otras. De aqu, se imparte la selectividad para aquellas que si absorben
pero que va a sufrir de prejuicio ya que esta propiedad vara de compuesto en compuesto
porque no todo arreglo espacial va a tener la misma capacidad de absorber.
! El problema de inyectar mucha muestra es que se satura y pierdo separacin.

8. Detectores
" Hay dos detectores principales: UV-Visible e ndice de refraccin
C. ndice de refraccin

" No destructivo, ideal para aplicaciones preparativas
" No analtico (LDL= 4g)
" Rango lineal bueno

" Universal para HPLC.
" En HPLC, no hay ningn detector universal analtico.
D. UV/Visible

" El detector ms utilizado en HPLC.
" Se basa en el concepto de absorcin. Se mide la cada en intensidad para ver cuantos
fotones se han incorporado.
" No todo compuesto absorbe al mismo largo de onda. Todo compuesto absorbe a algn
largo de onda ya que tienen C-H y este absorbe.
" La energa guarda una relacin inversa con el largo de onda. Debemos saber que
compuestos queremos analizar para poder programar el selector de largo de onda a la
que absorbe los compuestos de inters.
" Prejuicio alto, el cual esta dictado por 8 cuyo valor baria tremendamente de compuesto
en compuesto.
" 8 establece la relacin de cuan bien se da la cada. La absorcin guarda una
proporcionalidad de esta diferencia. Entre mayor es la diferencia mas fotones se
incorporaron, mas absorcin se dio en ese medio.
" 8 es nico de compuesto en compuesto y dicta la magnitud de esta cada por unidad
cantidad de molculas.
" De mirar un cromatograma no se puede llegar a una conclusin de cantidades
relativas de compuesto en compuesto. Solo cuando el cromforo de compuesto en
compuesto se a igual.
" Cuando 8 es ms o menos constante, entonces podemos comparar.
" Cuando se escoge un largo de onda, solo podremos ver aquellos compuestos que
absorban a ese largo de onda.

19 de abril de 2006
! Detector UV-VIS
! Detector basado en el concepto de absorcin de radiacin donde se produce energa en forma
radiactiva de una fuente. Se enfoca y se condiciona hacia una regin en el espacio, en
especfico en una celda por donde esta pasando la fase mvil que pasa por la columna
arrastrando los analitos y tambin por una celda de referencia, es decir que pasa por dos
celdas la fuente enfocada.
! En la celda despus de la columna, pasan analitos los cuales tienen la oportunidad de
interaccionar con esta radiacin y ocurriendo as el fenmeno llamado absorcin.
! Fenmeno de Absorcin " fenmeno en el cual los analitos tienen la capacidad de incorporar
parte de esa energa radiativa, es decir, cuando los fotones que estn pasando por la celda

coinciden en tiempo con analitos que estn pasando, hay analitos que pueden incorporar, es
decir, coger de esta energa y aumentar su energa neta potencial y a cambio tiene que ver
una cada en el rayo de fotones que est pasando por la celda.
! Este se puede medir mirando la cuanta de fotones antes de llegar a la celda por donde estn
pasando los analitos y la cuanta despus de interaccionar con la muestra en esa celda. Esa
diferencia entre I
o
(indicente) e I
t
(transmitido) va a dictar la magnitud de la absorcin. Entre
mayor la diferencia, ms fotones fueron removidos del rayo, ms energa fue incorporada por
la materia y mayor, para propsitos del analista, fue la absorcin.
! En la celda de referencia, no est pasando muestra por ende no se puede dar, si se escogi
bien la fase mvil, absorcin. Esto por el primer mandamiento de cromatografa, el cual
seala que el detector no debe ver la fase mvil.
! La fase mvil que se utiliza en HPLC es ms compleja, multi-atmica. Por lo que, tiene la
capacidad (si no se tiene cuidado) de absorber tambin esos fotones; y es por esto que hay
que escoger bien la misma para que esta no absorba tambin.
! Si ocurre absorcin por parte de la fase mvil seria tanta la absorcin de este que en
trminos relativos la cuanta de fase mvil relativo a la cuanta de analitos es tremendamente
ms, que opacara la contribucin de la absorcin del analito haciendo que su contribucin
sea nada dado que la contribucin de la fase mvil se saldra de escala todo el tiempo. No se
podra observar una inflexin en una lnea base que es lo que nosotros definimos una seal
cromatogrfica. Fsicamente no es posible generar ese fenmeno, es decir que quedara
opacado.
! En HPLC, se van complicando las condiciones para la eleccin de fase mvil, no solo se busca
que el detector no la vea, sino que sea miscibles si se esta realizando un gradiente, que sea
compatible con la fase estacionaria y que separe la muestra bajo anlisis.
! Retornando al detector UV-VIS, a base de la razn de la seal en el canal (si se le puede
llamar as) electrnico de la muestra y el canal de la referencia, esa razn entre ms cambia
de (1), mayor va a ser el pico cromatogrfico: 1 9
ref erenci a
muest ra
Seal
Seal

! Aqu se observa LVoltaje, la diferencia entre la razn de voltaje, esto es lo que se esta
graficando.
! Este es un detector selectivo, dado que no todo compuesto tiene la capacidad de absorber a
la energa seleccionada, pero todo compuesto tiene la capacidad de absorber en algn rango
energtico espectral radiativo. Sin embargo, se escogen largos de ondas (A) con energa
radiactiva donde los compuestos de inters absorben.
! Rango linear - no es tan bueno comparado con un FID de GC, es ms limitado, 10
3
~ 10
4
,
este es un mal de muchos de los detectores selectivos, aunque en unos ms que en otros. En
general, los detectores selectivos tienen perores rangos lineales.

! Prejuicio- enorme dado que la capacidad de absorber es bien variable de compuesto en
compuesto dentro de cierto rango espectral dictado por un trmino llamado epsiln (!) o
coeficiente de absortividad que dicta cuan bien un compuesto absorbe y este epsiln (!)
puede variar tremendamente hasta un milln de veces desde el que ms eficientemente
absorbe hasta el que casi no absorbe, lo que se puede traducir a un prejuicio de hasta un
milln de veces. Definitivamente, mirando un cromatograma de una muestra desconocida no
podemos decir nada de las cantidades relativas entre los compuestos, solamente podemos
decir que estn presentes pero cuanto relativo al otro jams. A menos que sepamos el grado
de prejuicio (RF) o que estemos comparando dentro de una familia de compuestos,
entindase por familia un grupo de compuestos que tienen el mismo cromforo.
! Cromforo " la parte de la molcula que esta absorbiendo la radiacin, ya que se observa
que las molculas tienen muchos "bolsillos energticos y donde coloca el fotn va a
depender del tamao y algunos compuestos tienen "bolsillos muy parecidos o grupos
funcionales (cromforos) y si tienen el mismo cromforo, los coeficientes de absortividad
tienden a ser parecidos y entonces s mirando un cromatograma se puede hablar de
cantidades relativas con bastante confianza. Aun as van a ver variaciones, por que como el
grupo que va a estar enlazado a ese cromforo va a variar, por que si fuera el mismo grupo
enlazado al mismo cromforo es el mismo compuesto, tiene una leve influencia sobre la
capacidad de ese cromforo poder absorber.
! Entre ms parecidos son compuestos mas fcil puede el analista comparar, lo mismo que se
observ con los otros detectores selectivos, entre ms diferentes qumicamente y todava den
seal (los compuestos) mayor va a ser el prejuicio.
! Lmite de deteccin - esta en los nanogramos, es un detector analtico, sin embargo este
lmite va a variar tremendamente debido al prejuicio que hay, para algunos podra llegar
hasta los picogramos para aquellos que absorban bien eficientemente y para otros casi ya ni
sea analtico el detector para ellos porque necesite casi microgramos para poder absorber lo
suficiente.
! Detector No Destructivo - la absorcin es un principio no destructivo.

! Detector Fluorescente
! Hay compuestos que tienen la capacidad de pasar por este fenmeno de fluorescencia que en
parte depende tambin de la absorcin. Hay compuestos en una celda digamos en este caso
por donde esta fluyendo la muestra, que despus de absorber la energa en exceso que
incorporan por encima de la que tenan inicialmente no se quedan con esta energa.
! Las molculas nunca se quedan con esa energa dado que las mismas quieren estar en una
energa mnima y al absorber energa ya no estn en esa energa mnima, estn en un estado
excitado en una energa mayor que la que normalmente deben existir.

! Las molculas se deshacen de la energa absorbida y tienen diferentes mecanismos para
deshacerse de ese exceso de energa, uno de los mecanismos es en la misma forma en la que
la recibi: "le di una peseta y me devuelve una peseta absorbi un fotn de cierta energa y
libera un fotn de cierta energa. Se observa que en un corto lapso de tiempo luego de haber
absorbido dicho fotn la molcula suelta el mismo otra vez, "como que le quema las manos
y rpidamente se observa emisin, de esa emisin que se observa en el rango visible vemos
luz saliendo de esa muestra y esto es fluorescencia.
! Es posible utilizar esta capacidad de emitir de ciertos compuestos para crear un detector
selectivo para esos compuestos fluorescentes. Esto se lleva acabo poniendo un censor
(detector) a un ngulo de 90
o
que cuenta los fotones fluorescentes, diferente a la posicin del
censor del detector de absorcin donde estaba en lnea con la direccin de propagacin de los
fotones, por eso es que se define un rayo en esa direccin y se enfoca en esa direccin por
que ese es el que cuenta la diferencia que le tiene que llegar a ese censor fotnico.
! En fluorescencia el detector como es colocado en UV-VIS no le sirve al analista para detectar
fluorescencia a pesar de que la fluorescencia se libera en forma radial en todas las
direcciones y parte de la fluorescencia le va a llegar al detector, sin embargo quedara
opacada la fluorescencia con la llegada de todos los fotones no absorbidos porque la mayora
de los fotones que pasan por la celda en absorcin no son absorbidos. Bajo condiciones Beer-
Lambert la muestra es diluida la cantidad de analito que sale de la columna es poca relativa a
la cuanta de fase mvil. As que estas cadas no son grandes de que no es mucha la muestra
incorporando fotones, de ah que (I
t
) es bastante intensa, mucho ms intensa que los
poquitos fotones que van a optar por esa direccin. De ah que es necesario medir fotones en
una direccin que no estn interfiriendo y la direccin en donde menos interferencia se da es
a 90
o
grados, as que en el detector de fluorescencia el censor traduce energa fotnica a una
energa electrnica la cual es la que se grfica, este censor est a 90
o
a la direccin de
propagacin de la radiacin que indujo la excitacin de la muestra para que pudiera emitir
fluorescencia porque si estuviera en lnea se vera opacada la media de fluorescencia.
! (Aclaracin: el detector es todo el sistema de deteccin, el cual depende de un puente, de
una barrera, de algn colimador, algn condicionador de largo de onda o filtro en una celda y
algo que cuente los fotones; todo esto constituye un sistema de deteccin, sin embargo
dentro de un sistema de deteccin se tiene un subdectector o un censor que traduce energa
fotnica a energa elctrica.)
! Este es un detector muy selectivo por varias
razones:
a) no todo compuesto va a absorber a esa
energa especifica, porque se escoge un (A)
dentro de todos los (A) que salen de una

fuente poli-cromtica o poli-energtica se escoge uno en el cual los compuestos de
inters absorban dependiendo del cromforo que quiero quirrgicamente medir en la
mezcla de compuesto.
b) hay un nmero reducido dentro de los que tienen la capacidad de absorber esa
energa, los que liberen esa energa en forma fotones tambin, la basta mayora de los
compuestos no son capaces de exhibir fluorescencia o de deshacer del exceso de
energa en forma luminiscente.
! Estas dos razones hacen que este detector tenga dos capas de selectividad.
! Lmite de Deteccin - se encuentra en los pg, lo nico que se le acerca a eso son los
detectores electroqumicos.
! Rango linear - psimo, peor que el de captura de electrones, aqu si se observa 10
2
.
! Prejuicio - de los perores porque adems de tener prejuicio en la absorcin (10
3
~ 10
6
)
tambin hay diferentes eficiencias de emisin, es decir que de los pocos que compuestos
absorben, emiten dbilmente y otros fuertemente o algunos "todas las pesetas que reciben
las devuelven, otros miran para otro lado y se la pasan al vecino y solo devuelven parte de
las pesetas. Al tener estos dos niveles de prejuicio se le puede aadir otro 10
3
. De manera
que ni se piensa en la posibilidad de comparar en una forma relativa en detectores de
fluorescencia, esto no quiere decir que no se puede cuantiar porque si se conoce lo que se
esta buscando se hace una curva de calibracin con este detector para dicho compuesto para
cuantiar. De forma relativa, aunque tericamente se puede calcular el nivel de prejuicio y
corregir por ello y comparar los picos es tan ridcula la magnitud de los prejuicios y tan dbil
la seal que el analista ni debe molestarse en tratar de analizar de manera relativa con este
tipo de detector aun en familia.
! Detector No Destructivo

! Espectroscopia
! Definicin General de espectroscopia " es aquella rea del
anlisis instrumental en que se estudia o se analiza la
materia con energa radiactiva es decir a travs de la
interaccin de energa radiante con la materia.
! Se tiene la muestra y la misma se incide con fotones, y se
mide con un censor el cual interpreta lo que se dio, as como se observa en la Figura 2. El
ms simple y el ms til es la absorcin, es uno de los fenmenos que se dan, sin embargo
estaremos estudiando como cinco conceptos o fenmenos que se pueden dar. Probablemente
80% de ellos dependen directa o indirectamente de la absorcin, este es el dominante.
! La espectroscopia por definicin es bien simple: se genera radiacin, se dirige hacia donde
esta la muestra y se observa qu pasa despus que se encuentran en el espacio, eso s, tiene
que haber un encuentro fsico en el espacio, los fotones tienen que pasar por donde estn

esas molculas, no puede pasarle lejano y esperarse que se de un fenmeno, normalmente
no se van a enterar si no coinciden en el espacio, es por esto es que hay que ubicar la
muestra o ponerla en una celda y enfocar la radiacin y hacerla llegar a ese punto en el
espacio; y luego se mide la magnitud del fenmeno que se vaya a dar.
! Para entender bien lo que es la espectroscopia y los fenmenos que se pueden dar tenemos
que conocer bien los dos que van a ir a "esa pista de baile, tengo que conocer bien qu es
energa radiante y qu es la materia.
! Materia " algo que tenga masa y ocupe un volumen, y se desarrollan mltiples modelos
para ello, desde subpartculas atmicas: electrones, protones, neutrones, conjuntos de ellos,
creando tomos, conjuntos de tomos creando molculas y conjuntos de molculas pasando
cada vez ms macro con sustancias, mezclas y soluciones.
! Radiacin " este es un trmino del cual hemos hablado de una forma ambigua, a veces se
le llama fotn, onda o pequeos paquetitos de energa en el espacio. A veces se refiere a
energa radiante como fotones o como onda, hay dos modelos, el hombre no puede explicar
la radiacin con un solo modelo. Tenemos que a veces utilizar un modelo de fotn o
paquetitos de energa y a veces un modelo de onda, esto nos dice que el hombre no sabe que
es energa, y que agarra lo que pueda para explicar lo que este viendo en un momento dado,
no tenemos un modelo nico para explicar la energa, de manera que estaremos brincando
entre dos modelos:
a) Modelo de Partcula o fotn " donde otra vez energa radiante es una cuanta
especfica de cierta cantidad de energa, una energa nica asignada a un paquetito,
esto es lo que es un fotn.
b) Modelo de Onda " es una grfica, pero
una grfica solo hace sentido si le asignan
coordenadas y una propiedad que est
cambiando a lo largo de los ejes en esa
forma para entender qu es lo que
representa ese patrn curvo que
conocemos como onda. Que solo cobra
sentido cuando se define la direccionalidad
de dicha grfica en el espacio. A estos ejes, para propsito de la clase, se le asigna un
fenmeno qumico-fsico que podemos medir cuando radiacin pasa por el espacio.
! Esta grafica va a representar una propiedad, la propiedad va a ser polarizacin en el eje de
(y) y en el eje de (x) distancia o tiempo (por que la radiacin se va estar propagando a una
velocidad especifica, as que es posible intercambiar entre distancia y tiempo a travs del
termino de la velocidad de la radiacin)

! Polarizacin

! Se define a base de un comportamiento de materia, materia que tenga una carga, es decir,
materia que tenga exceso sea de protones o sea de electrones, un tomo una molcula que
tenga ms electrones que protones adquiere una carga negativa porque al electrn se le ha
asignado una carga negativa, aquella materia que tenga ms protones que electrones va a
tener carga positiva porque al protn se le asigna una carga positiva.
! A igual nmero de ellos (protones y electrones) entonces se cancelan esas cargas en ese
volumen, no es que desaparecen pero ese volumen donde he ubicado esto es neutral porque
se cancelan las lneas de fuerza en el espacio de los dos, queda neutral pero tan pronto quito
ms de uno que de otro o aado ms de uno que de otro s ese volumen en el espacio en el
que se est moviendo esa partcula gana esa propiedad de exceso de carga positiva o
negativa y eso le imparte a ese espacio la capacidad de interaccionar con otro conjunto de
materia que tambin tenga exceso o deficiencia de carga.
! En el momento que una regin en el espacio esta cargada puede influenciar en el
comportamiento de otra partcula cargada. En el caso de dos cargas iguales negativas se van
a repelar quieren distanciarse, la posicin de menor energa relativa de esas dos particulares
a va a ser aquella donde ya no se sientan unas a las otras, donde ya no se influyan, cualquier
otra distancia donde se sientan aumenta la energa potencial neta de todo el sistema de ser
ambas positivas ocurre lo mismo se repelen; ahora al instante que son opuestas una negativa
y otra positiva se atraen, una condicin de menor energa es aquella donde lleve a mayor
cancelacin de carga neta en el espacio, esto lo vimos con los dipolos.
! Qu es Polarizacin? " La capacidad de influir sobre la energa de otra partcula cargada,
para nosotros la polarizacin es esa capacidad de influir e interaccionar entre dos cargas.
! Retornando al Modelo de onda, se est tratando de explicar el Modelo de onda, para explicar
el mismo debemos simplificar y definir lo que representa la grfica en el espacio, esa grfica
para propsito nuestro va a estar representando una polarizacin, que acabamos de explicar
como la capacidad de influir sobre otra carga, la capacidad de una carga influir sobre otra
carga, en el caso de radiacin vamos a medir esa polarizacin o capacidad de inducir/alterar
una carga en el espacio segn pasa radiacin a travs de ese espacio. Es decir, radiacin en
esa forma, energa radiante (uno de los muchos tipos de energa) esta pasando por un punto
en el espacio polariza ese punto, ese volumen en ese instante por donde esta pasando la
radiacin tiene la capacidad de atraer o repelar carga, se ha polarizado y se le impartido la
capacidad de hacer lo que se ha definido con las partculas cargadas anteriormente.
! Cuando radiacin pasa por un punto en el espacio,
ese volumen ese punto por donde esta pasando la
radiacin ese punte adquiere la capacidad de atraer
o repelar cargas. Esto sin embargo se complica, la
capacidad de atraer o repeler tipo de carga va a

variar en tiempo, esto se observa en la grfica, es decir en un momento dado esa radiacin
polariza en forma positiva es decir se comporta en esa regin en el espacio como si fuera
positivo, y va a atraer carga negativa a ese volumen y va a repeler las cargas positivas de
ese volumen.
! La magnitud de esa capacidad, es decir cuan fuerte va a atraer opuestos en el caso de
positivo, cuan fuertemente ese volumen puede atraer un electrn va a variar dependiendo del
tiempo, se observa que partiendo de un punto va aumentando esa capacidad atrae ms
fuertemente segn se va desplazando en tiempo en la direccin o en el instante que esta
pasando esa radiacin va a empezar a aumentar la capacidad de atraer carga negativa llega
hasta una cantidad mxima de polarizacin positiva y esto se va perdiendo la polarizacin
positiva hasta no poder atraer ningn tipo de carga a un instante mnimo de tiempo.
! Luego empieza a polarizarse negativamente y ese mismo punto en el espacio donde esta
pasando la radiacin cambia la polarizacin, va cambiando ahora la capacidad de atraer carga
positiva que antes repela y ahora empieza a atraer carga positiva y repeler carga negativa y
vemos que esa capacidad o propiedad qumico-fsica varia en forma ondulatoria.
! Esto es lo que representa para nosotros esa curva, es un poquito ms complicado que eso
porque esa capacidad lo puede hacer en dos dimensiones: una que se llama electromagntica
que es la que se utiliza en radiacin en el plano de la pizarra la magntica en un plano
opuesto perpendicular con el plano electromagntico, pensemos en el plano, se tiene un
modelo de onda con el que se va a trabajar.
! Sea fotn u onda ya podemos conocer el "jugador que llamamos radiacin.

! Interacciones
! Cuando se encuentra radiacin (sea en el modelo de fotn o sea en el modelo de onda) en el
espacio se dan una serie de fenmenos:
a) Absorcin " este es ms fcil de entender
utilizando el modelo de fotn, donde hay
muchas "pesetas pasando por el lado de ese
bolsillo y la molcula tiene la capacidad de
"echarse algunas en el bolsillo, esta es una propiedad inherente de ese compuesto,
"si fueran de cinco a lo mejor no entraban en ese bolsillo o si eran monedas dlar
tampoco entraban, ese bolsillo en especifico es para pesetas. Cuantas de esas
"pesetas se quedan en el bolsillo es lo que medimos como la magnitud de absorcin
expresada en trminos de la razn de la cada de la intensidad de los dos
b) Reflexin " otro fenmeno que se puede dar
cuando la radiacin coincide en el espacio con
la materia y hay tcnicas analticas que

dependen de estos fenmenos; es un fenmeno que se da a nivel de interfase, es
decir, en esa regin justo donde la materia esta en contacto con el aire es donde se da
el fenmeno de reflexin, no pasa la reflexin a travs del volumen de la materia no
atraviesa la materia sino a nivel de donde empieza la materia es donde se da el
fenmeno.
" El fenmeno es que se desva su direccin de propagacin, que por donde vena la
radiacin y llega a la muestra la desva como unidad todos los fotones que venan
en ese rayo se viran y se orientan en otra direccin (esto se conoce bien, cada vez
que uno se ve en el espejo lo que se observa es la reflexin, los fotones estn
reflejados).
" El ngulo de incidencia va a dictar en ngulo en que sale de esa superficie, sin
embargo todos salen de forma unida. (Por qu es posible ver a otros? Porque hay
fotones que estn chocando con los otros y vienen en la direccin de los detectores
(ojos) y se pueden percibir esos fotones y a travs de aos de entrenamiento el
cerebro interpreta el patrn como una forma y una persona.)
c) Refraccin " cuando radiacin pasa a travs
de la materia, se observa que cuando la
radiacin pasa a travs de la materia, aqu la
materia tiene que ser transparente, a esa
radiacin no debe absorber la radiacin, la
radiacin tiene que poder pasar a travs de
la materia, se ve un cambio en al direccin de propagacin anlogo a reflexin donde
se observa un cambio en la direccin de propagacin, la diferencia es que uno se da a
nivel de la interfase de la superficie de la materia y en el otro tiene que pasar a travs
de la materia para que se de esa desviacin, la amplitud depende del tipo de materia
y la cuanta de la materia.
" Esa magnitud de refraccin es nica para cada compuesto a cierto grado de
concentracin, si se reproduce la concentracin se puede caracterizar cual es el
compuesto, el problema es que son miles y millones de compuestos cada uno
con un ngulo nico as que algunos van a estar tan cerca a cuatro, cinco o seis
lugares decimales que ya su ndice de refraccin que dentro del margen de
error no es practico.
" Esta capacidad de desviar va a depender del modelo de onda, porque va a
estar esa radiacin interaccionando con todos los campos generados por
electrones por combinaciones de dipolos que van a interaccionar con esa
propiedad de polarizacin y van a doblar y sacar de orientacin la radiacin que
pasa a travs de la muestra.

d) Difraccin " es parecido a la reflexin porque cuando
la radiacin choca con la superficie no va a pasar a
travs de ella se va a desviar a nivel de la interfase de
la interfase de la superficie, pero diferente a la
reflexin donde todo se desviaban en otra direccin en
forma unitaria en este caso se dispersan o se riegan.
" (Otra palabra utilizada cuando se habla de difraccin es dispersin) Donde la
suma de todos esos mini rayos en el espacio tiene que ser igual a al suma de
todos los fotones que incidieron originalmente.
" Hay tcnicas analticas basadas en esto, es posible sacar estructuras viendo
donde est un tomo relativo a otro en un cristal y la distancia entre ellos de
ese patrn que sale depende de como estn orientados los tomos en la
materia y hay instrumentacin analtica de la ms segura en la caracterizacin
de una materia porque ubica la direccin exacta en el espacio de "quien est y
sus vecinos y con quien estn enlazados.
" Las estructuras cristalogrficas son de las caracterizaciones ms nicas que se
pueden hacer, claro, sta tiene que cristalizar, ste es el primer problema,
tiene que cristalizar porque sino lo hace no se puede utilizar difraccin, sta se
da cuando se tiene slido y no es cualquier cristal, tiene que estar de cierto
tamao, de cierta pureza e implica cierta cantidad mnima de materia y esto es
donde vienen los "talones de Aquiles de difraccin, hay tantas condiciones
especiales que es tan til digamos como espectro de infrarrojo, que no tiene
tantas condiciones atndolo aunque no son tan nicos son suficientemente
nicos como para tener mucha confianza. Sin embargo, cuando se cumplen las
restricciones de difraccin no hay nada ms seguro que una estructura
cristalogrfica para
caracterizar una materia.
e) Polarizacin " la radiacin que
definimos en el espacio y
enfocamos vamos a tener que
hacer algo especial antes de que llegue a la muestra, es decir adems de escoger
cierto de largo de onda hay que hacer un paso ms.
" Cuando se genera radiacin de una fuente (que genera fotones) esa radiacin
que sale solo se explica por el Modelo de onda dado que el de partcula no sirve
para explicar esto. Esa radiacin que sale no toda sale en plano de la pizarra;
esa polarizacin cuando sale por la fuente sale en todas la posible
orientaciones, va a haber una onda polarizando en cada eje, todos los 360
o
de

forma esfrica estn saliendo esa radiacin de esa fuente, para la polarizacin
tenemos que escoger solo un componente.
" En este caso, digamos que el componente esta en plano de la pizarra, hay
materiales que sus arreglos atmicos solo dejan pasar a travs de esa materia,
es decir, solo es transparente a una sola orientacin de polarizacin. Estn
todas las direcciones al azar y cuando salen, solo sale un componente dado,
solo el rayo que est orientado en el plano de las barras es el que pasa a
travs y el que viene de lado completamente no cabe, o hasta en un ngulo
especifico tampoco.
" Solo el rayo que viene en la orientacin vertical en especifico es el que puede
pasar otra vez, esta es la forma en la que lo aprenderemos a nivel molecular,
todos los dems no caben, no pasan a travs de ese material y por el otro lado
solo pasan en este caso el que esta orientado en el plano de la pizarra, esto
hay que hacrselo a la radiacin antes de que pase por la materia.
" Se le va poniendo un condicionamiento a la radiacin antes de llegar a la
materia. Se observa que cuando la radiacin polarizada en un plano pasa por la
materia, hay algunas materias que cambian la orientacin de ese plano,
cuando se tienen centros asimtricos en la materia.
" Ejemplo un carbono como el que se
presenta en el diagrama, tiene centros
de este tipo tiene la capacidad la
materia de comportarse de manera de
cambiar la orientacin de ese plano, que
cuando sale de la muestra ya no esta
orientado en el plano de la pizarra, sta desplaza en una direccin u otra, ste
es el fenmeno de la polarizacin.
" Hay instrumentacin basada en sta capacidad para caracterizar la materia,
que cada compuesto polariza o rota la radiacin de una forma nica. Son
millones de compuestos y muchas veces no es posible diferenciar entre las
pequeas diferencias; sin embargo si caractersticas de los fenmenos son
combinadas y los resultados van coincidiendo se le va poniendo un nombre a la
muestra, se le va aadiendo ms rasgos nicos, es decir que la combinacin de
muchas propiedades se hace nico. Entre ms propiedades se va midiendo de
algo, ms nico se hace, y ms confiable es la identificacin.

! Absorcin
! Es el ms til.
! Luego de observa una cada en (I
t
) se puede decir que se absorbi radiacin.

! El modelo que representa absorcin cuando medimos absorcin vemos que la magnitud de
esa cada en intensidad va a depender de la energa que llega esa radiacin.
! Es posible caracterizar la energa de radiacin utilizando el modelo de onda, se puede medir
de diferentes formas: con el largo de onda, entre menor sea el largo de onda mas energtica
es la radiacin, es una relacin inversa entre energa y largo de onda. Dentro del rango del
espectro electromagntico le damos diferentes nombres a diferentes partes de ese rango
energtico a bases de sus energas, empezando por los ms energticos que son los csmicos
pero estos no tiene una fuente, necesitaramos sper novas o blackholes, diseos
astronmicos para generar esas magnitudes de energa, el hombre no conoce nuestro sol
menos va a poder crear soles para que colisiones para que provoquen rayos csmicos, ese
tipo de eventos que generan rayos csmicos as que los ignoramos.
! Lo ms que podemos controlar son los rayos gamas, los rayos gamas vienen por romper
arreglos nucleares, si se toman dos ncleos si se ponen a colisionar puedo liberar la energa
que une esas subpartculas nucleares, de ah que la fuente de radiacin de esa magnitud es
una fuente que depende de poner a chocar ncleos.
! Se tiene un circulo de electroimn, con un dimetro de un kilmetro todo con sper imanes,
estos permiten coger partculas cargadas y acelerados para cuando ya estn a la velocidad
deseada se pone un espejo y esa partcula cargada que vena se hace chocar con el ncleo de
otro tomo y al chocar rompe fuerzas nucleares y libera radiacin, y de esos rayos se pueden
utilizar para que interaccione con materia y se puede caracterizar ciertas cosas de la materia
con radiacin gama, pero para propsitos prcticos, UV usa mucho ciclotrones para parte la
investigacin.

25 de abril de 2006
QUIZ #8
PREGUNTA: En GC se logra la separacin por gradiente en temperatura y en HPLC por gradiente
de composicin, Por qu con HPLC puedo invertir totalmente el orden de elusin de los analitos
y con GC no?

RESPUESTA:


! Espectroscopia
Rango espectral Cromforo
Rayos Gama Inestable
Rayos X Electrones
UV Electrones

Visible 350 - 800nm Electrones
Infrarrojo Vibracin
Microondas Rotacin
Ondas de radio Rotacin
*Hay que saber el orden relativo, cual es ms energtico y memorizar la regin visible*

! Largos de onda ms cortos hacia arriba y ms largos hacia debajo de la tabla.
! Cromforo es a donde va el exceso de energa potencial cuando esa muestra coge ese fotn,
porque en absorcin la energa en el rayo se transfiere a la muestra.
! En los Rayos X, vemos esos electrones ms cercanos al ncleo, en esa capa ms interna.
! En visible estamos viendo sistemas deslocalizados, con mltiples dobles enlaces conjugados
unos con el otro. Electrones bien libres que se estn moviendo a travs de un sistema de
tomos. Entre ms libre est el electrn, menos energa necesito para excitarlos. Entre ms
controlado y ubicado est el electrn, ms energa necesito para ubicarlos.
! Vibracin es el acercamiento y alejamiento de dos ncleos atados a un enlace covalente.
Entre ms fuerte es un enlace, en infrarrojo, ms energtica tiene que ser la radiacin para
poder distorsionar la magnitud de vibracin de ese enlace. Porque est vibrando dentro de
una amplitud ptima.
! En microondas, ya no hay suficiente energa para inducir vibracin, ahora el cromforo es
rotacin.
! Rotacin solo hace sentido cuado tenemos tomos con ms de un sustituyente, donde cambie
en forma relativa las posiciones de los grupos en los dos, no todos los rotmetros, son
equivalentes en energa. Vamos a ver que unas posiciones ms altas energticamente cuando
yo excito rotacionalmente, lo estoy llevando a rotmetros ms energticos y tambin a
energa traslacional.
! En ondas de radio ya estamos de los metros o kilmetros. Para ver las energas hay que
llevar la materia a una condicin especial, cogemos la materia y la ponemos en un campo
magntico bien fuerte, donde esas lneas de fuerza tienden a alinear todos los tomos que
tengan un giro neto nuclear y con ondas de radio cambio la direccin de ese giro magntico
en el espacio.

26 de abril de 2006
! Evidencia en la cual se ha basado el hombre para desarrollar un modelo
! Diferentes compartimientos de la materia estn asociados a absorciones a diferente rangos
espectrales
! El espectro de absorcin: en esa absorcin por la materia si yo varo el largo de onda
" Energa asociada a cada lambda es la que me caracteriza la energa de cada fotn

" Intensidad es en nmero de paquetitos que tiene esa energa especfica
" Lambda es el tipo de paquetito, la variedad, la energa asociada a cada fotn
" Mucho de lo mismo, aunque sea pequeo, puede sumarse a mucha energa o una de algo
bien energtico tambin est asociado a mucha energa
! Medida del nmero de fotones todos del mismo tipo
! Se ha observado que segn yo varo lambda a cierta
intensidad de cada lambda, y si lo graficara, voy viendo como
va cambiando esta razn segn voy variando el tipo de
energa dentro de un rango espectral.
! Si tomamos por ejemplo infrarrojo en forma de absorcin se
observa que hiendo de una energa a otra vara la capacidad
de esa materia por incorporar fotones, no incorpora de forma
igual a travs de ese rango espectral.
! Si absorbe o no y la eficiencia con la que absorbe, porque tiene la capacidad incorporar
ms fotones a cierto largo de onda y a otros en donde tambin absorba.
! Espectro de emisin
! Se observa que algunos compuestos despus de absorber libera esa energa potencial que
asimil originalmente en forma fotnica, coge paquetitos en forma radiante y luego lo
libera en forma radiante, pero no necesariamente de la misma forma, eso me permite
generar espectros de emisin.
! Cuanta de fotones liberado por esa muestra luego del fenmeno de absorcin, estoy
midiendo la consecuencia del fenmeno despus de absorber.
! No hay un espectro de emisin si no hay uno de absorcin asociado al compuesto, porque
no hay forma de que vaya a liberar energa si no lo he cargado con suficiente energa
para empezar.
! Tiene que haber un encuentro fsico en el espacio para que se de este fenmeno.
! Van a haber algunos que no va a absorber, esos se van a emitir

! Modelo
! Mecnica cuntica
! La premisa fundamental de la mecnica cuntica dice que la materia no puede existir a
cualquier energa, la materia solo puede existir a ciertas energas dadas
! La energa de la materia est cuantizada
! En forma grfica sera:
! No puede estar entre medio
:
1
E
S
0
S
1
S
2
S
3

:
i

! Anlogo a la energa potencial, cundo estoy subiendo una escalera estoy aumentando la
energa potencial relativo a un campo gravitacional, dependiendo del escaln donde est la
energa va a variar.
! No me puedo suspender entre escalones, dictadas por restricciones fsicas.
! Escalones energticos a donde puede subir un compuesto, pero no puede detenerse entre
medio.
! Dentro de la mecnica cuntica hay una sub-premisa, una es que dentro de los niveles
energticos nicos en que puede existir un compuesto la mayora de los compuestos la
mayora del tiempo quieren estar en lo ms bajo.
! Hay dos leyes que rigen todo en el universo: todo tiende a una energa mnima y a una
entropa mxima.
! Puede estar en cualquiera de los niveles, pero para eso tiene que subir un escaln, se le tiene
que impartir la energa para llegar a ese otro nivel.
! El fotn que le llega tiene que corresponder a ese escaln, en el contexto de absorcin.
! Multiplicidad = es una propiedad asociada a una molcula que se deriva del "spin de los
electrones.
! El electrn tiene uno de dos espines
! Esto se debe a que ese electrn gira, cuando una carga gira en el espacio genera un campo
asociado al movimiento fsico de esa carga.
! La flecha = representacin vectorial de la orientacin principal de ese campo.
! Spin = movimiento de una masa alrededor de un eje.
! Dependiendo de la orientacin como est girando va a dictar la orientacin del campo que se
va a generar.
! Pauli dijo que cuando tengo dos electrones ocupando una misma regin del espacio, dos
electrones en un mismo orbital, tiene que ser opuestos.
! En ausencia de un parejo, no hace sentido una orientacin neta.
! La ecuacin de multiplicidad: dad multiplici S ! #
;
1 2
! La vasta mayora de la materia existe un nmero par de electrones.
! En un sistema con un nmero par de electrones van a haber tantos +1/2 como -1/2, como la
sumatoria me da cero, la multiplicidad bajo estas condiciones que es la vasta mayora de la
materia entonces sera igual a 1.
! Al la mayora ser igual a 1 por eso se le llama singlete.
! Dentro de los singletes hay una variedad de estados, entre los ms bajos est el S
0

! S
0
este es el estado raso, donde quiere estar la materia por la leyes de
termodinmica
! S
1
primer estado singlete excitado
E
S
0
S
1
S
2
S
3

! Aqu estamos hablando de visible para arriba porque el cromforo son los electrones, lo
sabemos porque invocamos multiplicidad para nuestro diagrama. Multiplicidad hace sentido
en el contexto de bolsillos electrnicos, estamos representando aqu transiciones electrnicas.
! Emisin = esa muestra libera esa energa en forma
fotnica, algunos pueden ser idnticos en energa
como la recibieron pero otras no.
! La vasta mayora de la materia no exhibe
luminiscencia, es decir cuando absorbe no
necesariamente libera fotones.
! Luego de absorber no se puede quedar con esa
energa, choca con el vecino y le transfiere su
energa, convierte energa potencial en cintica.
! Lleva esa energa potencial a modos rotacionales,
vibracionales o trasnacionales en sus vecinos, le da la
energa a sus vecinos.
! La energa liberada no tiene que ser total, puede ser por
partes.
! Entre ms arriba es la excitacin, ms son las posibilidades
para relajarse energticamente de forma fotnica o
colisional, ms opciones se abren.
! Ahora vamos a ir en contra de Pauli, hay algunas
excepciones.
! A una de las parejas le gusta el vecino y decide explorar, se
sale del orbital
! Normalmente luego de un paso de absorcin que se vuelve rico energticamente entonces es
que decide irse a explorar.
! Cuando se sale del orbital, las restricciones de espines opuestos no se puede aplicar, porque
espines opuestos era solo relevante en el contexto que se defina uno. Porque cuando est
solo no importa en la orientacin en que est, en ausencia de un campo adicional.
! De un sistema par de electrones cambia de orbital y no cambia de spin sigue siendo singlete,
pero como hay restriccin fsica va a cambiar de spin
! Ahora van a haber dos electrones netos adicionales con un spin dado, ambos +1/2 o -1/2
relativo a todos los dems, pero esa suma de esos dos va a dar: 3 1 2 / 1 2 / 1 2 ! # #
;

3 1 ) 2 / 1 ( ) 2 / 1 ( 2 ! # . # .
;

! Ahora es un estado triplete y el resultado de esto va a ser:


E
S
3
S
2
S
1
S
0
Mas
energetico
menos
energetico
Fotonica
Colisional
E
S
3
S
2
S
1
S
0










! Se tiene que dar una excitacin para ir a la otra casa.
! Para que se de el cruce intersistmico tiene que haber conservacin de energa, porque
vemos que la energa de ese triplete es igual a la energa de ese singlete que le est dando
origen.
! Tiene que haber un triplete en el mismo nivel para que se de.
! Por eso vemos que muy pocos hacen esto, porque en la mayora de los casos no coinciden los
tripletes.
! Puedo ver una multitud de fuentes luminosas.
! Fotones originndose de estaos singletes los vamos a llamar fluorescencia.
! Fotones originndose de transiciones tripletes los vamos a llamar fosforescencia.







1 de mayo de 2006
! Diagrama de Jablonski

! La derivacin de la Ley de Beer es un
tratamiento cuantitativo del anlisis de la
materia por el fenmeno de la absorcin de la
radiacin y establece una relacin directa
entre la cantidad de materia que puede
absorber y la cantidad de fotones que son
absorbidos al pasar una fuente de radiacin a
travs de ella.
E
S
0
S
1
S
2
S
3
T
0
T
1
T
2
T
3
Fluorescencia
Fosforescencia
Cruce
intersistemico

! Qu tiene que ver cruce intersistmico con conservacin de energa? La mecnica cuntica
lo prohbe porque Pauli descubri que la materia que tenga un numero par de electrones (es
el caso 99.999% del tiempo) tiene que estar en pares con espines opuestos. Pero si partimos
de una teora cuyo modelo tenemos que tener dos formas de expresar radiacin pues
sabemos que vamos a encontrar excepciones ya que se observa que no todos los electrones
le hacen caso a Pauli. Especialmente cuando algunos electrones al absorber radiacin
cambian de orbital y al estar en espacio fsico diferente le da con cambiar de espn ya que no
se rige por la reglamentacin de Pauli. Por lo que, ahora el computo de multiplicidad no da
singlete ya que la sumatoria no se cancela a cero y ahora es triplete. Se observa que para
que se de ese proceso, el estado triplete o la energa con la que se representa ese estado
equivale en energa al del estado singlete excitado.
! Estamos hablando de transiciones electrnicas en el estado singlete por lo que los cromforos
son electrones. Si un fotn correspondiera a la diferencia entre dos niveles, el electrn podra
optar por absorber (se ver en Beer-Lambert con el coeficiente 8). Si absorbiera se observa
que la basta mayora de los electrones que se excitan se desactivan colisionalmente aunque
algunos lo hacen fotnicamente o con una combinacin de
ambos.
! Un electrn solo puede optar por una ruta. Dentro de la
improbabilidad de llegar a un estado triplete, la basta mayora
de las que llegan se desactivan colisionalmente. Muy pocas
cogen un ruta totalmente fotnica. Dentro de las fotnicas, las
ms probables van a ser fotnicas parcialmente.
! Para que ocurra un cruce intersistmico el electrn tiene que:
(1) cambiar de orbital y (2) alinearse paralelo al inicial.
! Modelo energtico es el modelo en el que nos vamos a basar
para el fenmeno de absorcin. Se observa absorcin solo a unas energas dadas ya que solo
va a absorber cuando el fotn que llega es de una energa que equivalga a la diferencia en
energa entre esos dos niveles.
! Por que la diferencia en tamaos de picos en
un espectro de absorcin? Por que la
probabilidad de una transicin como esta,
teniendo la opcin de ambas o todas, no son
iguales. Algunas transiciones se dan con una
eficiencia mayor que otras. El coeficiente de
absortividad es una medida de ello.
! Porque compuestos que absorben exhiben
luminiscencia, o sea se ve que emanan de esa
Fotonica
Colisional
E
S
3
S
2
S
1
S
0
E
S
0
S
1
S
2
S
3
T
0
T
1
T
2
T
3
Fluorescencia
Fosforescencia
Cruce
intersistemico

celda radiacin o fotones? Esos fotones son de una energa en especifico correspondientes a
algunas de la opciones fotnicas que tiene para desactivarse adicional a las del estado
triplete.
! Hay bolsillos energticos electrnicos, rotacionales, traslacionales y vibracionales.
! No todas las transiciones son de igual probabilidad. En general, la transicin fluorescente que
ms se observa es aquella transicin desde un S
1
a un S
0
. Las transiciones fluorescentes son
aquellas transiciones fotnicas dentro del estado singlete cuando hay conservacin del espn,
cuando empieza en un estado singlete excitado y termina en uno de menor energa.
! Las colisionales son siempre, siempre las ms probables. Por
lo que, al observar una grafica de cuanta vs. :, vemos que la
de I mayor o mas intensa tiende a ser la que corresponde a
un largo de onda proporcional a la transicin energtica mas
probable de las fotnicas.
! El 6E de una transicin S
1
a S
0
va a ser mayor al 6E de S
2
a
S
1
e igual dentro de los estados tripletes. Hay un largo de
onda asociado a un 6E.
! Para que se de el fenmeno de absorcin tiene que haber
un encuentro en el espacio de un fotn y un paquetito de
energa de la molcula que esta siendo irradiada. Puede
que el paquetito opte por coger uno de esos fotones de A
i
, observando una cada en el
nmero de fotones o la intensidad. El concepto de absorcin es directamente proporcional a
esa cada.
! Ese electrn, esa molcula, ese tomo o ese sistema que sufri ese cambio energtico se le
abren mltiples opciones; todas que lleven a un estado de menor energa porque as lo exige
la termodinmica. La colisional es la ms probable.
! Para que se de la fosforescencia tiene que haber un cambio en multiplicidad doble. Observar
este cambio es muy raro. La transicin ms probable dentro de la improbabilidad de
fosforescencia en la desactivacin de T
0
a S
0
.
! Reglas de Seleccin:
1. desactivacin Colisional $ ms probable
a) S
1
a S
0
$ ms intensa
2. Desactivacin Fosforescente $ menos probable.
a) T
0
a S
0
$ ms probable
! Una vez sabemos si hay conservacin de espn;
podemos clasificar en fosforescencia o fluorescencia.
! Podemos decir cual es el paquetito de menor energa ya
que a mayor lambda menor energa.
:
c
u
a
n
t
i
a
M
I
o
I
t
o
t
I
I
A <
#

d
e

f
o
t
o
n
e
s
x 1000
A
b
s
o
r
c
i

n
C
o
l
i
s
i
o
n
a
l
F
l
u
o
r
e
s
c
e
n
c
i
a
F
o
s
f
o
r
e
s
c
e
n
c
i
a
:
1
< E


3 de mayo de 2006
! Si yo tomo es espectro de absorcin de una molcula en hexano y tambin en metanol, se
pueden dar dos situaciones:
1. Absorbe menos o absorbe ms
2. No absorbe al mismo largo de onda
! La cuanta de absorcin puede alterarse, puede bajar o
subir al cambiar el disolvente y tambin la posicin de la
absorcin se puede correr.
! Puedo ver un AA.
! Sabemos que es debido a que hemos cambiado el
disolvente.
! El disolvente no absorbe, tuvo que hacerle algo el cambio de disolvente a la molcula, a la
parte de la molcula que absorbe para poder explicar eso.
! Qu indica esa escala energtica de un electrn? Hay muchos contribuyentes a la energa
de un sistema. Hay energa qumica en los enlaces de la molcula, energa asociada a la
repulsiones y atracciones de lo que tiene alrededor; los cuales contribuyen a la energa neta
de un sistema.
! Cualquier cambio que le hagamos a cualquiera de esos contribuyentes, como distancia entre
dos ncleos, va a alterar la energa de ese sistema.
! El ambiente qumico y fsico de la materia contribuye a
las posiciones de sus niveles energticos.
! Cualquier cambio en el ambiente altera las posiciones
de los niveles y por ende la relatividad entre los
niveles, de ah entonces que las transiciones que pueda
llevar a cabo.
! Colisional es mucho ms probable que fotnico.
! Dependiendo de la energa con que est incidiendo diferentes partes de la molcula estn
siendo afectadas.
! Estn cuantizadas, la energa no puede estar a cualquier nivel.
! Si la energa que llega al sistema corresponde exactamente con el nivel puede optar para
cogerla, no tiene que cogerla. Si la coge, esa energa no desaparece, la incorporan y se
refleja en que aumenta la energa de esas molculas dependiendo del paquetito que absorbi.
! Una vez lo absorbe no se queda ah con ella, y la libera de forma colisional o fotnica para
llegar al estado raso.
! Va a preferir colisional completamente, pero dentro de las fotnicas prefiere parcialmente
colisional y el resto fotnica normalmente de S
1
a S
0

E
Hexano
Metanol
So
#
A
Metanol
Hexano

! Dentro de la posibilidad de que haya un triplete con la misma energa que un singlete, el
electrn llega al triplete y se abre un mundo de formas de relajacin.
! Preferencialmente en forma colisional, pero tambin puede ser fotnica.
! Hay espectros de alta resolucin que puede diferenciar entre estados electrnicos donde se
pueden ver sub-divisiones de estados vibracionales.
! Si la absorcin est cuantizada eso va a dictar que lo que se origine en ese estado tambin
est cuantizado.
! Se guarda la proporcionalidad, entre ms tengo ms fluorescencia de ese tipo voy a ver. Hay
una relacin, dentro de ciertos grados de concentraciones, lineal que me permite establecer
eso, igual que la absorcin.
! Fluorescencia se puede cuantizar mejor que fosforescencia, aunque va a tener incertidumbre.
! Absorcin es la ms confiable aunque an as tiene incertidumbre.
! Corrijo por el factor con una curva de calibracin en fluorescencia, siempre y cuando yo
reproduzca ese factor va a estar dentro de mi curva de calibracin.
! En fluorescencia en vez de ser c, es un factor llamado q.
! Dentro de los vibracionales hay sub niveles rotacionales.
! Para poder ver esas pequeas trancisiones tengo que quitarle energa a ese medio, porque la
muestra en una celda a temperatura ambiente que va a estar en un nivel raso y
probablemente vibracional raso tqambin, voy a tener diferentes estados rotacionales
poblados porque muchas de esas molculas van a estar mixtos en esos estados rotacionales
a pesar de que no est irradiando con IR lejano o microondas. Porque los choque normales
son de una magnitud energtica que es ms que suficiente para excitar los rotacionales.
! Molculas que tengan enlaces covalentes sustituidos en ambos lados, por virtud de chocar
entre ellos ya estoy alterando las conformaciones de molculas.
! Cambios conformacionsales son cambios rotacionales al rededor de ese enlace, eso se est
dando continuamente en una celda a temperatura ambiente y por ende espectros
rotacionales son de poca utilidad a menos que me vaya a bajas temperaturas
! Al bajar la temperatura le quito energa cintica al medio, se estn moviendo ms lento,
chocan menos, y chocan ms dbilmente, as que obligo a mucha de la poblacin a estado
raso rotacional.
! Si quito choques, bajo la probabilidad de desactivaciones colisionales y me dejo la
oportunidad de que pueda utilizar otras vias fotnicas, normalmente aumento la lumnicencia
cuando bajo la temperatura.
! Yo no puedo hablar de espectros rotacionales si no bajo la temperatura.
! Resolucin en espectrometra es la separacin entre bandas, cuan bien yo puedo separar AE
uno del otro es lo que me va a permitir poder distinguir entre los estados rotacionales o
vibracionales en diferentes molculas y eso es importante porque habla de las
conformaciones. Su estado fsico a nivel molecular son bien importantes porque depende de

su conformacin o arreglo espacial. Las conformaciones se pueden estudiar muy bien por
espectrometra porque las conformaciones afectan estados energticos. Yo puedo ver
estados energticos de las molculas. Instrumentalmente yo puedo medir las diferencias en
AE. Resolucin se resume en yo poder medir en forma distintiva cada uno de esos largos de
onda a diferentes rangos espectrales.
! Yo puedo medir diferencialmente la fluorescencia de la fosforescencia, yo puedo sacar el
espectro de fluorescencia debido al tiempo.
! Los tiempos de fluorescencia se dan entre 10
-8
s mucho ms rpido que fosforescencia que es
de 10
-3
s, ya que tengo un A10
-5
entre ellas.
! Voy a poner una barrera que entorpezca el paso al detector hasta que termine toda la
fluorescencia, ya en 10
-7
s, quito la barrera y todo lo que llegue se define como
fosforescencia.
! Normalmente para fluorescencia no me tengo que preocupar de que puedan llegar fotones
fosforescentes, porque son tan y tan pequeos que no le hacen mella a la fluorescencia, pero
no el inverso.
! En fosforescencia se tarda ms tiempo porque ese brinco est prohibido, no se supone que lo
haga.

! Instrumentacin
! Fuente = lo que produce la radiacin.
! Barrera con una apertura cuya funcin era
permitir el paso de solo los que tengan esa
direccin, me escoge ya una direccionalidad para
la propagacin de radiacin.
! Colimador = los rayos que pasa desafortunadamente es una
propiedad de onda, esa propiedad de la radiacin de dispersarse
continuamente, de abrirse del rayo donde se est propagando.
Como yo no quiero eso se utiliza esta pieza ptica que lo que hace es que refracta, lo dobla
hacia adentro, el convexo me lo enfoca, el colimador enfoca.
! Celda donde est la muestra, se tiene que dar un encuentro fsico en el epacio entre el fotn
y la muestra, por eso es que enfoco el rayo, porque de nada valdra enfocar el rayo si la
muestra est en cualquier sitio.
! Detector donde vamos a contar los fotones, dependiendo el fenmeno que queramos
determinar, por ahora vamos a asumir absorcin.

1. Fuente:
" Produccin de fotones
F
D
M
C

V+
V-

" Se estn dando cambios nucleares en esa materia que estn liberando fotones en un
rango amplio.
A. Ultravioleta
= Un filamento de tungsteno que va a estar encerrado en una atmsfera poco reactiva,
porque voy a elevarle la temperatura a ese filamento, para se oxide rpido. Se rompe
el filamento cuando la mayora del tungsteno est oxidado. Por eso se asla el
tungsteno, para que no se oxide.
= Dependiendo del material va a ser el rango espectral. El tungsteno emite fuertemente
en el visible, pero hay un poco de UV y mucho de IR asociado a ello.
= Levantamos una diferencia en voltaje entre los dos extremos de ese filamento, por
eso los electrones van a querer moverse de donde estn en exceso a donde estn en
deficiencia. Como todo material va a presentar una resistencia a la corriente.
= Se pierde un poco de la energa elctrica y por eso se queda en el material. Aumenta
la energa en el material, ese material se calienta. Convertimos energa elctrica en
cintica.
= Al calentarse se estn moviendo ms y estar tan cercanos uno del otro, chocan ms
entre ellos, aumenta la energa potencial del sistema.
= Chocar = los orbitales digamos d del tungsteno estn metindose un poco en el
volumen del orbital del vecino, aumenta la repulsin, aumenta la energa de esos
tomos
= En un slido donde estn tan cercanos, yo puedo obligarlos a que se acerquen tanto,
que los aumentos en energa potencial lleguen a ser equivalentes en cambios en
energa fotnica.
= Antes de aplicar la diferencia en voltaje estoy abajo, una vez levanto esa diferencia en
voltaje y empieza a calentarse ese material y empiezan algunos de esos tomos a
empujarse tanto, a desestabilizarse tanto, a aumentar su energa potencial tanto, que
algunos de esos aumentos en energa potencial es el equvalente de tenerlos en el
estado excitado, sin haber hecho una transicin fotnica, sino por virtud del
calentamiento, aumentar su energa potencial tanto que empiezan a poblar estados
exitados, porque estoy aumentndole la energa potencial neta a ese sistema.
= Una vez llega arriba, regresa de varias formas.
= La ms comn es colisinal, pero parte de ellos va a ser fotnica.
= De ese filamento van a salir fotones, he generado una fuente convirtiendo energa
elctrica a energa radiativa.
8 de mayo de 2006

! Instrumentacin









! Para analizar la muestra hay que esperar que la fuente se estabilice.
! Los detectores son basados en AV.

! La fuente
! Tiene una resistencia al flujo de electrones y se calienta por el proceso
de la resistencia a fluir. Si se excita un metal a un nivel alto, mayores
nmeros de emisiones vamos a tener.
! Se tiene que presentar una resistencia adecuada para elevar el material
a una temperatura a las cuales se induzcan choques en el material donde se encuentran
todos los tomos alineados.
! Al calentar el material slido (metal) por la consecuencia de fluir de los electrones, por la
fuerza electro-motriz que se induce al levantar la diferencia en voltaje, se llama a ese
electrn a pasar por el alambre en el cual se le pone exceso en un extremo y deficiencia en el
otro y se inducen los electrones.
! Estos chocan con el filamento, en el proceso se frena parcialmente (por la fuerzas internas
del metal) y la energa que llevaban inicialmente en el comienzo de la trayectoria por el
filamento, por fuerzas internas se transfiere energa ya que los e- las pierden y eso es lo que
se convierte a calor.
! Al llevarse a esa temperatura alta el arreglo de tomos (3-D) se distorsiona, ya que el
calentar hace que se muevan mas, y que invadan el espacio del vecino, crendose
mutuamente inestabilidad.
! Existe una distancia ptima en la que puedo alinear los tomos y minimizar la energa de la
red. En el momento en que se mueven ms, se viola el espacio de la vecina o vecino
crendose una inestabilidad mutua.
! Ya no se minimizan las energas de repulsin y atraccin el la red, ya que empiezan a
aumentar mas las restricciones porque obligo a unos tomos a invadir los orbitales de otros y
empiezan las repulsiones. Se desestabiliza si el movimiento llega a una magnitud de voltaje
mayor pasando mas electrones convirtiendo mas energa elctrica a calor, se mueve mas de

modo que invade el otro espacio y hay tanta repulsin que la inestabilidad que induzco en el
sistema en trminos de energa potencial son equivalentes a los aumentos en energa
observados en absorciones fotnicas.

! Con esto se quiere decir que el tomo que tena ciertos niveles, en el momento que es
desestabilizado por el vecino que invade su espacio, aumenta tanto las repulsiones que
equivale a aumentar la energa hasta el punto S
i
(nivel energtico mayor), el cual no es
cualquier punto ya que esos tomos solo pueden existir a ciertas energas.
! Se excita energticamente pero no por absorcin de un fotn sino por aumento en energas
potenciales por repulsin. Una vez llega a un nivel de energa tiene que volver al punto raso y
se buscan rutas alternas para deshacerse de la energa, preferiblemente las colisionales.
Entonces el metal se escoge de tal forma que tenga una ruta para que se puedan observar a
unas intensidades que sirvan como fuente. No quiero un metal que no emita.
! De esta manera se genera la fuente. Entre mas caliento el material, mas es el
desplazamiento, de los tomos, mas inestabilidad puedo inducir al vecino, mayor la
excitacin que induzco, mas amplio el rango de posibles emisiones, mas tipos de fotones va a
emitir, por el espectro se ve cuantos fotones emite el material a cada energa.
! Mayor el cambio en energa (AE), mayor energa elctrica se convierte a calor, mas intensos
los choques, mas grandes son las distorsiones, mas altos los niveles que llega a poblar
energticamente, mayor el rango espectral que se puede ver.









Diagrama del rango de la fuente Continua:

Interpretacin:
! El voltaje tiene que caer en un rango estable e nico antes de que se analice la muestra. Se
necesita caracterizar la fuente, lo que significa que el rango de la muestra tiene que caer
dentro del rango til de la fuente. Esto se usa en absorcin para que los fotones que se
produzcan sean los que necesito para el anlisis. Si no se caracteriza el espectro estara
cambiando.
! Hay una intensidad mnima para que la fuente sirva, y para hacer la fuente reproducible.
Como se observa el pico de la derecha no cae dentro del rango de la fuente, adems se
observa que antes y despus del rango til (en los extremos) son regiones en las cuales las
emisiones no son tan estables, y en donde no hay reproducibilidad. La fuente mostrada en el
diagrama es una fuente continua en donde dentro del rango til hay una continuidad de
emisiones.
! Las fuentes tienen dos requisitos:
1. Producir fotones dentro del rango
2. Un mnimo de intensidad para la reproducibilidad (en
los extremos no son tan estables).
! Para espectros de Absorcin el rango que quiero debe estar
contenido dentro del rango til de la fuente. Ejemplo el
diagrama a continuacin.



! El diagrama de la derecha muestra un espectro continuo.
! Dentro de un tomo voy a tener multitud de variaciones porque no todos se desestabilizan a
la misma magnitud. Al cambiar el ambiente qumico va a cambiar la distribucin de los
niveles energticos. La multitud de variaciones es debida a las muchas variedades en el
movimiento de los vecinos. El ambiente qumico dicta la distribucin de los niveles
energticos de una especie. Ambientes qumicos diferentes llevan a distanciamientos
diferentes, aunque sean los mismos tipos de tomos, si se cambia el ambiente qumico se
cambian las relatividades de los AE. El resultado para una poblacin grande de 10
n
tomos,
que se calientan, se va a encontrar AE para todas las transiciones entre medio del sistema.
Hay una energa mxima que se induce de diferencia, dentro de estos voy a tener tomos
con la capacidad de emitir a cualquier nivel entre medio de los mximos y mnimos.
Diagrama de la libreta
! De esta manera se llegan a encontrar rangos en donde los AE coinciden S1$ S2. De esta
manera se da una continuidad de niveles energticos y de posibles emisiones a travs del
rango espectral.
! Fuentes no Continuas:
! Son tubos de gases con placas conductoras en los
extremos para levantar unas diferencias en voltaje. El
gas no conduce, a diferencia de los filamentos, entonces se llegan a diferencias en voltajes
mas marcadas que la fuentes continuas, esto debido a que como el material no conduce no
tienen a donde ir los electrones.
! Llegan a una momento en que la diferencia en voltaje es tan grande, que la a traccin es mas
grande para una parte del tubo (V-) "el paraso, y los electrones adquieren mucha velocidad
cintica y van a chocar con todo lo que este entre medio de la "miseria (V+ $ V-), van a
haber choques con los tomos de gas que se encuentren entre medio.
! Entonces se le "aplastan los orbitales atmicos al gas y el e- se mete dentro de un orbital del
mismo. Esto va a causar que ocurran repulsiones fuertes, el componente dentro de la energa

total asociada a repulsiones electrnicas se va a "trepar por las nubes va a desestabilizarse
el sistema y va a tener una energa potencial mayor, lo suficiente tal que equivale a excitar el
electrones.
! Al tener una energa superior va a tener a su vez unas posibilidades fotnicas, al ser un gas
la desactivacin colisional va a ser menor, que en un slido. Las emisiones van a ser mas
discretas (bandas) dentro de la E
max
y E
min
. No hay continuidad, hay regiones donde no se
producen fotones (crculos rojos).
! Esta fuente es til si lo que se quiere estudiar absorbe
a unas de las emisiones que se encuentran el la curva
del pico 1, 2 y 3. Si queremos ver algo que lo
absorbido se encuentra en las regiones en rojo, no nos
va a servir este tipo de fuente. Esta no sirve para
generar espectro de absorcin ya que mi fuente tiene
que producir fotones a travs de todo el rango donde
quiero medir absorciones.
! A dems no sirve porque tengo un mnimo de cambio en el largo de onda, para medir
cambios en energa. Para los espectros se necesitan que sean continuas. Si tengo una fuente
no continua con un A que necesito, es til ya que en estas hay ms interferencias asociadas a
las fuentes continuas. La fuente utilizada va a depender de mi propsito.
! Fuente LASER: Light Amplification Stimulated Emission Radiation
! En este tipo de fuente se pueden entregar muchos fotones para un punto en especfico, ya
que la onda de los mismos se mantienen colimados, y se puede sealar a cierto punto en
especfico. A ese punto tambin pudo entregar mucha intensidad de energa, para resaltar el
mismo. Se mantiene enfocado a largas distancias.
! Materiales o requisitos para las fuentes
laseres:
1. Estados excitados de larga vida
% La fluorescencia ms lenta es de 10
-8
seg.
% La fosforescencia ms rpida 10
-3
seg.
% Si llegan a una estado (S) excitado no
duran mucho. Los de mas larga vida
son los (T) son por lo menos 10
5
veces
mas lentos que la fluorescencia (porque
tienen que cruzar la calle 2 veces). Se necesitan los (T) de larga vida.

2. Inversin en poblacin:
% Lograr tener muchos tomos en estado excitado, ms que en estado raso.

3. Emisin estimulada:
% Tirarse por el "risco energtico, se logra la emisin enorme de todos los fotones a la
vez.
10 de mayo de 2006
ASIGNACION: Todo compuesto que exhibe fosforescencia exhibe tambin fluorescencia, pero no
todo compuesto que exhibe fluorescencia exhibe fosforescencia, Por qu?

! Fluorescencia y Fosforescencia
! Por qu este compuesto exhibe luminiscencia?
! Porque este compuesto tiene la capacidad de llevar el
compuesto a un nivel donde hay un AE asociado a cada A, no
se da la siguiente situacin porque sino estuviera fluoresciendo
a un A de 240nm.
! Tendramos que invocar un estadio intermedio al nivel
electrnico singlete, porque estamos hablando de transiciones electrnicas
por el largo de onda y como se est dando una emisin de algo menos
energtico de algo que absorbi ms energtico se tiene que dar una
transicin con un AE ms pequeo. Por lo tanto, como la regla de
seleccin ms probable de fluorescencia se origina del S
1.


! LASER
! Para qu situacin alta intensidad es til? Para la emisin de fosforescencia porque la
transicin de un T a un S es la ruta que menos cromforos toman, y quiero hacerla ms
intensa que ms cantidad tome esa ruta.

ASIGNACION: Qu llamo una transicin como esta, de un T
i
a un T
n
de menor energa de forma luminiscente?

! Otra caracterstica deseable de los LASER es su
monocromaticidad: todos se tiran desde un estado igual en
energa hasta el S
0
.
! La emisin o los fotones que vengan de ese estado, cuando
se induzca emisin estimulada, van a ser todos del mismo AE.
! Requisitos para que se de accin LASER:
1. Estados de larga vida
2. Inversin en poblacin
3. Emisin estimulada
! Si no se da la combinacin de estas tres cosas no se da accin LASER.
M
240nm 240nm
560nm
560nm
E
E
S
1
E
S
0
S
1
S
2
S
3
T
0
T
1
T
2
T
3

! Los ms larga vida que tienen son los estados tripletes Cmo lo sabemos? Dentro de
nuestro modelo, Qu evidencia tiene para decir eso? La evidencia fsica es ese "delay, esa
diferencia en tiempo desde que se excita una muestra hasta que emite. Por eso es el que
ms larga vida permanece en un estado excitado.
! En la mayora de los casos no se da la fosforescencia porque se tienen que acumular los
fotones para que baje con mayor intensidad.
! La alta intensidad de LASER es valiosa bajo algunas circunstancias pero que es bien limitada
a que sea monocromtica, porque de que me vale 240nm de mucha intensidad cuando mi
muestra absorbe a 270nm.
! Por esto han tratado de hacerlo ms policromtico, de esa radiacin convertirla a otros largos
de onda. Cmo? Pongo entre medio una pieza, una celda, con un tinte; un tinte que absorbe
bien eficientemente la emisin fundamental de mi LASER.
! Este tinte tiene una transicin permitida
correspondiente a un al largo de onda del LASER y que
exhibe fluorescencia ms eficientemente que la
mayora de los materiales.
! Eso permite entonces que se me abra ese panorama para relajar desde una transicin alta y
todo incluyendo los estados rotacionales y vibracionales.
! As que va a estar saliendo de ese material una multitud de largos de onda fluorescentes, de
diferentes energas, de lo que le dio origen al primer estado S
i
bien alto que vena del LASER
fundamental.
! Y como las rutas colisionales son ms probables que las fluorescentes, an para este sistema
bien especial que sintetizo y estructura esa molcula para que la fluorescencia sea ms
probable que la mayora de los materiales aunque siempre menos probable que lo colisional
dentro de ellos, al grado que logro conversiones de un 15-20% en intensidad de lo que se
excit originalmente.
! El 80-85% de la energa que le met al "dye lo perd por rutas colisionales, por calor, pero
todava estoy obteniendo en forma luminiscente un 15-20% en forma fotnica.
! Eso es altsimo!
! En adicin est distribuido en mltiples largos de onda, el 15% no es todo de un largo de
onda.
! Pero an as eso que sale es mucho ms intenso que las fuentes convencionales.
! Es decir una fuente continua es tanto, tanto ms dbil que un LASER, que puedo darme el
lujo de excitar otro material, que la mayora de los fotones que se absorban se relajen en
forma colisional y solo un porciento pequeo lo haga en forma fluorescente y ese porciento
pequeo fluorescente lo distribuya en mltiples largos de onda, cualquier largo de onda sigue
siendo ms intenso que una fuente convencional policromtica.
***Estudiar MS para el examen final: pero no a mucho detalle***
F M
Celda
con
tinte

! La diferencia con y sin el tinte sera:
! Muchas veces la fuente produce ms tipos de fotones
en tiempo de los que queremos que lleguen a nuestra
muestra (hay mltiples A y en un momento en tiempo
lo que quiero es que una llegue a mi muestra porque
cuando estoy realizando el espectro estoy analizando
cada una de ellas en forma discreta no puedo medir
una de ellas si me estn llegando todas a la vez), por
ende necesitamos eliminar todas las dems excepto la que est midiendo en un momento
dado, para eso puedo utilizar dos tipos de selectores de energa: filtro o monocromador.

! Filtros
! Material que tiene la capacidad de absorber bien eficientemente muchos largos de onda,
excepto uno.
! Filtro de absorcin: Si los largos de onda los absorbe no pueden salir al otro lado excepto
aquel que sea transparente, que no tenga un nivel energtico que pueda absorber.
! El resultado de ello en forma grfica, si fuera a ver el
espectro de emisin de una fuente y representar en ello lo
que hay antes del filtro sera como (a).
! Si fuera a graficar ah mismo la cuanta y tipo de fotones al
otro lado del filtro se vera como (b).
! Esa es la bandita que le llega a mi muestra, todo lo dems se
qued en el filtro.
! Logr una seleccin de un largo de onda, uno que me sea til
para mi aplicacin.
! Filtro que sea transparente.
! Entre ms diluida est una solucin o si est en
estado gaseoso ms uniforme son los estados
energticos de cada molcula en esa poblacin.
! Lo malo de los filtros es que tengo que trabajar a ese
largo de onda, no puedo trabajar a otro largo de onda.
! Siquiera ver la muestrea a otro largo de onda tengo
que cambiar el filtro, uno que sea transparente al que quiero.
! Para absorciones discretas no hay problema.



#
n
-#
m

I
#
i

Sin tinte
Con tinte
a)
I
#
b)
#
I
F M
:
s
:
n
-:
m

! Monocromador
! Otro tipo de selector de largo de onda, de pieza que permita llegar a la muestra el largo de
onda que yo quiero.
! Necesito un sistema que permita en forma continua pero selecta llegar en diferentes
momentos en tiempo a cada largo de onda, filtros no hacen eso.
! Filtros son discretos, nunca continuos, no es prctico.
1. Monocromador de Prisma
" Tiene un rayo policromtico de mi fuente
" Un rango til de emisin de esa fuente va a ser aquel donde
el espectro de absorcin sea igual o menor que el AA del
rango de los valores umbrales de mayor y menor energa.
" Prisma es un cristal en forma piramidal, transparente a los
largos de onda que quiero escoger en tiempo.
" Al cristal ser un slido va a haber una diferencia en
densidad en lo que se est se est propagando la radiacin
en el aire y lo que est pasando por el prisma.
" Eso invoca refraccin.
" Viene la radiacin y al pasar por el prisma se
dobla en forma diferencial de acuerdo a la
energa.
" El ms energtico es el ms que se dobla.
" Si fuera a ver el ndice de refraccin con A, vera como (c).
" Las energticas son las ms que se doblan.
" Los dispersa en forma ordenada en el espacio de acuerdo a
la energa.
" Si pongo otra barrera antes de llegar a la muestra solo
aquella energa cuya orientacin coincida con la de la apertura es la que va a llegar a
la muestra.
" Escog una energa a pesar de que mi fuente es policromtica, pero puedo ver la
prxima energa.
" Ese prisma lo monto en un eje y lo roto, ya diferentes instantes en tiempo
dependiendo de la posicin del prisma la dispersin en el espacio es tal que van a
coincidir cada uno de los largos de onda en algn momento, dependiendo de la
posicin del monocromador, y llegar a mi muestra.
" Voy a haber rastreando el rango espectral de mi fuente para que en algn rango
espectral de mi fuente, para que en un instante en tiempo cada uno de los largos de
onda llegara a la muestra y yo midiese la absorcin de cada uno de ellos, segn yo me
voy moviendo a travs del espectro.
# n m
A
I
# n m
F M
:
s
:
i
:
n
-:
m
#
IR
c)

" Un problema grande con esto es que esa dispersin no es
lineal.
" Vemos que para un AA dado en un rango bien energtico
(d).
" A las energas menores en este rango van a estar ms
apiados en el espacio, van a estar ms cerquita los A y
para un espacio despus se cuelan ms de los que se
colaran en el primer espacio.
" La apertura de la barrera me va a dictar el ancho de la apertura, a bajas
energas seria como el dibujo al lado.
" A altas energas sera como el otro dibujo al lado
" La monocromaticidad de la banda que est llegando a la
muestra vara con rango espectral.
" Lo que quiero producir proviene de nuestro modelo de
Jablonski.
" A altas energa no voy a ver transiciones discretas porque con lo que estoy mirando no
tiene la resolucin espectral, no pudo ver una transicin en especfico porque se
colaron todos los dems.
" Porque todos tienen la energa.
" Esta es la limitacin usando el prisma.



E
E
I
d) # n m